四种提取花生DNA的方法
花生种皮及籽仁DNA提取方法的研究
文章编号:100224093(2008)0420037203花生种皮及籽仁DNA提取方法的研究3石运庆1,苗华荣1,陈高2,孙兵2,陈静1,胡晓辉1,闫彩霞1,单世华133(1.山东省花生研究所,山东青岛266100;2.东北农业大学,黑龙江哈尔滨150030)摘要:采用改良的CTAB和SDS方法对金花1012和J11两个花生品种种子的种皮及籽仁的DNA 进行了提取研究。
发现CTAB法无法提取J11种皮的DNA,而改良的SDS方法能将两种花生的种皮及籽仁的DNA提取出来。
另发现用苯酚对提取的DNA进行纯化效果更显著。
因此,配合使用苯酚去除蛋白质的SDS方法更适宜于花生种皮DNA的提取。
关键词:花生;籽仁;种皮;DNA提取;SDS法;CTAB法中图分类号:S565.203;Q78文献标识码:AStudy on D NA Extraction from Seed and Seed C apsule ofPeanut(Ar achis hy pogaea L.)S H I Yun2qing1,M IAO Hua2rong1,C H EN Gao2,SUN Bing2,C H EN Jing1,HU Xiao2hui1,YAN Cai2xia1,S HAN Shi2hua1(1.S handong Peanut Research I nstit ute,Qi ng dao266100,Chi na;2.N ort heast A g ricult ure U ni versit y,H aerbi n150030,Chi na)Abstract:Two DNA ext raction met hods,C TAB and SDS,were compared in ext racting DNA f rom seed and seed cap sule of Jinhua1012and J11.It was found t hat t he DNA f rom seed cap sule of J11 couldn’t be ext racted out using C TAB met hod;but using SDS met hod,t he DNA could be ext racted out f rom bot h seed and seed cap sule of t he two varieties.And t he p urification effect of DNA was very obvious using p henol.Result s showed,SDS met hod wit h p henol is more suitable to ext racting DNA f rom seed cap sule of peanut s.K ey w ords:peanut(A rachis hy pogaea L.);seed;seed cap sule;genome DNA;SDS met hod;C TAB met hod 花生种皮是花生抵御病毒侵染的首要屏障,也是克隆抗病基因的重要材料[1～3]。
花生DNA快速提取方法及应用
收稿日期：２０１９－０７－２４ 基金项目：国家自然科学基金项目（Ｕ１７０４２３２）；河南省产业技术体系（Ｓ２０１２－０５－Ｇ０３） 作者简介：李柯（１９９５—），男，河南南阳人，硕士研究生。 通讯作者：殷冬梅（１９７２—），女，河南南阳人，博士，教授，主要从事花生遗传育种工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｉｎｄｍ＠１２６．ｃｏｍ
关键词：花生；ＤＮＡ快速提取；碱裂解法 中图分类号：Ｓ５６５．２ 文献标识号：Ａ 文章编号：１００１－４９４２（２０１９）０９－００６８－０５
Ａ ＲａｐｉｄＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｏｆＰｅａｎｕｔＤＮＡ ａｎｄＩｔｓＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ＬｉＫｅ，ＺｈａｏＫｕｎｋｕｎ，ＮｉｎｇＬｏｎｇｌｏｎｇ，ＭａＱｉａｎ，ＬｉＺｈｏｎｇｆｅｎｇ，ＭａＸｉｎｇｌｉ，ＺｈａｎｇＸｉｎｇｇｕｏ，ＹｉｎＤｏｎｇｍｅｉ
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｐｅａｎｕｔ；ＲａｐｉｄＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；Ａｌｋａｌｉｎｅｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄ
花生是世界上主要油料作物之一，其出油率 远远高于油菜、大豆、芝麻、向日葵等其他油料作 物。在我国油料生产中，花生种植面积仅次于油 菜，而单产和总产居第一位。随着植物分子研究 的进一步发展，可通过分子标记选择育种、大规模 杂交后代单株基因型鉴定等方式获得高蛋白、高 油酸、抗 病 抗 逆、适 产 的 花 生 品 种［１］。 分 子 标 记 辅助选择技术能够快速对目标性状进行筛选，而 植物基因组 ＤＮＡ的提取是该方法的基础［２］。一 般实验 室 提 取 ＤＮＡ 的 方 法 有 ＣＴＡＢ法［３］、ＳＬＳ
山 东 农 业 科 学 ２０１９，５１（９）：６８～７２ ＤＯＩ：１０．１４０８３／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－４９４２．２０１９．０９．０１０
ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
花生叶片DNA快速提取方法的优化
Ａｂｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｙ ｏ ｕ ｎ ｇ ｌ ｅ ａ ｖ ｅ ｓ ｏ ｆ ｐ ｅ ａ ｎ ｕｔ ａ ｓ ｅ ｘ ｐｅ ｉｍｅ ｒ ｎ ｔ ｍａ ｔ ｅ ｉａ ｒ ｌ ，ｆ ｏ ｕ ｒ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ＤＮＡ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ －
取方法进行 比较和优化 。结果表 明， 与其他 ３种改 良方法 比较 ， 改良 Ｔ Ｐ Ｓ法 具有不需 液氮磨样 、 提取 速度快 、
试剂种类少 、 成本 低 、 Ｄ Ｎ Ａ溶解速度快 、 质量较好的优点 ， 提取 的 Ｄ Ｎ Ａ可用于花生 Ｓ Ｓ Ｒ分析 。
关键词 ： 花生 ； 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ； 提取方法 ； 幼 叶 中 图分 类号 ： ￥ ５ ６ ５ ． ２ ０ １ 文献标识号 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ １ — ４ ９ ４ ２ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ７— ０ ０ １ １ — ０ ４
（ １ ． Ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ，Ｑ ｉ ￣ ｇ ａ ａ ｏ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆＳ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，Ｑ ｉ ｎ ｇ ｄ ａ ｏ ２ ６ ６ ０ ４ ２ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ． Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｐ ｅ ａ ｎ ｔ ｕ
快速提取植物基因组DNA
4 种快速植物基因组DNA 提取方法比较：DNA 是从2 周龄水稻幼苗中提取。
（1）煮沸法：取50 mg 新鲜水稻叶片，剪碎至一干净1.5 mL 离心管中；加入200 μLTE Buffer，用细玻璃棒捣碎混匀；在沸水上煮10 min，冰浴10 min；于室温下13000 r/min 离心5 min；将上清储存在-20 ℃中。
（2）微波炉法：取50 mg 水稻叶片，剪碎至一干净1.5 mL 离心管中；在700 W 家用微波炉中高热处理5 min，加入100 μL TE Buffer，振荡，13000 r/min离心 5 min；将上清液储存在－20℃。
（3）碱处理法：取50 mg 水稻叶片，剪碎至一干净1.5 mL 离心管中；加入配好的NaOH 提取液[(Tris-HCL) = 100 mmol/L (pH8.0)，c(NaOH) =300 mmol/L(TritonX-100)=0.3 %]用玻璃棒捣碎混匀，室温静置片刻后13000 r/min 离心3min。
4）TritonX-100 提取法：取50 mg 嫩叶片，剪碎至一干净1.5 mL 离心管中；加入200 μL 提取缓冲液[c (Tris-HCl) = 20 mmol/L (pH8.0)，c (EDTA) =2mmol/L，c (TritonX-100) = 1.2 %]用细玻璃棒捣碎混匀；65 ℃水浴15 min，13000r/min 离心5 min，将上清储存在－20 ℃。
每个方法做三次重复，分别用上清提取液进行电泳检测。
将提取所得的基因组DNA 用 1.5 %琼脂糖电泳分析，结果表明用试剂盒提取的基因组DNA 最完整，Triton X-100 提取法所得的基因组DNA 条带也较明亮，煮沸法、微波法和碱处理法没有基因组条带。
LAMP检测结果：碱处理法和微波处理法扩增出来的条带亮度低，可能是因为微波和碱破坏了基因组的完整性。
煮沸法和Triton X-100 提取法的检测效果最好，这与提取液的成分能很好的保护基因组的完整性有关，可用于现场LAMP 检测用模板DNA的快速制备。
植物提取dna的步骤及原理
植物提取dna的步骤及原理以植物提取DNA的步骤及原理为标题，本文将介绍植物提取DNA 的基本步骤以及相关原理。
植物提取DNA是指从植物细胞中分离出DNA分子的过程。
植物细胞中的DNA包含了植物的遗传信息，因此提取植物DNA对于遗传研究和基因工程具有重要意义。
下面是植物提取DNA的基本步骤：步骤一：准备样品需要选择一种适合的植物样品。
可以选择新鲜的叶片、茎段或种子作为样品。
样品应该尽可能新鲜，并且避免受到污染或损伤。
步骤二：打碎细胞将样品放入冰冻细胞研磨器中，加入研磨缓冲液，并用研磨器将样品研磨成细胞悬浮液。
研磨缓冲液中的盐和洗涤剂有助于破坏细胞壁，并释放细胞内的DNA。
步骤三：溶解细胞膜将研磨后的细胞悬浮液转移到离心管中，并加入含有洗涤剂的细胞裂解液。
洗涤剂能够破坏细胞膜，使DNA从细胞中释放出来。
步骤四：沉淀DNA将细胞裂解液置于高速离心机中进行离心，离心过程中，DNA会被沉淀到离心管底部形成一个白色的沉淀物。
离心后，将上清液倒掉，只保留沉淀物。
步骤五：洗涤DNA使用75%乙醇溶液洗涤DNA沉淀物，以去除离心过程中残留的盐和洗涤剂等杂质。
洗涤后，用吸管或微量移液器将乙醇溶液完全抽尽，避免干燥过程中DNA沉淀物溶解。
步骤六：溶解DNA将洗涤后的DNA沉淀物用适量的溶解液溶解，常用的溶解液包括TE缓冲液或纯净水。
溶解后的DNA溶液可以用于后续的实验操作，如PCR扩增、酶切等。
以上就是植物提取DNA的基本步骤，下面将简要介绍相关的原理。
DNA提取的原理主要基于细胞的破坏和DNA的溶解。
在打碎细胞的过程中，使用研磨缓冲液破坏细胞壁，释放细胞内的DNA。
细胞裂解液中的洗涤剂能够破坏细胞膜，使DNA从细胞中释放出来。
离心过程中，DNA分子由于其较大的分子量而沉淀到离心管底部，而其他细胞碎片和杂质则在上清液中。
洗涤过程中使用的乙醇溶液能够去除离心过程中残留的盐和洗涤剂等杂质。
最后，将DNA沉淀物溶解在适当的溶解液中，得到DNA溶液。
植物dna提取方法
植物dna提取方法
提取植物的DNA可以通过以下几个步骤：
1. 植物材料准备：选择新鲜的植物组织，如叶片、茎、根或花朵。
使用刀片将组织切碎，将其放入离心管或试管中。
2. 细胞破碎：可以使用物理或化学方法将细胞破碎，以释放DNA。
常用的方法有研钵法、冻融法或特定的细胞破碎缓冲液。
3. DNA溶出：将细胞破碎液加入含有溶出缓冲液的试管中，使DNA从细胞中溶出。
溶出缓冲液通常含有EDTA、盐和洗涤剂等成分。
4. 蛋白质消化：加入蛋白酶K等蛋白质消化酶，去除DNA溶液中的蛋白质。
蛋白酶K可以在高温下活性化，并能降解多种蛋白质。
5. DNA沉淀：加入等体积的冷乙醇或异丙醇，使DNA分子沉淀。
可以通过离心沉淀DNA，并将上清液倒掉。
6. DNA纯化：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除杂质。
然后用适量的缓冲液重新溶解DNA。
7. DNA检测：可以使用紫外光谱仪或凝胶电泳等方法检测DNA的浓度和质量。
注意事项：
- 实验操作时应注意无菌条件，以避免污染。
- 建议在化学通风橱等无菌环境下进行DNA提取。
- 每个步骤中所用试剂和设备应事先消毒或经过无菌处理。
- DNA提取过程中应尽量避免DNA的降解，可以采取低温、迅速和轻柔的操作方式。
花生叶片DNA快速提取方法的优化
花生叶片DNA快速提取方法的优化作者：王蕾赵新涛许梦琦等来源：《山东农业科学》2014年第07期摘要：以花生幼叶为试材，对高通量DNA提取法、SDS简易法、TPS法以及TENP法4种不同的DNA提取方法进行比较和优化。
结果表明，与其他3种改良方法比较，改良TPS法具有不需液氮磨样、提取速度快、试剂种类少、成本低、DNA溶解速度快、质量较好的优点，提取的DNA可用于花生SSR分析。
关键词：花生；基因组DNA；提取方法；幼叶中图分类号：S565.201文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）07-0011-04AbstractWith the young leaves of peanut as experiment material， four different DNA extraction methods， the high-throughput DNA extraction method， the simple SDS method， TPS method and TENP method， were compared and optimized. The results showed that， compared with the other improved methods， the improved TPS method had the advantages of grinding samples with no liquid nitrogen， faster extraction rate， fewer kinds of reagent， lower cost， rapider DNA solution rate and better DNA quality. The DNA extracted through improved TPS method could be used for SSR analysis of peanut.Key wordsPeanut （Arachis hypogaea L.）；Genomic DNA；Extraction method；Young leavesDNA是遗传信息的载体，DNA的提取是分子生物学研究的基础。
花生DNA提取方法比较
花生DNA提取方法比较梁雪莲;郑奕雄;陈晓玲;曾锦姬【期刊名称】《生物技术》【年(卷),期】2007(17)1【摘要】目的:旨在筛选优化花生DNA提取方法。
方法:采用SDS法、改进SDS 法;CTAB法、改进CTAB法四种方法对花生叶DNA进行提取,并从电泳结果、纯度、得率、等方面对其进行比较研究,从而确定花生DNA提取适用流程;结果:CTAB法DNA平均得率为55.0μg/g.Fw,略小于SDS的60.3,但其A260/A280平均值为1.81,比SDS的1.55更接近标准要求。
结论:综合考虑CTAB法是提取花生DNA的最佳方法,可提取到较高质量的DNA,符合分子检测要求;虽然改良CTAB 法也相对好于SDS法,但由于步骤增加反而加剧DNA降解。
【总页数】4页(P41-44)【关键词】花生;叶片DNA;SDS法;改进SDS法;CTAB法;改进CTAB法【作者】梁雪莲;郑奕雄;陈晓玲;曾锦姬【作者单位】仲恺农业技术学院【正文语种】中文【中图分类】Q781【相关文献】1.农杆菌介导花生的遗传转化研究Ⅱ.花生基因组DNA提取方法的改良与鉴定 [J], 单世华;张海平;李春娟;庄伟建2.五种DNA提取方法对酸奶及菌粉中益生菌DNA提取效果比较 [J], 肖其胜;杨捷琳;丁卓平;何宇平3.几种DNA提取方法对红树植物秋茄叶片DNA提取效果的比较 [J], 仇建标;丁文勇;陈少波4.五种DNA提取方法对鱼加工制品DNA提取效果的比较 [J], 李进波;盛婧;李想;潘良文;吕蓉;杨捷琳5.DNA提取方法对一串红不同部位DNA提取的比较 [J], 侯艳霞;汤浩茹;张勇;罗娅;董晓莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
植物中dna的提取方法
植物中dna的提取方法
1.取植物样品：从植物中选取新鲜的叶片、花、果实、根等样品，避免使用含有腐烂、干枯或受到污染的样品。
2. 切碎植物组织：用刀片或剪刀将植物材料切成小块，放入细碎的研钵中，加入液氮或干冰，迅速研磨碎成粉末状。
3. 加入提取缓冲液：将粉末状样品转移到离心管中，加入含有CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）的提取缓冲液，并加入蛋白酶K。
缓冲液的配方可以根据不同的植物种类和研究目的进行调整。
4. 热处理样品：将离心管放入水浴中，用80°C的温度加热30分钟，使细胞壁破裂，释放DNA。
5. 加入有机溶剂：将等体积的氯仿：异戊醇（24:1）加入样品中，充分混合后离心，分离出上清液。
6. 沉淀DNA：将上清液转移到装有冰冷乙醇的离心管中，缓慢倒入样品，轻轻摇晃后静置10分钟，将离心管放入高速离心机中离心10分钟，沉淀出DNA。
7. 溶解DNA：将沉淀的DNA用70%的乙醇洗涤，再用TE缓冲液（10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0）将DNA溶解。
以上是一种常用的植物中DNA提取方法，可以根据实验需要进行调整和改进。
- 1 -。
植物DNA的提取的几种有效方法
植物ＤＮＡ的ＣＴＡＢ提取法：1 称取新鲜叶片2-3ｇ,剪碎放入研钵中,在液氮中研磨成粉末。
2 将粉末转移到的加有7ｍｌ经预热的1 5×ＣＴＡＢ提取缓冲液15ｍｌ离心管中,迅速混匀后置于65℃水浴中,温育30ｍｉｎ。
3 取出离心管,冷却至室温,加入氯仿/异戊醇(24:1),充分混匀,室温下2300×ｇ离心20ｍｉｎ。
4 将上清转移至另一新的15ｍｌ离心管中,加入1/10体积10%的ＣＴＡＢ和等体积的氯仿/异戊醇。
充分混匀,2300×ｇ离心20ｍｉｎ。
5 转移上清至另一新的15ｍｌ离心管中,加入等体积1%的ＣＴＡＢ沉淀缓冲液,轻轻摇晃至形成ＤＮＡ絮状沉淀。
1000×ｇ离心10ｍｉｎ,使ＤＮＡ沉淀于管底。
6 加入1 5-2ｍｌ的1ｍｏｌ/ＬＮａＣｌ及5μｌＲＮａｓｅ置于56℃水浴中过夜。
待ＤＮＡ完全溶解后,加2-3ｍｌ4℃预冷的95%的冰乙醇使ＤＮＡ沉淀,挑出ＤＮＡ,置于1 5ｍｌ离心管中,用70%乙醇清洗30ｍｉｎ,用离心机甩5ｓ,倒出70%乙醇,再用95%乙醇浸泡5ｍｉｎ,倒出95%乙醇,在超净工作台上吹干。
7 将风干的ＤＮＡ直接在4℃保存备用或溶于100μｌＴＥ溶液中于-20℃保存。
植物ＤＮＡ的ＳＤＳ提取法：1 取2-3ｇ新鲜叶片,在液氮中研磨成粉状(防止溶化)后转入15ｍｌ离心管中。
2 加入5ｍｌ于65℃预热的提取缓冲液,65℃水浴保温30ｍｉｎ(摇动数次),使提取液与样品充分混合。
3 加入2ｍｌ5ｍｏｌ/ＬＫＡｃ,剧烈振荡,冰浴保温20ｍｉｎ以上。
4 2700×ｇ离心20ｍｉｎ,将上清液倒入新的15ｍｌ离心管中,(若提取ＤＮＡ用于Ｓｏｕｔｈｅｒｎ等实验,一般在转移上清时加滤膜,防止样品残渣混入,可保证ＤＮＡ纯度)。
5 加入4ｍｌ氯仿/异戊醇(24∶1),摇匀,平衡,2700×ｇ离心15ｍｉｎ。
6 在另一新的15ｍｌ离心管中加入5ｍｌ预冷的异丙醇,将上清液用移液枪转入此管,在-20℃冷却30ｍｉｎ以上。
植物提取dna的方法
植物提取dna的方法
植物提取DNA的方法通常包括以下步骤：
1. 样品收集：选择新鲜的植物组织（如叶片、根部、种子等），避免使用死亡或腐烂的组织。
2. 组织破碎：将植物组织切碎或研磨，以释放DNA。
可以使用刀片、搅拌器、搅拌器研磨器等工具。
3. 细胞破裂：将组织样品置于研磨缓冲液中，并使用低温（如液氮）或高温（如加热至95C）进行热处理，破坏细胞壁以释放DNA。
4. 清理组织混合物：将组织破碎液通过滤纸等过滤，除掉固体残渣，获得纯净的液体样品。
5. 提取DNA：使用DNA提取试剂盒或自制的DNA提取缓冲液，根据试剂盒说明书或简单的化学反应步骤，将DNA从提取液中分离出来。
6. 纯化DNA：通过酒精沉淀、洗涤和干燥等步骤，去除可能存在的杂质和污染物，提高DNA的纯度和浓度。
7. DNA定量和质量检测：使用紫外吸收光度计或荧光探针等方法，测量提取得
到的DNA的浓度和纯度，确保其适合后续实验应用。
需要注意的是，不同植物物种的DNA提取方法可能存在差异，具体步骤和试剂使用可以根据研究目的和样品特点进行调整和优化。
同样，商业化的DNA提取试剂盒也提供了一种方便和快速的方法，避免了自制试剂的繁琐操作和优化步骤。
植物DNA提取方法总结
植物DNA的提取分离技术摘要：主要介绍了近年来国内外几种常用的DNA提取方法：CTAB法、SDS法等，并在对其进行了简单的归纳总结与比较分析同时，并介绍了一些新的改良方法和其他植物提取方法关键词：植物DNA 提取方法研究进展市售中药材大多为干品,而中药材的加工和贮藏整个过程,如日晒、高温烘干等都不利于DN的完整性, 为达到要求目前国内外研究发现并使用的DNA提取方法有很多[1-12]，其中被最为广泛应用的DNA提取方法是传统的CTAB法和SDS法[13]。
由于不同植物的材料组分和干湿程度各异，因此对不同植物DNA的提取存在着不同的效果。
目前许多学者都在致力于研究不同的植物DNA提取方法。
他们在探索新方法的同时，也针对不同的植物，在传统的提取方法上进行着一些新的改良。
1.十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）法在目前众多的DNA提取方法中，CTAB法是其中最为广泛应用的一种。
它既可以裂解细胞，又可以有效地去除多酚类和多糖类物质的沉淀，因而经常被应用于植物的DNA提取工作中。
1.1方法及原理CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。
在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB 与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。
通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
1.2 CTAB提取缓冲液的经典配方Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；NaCl 提供一个高盐环境，使DNP 充分溶解，在于液相中； CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离。
β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。
一种优化的提取花生根尖细胞DNA的方法
一
种 优 化 的提 取 花 生 根 尖 细 胞 ＤＮＡ 的方 法
詹 洁 ， 永 昌 何 龙 飞 伍 荣 冬 余 ， ，
（ ． 西 大 学 农 学 院 ， 西 南 宁 ５ ０ ０ ；． 西 大 学 林 学 院 ， 西 南 宁 ５ ０ ０ ） １广 广 ３０ ５ ２ 广 广 ３０ ５
摘要 ： 用 传 统 的 Ｃ Ｂ法 和 Ｓ Ｓ法提 取 花 生 根 尖 细 胞 的 Ｄ 采 ＴＡ Ｄ ＮＡ， Ｄ Ｓ Ｓ法 提 取 效 果优 于 Ｃ Ｂ 法 ， 仍 ＴＡ 但 不 能 满 足 实验 要 求 。对 传 统 的 Ｓ ＤＳ法 进 行 简 化 和 优 化 ， 立 了改 良 Ｓ Ｓ法 ， 用 改 良 Ｓ Ｓ法 提 取 花 生 建 Ｄ 利 Ｄ 根 尖 ＤＮＡ， 果 较 好 ， 够 满 足 分 子 生 物 学研 究 需要 。 效 能 关键 词 ： ＮＡ 提 取 ； 生 ； 尖 ； 良 Ｓ Ｓ法 Ｄ 花 根 改 Ｄ 中 图 分 类 号 ：５ ５ ２ Ｑ ４ ￥ ６ ． ９ ６ 文献标识 码 ｉ Ａ
大 ， 面含 有大 量 的液泡 ， 里 而且 根 部有 木质化 的导管 ， 些 都是 由死 细胞 组 成 ， 以 Ｄ 这 所 ＮＡ 含量 比较 低＿ ， １ 提取 不易 。本 文 比较 了 Ｃ ］ ＴＡＢ法 和 Ｓ ＤＳ法 提取 花生 根 尖 ＤＮＡ 的效 果 ， 现 Ｓ Ｓ法 的 提取 发 Ｄ 效果 优 于 Ｃ ＴＡＢ， 但效 果仍 不理 想 ， 以满足分 子 生物 学研究 需 要 。在 此基 础 上 ， 传 统 的 Ｓ Ｓ法 难 对 Ｄ
Ａｎ Ｏｐｔｍ ｕ ｅ ｈｏ ｆ Ｅｘｔ ａ ｔｎ ｉ ｍ Ｍ ｔ ｄｏ ｒ ｃ ｉ ｇ ＤＮＡ ｒ ｍ ａ ｔＲｏ ｔ Ｔｉ ｆ ｏ Ｐｅ ｎｕ ｏ ｐｓ
ＺＨＡＮ Ｊｉ ，ＹＵ Ｙｏｎ ｃ ａｎ 。。 ＨＥ ｎ －ｅｉ ｅ ｇ－ ｈ ｇ Ｌｏ ｇｆ ，Ｗ Ｕ Ｒｏｎ － ｏ ｇ ｇｄ ｎ
CTAB法少量快速提取花生基因组DNA
植 物基 因组 Ｄ Ａ 的提 取是 植 物 分子 生 物 学 Ｎ
研 究 的基 础 ， 目前 一 般 用 Ｃ Ａ Ｔ Ｂ和 Ｓ Ｓ两 种 方 法 Ｄ
１ １ 材料 与试 剂 ． 所 用花 生 品种 Ａ Ｒ一１ Ｒ 一 、 Ｒ一 、 Ｒ一 、Ａ ２Ａ ３Ａ
ｍｅｈ ｄ ｔｏ ｓ—Ｃ ＡＢ ｍｅｈ ｄ ａ ｄＳ Ｓ ｍｅｈ ｄ ｈ ｅｕｔ ｓ ｏ ｄ ｔａ ｒｖ ｄ。 Ｔ ｔｏ ｓａｒｐｄ．ｓ Ｔ ｔｏ ｎ Ｄ ｔｏ ．Ｔ ｅｒｓ ｌ ｈ ｗｅ ｈ ｔ ｍｐ ｏ ｅ Ｃ ＡＢ ｍｅｈ ｄｗａ ａ ｉ ｓ ｉ ｉ ｍ—
ｐ ｅ ａ ｄ ｅｆｃ ｉｅ ｍｅｈ ｄ ａ ｄ ｃ ｕ ｄ ｓ ｔ ｆ ｄ ｔ ｅ Ｓ Ｒ ａ ａｙ ｉ． ｌ ｎ ｆ ｔ ｔ ｏ ｎ ｏ ｌ ａｉｉ ｈ Ｓ ｎ ｌ ｓ ｅ ｖ ｓｅ ｓ
为 Ｓ ｍ 公 司生产 ， ｉ ａ ｇ 其余 试剂均 为国产分析纯 ； 引物 Ｐ ７ 、Ｄ ９由上 海生 工合成 。 Ｍ３５ Ｐ ５
１２ Ｄ Ａ提 取 ． Ｎ
１２ １ Ｃ Ａ ． ． Ｔ Ｂ法提取 花 生叶 片 Ｄ Ａ 取 ３ｇ幼 叶 Ｎ
于 一２ ℃ 预冷 研 钵 中加 液 氮 快速 研 磨 成粉 末 ， Ｏ 将
山 东 农 业 科 学 ２ １ ，４ ７ ： ９，５ ０ ２ ４ （ ） ８— １
Ｓ ａ ｄｎ ｇｉ ｌ ｒｌ ｃ ｎｅ ｈ ｎ ｏ ｇＡ ｒ ｕｔ ａ Ｓ ｉ ｃｓ ｃ ｕ ｅ
ＣＡ Ｔ Ｂ法 少 量 快 速提 取 花 生 基 因组 Ｄ Ａ Ｎ
周 浩 ， 闫彩 霞 ， ｎ ｍ ｉ ｐ ｄ Ｅｘ ｒ ｃ ｉ ｆ Ｇｅ ｏ ｃ ＤＮＡ ｒ ｍ ａ ｕ ｙ ＣＴＡＢ ｅ ｈ ｄ ０ ｆ ０ Ｐｅ ｎ ｔｂ Ｍ ｔｏ
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氯化钠法：取3mL 精练棉子油, 加入 3 mL 正己烷,
加入3mLN aCl( 1. 4 m ol # L- 1) , 继续于旋转搅拌器上振荡混合1h ; 120 00 r # min- 1离心20 m in, 使有机相和水相分离, 小心取出下层水相; 加入与水相溶液等体积的异丙醇, 轻缓颠倒混匀, 室温放置40 min后, 1 2000 r /min- 1离心20 m i n , 弃上清液, 保留沉淀; 待沉淀稍微干燥后用 1 mL T E 溶解沉淀, 加入 1 mL 异丙醇, 轻缓颠倒混匀, 室温放置10 min，后, 1 2000 r # m in- 1离心20min , 弃上清液, 保留沉淀; 待沉淀稍微干燥后加入60 L L T E, 充分溶解沉淀, 2 min 过后generay biotech 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(离心柱型)GK2041 50次( 仅进行纯化部分) , 最后将离心获得的溶液( 经核酸蛋白浓度检测仪检测浓度) 取5微升进行琼脂糖凝胶电泳, 同时可作为PCR 反应的模板[ 5 - 6]。
建议一个P CR 反应使用1微升DN A 。
纯化部分：1．从琼脂糖凝胶中切下含有目的片段的凝胶，估计重量
或精确称量重量。
2．每100mg 琼脂糖凝胶加入100μl Binding Solution ，
于50～60℃水浴3～5min，期间每2～3min 间断轻微
颠倒混匀，直至胶块完全融化。
注：为操作方便，可统一加入400μl Binding Solution。
3．将上述混合液转移至套有2ml 收集管的吸附柱GC-3u
中，室温放置2min，6,000rpm 室温离心1min，取出
吸附柱GC-3u，并倒掉收集管中废液。
4．将将吸附柱GC-3u 重新放回收集管中，加入500µl WA
Solution，于12,000rpm，室温离心1min，倒掉收集管
中废液。
5．将吸附柱GC-3u 重新放回收集管中，加入500μl Wash
Solution，于12,000rpm，室温离心1min，倒掉收集管
中废液。
6．重复步骤5 一次。
7．将吸附柱GC-3u 重新放回收集管中，12,000 rpm，室
温离心1min，之后，打开吸附柱GC-3u 的盖子，室温
放置5～10min或50℃放置3～5min，以彻底去除Wash
Solution。
8．将吸附柱GC-3u放入干净的1.5ml 收集管中(用户自
备)，对膜中央悬空加入25～30μl Elution Buffer，盖
好盖子，37℃放置2min，12,000rpm 离心1min，离
心管中的液体即为包含目的DNA 片段的溶液。
PBS和正己烷法：取500 ml精炼大豆油加入500 ml 正己烷，在磁力搅拌器中充分混匀，4 h；加入1 000 ml PBS缓冲溶液在磁力搅拌器中充分混匀，6 h；12 000×g 离心20 min，小心取出下层水相；加入(NH)4SO4沉淀过夜。
12 000×g 离心20 min，保留沉淀；在沉淀
中加入800 µl H2O, 充分溶解沉淀后，加入等体积的酚和氯仿抽提，12 000×g 离心10 min，取上清，加入二倍体积的无水乙醇，4℃20 min，12 000×g 离心10 min，保留沉淀，自然风干后，加入50 µl水溶解沉淀，电泳定量。
SDS法：待检样品的制备[2]在1.5mLEP管中加入1mL食用油及400μLTE缓冲液，颠倒混匀5min，室温下离心13000r/min3min，去除上层油脂层；再次向同一支管中加入1mL 食用油，颠倒混匀，离心，去除上层油脂层，反复20次。
取水相用于提取DNA。
A．400 L TE缓冲液中加入1 mL棉籽油，上下颠倒混匀5 min，离心3 min; 去上层油脂; 重复20次，得约400 L水相; B．水相中加入200 L 20%SDS，水浴; C．加入100 L 5 mol /L NaAc，轻轻摇匀，冰上放置30 min，离心10 min; D．将上清移至新离心管，加入1 g担体等体积无水乙醇和0．1倍体积3 mol /L NaAc( pH 5．2) ，颠倒混匀后，－20 ℃放置2 h; 离心，弃上清; E．沉淀用500 L 70%乙醇洗涤两次，干燥15 min; F．加入30 L 0． 1 ×TE。
SDS 法也是一种分子生物学中常用的DNA 提取方法。
与CTAB 不同，SDS 是一种阴离子去垢剂，在高温条件下能裂解细胞，使染色体离析、蛋白变性，同时SDS 能与蛋白质及多糖结合成复合物，释放出核酸。
通过提高盐浓度并降低温度，使SDS-蛋白质复合物的溶解度变得更小，从而使蛋白质及多糖杂质沉淀。
上清液经酚/氯仿反复抽提后用乙醇沉淀DNA。
传统的SDS 提取缓冲液，包含Tris-HCl，EDTA，
NaCl，巯基乙醇和SDS［23］。
CTAB法：待检样品的制备[2]在1.5mLEP管中加入1mL食用油及400μL TE缓冲液，颠倒混匀5min，室温下离心13000r/min3min，去除上层油脂层；再次向同一支管中加入1mL 食用油，颠倒混匀，离心，去除上层油脂层，反复20次。
取水相用于提取DNA。
在制样获取的水相中，加入400μLCTAB提取液漩涡振荡1s~3s，置于65℃水浴30min；加入等体积。
三氯甲烷/异戊醇（24:1），轻缓颠倒数次后室温静置5min；13000r/m室温下离心5min，转移并等分上清液于两个1.5mL离心管；加入0.6倍体积预冷的异丙醇，颠倒混匀后于-20℃静置过夜沉淀DNA；13000r/min室温离心10min，弃去上清液；用70%乙醇洗涤沉淀两次，干燥沉淀物（注意不应过于干燥，否则沉淀难溶解）；每个离心管中加入30μL~50μLTE缓冲液溶解沉淀，4℃保存备用。
CTAB 法被广泛的应用于植物叶子、种子、微生物以及加工食品中的DNA 提取，是一种经典的DNA提取方法［14 －15］。
其基本原理是: CTAB 是一种阳离子去污剂，它能与核酸形成复合物，这些复合物在低盐溶液中因溶解度的降低而沉淀，而在高盐溶液中可
解离，从而使DNA 与多糖等杂质分开，再用乙醇沉淀DNA 而除去CTAB。
自从Murray 等人［16 －17］首次使用CTAB 法成功的提取植物基因组DNA，CTAB 发展迅速，不断得到改进，已经成为分子生物学中提取DNA 的最常用的方法之一［18 －20］。