双缩脲法测定血清总蛋白ppt课件
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【医学课件】 双缩脲法测定血清蛋白
三、试剂 1. 溴甲酚绿试剂 BCG
2. 60g/L蛋白标准液
三、试剂 1. 6mol/LNaOH
2. 双缩脲试剂
3. 双缩脲空白试剂
4. 60－70g/L标准液
四、操作
Bl
0.1
0.1
蛋白标准液
0.1
蒸留水
0.1
空白试剂
5.0
双缩脲试剂
5.0
5.0
5.0
混匀置25℃30分钟或37℃10分钟，蒸留水调零在540nm处 比色，测各管吸光度 五、 计算 血清总蛋白(g/L)
实验三、双缩脲法测定血清蛋白
一、目的
二、原理 血清中蛋白质的肽键（-CO-NH-）在碱性溶液 中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物，这 种 紫 红 色 络 合 物 在 540nm 处 有 明 显 的 吸 收 峰 ， 吸 收 峰 在一定范围内与血清中蛋白含量成正比，与同样方法 处理的蛋白标准液比较求得其含量。
=(AU-ARB-AB)/(AU-ARB-AB)*标准液浓度(g/L)
六、参考值 成人 60－80(g/L) 七、注意事项 略
附：溴甲酚绿法测定血清白蛋白
一、目的
二、原理 血清白蛋白在PH4.2的缓冲液中带正电荷， 在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的 染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色的复合物，在波长 630NM处有吸收峰，其颜色深浅与蛋白的浓度成正 比。
2. 60g/L蛋白标准液
三、试剂 1. 6mol/LNaOH
2. 双缩脲试剂
3. 双缩脲空白试剂
4. 60－70g/L标准液
四、操作
Bl
0.1
0.1
蛋白标准液
0.1
蒸留水
0.1
空白试剂
5.0
双缩脲试剂
5.0
5.0
5.0
混匀置25℃30分钟或37℃10分钟，蒸留水调零在540nm处 比色，测各管吸光度 五、 计算 血清总蛋白(g/L)
实验三、双缩脲法测定血清蛋白
一、目的
二、原理 血清中蛋白质的肽键（-CO-NH-）在碱性溶液 中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物，这 种 紫 红 色 络 合 物 在 540nm 处 有 明 显 的 吸 收 峰 ， 吸 收 峰 在一定范围内与血清中蛋白含量成正比，与同样方法 处理的蛋白标准液比较求得其含量。
=(AU-ARB-AB)/(AU-ARB-AB)*标准液浓度(g/L)
六、参考值 成人 60－80(g/L) 七、注意事项 略
附：溴甲酚绿法测定血清白蛋白
一、目的
二、原理 血清白蛋白在PH4.2的缓冲液中带正电荷， 在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的 染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色的复合物，在波长 630NM处有吸收峰，其颜色深浅与蛋白的浓度成正 比。
实验一血清蛋白质测定(共51张PPT)
【注意事项】
1.测定的血清以新鲜为宜，但在冰箱保存而不混 浊的标本也可应用，高脂血症混浊血清会干扰比 色，可采用下述方法消除：取2支带塞试管或离 心管，各加待测血清，再加蒸馏水和丙酮10ml， 塞紧并颠倒混匀10次后离心，倾去上清液，将试 管倒立于滤纸上吸去残余液体。向沉淀中分别加 入双缩脲试剂及双缩脲空白试剂，再进行与上述 相同的其他操作和计算。
-----------------
-----------------
标准
A 血红蛋白和BCG产生与白蛋白相等的颜色强度，血红蛋白在1g/L以下无明显干扰，2g/L使吸光度增高3.
2．10mmol/L BCG贮存液
标准
3．叠氮钠贮存液
4．聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)贮存液
5．BCG试剂
实验一 血清蛋白质测定
但本法的检出限为～，这相当于70g/L的血清3～24μl，已能满足临床生化检验的需要，成为临床实验室血清TP首选的最方便，实用的常规方法。 酚酞、溴磺酞钠在碱性溶液中呈色，影响测定结果，右旋糖酐可使测定管混浊亦影响结果，理论上这些干扰均可用相应的标本空白管来消除。 ３．在波长630nm处用空白管调零，用定量加液器加BCG试剂，与测定管血清混合后，立即在30±3s内，读取吸光度。 4%，4g/L使吸光度增高7. 2 桌面，边台，水池，窗台，仪器要一尘不染，请值日生用抹布擦干净。 4(显蓝绿色)，受酸、碱影响较大，故所用的器材必须无酸、碱污染，BCG工作液的pH必须精确度监测，务必使其保持在限度内。 手工操作参数：波长540nm，光径1cm； 用双缩脲法测定血清标本中总蛋白浓度，用溴甲酚绿法测定血清白蛋白浓度, 蛋白质测定方法很多，常用的有： 丽春红蛋白结合法测得的结果与凯氏定氮法相符，并且显色后在室温可稳定24小时； 1．黄疸血清，溶血，高糖，酚酞等干扰用样本空白来消除。 由于血红蛋白本身能与双缩脲试剂反应，产生与血清白蛋白和球蛋白相近的显色效价，故应注意高血红蛋白的影响。 取试管4支，标明测定管（U）、标准管（S）、标本空白管（B）、试剂空白管（RB）。 双缩脲法测定血清总蛋白
双缩脲法测定蛋白质含量(共7张PPT)
1
2 345
课后练习
1、记忆五种蛋白质浓度测定方法的优缺点、 灵敏度和原理。
2、双缩脲法显色的颜色是什么? 3、使用紫外－可见分光光度计时，测定A值应
当在什么范围内比较合理？为什么？
注意
1、除－CONH-有此反应外——CO NH2，
-CH2-NH2，-CS- NH2等基团亦有此反应。
2、双缩脲法常用于蛋白质的快速测定 。
3、低浓度的铵盐不干扰结果；Tris及含氨基酸、多肽的缓冲
被．以及蔗糖、甘油等干扰本实验。
4、反应完后，放置30min；灵敏度低1～20mg
Tris:三羟甲基氨基甲烷盐酸盐
操作
3、低浓度的铵盐不干扰结果；
双缩脲法测定蛋白质含量
1
2
3
4
5
0——
0蛋白质标—含准有两酪—个以蛋上白的肽（键，ml因）此，有双缩—脲反应，在碱性1溶.液0 中蛋白质与C1u2.＋0形成紫红色络合—物，其颜色的深—浅与蛋白质的浓度成
样品（ml） — 正Leabharlann ，而与蛋白质的分子量和氨基酸成份无关。
2、双缩脲法显色的颜色是什么?
双01、缩除脲H双—－2法OC缩测(O定Nm脲—Hl蛋-)有白试此质剂反含应量（外—m—l）CO
2.0 NH2，4.0
— 1.0 4.0
— 1.0 4.0
2.0
2.0
—
—
4.0
4.0
0——
室温放置30分钟，于540nm处比色 2、双缩脲法常用于蛋白质的快速测定 。
Tris及含氨基酸、多肽的缓冲被．以及蔗糖、甘油等干扰本实验。
双缩脲法测定蛋白质含量
原理
蛋白质含有两个以上的肽键，因此，有双缩脲反应，在碱性
临床生化检验：3-血清总蛋白测(双缩脲法)
50～100mg 1～5ug
优点
准确性好、精密度高、 灵敏度高。 特异性高、准确度好、 精密度高、操作简单方 便，显色稳定。
灵敏度高、达双缩脲法 的100倍。
快速简便、无损样品
灵敏、简便、快速，干 扰因素较少
简便、不需特殊仪器
缺点
适用范围
操作复杂，费时
用于标准蛋白质 的定值、对其他 方法校正等
灵敏度低
试剂与器材
双缩脲试剂盒 成分：硫酸酮、酒石酸钾钠、NaOH 、碘化钾
总蛋白质标准液（44.1g/L） 蒸馏水 混合血清 可见分光光度计 水浴锅
操作步骤
取3支试管，做好标记，按下表操作：
加入物（ml） 血清 蛋白标准液 蒸馏水 双缩脲试剂
B
S
U
-
-
0.06
-
0.06 -
0.06
-
-
3.0
血清总蛋白测定 (双缩脲法）
医学检验系临床生化检验教研室
实验目的
掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理 熟悉血清总蛋白的临床意义；
总蛋白测定经典和常见的方法比较
方法
凯氏定氮法
双缩脲法
Lowry法 （Folin酚法 ）
紫外 分光光度法 考马斯亮蓝法 （Bradford）
化学比浊法
灵敏度
0.2~ 1.0mg氮 1～20mg 20～250ug
干扰物质多、操作 要求严格计时
为临床测定血清 总蛋白首选方法 。
适用于测定单一 蛋白质及测定蛋 白质含量较少的 标本如脑脊液
灵敏度低、干扰物 较多
常用于较纯的酶 和免疫球蛋白测 定
不同蛋白质与染料 常用于需求更高 结合力不一致，对 呈色灵敏度的蛋 比色杯有吸附作用 白电泳
优点
准确性好、精密度高、 灵敏度高。 特异性高、准确度好、 精密度高、操作简单方 便，显色稳定。
灵敏度高、达双缩脲法 的100倍。
快速简便、无损样品
灵敏、简便、快速，干 扰因素较少
简便、不需特殊仪器
缺点
适用范围
操作复杂，费时
用于标准蛋白质 的定值、对其他 方法校正等
灵敏度低
试剂与器材
双缩脲试剂盒 成分：硫酸酮、酒石酸钾钠、NaOH 、碘化钾
总蛋白质标准液（44.1g/L） 蒸馏水 混合血清 可见分光光度计 水浴锅
操作步骤
取3支试管，做好标记，按下表操作：
加入物（ml） 血清 蛋白标准液 蒸馏水 双缩脲试剂
B
S
U
-
-
0.06
-
0.06 -
0.06
-
-
3.0
血清总蛋白测定 (双缩脲法）
医学检验系临床生化检验教研室
实验目的
掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理 熟悉血清总蛋白的临床意义；
总蛋白测定经典和常见的方法比较
方法
凯氏定氮法
双缩脲法
Lowry法 （Folin酚法 ）
紫外 分光光度法 考马斯亮蓝法 （Bradford）
化学比浊法
灵敏度
0.2~ 1.0mg氮 1～20mg 20～250ug
干扰物质多、操作 要求严格计时
为临床测定血清 总蛋白首选方法 。
适用于测定单一 蛋白质及测定蛋 白质含量较少的 标本如脑脊液
灵敏度低、干扰物 较多
常用于较纯的酶 和免疫球蛋白测 定
不同蛋白质与染料 常用于需求更高 结合力不一致，对 呈色灵敏度的蛋 比色杯有吸附作用 白电泳
双缩脲法测定蛋白质PPT教学课件
➢ 严禁在实验室内吃饭、吸烟、扔废物和随地吐痰，实验室内学生轮流安排值日，实 验结束离开实验室之前，关好窗户，切断电源，水源，确保安全。
2020/12/11
4
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
试剂使用规则
➢ 使用试剂前应该仔细辨认标签，看清名称及浓度，是否为本实验所需。 ➢ 取出试剂后，立即将瓶塞盖好，放回原位；未用完的试剂决不可倒回原瓶。 ➢ 取标准溶液时，应该将标准溶液倒入干试管中，再用干净吸管吸取标准液，以免
污染瓶中的标准液体。 ➢ 使用滴管时，滴管尖端朝下，避免试剂流入橡皮帽内。 ➢ 使用有毒试剂及强酸强碱时，尽可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿
用嘴吸取，以免造成意外。
2020/12/11
5
吸量管的使用
➢ 正确拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指顶住吸量管顶端。 ➢ 取液：用吸耳球吸取液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸量管上
端。 ➢ 调刻度：吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体
下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。 ➢ 放液：吸量管移入准备接受溶液的容器中，使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸
量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。吸量管应最后靠壁15秒。
2020/12/11
2020/12/11
12
不同浓度的VitB12溶液对相同波长的光的不同吸收
λ＝ 550nm
A
µg/ml
2020/12/11
13
物质定性分析常用方法
➢ 原理：根据物质对于入射光的特征吸收，可应用于物质溶液的定性检测 ➢ 比较吸收光谱曲线：在相同的条件下，吸收光谱曲线不同，表明物质的化学结构不同。 ➢ 比较最大吸收波长：不同物质的最大吸收波长不同；化学结构相似的物质最大吸收波长
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4
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
试剂使用规则
➢ 使用试剂前应该仔细辨认标签，看清名称及浓度，是否为本实验所需。 ➢ 取出试剂后，立即将瓶塞盖好，放回原位；未用完的试剂决不可倒回原瓶。 ➢ 取标准溶液时，应该将标准溶液倒入干试管中，再用干净吸管吸取标准液，以免
污染瓶中的标准液体。 ➢ 使用滴管时，滴管尖端朝下，避免试剂流入橡皮帽内。 ➢ 使用有毒试剂及强酸强碱时，尽可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿
用嘴吸取，以免造成意外。
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吸量管的使用
➢ 正确拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指顶住吸量管顶端。 ➢ 取液：用吸耳球吸取液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸量管上
端。 ➢ 调刻度：吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体
下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。 ➢ 放液：吸量管移入准备接受溶液的容器中，使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸
量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。吸量管应最后靠壁15秒。
2020/12/11
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不同浓度的VitB12溶液对相同波长的光的不同吸收
λ＝ 550nm
A
µg/ml
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13
物质定性分析常用方法
➢ 原理：根据物质对于入射光的特征吸收，可应用于物质溶液的定性检测 ➢ 比较吸收光谱曲线：在相同的条件下，吸收光谱曲线不同，表明物质的化学结构不同。 ➢ 比较最大吸收波长：不同物质的最大吸收波长不同；化学结构相似的物质最大吸收波长
血清总蛋白测定(双缩脲
血清总蛋白测定（双缩脲）1. 简介血清总蛋白是指血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白和球蛋白等。
血清总蛋白测定是一项常见的检验方法，用于评估患者的蛋白质代谢情况，以及某些疾病的诊断和监测。
双缩脲法是一种常用的血清总蛋白测定方法，本文将介绍该方法的原理、操作流程和结果解读。
2. 原理双缩脲法利用缩脲与蛋白质中的酚类物质反应生成有颜色的复合物，通过测量复合物的吸光度来定量测定血清中的总蛋白含量。
该方法具有简单、灵敏、快速等特点，被广泛应用于临床实验室及科研领域。
3. 操作流程3.1 样本处理从被检测者的静脉血中采集适量的血清样本，并放置在离心管中，离心10分钟将血清分离出来。
将分离得到的血清样本转移到干净的试管中。
3.2 加入试剂取适量的双缩脲试剂，按照其说明书的要求加入到试管中，与血清样本进行充分混合。
注意避免空气泡的形成。
3.3 酶解反应将试管放置于恒温水浴中，根据试剂的要求进行酶解反应。
一般情况下，反应时间为30分钟。
3.4 测定吸光度将反应体放入分光光度计中，设置波长为试剂说明书要求的波长，记录吸光度值。
3.5 统计结果根据标准曲线，计算出血清样本中总蛋白的含量。
4. 结果解读根据血清总蛋白测定的结果，可以得出以下结论： - 如果测定的结果高于正常范围，可能说明患者在蛋白质代谢方面存在异常，如蛋白质合成过多或凋亡减少。
- 如果测定的结果低于正常范围，可能说明患者在蛋白质合成方面存在问题，如肝功能受损或营养不足等。
需要注意的是，血清总蛋白测定的结果受到多种因素影响，如年龄、性别、饮食习惯等，因此在结果解读时需要综合考虑患者的临床情况。
5. 总结血清总蛋白测定是一种常用的检验方法，通过双缩脲法可以快速、准确地测定血清中的总蛋白含量。
该方法操作简单，结果解读可为临床医生提供重要的参考依据。
但需要注意的是，结果的解读需要综合考虑患者的临床情况，以及其他相关检验指标的结果，才能做出正确的诊断。
双缩脲法测定蛋白质PPT演示课件
端。 ➢ 调刻度：吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体
下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。 ➢ 放液：吸量管移入准备接受溶液的容器中，使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸
量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。吸量管应最后靠壁15秒。
•5
吸量管的使用注意事项
•9
光吸收示意图
I0
I
C
b
•10
吸收光谱和物质的定性分析
➢ 物质的吸收光谱与物质分子结构有关。 ➢ 吸收光谱曲线是物质的特征曲线。用各种不同波长的光线作为入射光测定物质的吸光度
（Absorbance），然后以波长（λ）为横轴，相应的吸光度（A）为纵轴，按结果作图， 可得到该物质的吸收光谱曲线，这种曲线体现了物质对不同波长的光的吸收能力。 ➢ 在一定的温度、pH值等条件下吸收光谱的曲线形状是一定的。在吸收光谱中，往往可 找到一个或几个吸收最大值，该处的波长称为最大吸收波长（λmax）。物质不同，它 们的最大吸收波长也往往不同。
➢ 吸量管上端标有“吹”字。将所量液体全部放出后，还需要吹出残留于管尖的溶 液。此类吸量管为“吹出式”，未标“吹”字的吸量管，则不必吹出管尖的残留 液体。(0.5ml以下的都要吹）
➢ 吸量管尖应接触受器内壁，但不应插入受器内的原有液体之中，以免污染吸量管 及试剂。
➢ 吸取血液、尿、组织样品、粘稠试剂或有颜色的吸量管，用后应及时用自来水冲 洗干净。如果吸取一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，待实验完毕后，用自来水 冲洗干净，晾干备用。
A＝KCL 或 lgI0/I =KCL A为溶液对光的吸光度，反映了物质对光的吸收程度； C为溶液浓度； L为溶液厚度； I0为照射待测物质的单色光强度，I为透过待测物质光线的光强度，透光度 T= I/I0即溶液透过光的强度与入射光的强度之比； K为吸光系数，是物质在单位浓度和单位厚度的条件下对入射光的吸光度。 实验中溶液厚度不变，则A＝KC
下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。 ➢ 放液：吸量管移入准备接受溶液的容器中，使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸
量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。吸量管应最后靠壁15秒。
•5
吸量管的使用注意事项
•9
光吸收示意图
I0
I
C
b
•10
吸收光谱和物质的定性分析
➢ 物质的吸收光谱与物质分子结构有关。 ➢ 吸收光谱曲线是物质的特征曲线。用各种不同波长的光线作为入射光测定物质的吸光度
（Absorbance），然后以波长（λ）为横轴，相应的吸光度（A）为纵轴，按结果作图， 可得到该物质的吸收光谱曲线，这种曲线体现了物质对不同波长的光的吸收能力。 ➢ 在一定的温度、pH值等条件下吸收光谱的曲线形状是一定的。在吸收光谱中，往往可 找到一个或几个吸收最大值，该处的波长称为最大吸收波长（λmax）。物质不同，它 们的最大吸收波长也往往不同。
➢ 吸量管上端标有“吹”字。将所量液体全部放出后，还需要吹出残留于管尖的溶 液。此类吸量管为“吹出式”，未标“吹”字的吸量管，则不必吹出管尖的残留 液体。(0.5ml以下的都要吹）
➢ 吸量管尖应接触受器内壁，但不应插入受器内的原有液体之中，以免污染吸量管 及试剂。
➢ 吸取血液、尿、组织样品、粘稠试剂或有颜色的吸量管，用后应及时用自来水冲 洗干净。如果吸取一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，待实验完毕后，用自来水 冲洗干净，晾干备用。
A＝KCL 或 lgI0/I =KCL A为溶液对光的吸光度，反映了物质对光的吸收程度； C为溶液浓度； L为溶液厚度； I0为照射待测物质的单色光强度，I为透过待测物质光线的光强度，透光度 T= I/I0即溶液透过光的强度与入射光的强度之比； K为吸光系数，是物质在单位浓度和单位厚度的条件下对入射光的吸光度。 实验中溶液厚度不变，则A＝KC
实验双缩脲法测定蛋白质含量共41页PPT
实验双缩脲法测定蛋白质含量
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
41、学问异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
41、学问异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
双缩脲法测定血清总蛋白ppt课件
=
A测 —— A标
×
C标
5
三、实验操作
加入物 （ml） 血清
调零 管
——
标本空 试剂空 标准管 测定管 白管(B) 白管(RB) (S) (U)
0.1
—— —— 0.1
蛋白质标 —— 准液
蒸馏水 5.0
—— ——
—— 0.1
0.1 —— —— ——
双缩脲空 —— 白试剂
双缩脲试 —— 剂
5.0 ——
双缩脲法测定血清总蛋白
临床生化实验室
1
一、实验目的
• 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理及操作。 • 了解血清总蛋白测定的临床意义。
2
二、实验原理
• 尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子 氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中， 能与硫酸铜结合成紫红色的化合物，此反 应称为双缩脲反应。
3
二、实验原理
• 因血清取量少，取量尽量准确。 • 碱液对玻璃仪器有腐蚀作用，尽量用塑料
瓶装。
15
8
五、方法学评价
• 目前常用的测定血清总蛋白的方法有如下 五种经典方法： 双缩脲法（Biuret法）：1~2mg 定氮法：灵敏度0.2~1.0mg Folin－酚试剂法（Lowry法）：50~100μg 紫外吸收法：5μg 考马斯亮蓝法（Bradford法）：1~5μg 9
五、方法学评价
双缩脲法优缺点： • 优点
操作简单，使用方便，作为临床测定血清 总蛋白的首选常规方法且重复性好。 • 缺点 灵敏度较低，比酚试剂法低100倍左右。
10
六、临床意义
• 血清总蛋白降低 1、蛋白合成障碍：肝功能严重受损 2、蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出；
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- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
• 双缩脲法显色反应和蛋白质中肽健数成正比 关系，与蛋白质的种类、分子量及氨基酸的 组成无明显关系。
.
13
七、注意事项
• 黄疸血清、严重溶血、葡萄糖、酚酞等对 本法有明显干扰，故用标本空白管来消除； 因双缩脲试剂中含有CuSO4具有颜色，故 用试剂空白管消除干扰。
.
14
七、注意事项
• 高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用下 列方法消除：取2支离心管，各家待测血清 0.1ml，再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml， 混匀后离心。
• 因血清取量少，取量尽量准确。
• 碱液对玻璃仪器有腐蚀作用，尽量用塑料 瓶装。
.
15
蛋白质分子中含有肽键（—CO — NH — ） 与双缩脲结构相似，故也能进行此反应。双缩 脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。
.
4
二、实验原理
• 紫红色络合物在波长为540nm处的吸光度 与溶液中蛋白质的含量在一定范围内成正 比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比 较，即可求得溶液中蛋白质的含量。
•
C测
操作简单，使用方便，作为临床测定血清 总蛋白的首选常规方法且重复性好。
• 缺点
灵敏度较低，比酚试剂法低100倍左右。
.
10
六、临床意义
• 血清总蛋白降低
1、蛋白合成障碍：肝功能严重受损
2、蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出； 大出血；肾病综合症等
3、营养不良或消耗增加：如低蛋白饮食；慢性 消耗性疾病：结核病、恶性肿瘤等
•参考范围： 正常人：60~80g/L
.
8
五、方法学评价
• 目前常用的测定血清总蛋白的方法有如下 五种经典方法：
双缩脲法（Biuret法）：1~2mg
定氮法：灵敏度0.2~1.0mg
Folin－酚试剂法（Lowry法）： 50~100μg
紫外吸收法：5μg
.
9
五、方法学评价
双缩脲法优缺点：
• 优点
—— ——
—— 5.0
.
5.0 5.0
6
三、实验操作
• 混匀，置25 ℃水浴放置30min或37℃水浴 放置10min，以空白管调零，在540nm波长 处进行比色，分别读取各管的吸光度值。
.
7
四、结果计算
• 计算公式： AU- ARB- AB
血清总蛋白（g/L）= ———— ×C标 AS-ARB
4、血浆稀释：静脉注射过多低渗溶液或各种原
因引起的水钠潴留。
.
11
六、临床意义
• 血清总蛋白升高 1、蛋白合成增加：多见于多发性骨髓瘤 患者，主要是因为异常球蛋白增加 2、血浆浓缩：急性脱水、呕吐、腹泻等。
.
12
七、注意事项
• 双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反应！ 凡分子内含有2个或2个以上肽健（—CO — NH — ）的化合物均可呈双缩脲反应。
=
—A测— A标
×
C标
.
5
三、实验操作
加入物 （ml） 血清
调零 管
——
蛋白质标 —— 准液
蒸馏水 5.0
双缩脲空 —— 白试剂
双缩脲试 —— 剂
标本空 试剂空 标准管 测定管 白管(B) 白管(RB) (S) (U)
0.1
—— —— 0.1
—— —— 0.1 ——
—பைடு நூலகம் 5.0
0.1 ——
—— ——
双缩脲法测定血清总蛋白
临床生化实验室
.
1
一、实验目的
• 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理及操作。 • 了解血清总蛋白测定的临床意义。
.
2
二、实验原理
• 尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子 氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中， 能与硫酸铜结合成紫红色的化合物，此反 应称为双缩脲反应。
.
3
二、实验原理
.
13
七、注意事项
• 黄疸血清、严重溶血、葡萄糖、酚酞等对 本法有明显干扰，故用标本空白管来消除； 因双缩脲试剂中含有CuSO4具有颜色，故 用试剂空白管消除干扰。
.
14
七、注意事项
• 高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用下 列方法消除：取2支离心管，各家待测血清 0.1ml，再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml， 混匀后离心。
• 因血清取量少，取量尽量准确。
• 碱液对玻璃仪器有腐蚀作用，尽量用塑料 瓶装。
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蛋白质分子中含有肽键（—CO — NH — ） 与双缩脲结构相似，故也能进行此反应。双缩 脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。
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二、实验原理
• 紫红色络合物在波长为540nm处的吸光度 与溶液中蛋白质的含量在一定范围内成正 比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比 较，即可求得溶液中蛋白质的含量。
•
C测
操作简单，使用方便，作为临床测定血清 总蛋白的首选常规方法且重复性好。
• 缺点
灵敏度较低，比酚试剂法低100倍左右。
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六、临床意义
• 血清总蛋白降低
1、蛋白合成障碍：肝功能严重受损
2、蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出； 大出血；肾病综合症等
3、营养不良或消耗增加：如低蛋白饮食；慢性 消耗性疾病：结核病、恶性肿瘤等
•参考范围： 正常人：60~80g/L
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五、方法学评价
• 目前常用的测定血清总蛋白的方法有如下 五种经典方法：
双缩脲法（Biuret法）：1~2mg
定氮法：灵敏度0.2~1.0mg
Folin－酚试剂法（Lowry法）： 50~100μg
紫外吸收法：5μg
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五、方法学评价
双缩脲法优缺点：
• 优点
—— ——
—— 5.0
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5.0 5.0
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三、实验操作
• 混匀，置25 ℃水浴放置30min或37℃水浴 放置10min，以空白管调零，在540nm波长 处进行比色，分别读取各管的吸光度值。
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四、结果计算
• 计算公式： AU- ARB- AB
血清总蛋白（g/L）= ———— ×C标 AS-ARB
4、血浆稀释：静脉注射过多低渗溶液或各种原
因引起的水钠潴留。
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六、临床意义
• 血清总蛋白升高 1、蛋白合成增加：多见于多发性骨髓瘤 患者，主要是因为异常球蛋白增加 2、血浆浓缩：急性脱水、呕吐、腹泻等。
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七、注意事项
• 双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反应！ 凡分子内含有2个或2个以上肽健（—CO — NH — ）的化合物均可呈双缩脲反应。
=
—A测— A标
×
C标
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三、实验操作
加入物 （ml） 血清
调零 管
——
蛋白质标 —— 准液
蒸馏水 5.0
双缩脲空 —— 白试剂
双缩脲试 —— 剂
标本空 试剂空 标准管 测定管 白管(B) 白管(RB) (S) (U)
0.1
—— —— 0.1
—— —— 0.1 ——
—பைடு நூலகம் 5.0
0.1 ——
—— ——
双缩脲法测定血清总蛋白
临床生化实验室
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一、实验目的
• 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理及操作。 • 了解血清总蛋白测定的临床意义。
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二、实验原理
• 尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子 氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中， 能与硫酸铜结合成紫红色的化合物，此反 应称为双缩脲反应。
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二、实验原理