实验五_细菌的生化实验
实验五 细菌的生化试验
酵管中，置37℃培养48h后，取出培养液加入甲基 红试剂2-3滴，观察结果。
[结果判定] ：培养液变红色，反应阳性，用+表示；
培养液不变色，反应阴性，用-表示。
4.乙酰甲基甲醇试验（V-P试验）
[基本原理]：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，进 一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境下被氧 化成二乙酰，后者与蛋白胨中的精氨酸所含的胍 基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP试验阳性。
标记气室示意图
二 实验内容
（一）病毒的鸡胚分离培养
1.鸡胚：9-10日龄健胚
2.病毒：NDⅣ-Lasota株，100×稀释，加双抗各 5000单位/ml，室温下30min或4℃过夜
3.接种部位：尿囊腔接种
4.接种量：0.1-0.2ml/胚
5.接种步骤：照蛋→标记→打孔→接毒→封孔→37 ℃孵化箱中继续孵化，及时照蛋，24h内死胚丢 弃，以后死亡者随时取出，冷藏，120h不死者， 冻死。
[结果判定]：
溴甲酚紫是一种酸碱指示剂，在中性时为紫色，碱 性时为深红色，而在酸性时呈现黄色。
紫色无气泡，既不产酸也不产气，用-表示； 黄色无气泡，产酸不产气，用+表示； 黄色有气泡，产酸产气，用⊕表示。
2.吲哚（靛基质）试验
[基本原理]：有些细菌有色氨酸酶，能分解蛋白胨 中的色氨酸形成吲哚，吲哚与对位二甲基氨基苯 甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。该试验主要 用于肠道杆菌的鉴定。
[试验方法]：将待检菌液接种到葡萄糖蛋白胨水微 量发酵管中，置于37℃培养48h，取出后加入VP 试剂甲液3滴，乙液各1滴，充分摇动，静置1530分钟后，观察实验结果。
[结果判定]：管内变红色为阳性，用+表示； 管内不变色为阴性，用-表示。
细菌生化实验报告
一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应的基本原理和实验方法。
2. 掌握常见细菌生理生化反应的检测方法，如糖发酵、吲哚产生、甲基红反应等。
3. 学会通过生理生化反应对细菌进行初步鉴定。
二、实验原理细菌生理生化反应是指细菌在生长繁殖过程中，利用酶催化底物发生的一系列化学反应。
通过检测细菌对特定底物的利用能力、酶的产生以及代谢产物的生成，可以判断细菌的种类和特性。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、吲哚试剂、甲基红试剂等。
3. 仪器：酒精灯、接种环、培养皿、试管、试管架、滴管等。
四、实验方法1. 糖发酵实验：将待测菌接种于糖发酵培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
观察菌落周围是否出现透明圈，判断细菌是否能发酵该糖。
2. 吲哚产生实验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
取培养液滴加吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀，判断细菌是否能产生吲哚。
3. 甲基红反应实验：将待测菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
取培养液滴加甲基红试剂，观察颜色变化，判断细菌是否能产生有机酸。
五、实验结果与分析1. 糖发酵实验结果：- 大肠杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。
- 金黄色葡萄球菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。
- 枯草芽孢杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。
- 变形杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阳性。
2. 吲哚产生实验结果：- 大肠杆菌：吲哚产生阴性。
- 金黄色葡萄球菌：吲哚产生阳性。
- 枯草芽孢杆菌：吲哚产生阴性。
- 变形杆菌：吲哚产生阳性。
3. 甲基红反应实验结果：- 大肠杆菌：甲基红反应阴性。
- 金黄色葡萄球菌：甲基红反应阴性。
- 枯草芽孢杆菌：甲基红反应阳性。
- 变形杆菌：甲基红反应阳性。
根据实验结果，我们可以初步判断：- 大肠杆菌为革兰氏阴性菌，发酵葡萄糖，不产生吲哚和有机酸。
实验五 细菌生理生化反应
细菌鉴定中常用的生理生化反应生05 边晔 2010030026周四班同组成员：徐竞实验时间 2012年11月15日一、实验目的1.了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；2.通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样性；3.了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义；4.学习各种接种技术。
二、实验原理1.各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质分解能力也不一样，因而代谢的产物存在差别。
2.细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。
（具体原理略）3.用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
三、实验器材1.仪器和用具恒温培养箱。
试管：每个试验4根试管(3根接种，1根对照)。
接种环、接种针、酒精灯、试管架、记号笔、打火机、杜氏小管。
2.微生物大肠杆菌（Escherichia coli）、变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）、产气杆菌（Enterobacter aerogenes）和未知菌S3的各自悬液。
3.试剂甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂。
上次配制的试管培养基（葡萄糖/乳糖发酵培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，胰蛋白胨水培养基，硫化氢试验培养基，明胶液化培养基，柠檬酸盐培养基），淀粉培养基平板。
四、实验步骤1.培养基配制（上次实验制备）1)葡萄糖/乳糖发酵培养基（用于糖发酵实验）胰蛋白胨 5gNaCl 2.5g水 500ml制法：a)将上述成分混合于水中溶解，矫正pH至7.4—7.6。
b)加葡萄糖/乳糖5g，溶解后加入0.5ml的1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，混匀。
c)分装于60支试管内，每管5ml。
d)每管倒置一个杜氏小管，加盖，115℃灭菌30min。
2)葡萄糖蛋白胨水培养基（用于甲基红和VP实验）蛋白胨 2.5g葡萄糖 2.5g磷酸氢二钾 2.5g蒸馏水500ml制法：a)将上述成分混合于蒸馏水中，加热溶解后，调pH至7.2。
实验五 霉菌的形态观察讲解
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细菌生理生化反应
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实验原理
细菌生理生化反应
霉菌的营养体是分枝的丝状体。其个体比细菌和放线 菌大得多，分为基内菌丝和气生菌丝。气生菌丝生长到一 定阶段又可分化出繁殖菌丝。不同霉菌的繁殖菌丝可以形 成不同的孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的 形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
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细菌生理生化反应
关键步骤及注意事项
一． 1.倒平板要厚一些，接种时划线要密。且不能 将培养基划破。
二． 2.插片时要有一定角度（45度）并与划线垂直。 三． 3.放玻璃纸时，使玻璃纸紧贴培养基表面，不
留空隙。 四． 4.扦片时要等到盖玻片完全冷却后在扦入培养
基中。
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实验结果示意图
细菌生理生化反应
6片，用旧报纸隔层叠好灭菌(每小组)
三．灭菌条件：121℃、30min
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细菌生理生化反应
一．3.倒平板
1. 每组倒2个马丁氏平板
二．4.扦片法
1. 接种：每小组用连续划线法接种青霉菌介入 一个马丁氏平板中
2. 扦片：将灭菌的盖玻片垂直菌线以45度角插 入培养皿内的培养基中，插入深约为1/2或 1/3(6片）
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细菌生理生化反应
一． 霉菌是由许多交织在一起的菌丝体构成。在潮 湿条件下生长繁殖，长出丝状、绒毛状或蜘蛛 网状的菌丝体，并在形态及功能上分化成多种 特化结构。菌丝在显微镜下观察呈管状，有的 有横隔将菌丝分割为多细胞（如青霉、曲霉）， 有的菌丝没有横隔（如毛霉、根霉）。
二． 霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗 得多（约为3-10μm）,常是细菌菌体宽度的几 倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。 霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，且孢子容 易飞散。
实验五-细菌鉴定中常见的生理生化反应
实验五细菌鉴定中常见的生理生化反应一、实验目的。
1)了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。
3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理。
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。
以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
1.糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。
指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。
产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。
2.甲基红试验（M.R试验）甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。
有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。
3.Voges-Proskauer试验（伏-普试验，V.P. 试验）伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。
某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为V.P.反应阳性。
4.靛基质试验某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。
5.硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。
6.明胶液化实验明胶在25度以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在25度以上时明胶就会液化。
细菌的生化试验名词解释
细菌的生化试验名词解释细菌是一类微生物，广泛存在于自然界中。
它们是单细胞生物，无真正的细胞核，但却能够执行一系列生化反应。
研究细菌的生化试验是了解细菌的基本生物学特性和进行抗菌药物研发的重要手段。
以下是一些常见的细菌生化试验名词的解释。
1. 嗜热菌试验嗜热菌试验用于检测细菌是否具有耐热能力。
这个试验基于嗜热菌能够在高温环境下生长的特性。
通过将细菌接种在含有特定营养物质的培养基中，并在高温下孵育，观察细菌的生长情况，可以判断其是否为嗜热菌。
2. 酸酶试验酸酶试验用于检测细菌是否能够产生特定的酸酶。
这些酸酶可以将特定的底物分解为酸性产物，从而改变培养基的酸碱度。
通过观察培养基颜色的变化或使用酸碱指示剂，可以判断细菌的酸酶活性。
3. 氧化还原试验氧化还原试验用于检测细菌是否能够对底物进行氧化或还原反应。
这些反应可以生成或消耗氧分子，并产生可见的颜色变化。
通过添加特定的底物和指示剂，可以观察培养基的颜色变化，从而判断细菌的氧化还原能力。
4. 胶原酶试验胶原酶试验用于检测细菌是否能够分解胶原蛋白，一种存在于动物组织中的重要蛋白质。
这个试验基于胶原酶可以将胶原蛋白分解为小分子肽或氨基酸的特性。
通过观察培养基的透明圈或使用特定染料的变化，可以判断细菌是否具有胶原酶活性。
5. 大理石气试验大理石气试验是检测细菌是否具有尿素酶活性的方法。
尿素酶可以将尿素分解为氨和二氧化碳。
这个试验基于细菌产生的氨可与酚红指示剂反应，使培养基呈现鲜艳的红色。
通过观察培养基的颜色变化，可以判断细菌是否具有尿素酶活性。
这些生化试验名词只是细菌研究中的一小部分，不同的试验可以提供不同的信息，从而深入了解细菌的特性。
在细菌学的研究中，这些试验通常与其他分析方法结合使用，以全面了解细菌的生化特性、代谢途径和致病机制，为抗菌药物研发和靶向治疗提供有力的依据。
通过深入研究细菌的生化特性，我们可以更好地理解它们的生存机制，并为人类健康和环境保护提供支持。
细菌的生化实验
细菌的生化实验一、糖的发酵培养基：糖培养基PH7.6的蛋白胨水溶液（蛋白胨1%）（氯化钠0.5%）适量糖，1%1.6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1%分装10*100mm小试管，每管3-4ml，内置一密闭端向上的发酵管，10磅10分灭菌。
方法：用接种环取少量纯培养物接种于培养基中，37摄氏度培养18-24小时后观察，一般观察2-3天。
结果：产酸则培养基由兰紫变黄，用“+”表示。
产酸又产气，则培养基变黄，小管内有气泡，用“☉”表示，无变化则培养基仍为兰紫色，管内也无气泡，用“-”表示。
原理：指示剂溴甲酚紫的指示范围为PH5.2-6.8（黄-紫）。
每一种糖（醇）培养基内只含一种糖（醇）的成分，接种进去的细菌若能发酵这种糖，则可产生乳酸，使PH下降，培养及就由兰紫色变为黄色，如果同时还产生CO2、H2、CH4等气体，则小管内留有气泡，如果不能发酵分解这种糖，则培养及不变色也无气泡。
二、靛基质实验培养基：蛋白胨水蛋白胨 1%氯化钠 0.5%蒸馏水适量其中的蛋白胨最好选用含色氨酸较多的多价蛋白胨。
每支小试管分装3-4ml，10磅10分灭菌。
试剂：（欧立希氏试剂）对二甲基氨基苯甲醛 1g纯乙醇 95ml浓盐酸 20ml以上物品依次混合溶解方法：接种细菌于培养基中，37摄氏度培养24-48小时后，取出加乙醚约0.7cm厚，塞紧棉塞后摇震，使乙醚与培养物混匀，静置于试管架内数分钟，待乙醚浮至培养基表面，打开棉塞，沿试管壁慢慢加入靛基质试剂4-5滴，不要摇。
结果：乙醚层现红色为阳性，以“+”表示，不变者为阴性，以“-”表示。
原理：细菌若有色氨酸酶，就能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质（吲哚）。
靛基质无色，但遇到对二甲基氨基苯甲醛，则可以生成红色的靛基质，以肉眼可见。
三、甲基红实验：培养及：葡萄糖蛋白胨水（PH7.4）葡萄糖 0.5%磷酸氢二钾 0.5%蛋白胨 0.5%蒸馏水适量加热溶解后，分装小试管，每管3-4ml，10磅10分灭菌试剂：0.1g甲基红溶于300ml95%乙醇中，加蒸馏水至500ml方法：接种细菌于培养液中，37摄氏度培养2-4天，取出加M、R试剂3-4滴。
实验五细菌的生长现象和代谢产物的观察
课程名称：微生物学检验技术授课专业：医学检验学时：2学时实验五细菌的生长现象和代谢产物的观察一、实验目的1.掌握观察菌落的方法，细菌在固体、半固体、液体培养基上的生长现象及意义；2.熟悉鉴别细菌常用的生化反应实验原理、方法和结果判断。
二、实验物品㈠菌种：金葡、白葡、柠葡、大肠杆菌、枯草杆菌㈡Culture media：葡萄糖发酵管乳糖发酵管蛋白胨水㈢试剂：靛基质试剂三、实验内容㈠细菌在固体培养基上的生长现象菌落：接种的细菌适当的分开，经一段时间培养后，由1个细菌生长繁殖而形成单一的肉眼可见的细菌集团。
菌苔：当细菌在培养基表面密集生长时，多个菌落融合在一起。
菌落的描述：大小、形状、突起、边缘、表面、透明度、粘度葡萄球菌——光滑型菌落（S）枯草杆菌——粗糙型菌落（R）㈡细菌在液体培养基中的生长现象1．葡萄球菌：混浊生长为兼性厌氧菌，细菌向四周均匀扩散，出现肉眼可见均匀的混浊生长。
2．枯草杆菌：菌膜为专性需氧菌，多生长在液体的表面而形成菌膜。
3．链球菌：沉淀链球菌在生长过程中结成链状而增加了细菌本身的重力，由于重力的作用下沉而形成沉淀。
㈢细菌在半固体培养基中的生长现象:可观察细菌的动力葡萄球菌：沿穿刺线生长(穿刺线清晰)；动力阴性、无鞭毛，培养基清亮枯草杆菌：沿穿刺线扩散生长(穿刺线模糊)；动力阳性、有鞭毛，培养基混浊㈣细菌代谢产物的检查：鉴别细菌附：各种生化试验原理1.单糖发酵试验：细菌分解发酵单糖，可产生酸或气；酸使培养基中的酸性复红变成红色，为阳性。
2．靛基质试验：有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸，生成无色的靛基质（又称吲哚），与滴加的靛基质试剂（对二甲基氨基苯甲醛）生成玫瑰红化合物，为靛基质试验阳性。
3．H2S试验：有些细菌能分解培养基中含硫氨基酸生成H2S，遇到培养基中的亚铁离子，可生成黑色的沉淀，为H2S试验阳性。
四、实验报告记录细菌的生长、生化反应结果；并说明生化反应的原理。
细菌生化反应实验报告
一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应的基本原理。
2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
3. 熟悉生理生化反应在细菌鉴别中的实际应用。
二、实验原理细菌生理生化反应是指细菌在生长代谢过程中，通过酶催化作用，将底物转化为产物的化学反应。
这些反应能够反映细菌的代谢类型和生理特性，从而用于细菌的鉴定。
常见的细菌生理生化反应包括吲哚试验、甲基红试验、V-P试验、糖发酵试验等。
三、实验材料与仪器1. 菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂。
3. 仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管。
四、实验步骤1. 接种：将菌种接种于相应的培养基中，37℃恒温培养箱中培养24小时。
2. 吲哚试验：取少量培养液，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
3. 甲基红试验：取少量培养液，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
4. V-P试验：取少量培养液，加入V-P试剂，观察颜色变化。
5. 糖发酵试验：将不同糖类培养基分别接种菌种，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 吲哚试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。
2. 甲基红试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。
3. V-P试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。
4. 糖发酵试验：大肠杆菌和产气肠杆菌对葡萄糖、乳糖和蔗糖均呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌对葡萄糖和乳糖呈现阴性反应。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了细菌生理生化反应的基本原理和实验方法。
通过对吲哚试验、甲基红试验、V-P试验和糖发酵试验的结果分析，我们可以初步判断出大肠杆菌和产气肠杆菌为阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌为阴性反应。
这表明生理生化反应在细菌鉴别中具有重要的实际应用价值。
第五章细菌的生理生化实验基本知识
2．糖类分解试验
不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不 能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检 验。 试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接 种于发酵液体培养基管，若为半固体培养基，则用接种针作穿 刺接种。接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培 养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦 为产气阳性。 指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。
原理 : 本试验是检测细菌有无触酶的存在。过氧化氢的形成看作 是糖需氧.分解的氧化终末产物，因为H202的存在对细菌是有毒性 的，细菌产生酶将其分解，这些酶为触酶(过氧化氢酶)和过氧化物 酶。
试剂 3％H202(新配)。 试验方法: 可用接种环将一菌落放于载玻片的中央，加l滴3％ H202于菌落上，立即观察有无气泡出现，也可在菌落和H202混合 物之上放一张盖玻片，可帮助检出轻度反 应，还可降低细胞的气溶
丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸， 琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降 至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
大肠杆菌：MR + /VP -
5、吲哚(靛基质)试验
某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚 的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基 苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物
食品质量检测技术
一 生理生化试验 微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产
物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的 微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依 据之一。
1．氧化型与发酵型(O／F)的测定
实验五大肠杆菌与沙门氏菌
0.02g 60mL 40mL
• V-P试剂
甲液：α萘酚酒精溶液 （α萘酚5g无水乙醇100mL）
乙液：KOH溶液 （KOH 40g，水100ml）
将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-10℃保存。
五、结果观察
1. 大肠杆菌的生长表现
普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落， 直径约2~3mm；
• 在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。
② V-P试验： 某些细菌能发酵
粉
碱
红
+ 二乙酰 色
葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 2,3-丁二烯醇
+
化 合
胨中的胍基化合物 物
注意：通常M.R和V-P试验是密切相关： 如果一个微生物M.R是阳性，则V-P是阴性；或者相反。
• M.R试剂
甲基红 95％酒精 蒸馏水
3. 生化管接种培养
① 糖发酵试验：
葡乳麦甘蔗
② H2S试验； ③ 尿素酶试验； ④ 枸橼酸盐利用试验。
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
大肠杆菌
沙门氏菌
大肠杆菌 沙门氏菌 置 37℃培养
4. 吲哚试验
① 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中， 置37℃培养3-5d；
＋(－) ；＋(－)
3. 细菌的染色、镜检
大肠杆菌
沙门氏菌
G－直杆菌，大小0.4-0.7×2-3μm， 无芽胞，两端钝圆，散在或成对。
4. 生化管接种培养
大肠杆菌
沙门氏菌
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ⊕/- － － －
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
⊕－ ⊕ ⊕ － ＋ － ＋
[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验
![[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验](https://img.taocdn.com/s3/m/1967ad89f01dc281e43af093.png)
[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验实验六细菌的生化试验目的要求1．通过本试验加深对细菌生化反应原理和意义的理解；2．掌握常规细菌生化试验操作方法。
操作步骤一、糖类发酵（分解）试验原理：细菌含有分解不同蔗糖（醇、苷）类的酶，因而分解各种糖（醇、苷）类的能力也不必一样。
有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸（符号：+）、产气（符号：○），培养基由兰变黄（指示剂溴指示剂麝香草酚兰由兰遇酸福兰县的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（符号：－），培养基仍为兰色。
（一）适用于需氧菌的方法培养基用邓亨氏（Dunham）蛋白胨水溶液（蛋白胨1g，氯化钠0.5g，水100ml，pH7.6按0.5～1％的比例分别加入各种辣椒），每100ml加入1.2ml的0.2％溴麝香草酚蓝（或用1.6％溴甲酚紫酒精溶液0.1ml）作指示剂。
分装于试管（每一个试管事先都加有一枚倒立的小发酵管），10磅高压灭菌10分钟。
如在培养基中加入琼脂达0.5～0.7％，则成半固体，可省去倒立的小失水管。
0.2％溴麝香草酚蓝溶液配法：溴麝香草酚蓝 0.2g0.1N NaOH 5ml蒸馏水 95ml方法：从琼脂斜面的纯培养物上，用接种环取少量被检细菌接种于糖发酵管培养基中（如为半固体，应穿刺），在37℃培养，一般观察2～3天，观察时用上述符号标记之。
（二）适用于厌氧菌的方法培养基：蛋白胨 20g氯化钠 5g琼脂 1g1.6％硫甲酚紫酒精溶液 1ml糖 10g硫乙醇酸钠 1g蒸馏水 1000ml将胨、盐、硫乙醇酸钠、琼脂和水放于水槽内，加热使融化，再加入所需的糖，调整pH到7.0，加入指示剂，分装试管，在10磅高压灭菌15分钟后，做成高层。
方法将厌氧菌的培养物用穿刺接种法接种于上述培养基的深部，于37℃培养。
结果观察同需氧菌。
二、V－P试验（二乙酰试验）原理：某些细菌能从葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇（Acetymethyl carbinol）→2，3-丁烯二醇（2，3-bytaylene cylycol），在有碱阿提斯鲁夫尔谷存在时氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物起作用，会带来粉红色的化合物。
(整理)各种微生物生化试验方法原理.
各种微生物生化试验方法原理通常利用生化试验的方法，检测细菌对各种物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化反应，常用于细菌的鉴别。
1、糖类分解产物（1）糖发酵试验（carbohydrate fermentation test）不同种类的细菌对糖的分解利用能力不同，一般以能否分解某种糖，是否产酸产气等现象来鉴别。
例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。
这是因为大肠杆菌分解葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。
而伤寒杆菌无此酶，故分解葡萄糖只产酸不产气。
（2）VP试验（V oges-Proskauer test）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，生成一分子乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二乙酰可与培养液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反应，生成红色的化合物，此为VP试验阳性。
大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP试验阴性。
（3）甲基红试验（methyl red test）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、乳糖产酸产气，二者不易区别。
但两者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。
故大肠杆菌培养液PH在4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性；产气杆菌培养液PH在5.4以上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红试验阴性。
（4）枸橼酸盐利用试验(citrate utilization test）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培养基上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变为碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，含溴麝香草酚蓝（BTB）指示剂的培养基由淡绿色变为深兰色，此为枸橼酸盐利用试验阳性。
大肠杆菌不能利用枸橼酸盐，故在此培养基上不能生长，培养基仍为绿色。
2、蛋白质及氨基酸的分解产物（1）硫化氢试验（hydrogen sulfide test）有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢试验阳性。
各种微生物生化试验方法原理
各种微生物生化试验方法原理通常利用生化试验的方法，检测细菌对各种物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化反应，常用于细菌的鉴别。
1、糖类分解产物（1）糖发酵试验（carbohydrate fermentation test）不同种类的细菌对糖的分解利用能力不同，一般以能否分解某种糖，是否产酸产气等现象来鉴别。
例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。
这是因为大肠杆菌分解葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。
而伤寒杆菌无此酶，故分解葡萄糖只产酸不产气。
（2）VP试验（V oges-Proskauer test）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，生成一分子乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二乙酰可与培养液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反应，生成红色的化合物，此为VP试验阳性。
大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP试验阴性。
（3）甲基红试验（methyl red test）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、乳糖产酸产气，二者不易区别。
但两者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。
故大肠杆菌培养液PH在4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性；产气杆菌培养液PH在5.4以上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红试验阴性。
（4）枸橼酸盐利用试验(citrate utilization test）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培养基上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变为碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，含溴麝香草酚蓝（BTB）指示剂的培养基由淡绿色变为深兰色，此为枸橼酸盐利用试验阳性。
大肠杆菌不能利用枸橼酸盐，故在此培养基上不能生长，培养基仍为绿色。
2、蛋白质及氨基酸的分解产物（1）硫化氢试验（hydrogen sulfide test）有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢试验阳性。
细菌的生理生化鉴定
竭诚为您提供优质文档/双击可除细菌的生理生化鉴定篇一：细菌生理生化鉴定实验九细菌的生理生化试验[日期：20XX-5-30]来源：作者：孔庆学[字体：大中小]实验九细菌的生理生化试验1目的1.1了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理1.2掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法2原理各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。
由于细菌特有的单细胞原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。
不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。
即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。
3材料3.1菌种大肠埃希氏菌（escherichiacoli）、产气肠杆菌（enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（bacillussubtilis）的斜面菌种3.2培养基葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）3.3试剂40％naoh溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。
3.4器具超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。
4流程糖发酵试验→V-p试验→甲基红试验→吲哚试验5步骤(一)糖类发酵试验1目的了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法．2原理可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。
是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即b.c.p指示剂，其ph在5.2以下呈黄色，ph在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。
是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。
3材料3.2菌种大肠埃希氏菌（escherichiacoli）、产气肠杆菌（enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（proteus vulgaris）的斜面菌种3.３培养基葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管４流程发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录5步骤5.1试管标记图9-1糖发酵产气取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各Ａ不产气；Ｂ产气4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。
实验五分枝杆菌铜绿假单胞菌
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实验五分枝杆菌铜绿 假单胞菌
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目 录
• 实验目的 • 分枝杆菌铜绿假单胞菌简介 • 实验材料和试剂 • 实验步骤和方法 • 实验结果分析和讨论 • 结论和总结
等原因。
讨论
根据实验结果和解释，我们可以进一步讨论分枝杆菌铜绿假单胞菌的生态习性和致病性。 分枝杆菌铜绿假单胞菌在自然界中广泛分布，能够在多种环境中生存和繁殖。此外，该 菌还具有致病性，可引起人类和动物感染。因此，我们需要进一步研究分枝杆菌铜绿假
单胞菌的生态习性和致病性，以便更好地预防和控制其传播和感染。
分类
分枝杆菌铜绿假单胞菌属于假单 胞菌属，是一种革兰氏阴性杆菌 。
特点
具有多重耐药性，对多种抗生素 不敏感，容易产生抗药性变异。
分枝杆菌铜绿假单胞菌的生物学特性
01
02
03
生长条件
适宜在潮湿环境中生长， 对干燥、阳光和常用消毒 剂抵抗力较弱。
繁殖方式
通过二分裂法进行繁殖， 繁殖速度较慢。
抗原结构
具有O抗原和K抗原，其中 K抗原是主要的毒力因子。
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实验结果与预期结果的比较和分析
实验五微生物的分离、培养
学会使用微生物分离、培养的实验技术
选择适当的培养基
根据目标微生物的特性和生长需求，选择适宜的培 养基配方和制备方法。
无菌操作技术
在实验过程中，严格遵守无菌操作原则，防止外来 杂菌污染。
微生物接种与培养
掌握微生物的接种方法，包括划线法、涂布法、倾 注法等，并控制适当的培养温度和湿度。
了解微生物在自然界中的分布和作用
采集方法
根据微生物生长环境的不 同，采用适当的采集方法， 如挖掘、过滤、无菌操作 等。
样品保存
采集后的样品应立即进行 保存，以保持微生物的活 性，常用的保存方法有低 温、干燥、真空等。
微生物的分离
样品处理
将采集的样品进行预处理， 如破碎、研磨、离心等， 使微生物从样品中分离出 来。
培养基选择
根据分离的微生物种类和 实验目的，选择适宜的培 养基，以满足微生物生长 的需求。
实验设计不够严谨
本实验在对照设置方面存在不足，未设置空白对照组以排除非特异性污染的影响。在未来的实验中，应完善实验设计 ，增加对照组以增强实验说服力。
实验结果分析不全面
在实验结果分析中，我只关注了微生物的形态和生长情况，未对微生物的生理生化特性进行深入研究。 建议在后续实验中增加相关分析，以更全面地了解微生物的特性。
培养结果分析
根据观察结果，对微生物的生长情 况进行分析，得出相应的结论。
04
实验结果与分析
微生物的形态观察
总结词
通过显微镜观察，记录微生物的形态特征，如形状、大小、颜色、运动性等。
详细描述
在实验中，我们观察到了多种微生物的形态特征。例如，细菌呈球形、杆形或螺旋形，大小通常在0.5-5微米之 间；霉菌呈丝状或网状结构，有分枝和无分枝，大小因菌种而异；原生动物通常比细菌大，形态多样，如变形虫、 草履虫等。对未来实验的展望Fra bibliotek1 2
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甲基红（M.R）试验/VP试验
（1）接种培养 将菌种接种于2支葡萄糖磷酸盐蛋白胨 水微量发酵管，37℃，48h。
（2）观察记录 1支滴加M.R试剂30秒，观察结果。 1支加VP试剂（先加甲液再加乙液） 15min，观察结果。
（五）硫化氢试验
凡细菌能分解含硫氨基酸，产生硫化氢 （H2S）者，其所产生的H2S会使培养基中的 醋酸铅或FeCl3形成黑色的硫化铅或硫化铁。
实验五 细菌的生化实验
一 目的要求
1.掌握细菌生化试验操作方法及判定标准； 2.了解细菌生化试验在细菌鉴定中的作用。
二 实验内容
（一）糖分解实验 将菌种分别接种于五种糖微量发酵管，37℃，24h，观察结果。 （二）靛基质（吲哚）试验 将菌种接种于蛋白胨水微量发酵管，37℃，48h，再加靛基质试剂，观察结 果。 (三)甲基红（M.R）试验/VP试验 将菌种接种于2支葡萄糖磷酸盐蛋白胨水微量发酵管，37℃，48h，再分别 滴加M.R试剂30秒，VP试剂（先加甲液再加乙液）15min，观察结果。 （四）硫化氢试验 将菌种接种于硫化氢微量发酵管，37℃，24h，观察结果。 （五）脲酶试验 将菌种接种于尿素微量发酵管，37℃，24h，观察结果。 （六）枸橼酸盐利用试验 将菌种接种于枸橼酸盐微量发酵管，37℃，48h，观察结果。
是否产气，观察微量发酵管底部是否有气泡。
（二）靛基质（吲哚）试验 有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的 色氨酸生成吲哚(靛基质)。吲哚本身没有颜 色，不能直接看见，但当加入对二甲基氨基 苯甲醛试剂时，该试剂与吲哚作用，形成红 色的玫瑰吲哚。
（1）接种培养
取装有蛋白胨水培养液的微量发酵管1支，以无菌操
（六）脲酶试验 将菌种接种于尿素微量发酵管，37℃， 24h，观察结果。 有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解，产 生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈 粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物 尿素是否存在，细菌均能合成此酶，其活性 最适pH为7.0。
（七）枸橼酸盐利用试验 将菌种接种于枸橼酸盐微量发酵管，37℃， 48h，观察结果。 产气杆菌可利用枸橼酸盐作为碳源，细菌生 长繁殖，形成菌苔，分解枸橼酸盐生成碱性碳酸 盐，使培养基pH上升到7.0以上，由绿色变为深 蓝色，为枸橼酸盐利用试验阳性；而大肠杆菌则 不能分解枸橼酸盐，得不到碳源，不能生长，无 菌苔形成，培养基颜色不发生变化，为枸橼酸盐 利用试验阴性。
实验报告
原理、操作方法、结果及意义。
作分别接种细菌，置37℃恒温箱中培养48h。
（2）观察记录
在培养液中加入乙醚1～2滴，经充分振荡使吲哚萃取 至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此 时沿管壁缓慢加入1滴吲哚试剂（加入吲哚试剂后切 勿摇动试管，以防破坏乙醚层影响结果观察），如有
吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，此为吲哚试验阳性
反应，否则为阴性反应，阳性用“＋”、阴性用“－” 表示。
细菌生化试验结果记录表
糖分解试验 葡 大 肠 鸡 白 痢 麦 甘 乳 蔗 吲 哚 MR VP
H2S
脲 酶
枸橼 酸盐
产 气
变 形
细菌生化实验原理
（一）糖类分解（发酵）试验 细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸 产气。 是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂 溴甲酚紫（其pH在5.2以下呈黄色，pH在 6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的 颜色变化来判断。
（三）乙酰甲基甲醇试验(V.P.试验)
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解 葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合、脱羧成乙 酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中 氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基 生成红色化合物，称V.P.（+）反应。
(四)甲基红（M.R.）试验 某些细菌如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮 酸，继而分解为甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸 等，使培养基pH降至4.5以下，加入甲基红 指示剂呈红色，此为阳性反应；若产酸量少 或产生的酸进一步转化为醇、醛、气体和水 等，则培养基的酸碱度仍在pH6.2以上，加 入甲基红指示剂呈现黄色，为阴性反应。