实验五_细菌的生化实验

（六）脲酶试验 将菌种接种于尿素微量发酵管，37℃， 24h，观察结果。 有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解，产 生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈 粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物 尿素是否存在，细菌均能合成此酶，其活性 最适pH为7.0。
（七）枸橼酸盐利用试验 将菌种接种于枸橼酸盐微量发酵管，37℃， 48h，观察结果。 产气杆菌可利用枸橼酸盐作为碳源，细菌生 长繁殖，形成菌苔，分解枸橼酸盐生成碱性碳酸 盐，使培养基pH上升到7.0以上，由绿色变为深 蓝色，为枸橼酸盐利用试验阳性；而大肠杆菌则 不能分解枸橼酸盐，得不到碳源，不能生长，无 菌苔形成，培养基颜色不发生变化，为枸橼酸盐 利用试验阴性。
甲基红（M.R）试验/VP试验

（1）接种培养 将菌种接种于2支葡萄糖磷酸盐蛋白胨 水微量发酵管，37℃，48h。

（2）观察记录 1支滴加M.R试剂30秒，观察结果。 1支加VP试剂（先加甲液再加乙液） 15min，观察结果。
（五）硫化氢试验
凡细菌能分解含硫氨基酸，产生硫化氢 （H2S）者，其所产生的H2S会使培养基中的 醋酸铅或FeCl3形成黑色的硫化铅或硫化铁。

（三）乙酰甲基甲醇试验(V.P.试验)
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解 葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合、脱羧成乙 酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中 氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基 生成红色化合物，称V.P.（+）反应。
(四)甲基红（M.R.）试验 某些细菌如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮 酸，继而分解为甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸 等，使培养基pH降至4.5以下，加入甲基红 指示剂呈红色，此为阳性反应；若产酸量少 或产生的酸进一步转化为醇、醛、气体和水 等，则培养基的酸碱度仍在pH6.2以上，加 入甲基红指示剂呈现黄色，为阴性反应。
作分别接种细菌，置37℃恒温箱中Biblioteka Baidu养48h。

（2）观察记录
在培养液中加入乙醚1～2滴，经充分振荡使吲哚萃取 至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此 时沿管壁缓慢加入1滴吲哚试剂（加入吲哚试剂后切 勿摇动试管，以防破坏乙醚层影响结果观察），如有
吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，此为吲哚试验阳性
反应，否则为阴性反应，阳性用“＋”、阴性用“－” 表示。
实验五 细菌的生化实验
一 目的要求
1.掌握细菌生化试验操作方法及判定标准； 2.了解细菌生化试验在细菌鉴定中的作用。
二 实验内容
（一）糖分解实验 将菌种分别接种于五种糖微量发酵管，37℃，24h，观察结果。 （二）靛基质（吲哚）试验 将菌种接种于蛋白胨水微量发酵管，37℃，48h，再加靛基质试剂，观察结 果。 (三)甲基红（M.R）试验/VP试验 将菌种接种于2支葡萄糖磷酸盐蛋白胨水微量发酵管，37℃，48h，再分别 滴加M.R试剂30秒，VP试剂（先加甲液再加乙液）15min，观察结果。 （四）硫化氢试验 将菌种接种于硫化氢微量发酵管，37℃，24h，观察结果。 （五）脲酶试验 将菌种接种于尿素微量发酵管，37℃，24h，观察结果。 （六）枸橼酸盐利用试验 将菌种接种于枸橼酸盐微量发酵管，37℃，48h，观察结果。


是否产气，观察微量发酵管底部是否有气泡。

（二）靛基质（吲哚）试验 有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的 色氨酸生成吲哚(靛基质)。吲哚本身没有颜 色，不能直接看见，但当加入对二甲基氨基 苯甲醛试剂时，该试剂与吲哚作用，形成红 色的玫瑰吲哚。

（1）接种培养
取装有蛋白胨水培养液的微量发酵管1支，以无菌操
实验报告
原理、操作方法、结果及意义。
细菌生化试验结果记录表
糖分解试验 葡 大 肠 鸡 白 痢 麦 甘 乳 蔗 吲 哚 MR VP
H2S
脲 酶
枸橼 酸盐
产 气
变 形
细菌生化实验原理

（一）糖类分解（发酵）试验 细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸 产气。 是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂 溴甲酚紫（其pH在5.2以下呈黄色，pH在 6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的 颜色变化来判断。