分光光度计的操作方法
分光光度计的使用方法
分光光度计的使用方法一、准备工作1.检查仪器：确保分光光度计处于正常工作状态，检查是否有损坏或故障。
2.准备试剂：根据实验需要，准备好所需的试剂溶液或样品。
二、进样1.打开仪器：打开分光光度计电源，并按照仪器说明书进行启动和预热。
2.选择光程：根据样品的吸收强度选择适当的光程，一般来说，如果样品浓度较高，可选择较短的光程，反之则选择较长的光程。
3.选择波长：根据实验需要选择适当的波长。
一般情况下，可根据物质的吸收峰选择最大吸收光的波长。
4.进样：将试剂溶液或待测样品倒入透明的样品池中，注意不要溢出或弄脏边缘。
三、调零1.调节零位：根据仪器说明书调节零位，通常为调整样品池为空极或将样品池填满纯溶剂。
确保读数为零或接近零。
2.稳定仪器：根据仪器要求等待一段时间，使仪器系统稳定。
四、测量样品1.设置参比：根据需要选择一个参考物质，可以是纯溶剂或者与待测样品相似的物质，通过与参考物质的比较，可以减少溶液浑浊、杂质等因素对测量结果的影响。
2.读取数据：进行光度值的测量。
读取数据的方法有两种：直接读取和保存数据。
直接读取：先置于比色池中参比物，调节至零位，再将样液置入比色池中，测量吸收度，读取显示屏上的数值。
保存数据：通过设置保存模式，将测量数据保存到仪器的内存中，后期可以通过导出功能将数据导出到计算机或者其他设备中进行分析和处理。
五、数据处理1.曲线绘制：若需要进一步分析和比较各组数据，可以根据测得的吸光度数据绘制吸光度-浓度曲线。
2.数据分析：根据实验需要进行吸光度数据的定量或定性分析，例如计算样品的浓度、比较各组数据等。
3.定量测定：根据标准曲线或者已知吸光度和浓度的关系，计算样品的浓度。
六、使用注意事项1.操作规范：按照仪器操作说明进行操作，避免操作失误。
2.避免污染：保持样品池的清洁，避免样品残留对后续测量的影响。
3.避免干扰：仪器放置在稳定的平台上，避免机械振动对测量结果的影响。
4.选择适当的波长：根据样品的物理、化学性质选择适当的波长进行测量。
分光光度计使用方法
最佳答案1.接通电源;打开仪器开关;掀开样品室暗箱盖;预热10分钟..2.将灵敏度开关调至“1”档若零点调节器调不到“0”时;需选用较高档..3.根据所需波长转动波长选择钮..4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处;用擦镜纸擦清外壁;放入样品室内;使空白管对准光路..5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器;使读数盘指针指向t=0处..6.盖上暗箱盖;调节“100”调节器;使空白管的t=100;指针稳定后逐步拉出样品滑竿;分别读出测定管的光密度值;并记录..7.比色完毕;关上电源;取出比色皿洗净;样品室用软布或软纸擦净分光光度计使用的外部环境要求分光光度计属于精密仪器;应当妥善保管和精心维护;这样才能保证分光光度计长期使用、长期的稳定可靠、测量精度高..元析公司在多年的生产和应用的过程中;得到了一套在一定环境下维护分光光度计的经验;具体如下：1、环境温度在条件容许的情况下;尽量保持在15-30摄氏度之间;这样能保持电器件稳定工作;不易老化;使分光光度计不易损坏;灯源的使用寿命得到延长..若条件不容许;在高温的情况下;缩短开机时间;高效使用分光光度计;使电器件不要长期保持在高温下..在低温下;使预热时间比常温下的预热时间要长;这样能保证在仪器稳定的情况下进行测试..2、环境湿度在条件容许的情况下;尽量保持在60%以下;这样能保证光度计内部的光学件和电器件不易受潮、腐蚀、和上霉..若条件不容许;在高湿度和低湿度的情况尽量保持通风..3、环境在条件容许的情况下尽量保持洁净;打扫环境时动作不宜太大;不要扬起灰尘;打扫之前用防尘罩盖上分光光度计;不要让灰尘进入分光光度计内部..以上仅就仪器使用的外部环境作了描述;以供使用用户参考..分光光度计的使用分光光度计的应用常识分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器..常用于核酸;蛋白定量以及细菌生长浓度的定量..分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源;通过系列分光装置;从而产生特定波长的光源;光源透过测试的样品后;部分光源被吸收;计算样品的吸光值;从而转化成样品的浓度..样品的吸光值与样品的浓度成正比..核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能..可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸;单链、双链DNA;以及RNA..核酸的最高吸收峰的吸收波长260nm..每种核酸的分子构成不一;因此其换算系数不同..定量不同类型的核酸;事先要选择对应的系数..如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA;37μg/ml的ssDNA;40μg/ml的RNA;30μg/ml的Olig..测试后的吸光值经过上述系数的换算;从而得出相应的样品浓度..测试前;选择正确的程序;输入原液和稀释液的体积;尔后测试空白液和样品液..然而;实验并非一帆风顺..读数不稳定可能是实验者最头痛的问题..灵敏度越高的仪器;表现出的吸光值漂移越大..事实上;分光光度计的设计原理和工作原理;允许吸光值在一定范围内变化;即仪器有一定的准确度和精确度..如EppendorfBiophotometer的准确度≤1.0%1A..这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动;都是正常的..另外;还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值;离子浓度等：在测试时;离子浓度太高;也会导致读数漂移;因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液;如TE;可大大稳定读数..样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒;尤其是核酸样品..这些小颗粒的存在干扰测试效果..为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响;要求核酸吸光值至少大于0.1A;吸光值最好在0.1-1.5A..在此范围内;颗粒的干扰相对较小;结果稳定..从而意味着样品的浓度不能过低;或者过高超过光度计的测试范围..最后是操作因素;如混合要充分;否则吸光值太低;甚至出现负值；混合液不能存在气泡;空白液无悬浮物;否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品;否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项..除了核酸浓度;分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度;如A260/A280的比值;用于评估样品的纯度;因为蛋白的吸收峰是280nm..纯净的样品;比值大于1.8DNA或者2.0RNA..如果比值低于1.8或者2.0;表示存在蛋白质或者酚类物质的影响..A230表示样品中存在一些污染物;如碳水化合物;多肽;苯酚等;较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0..A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子..纯样品;A320一般是0..蛋白质的直接定量UV法这种方法是在280nm波长;直接测试蛋白..选择Warburg公式;光度计可以直接显示出样品的浓度;或者是选择相应的换算方法;将吸光值转换为样品浓度..蛋白质测定过程非常简单;先测试空白液;然后直接测试蛋白质..由于缓冲液中存在一些杂质;一般要消除320nm的“背景”信息;设定此功能“开”..与测试核酸类似;要求A280的吸光值至少大于0.1A;最佳的线性范围在1.0-1.5之间..实验中选择Warburg公式显示样品浓度时;发现读数“漂移”..这是一个正常的现象..事实上;只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%;表明结果非常稳定..漂移的原因是因为Warburg公式吸光值换算成浓度;乘以一定的系数;只要吸光值有少许改变;浓度就会被放大;从而显得结果很不稳定..蛋白质直接定量方法;适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质..紫外直接定量法相对于比色法来说;速度快;操作简单；但是容易受到平行物质的干扰;如DNA的干扰；另外敏感度低;要求蛋白的浓度较高..比色法蛋白质定量蛋白质通常是多种蛋白质的化合物;比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸如酪氨酸;丝氨酸与外加的显色基团或者染料反应;产生有色物质..有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关;从而反应蛋白质浓度..比色方法一般有BCA;Bradford;Lowry等几种方法..Lowry法：以最早期的Biuret反应为基础;并有所改进..蛋白质与Cu2+反应;产生蓝色的反应物..但是与Biuret相比;Lowry法敏感性更高..缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂；反应需要的时间较长；容易受到非蛋白物质的影响；含EDTA;Tritonx-100;ammoniasulfate等物质的蛋白不适合此种方法..BCABicinchoninine acid assay法：这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法..要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2+反应产生Cu+;后者与BCA形成螯合物;形成紫色化合物;吸收峰在562nm波长..此化合物与蛋白浓度的线性关系极强;反应后形成的化合物非常稳定..相对于Lowry法;操作简单;敏感度高..但是与Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰..Bradford法：这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应;产生的有色化合物吸收峰595nm..其最大的特点是;敏感度好;是Lowry和BCA两种测试方法的2倍；操作更简单;速度更快；只需要一种反应试剂；化合物可以稳定１小时;方便结果；而且与一系列干扰Lowry;BCA反应的还原剂如DTT;巯基乙醇相容..但是对于去污剂依然是敏感的..最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大;无可比性..某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致;感到迷惑;究竟该相信哪种方法由于各种方法反应的基团以及显色基团不一;所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性..例如：Keller等测试人奶中的蛋白;结果Lowry;BCA测出的浓度明显高于Bradford;差异显着..即使是测定同一样品;同一种比色法选择的标准样品不一致;测试后的浓度也不一致..如用Lowry测试细胞匀浆中的蛋白质;以BSA作标准品;浓度1.34mg/ml;以a球蛋白作标准品;浓度2.64mg/ml..因此;在选择比色法之前;最好是参照要测试的样本的化学构成;寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品..另外;比色法定量蛋白质;经常出现的问题是样品的吸光值太低;导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大..关键问题是;反应后1011分光光度计的重要配件——比色杯的颜色是有一定的半衰期;所以每种比色法都列出了反应测试时间;所有的样品包括标准样品;都必须在此时间内测试..时间过长;得到的吸光值变小;换算的浓度值降低..除此;反应温度、溶液PH值等都是影响实验的重要原因..此外;非常重要的是;最好是用塑料的比色法..避免使用石英或者玻璃材质的比色杯;因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色;导致样品吸光值不准确..细菌细胞密度OD600实验室确定细菌生长密度和生长期;多根据经验和目测推断细菌的生长密度..在遇到要求较高的实验;需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度..OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法..以未加菌液的培养液作为空白液;之后定量培养后的含菌培养液..为了保证正确操作;必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数;做出校正曲线..实验中偶尔会出现菌液的OD值出现负值;原因是采用了显色的培养基;即细菌培养一段时间后;与培养基反应;发生变色反应..另外;需要注意的是;测试的样品不能离心;保持细菌悬浮状态..分光光度计的重要配件——比色杯比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯..根据不同的测量体积;有比色杯和毛细比色杯等..一般测试核酸和紫外定量蛋白;均采用石英杯或者玻璃杯;但是不适合比色法测定..因为反应中的染料如考马斯亮兰能让石英和玻璃着色;所以必须采用一次性的塑料杯..而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品..由于另外测试的样品量不同;所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求..目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量;亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯;样品用量仅需50μl;比色杯单个无菌包装;可以回收样品..如EppendorfUVette塑料比色杯;是目前比色杯市场上一个革新..随着生命科学以及相关学科发展;对此类科学的实验研究提出更高的要求;分光光度计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器;也成为微生物、食品、制药等相关实验室的必备设备之一..分光光度技术6.1基本原理利用紫外光、可见光、红外光和激光等测定物质的吸收光谱;利用此吸收光谱对物质进行定性定量分析和物质结构分析的方法;称为分光光度法或分光光度技术;使用的仪器称为分光光度计;这种分光光度计灵敏度高;测定速度快;应用范围广;其中的紫外/可见分光光度技术更是生物化学研究工作中必不可少的基本手段之一..因此本章重点讨论紫外/可见分光光度法的基本原理、仪器构造及其在生化领域中的应用等..1.光谱：光是电磁波;可用波长“λ”表示;电磁波谱是由不同性质的连续波长的光谱所组成;对于生物化学来说;最重要的波长区域是可见光和紫外光..光的波长是二个相邻的波峰之间的距离..光的传播是由相互垂直的电场分量“E”和磁场分量“H”所构成..λ＝C/νλ——波长C——光速ν——频率;单位时间通过一个定点的波数..光又可以看作是由具有能量的粒子所组成..这些粒子所具有的原能量“E”由下式算出：E＝hνH——普朗克常数6.624×10-27尔格秒ν——频率紫外区可分为紫外近紫外和真空紫外远紫外..由于吸收池又称样品池、比色杯等和光学元件以及氧气能吸收小于190nm波长的光;因此常规紫外测定集中在近紫外区;即200nm～400nm..可见光区为400nm～800nm..组成物质的分子均处于一定能态并不停地运动着;分子的运动可分为平动、转动、振动和分子内电子的运动;每种运动状态都处于一定的能级;因此分子的能量可以写成：E＝E0+E平+E转+E振+E电E0是分子内在的不随分子运动而改变的能量;平动能E平只是温度的函数;因此与光谱有关的能量变化是分子的转动能量、振动能量和分子的电子能量..分子的每一种能量都有一系列的能级;能级不是任意的;而是具有量子化特征的;通常分子处于基态;当它吸收一定能量跃迁到激发态;则产生吸收光谱..分子转动、振动和电子能级的跃迁;相应地产生转动、振动及电子光谱..按照量子力学原理;分子能态按一定的规律跳跃式地变化;物质在入射光的照射下;分子吸收光时;其能量的增加是不连续的;物质只能吸收一定能量的光;吸收光的频率和两个能级间的能量差要符合下列关系：E＝E2-E1＝hE1、E2分别表示初能态和终能态的能量;初能态与终能态之间的能量差愈大;则所吸收的光的频率愈高即波长愈短;反之则所吸收的光的频率愈低即波长愈长..由于吸收是不连续的;因此在光的一定部位出现一系列吸收暗带..因为分子转动、振动及电子能级跃迁的能量差别较大;因此;它们的吸收光谱出现在不同的光谱区域..分子转动能级级差小;△E＜0.05电子伏特ev;分子转动光谱的吸收出现在远红外或微波区..振动能级纵间的差别较大;E＝0.05～1.0ev;振动光谱出现在中红外区..电子能级的级差更大;E＝1～20ev;所以由电子跃迁得到的光谱出现在可见、紫外或波长更短的光谱区..可见光、紫外光吸收光谱;是由于分子中联系较松散的价电子被激发产生跃迁从而吸收光辐射能量形成的;即分子由基态变为激发态;电子由一个低能级的轨道即成键轨道;吸收了光能量跃迁到高能级轨道称为反键轨道..与吸收光谱有关的三种电子是：⑴二个原子的电子沿其对称方向相互形成的共价键即单键;称σ键;构成键的电子称σ电子;如C－C、C－H键..⑵平行于二个原子轨道形成的价键即双键;称π键;形成π键的电子称为π电子;如C=C键..⑶未共享成键的电子;称n电子..各种电子跃迁所需能量大小的顺序是：n→π*＜π→π*≤n→σ*＜π→σ*＜σ→π*＜σ→σ*紫外吸收光谱主要是由于双键电子;尤其是共轭双键中的π电子和未共享的电子对的激发所产生的..所以各种物质分子对紫外光的吸光性质取决于该分子的双键数目和未共享电子对的共轭情况等..如下表所示：电子跃迁类型与紫外吸收波长nm关系表电子跃迁类型例子紫外吸收波长范围σ→σ*C－H100～150nmπ→π*非共轭C＝O＜200nmπ→π*共轭＝C－C＝200～300nmn→π*C＝O～300nmπ→π*跃迁：此类跃迁所需能量较小;吸收波长在紫外区的200～300nm;不饱和烃、共轭烯烃及芳香烃均可发生这类跃迁;氨基酸、蛋白质与核酸均含有大量共轭双键;因而200～300nm的紫外吸收测定;在生化实验技术中有极广泛的用途..若逐渐改变照射某物质的入射光的波长;并测定物质对各种波长光的吸收程度吸光度“A”或光密度“O.D”或透射程度透光度“T”;以波长λ作横坐标;“A”或“T”为纵座标;画出连续的“A~λ”或“T~λ”曲线;即为该物质的吸收光谱曲线..吸光度ADCBλmaxλmin波长nm由上图可以看出吸收光谱的特征：⑴曲线上“A”处称最大吸收峰;它所对应的波长称最大吸收波长;以λmax表示..⑵曲线上“B”处有一谷;称最小吸收;它所对应的波长;所对应的波长;称最小吸收波长;以λmin表示..⑶曲线上在最大吸收峰旁边有一小峰“C”;称肩峰..⑷在吸收曲线的波长最短的一端;曲线上“D”处;吸收相当强;但不成峰形;此处称为末端吸收..λmax是化合物中电子能级跃迁时吸收的特征波长;不同物质有不同的最大吸收峰;所以它对鉴定化合物极为重要..吸收光谱中;λmax、λmin、肩峰以及整个吸收光谱的形状决定于物质的性质;其特征随物质的结构而异;所以是物质定性的依据..测定某物质的紫外吸收光谱的曲线;可与已知标准的紫外光谱图相对照;对照时须注意测定的条件;如溶剂、浓度等..常用标准的紫处吸收光谱是萨德勒研究实验公司编制的“Sadtler”紫外标准图谱集;到七十年代末为止已收集28585个化合物紫外光谱图;此外还有药物和非极性溶剂紫外光谱图2000多幅..由于化合物紫外吸收峰较少;而且峰形都很宽;不象红外光谱是许多指纹峰;所以在用紫外吸收光谱进行化合物定性鉴定时;应注意：化合物相同;其紫外光谱应完全相同；但是紫外光谱相同不一定化合物就相同;可能仅是存在某些相同的发色团或基团;因此在鉴定时应与红外光谱相结合..由于电子跃迁的同时也引起分子的转动和振动光谱;要把电子跃迁和分子振动、转动的跃迁完全分开是不可能的;因此我们常见的紫外吸收光谱是由一个或几个宽的吸收谱带所组成..紫外光谱中常用的术语有发色团、助色团、增色效应和减色效应..发色团：凡是与饱和碳氢化合物连接能引起n→π*、π→π*、n→σ*等电子跃迁的基团称为发色团..例如：C＝C、C＝O等发色团..助色团：助色团是一些具有非共价键的基团如OH、NH2、SH等..这些基团在波长＞200nm处没有吸收;当它与发色团相连接时;使发色团的吸收带向长波移动;称为红移或浅色效应;红移的同时吸收带的强度增加..若助色团与发色团相连接;产生n→π*跃迁;使吸收波长向短波移动;称为兰移或深色效应..增色效应hyperchromiceffect:核酸变性或降解;使得DNA或RNA溶液对紫外光的吸收明显增加;即ε值吸光系数或称消光系数显着升高;此现象称为增色效应..此效应是由于碱基之间电子相互作用的改变所致;通常在260nm处测量..减色效应hypochromiceffect:在一定的条件下;变性的核酸又可以复性;此时ε值又明显减少;回复到原来的核酸分子ε值较低的水平;即此时DNA或RNA溶液的紫外光吸收显着降低;此现象称为减色效应;此效应也是由于碱基之间电子相互作用的变化所引起的;通常在260nm条件下测量..2.光吸收定律：朗伯——比尔Lambert－beer光吸收定律：A＝－lgT＝εbcA——吸光度;又称光密度“O.D”..T——透光度;T＝I/I..;I..——为照射到吸收池上的光强;I——为透过吸收池的光强..ε——摩尔吸光系数或克分子吸光系数Lmol－1cm－1..b——样品光程cm;通常使用1.0cm的吸收地;b=1cm..C——样品浓度mol/L..由上式可以看出：吸光度A与物质的吸光系数“ε”和物质的浓度“C”成正比..摩尔吸光系数：;是物质对某波长的光的吸收能力的量度..ε越大;吸收光的能力越强;相应的分光度法测定的灵敏度就越高..ε值越大;说明电子跃迁的几率大;通常ε＝10～105：一般认为ε＞104为强吸收；ε＝103～104为较强吸收；ε＜102为弱吸收;此时分光光度法不灵敏..因为通常使用分光光度计可检测出的最小吸光度A＝0.001;所以;当b＝1cm;ε＝105时;可检测的溶液最小浓度是C＝10-8mol/L..常用的吸光系数还有一种百分吸光系数;即在某一波长下;溶液浓度为1%W/V;液层厚度b＝1cm时的吸光度;以E1%λmax表示..C——百分浓度W/V..L——液层厚度;吸收杯光径长度..A——吸光度..最大吸收波长λmax时的ε和E1%λmax值可用下式换算：ε＝E1%λmax×分子量/10吸光度“A”有一个重要性质是其具有加和性：A＝ε1C1b1＋ε2C2b2＋ε3C3b3＋……＝即混合物的总吸光度等于溶液中的各组份各自在该波长下吸光度的算术和..这是多元混合物分光光度法定量分析的基础..若溶液中各溶质的吸光系数ε相同;则各溶质吸光度的大小与溶质浓度成比例..例如;离子交换柱层析分离核苷酸实验中可利用吸光度计算回收率：m＝CV;∵;∴m——溶质的量C——溶质浓度V——溶液体积A——吸光度ε——吸光系数b——吸收池光径∴回收率100%上式中假设ε总和各核苷酸的ε近似相等例一：尿嘧啶核苷酸溶液用1cm石英吸收池测定260nm处的吸光度为0.650;用同一吸收池测定纯溶剂的吸光度为0.070;计算尿嘧啶溶液的摩尔浓度;已知其摩尔吸光系数=8.2×103 M－1cm－1M＝mol/L..∵A＝εbC∵A＝溶剂加样品的吸光度－溶剂的吸光度∴A＝0.650－0.070＝0.580∵b＝1cm∴C==7.1×10－5mol/L例二：1%W/V;10mg/ml酪氨酸酶溶液的吸光度为24.91cm吸收池;280nm;计算A280=0.250的酪氨酸酶溶液的浓度..由于这两种酶溶液的百分吸光系数“E1%1cm;280nm”是相同的;因此可用正比例法计算浓度..∵∴∴C未知＝0.01％＝0.1mg/ml6.2分光光度计的组成和构造：1.组成：各种型号的紫外/可见分光度计;不论是何种型式;基本上都由五部分组成：1光源；2单色器包括产生平行光和把光引向检测器的光学系统；3样品室；4接收检测放大系统；5显示或记录器..光源单色器样品室检测放大系统显示器国产分光光度计近年来已有很大的发展;各种档次的分光光度计都已更新升级换代;可见光系列有：721、722、723等型号;紫外/可见光系列有：751、752、753、754、756等型号;主要生产厂为上海分析仪器总厂等..我系1985年购买的瑞士KONTRON康强公司生产的UNICON860型紫/可见光分光光度计;是双光束、快速自动扫描、荧屏显示的高档分光光度计..这种双光束分光光度计的特点是来自光源的连续光谱经凹面全息光栅分光后;由出射狭缝得到单色光;经过由电机带动的25周/秒左右的旋转镜分解为“样品”、“参比”光束;顺序分时通过参比池和样品吸收池;照射到光电倍增管上;由于两条光路是几乎同时测量;参比信号又不断与标准电压比较;使参比信号恒定;所以由光源、单色器、外界杂光、光电倍增管以及电源电压等带来的影响;仪器均能自动消除..最快波长扫描速度为1200nm/min;有五种测量功能和五种数据处理功能..我系2000年购买的德国耶拿蔡司公司生产的SPECORD200型高档紫外/可见光分光光度计的光路原理图如下：SPECORD200分光光度计的样品和参比光路;分别有各自的带温控的光电二极管检测器;因而取消了电机带动的旋转镜;大大提高了仪器的稳定性及各项检测指标;其波长范围是190nm～1100nm;吸光度测定范围是0～3A;可变狭缝宽度为1nm、2nm和5nm;仪器使用微机控制时;扫描速度最高可达6000nm/min;宽大的样品室可以安装各种附件;仪器性能优良;适合教学、科研使用..该仪器的使用说明详见附录..2.构造：⑴光源：理想光源的条件是：①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用寿命长;价格低..用于可见光和近红外光区的光源是钨灯;现在最常用的是卤钨灯Halogenlamp;即石英钨灯泡中充以卤素;以提高钨灯的寿命..适用波长范围是320～1100nm..由于能量输出的波动为电压波动的四次方倍;因此电源电压必须稳定..用于紫外光区的是氘灯Deuteriumlamp;适用波长范围是195～400nm;由于氘灯寿命有限;国产氘灯寿命仅五百小时左右;要注意节约灯时..⑵单色器：单色器是分光光度计的心脏部分;它的作用是把来自光源的混合光分解为单色光并能随意改变波长..它的主要组成部件和作用是：①入射狭缝——限制杂散光进入..②色散元件——即棱镜或光栅;是核心部件;可将混合光分解为单色光..③准直镜——把来自入射狭缝的光束转化为平等光;并把来自色散元件的平等光聚焦于出射狭缝上..④出射狭缝——只让额定波长的光射出单色器..转动棱镜或光栅的波长盘;可以改变单色器出射光束的波长；调节出入射狭缝隙的宽度;可以改变出射光束的带宽和单色光的纯度..光栅：光栅有透射光栅和反射光栅;实际应用的都是反射光栅;它又可分为平面反射光栅即通称的反射光栅或闪烁光栅和凹面反射光栅两类;凹面反射光栅可以起色散元件和准直镜两个作用;使色散后的光束聚焦于出射狭缝;得到锐线光谱..光栅的刻制方法有两种：机刻光栅：用金刚刀挤压镀于硬质玻璃上0.5~1的铝反射层而得..刻制工作量极大;一般每分钟只能刻10条线;刻100mm宽的600线/mm的光栅要100小时..最多刻到3600线/mm..由于其制造周期长;成本高;一般只能制得少量的母光栅;而实际应用的多是复制光栅;即在母光栅上涂上硅油;再镀上一层铝;用环氧树脂粘下来;就得到复制光栅..机刻光栅的缺点是线槽稍有缺陷时就会出现“鬼线”;即位于光谱强线两侧的模糊不清的假线..全息光栅：用全息照相法刻制的高精度光栅..即用高强度的相干性极好的单色光;如激光;用高分辨的感光材料——光致抗蚀剂记录干涉条纹;曝光1小时;化学处理掉受光部分;再进行真空镀膜镀铝;得到全息反射光栅..这种光栅几乎没有线槽间的周期误差;几乎没有“鬼线”;杂散光很少..最大线槽密度可达6500线/mm;最大直径可达400mm;刻线越多;分辨率就越高;最常用的是1200~1500线/mm的全息光栅..狭缝、光谱频带宽度和分辨率：出射狭缝的宽度通常有两种表示方法：一为狭缝的实际宽度;以毫米mm表示;另一种为光谱频带宽度;即指由出射狭缝射出光束的光谱宽度;以毫微米nm表示..例如;出射狭缝的宽度是6nm;并不是说出射狭缝的宽度是6nm;而是指由此狭缝射出的光具有6nm的光谱带宽..纯粹的单色光只是一种理想情况;分光光度计所能得到的“单色光”;实际上只是具有一定波长范围的谱带;狭缝越宽;所包括的波长范围也愈宽..对单色光纯度来说;狭缝是愈窄愈好;但光的强度也就越弱;因此狭缝不能无限制地小;狭缝的最小宽度取决于检测器能准确地进行测量的最小光能量..目前达到的最小宽度为0.1nm..。
红外分光光度计(药典红外光谱)操作规程
红外分光光度计（药典红外光谱）操作规程
一、试剂
1．KBr（光谱纯）2、KCl（光谱纯）
二、仪器
1、红外分光光度计
2、玛瑙研钵
3、压片机
三、操作
1．压片法：取供试品约1mg，置玛瑙研钵中，加入干燥的溴化钾或氯化钾细粉约200mg，充分研磨均匀，移置于直径为13mm的压模中，使铺均匀，压模与真空泵相连，抽气约25分钟后，无明显颗粒。
对空气作为背景扫描完后，立即放供试片进行扫描，录制光谱图。
2．薄膜法：取固体供试品约5mg溶于挥发性溶剂中，涂于溴化钾空白片或其它适宜的盐片上，待溶剂挥发后，样品遗留于盐片上形成薄膜，录制光谱图。
四、注意事项：
1．除另有规定外，用作鉴别试验时应按卫生部药典委员会编定的《药品红外光谱集》名光谱所规定的制定的制备方法及具体操作技术进行制备并应与对照的图谱相一致。
2．为避免固体供试品压片时可能发生的离子交换现象，凡是盐酸盐的供试品应采用氯化钾压片。
3．供压片用的溴化钾如无光谱纯品，可用分析纯试剂重结晶，未精制前若无明显吸收，也可经干燥后直接使用。
4．具有多晶现象的固体药品，由于测定时晶型可能不同，致使录制的光谱图与《药典红外光谱集》所收载的光谱图一致，遇此情况，应按该药品光谱图中备注的方法进行预处理后，再录制比较
5用作晶型异构体限度检查或含量测定时，应按品种有关项下规定进行供试品制备和操作。
分光光度计的使用方法
分光光度计的使用方法主体内容：1．使用仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理。
以及各个操作旋钮之功能。
在未接通电源前，应该对仪器的安全性进行检查，电源线接线应牢固。
通地要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再接通电源开关。
仪器在使用前先检查一下，放大器暗盒的硅胶干燥筒(在仪器的左侧)，如受潮变色，应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶，烘干后再用。
2．将灵敏度旋钮调置“ 1档”(放大倍率最小)。
3．开启电源，指示灯亮，选择开关置于“ T，”波长调至测试用波长。
仪器预热20 分钟。
4．打开试样室盖(光门自动关闭)，调节“ 0旋”钮，使数字显示为“ 00.0，盖上试样室盖，将比色皿架置与蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透过率“ 100%旋”钮，使数字显示为“ 100.0。
”5．如果显示不到“ 100.0，”则可适当增加微电流放大器的倍率档数，但尽可能置低倍率档使用，这样仪器将有更高的稳定性。
但改变倍率后必须按(4)重新校正“0和”“ 100%。
”6．预热后，按(4)连续几次调整“ 0和”“100%，”仪器即可进行测定工作。
7．吸光度 A 的测量按(4)调整仪器的“ 00.0和”“100%，”将选择开关置于“A，”调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为“.000，”然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度值。
8．浓度 C 的测量：选择开关由“A旋”置“C，”将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放入光路，即可读出被测样品的浓度值。
9．如果大幅度改变测试波长时，在调整“ 0和”“ 100%后”稍等片刻，（因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间），当稳定后，重新调整“0和”“100%”即可工作。
10．每台仪器所配套的比色皿，不能与其它仪器上的比色皿单个调换。
11．本仪器数字表后盖，有信号输出0～1000MV，插座1脚为正，2脚为负接地线。
分光光度计的使用
100.0 BLA
100% T
（5）重复（验证）（ ）、（4）两步，直至透 ）重复（验证）（3）、（ ）两步， ）（ ）、（ 射比为 0.000 和 100% 不变。 不变。 按“MODE”键至“ABSORBANCE”灯亮（此 键至“ 灯亮（ 键至 灯亮 时转换到测吸光度功能上）。 时转换到测吸光度功能上）。
将手柄向操作者方向再拉出一档（听到“咔嚓” 将手柄向操作者方向再拉出一档（听到“咔嚓” 一声），此时被测（ ），此时被测 溶液进入光路。 一声），此时被测（1 号）溶液进入光路。 此时仪器所显示的数值即为 1 号被测溶液的吸光 度值（记录下来）。 度值（记录下来）。
0.186 - 0.000
再拉出一档， 再拉出一档，仪器所显示的数值为 2 号溶液的吸 光度值。 光度值。 将 1、2 号吸收池换装入 3 、4 号溶液（黑体 、 号溶液（ 号参比溶液不动）， ），然后同法测定各溶液的 和 0 号参比溶液不动），然后同法测定各溶液的 吸光度、并一一记录下来，记录格式如下表。 吸光度、并一一记录下来，记录格式如下表。
×.××× ×××
4
4.00
×.××× ×××
5
5.00
×.××× ×××
6
未知
×.××× ×××
五、标准曲线（图） 标准曲线（ 六、从标准曲线上查得的 ρ(F =××× m ⋅ L e) g
−1
50 −1 e) g 七、原试液的 ρ(F = ρ查得× = ××× m ⋅ L 5
八、思考题
2号 透 光 窗 1号 0号 遮光 黑体 通过手柄将池架推到头， 通过手柄将池架推到头， 此时黑体对着入射光。 此时黑体对着入射光。
然后盖上盖子。 然后盖上盖子。
（3）调节投射比为 0.000 ）
分光光度计的使用方法以及注意事项
分光光度计的使用方法以及注意事项使用方法：1.准备样品：将需要测量的溶液或物质准备好，确保它是均匀的并无悬浮物质。
如果必要，可以通过过滤或离心的方式去除悬浮物。
2.校准仪器：打开分光光度计并进行校准。
这可以通过校准溶剂或标准物质进行，从而获得正确的基准值。
3.设置光程：根据实验目的，选择合适的光程。
光程是指光通过样品的距离，通常以毫米为单位。
4.设置波长：选择想要测量的波长。
分光光度计可以在可见光至紫外光范围内进行测量，根据样品需要选择适当的波长。
5.测量样品：将样品放置在光程区域，并将光源通过样品。
记录下通过样品的光的强度数据，可以使用显示器或计算机进行记录。
6.分析数据：使用测量得到的数据进行进一步的分析。
可以根据数据计算出物质的浓度或进行光谱扫描。
注意事项：1.保持仪器干净：分光光度计是非常精密的仪器，所以需要保持它的干净和整洁。
使用柔软的纸巾或净化棉轻轻擦拭仪器的外表，并避免使用粉尘较多的环境中进行操作。
2.维护波长校准：定期校准分光光度计的波长，以保证测量结果的准确度。
校准可以使用标准物质或校准溶剂进行，按照仪器操作手册中的方法进行校准。
3.避免反射和散射：在测量样品时，避免外部光源的反射和样品本身的散射对结果产生干扰。
可以使用黑色容器或覆盖物来最小化这些干扰。
4.注意样品浓度：在测量样品时，确保样品的浓度在仪器量程内。
如果样品过于稀释或过于浓缩，可能会导致无法准确测量或出现非线性响应。
5.光程保持稳定：对于相同的实验，保持相同的光程以保证结果的可比性。
使用恒温仪器或室温范围内进行测量可以避免由于温度变化引起的光程变化。
分光光度计使用说明
分光光度计使用说明一、仪器准备1.将分光光度计放在平稳的台面上，确保光路垂直。
2.将电源线插入电源插座，并连接到仪器的电源接口。
3.打开仪器的电源开关，待仪器预热完成后，仪表上的显示屏会显示相关信息。
二、调整光路1.调节仪器上的调节螺丝，使光束垂直。
2.确保样品室、检测器、光源等部件都没有灰尘或污渍，以免影响测量结果。
三、选择测量波长1.在仪器的面板上选择所需的波长，通常可以通过按下“波长选择”按钮，并使用面板上的增加或减少按钮选择波长。
2.对于多个波长的测量，可以先选择一个波峰，然后进行相应的测量。
四、校准仪器1.使用标准溶液进行仪器的校准。
校准可以通过按下仪器面板上的“校准”按钮来进行。
2.将标准溶液注入样品室，然后按下“校准”按钮。
仪器会自动将该浓度的溶液设置为标准值，并根据该标准值进行后续测量。
五、测量样品1.将待测样品注入样品室，并确保样品室盖子严密关闭，以防止外部光干扰。
2.增加或减少样品室内的溶液浓度，直到仪器读数在可测范围内。
3.等待一段时间，直到仪器的读数稳定在一些数值上，此时可以读取示数作为该样品的吸光度或透光度。
六、数据处理1.将测得的吸光度或透光度值记录下来，并根据需要进行转换或计算。
2.如果需要绘制吸光度-浓度曲线，可以测定一系列不同浓度的标准溶液，将吸光度与浓度值进行配对，然后绘制曲线。
3.使用所绘制的吸光度-浓度曲线，可以根据测得的吸光度值来计算样品的浓度。
七、仪器的维护1.在使用完毕后，关闭仪器的电源开关，并拔掉电源线。
2.清洁仪器的各个部分，特别是样品室和光路部分，可以使用棉签或清洁纸轻轻擦拭。
3.定期对仪器进行漂白操作，可选择性地使用漂白剂对光路进行清洁处理，以去除污渍和杂质。
以上就是分光光度计的使用方法，正确操作仪器可以保证测量的准确性和可靠性。
在进行实际操作前，还需要详细阅读仪器的使用说明书，确保熟悉仪器的各项功能和操作步骤，以免误操作或造成损坏。
分光光度计的操作步骤
分光光度计的操作步骤1.打开仪器电源，等待其启动，通常需要几分钟的预热时间。
确保仪器台面整洁，无杂物。
2.准备样品溶液。
根据需测定的物质和波长，制备适量的待测溶液。
确保待测溶液无颗粒杂质，否则可能会影响测量结果。
3.插入光栅。
打开分光光度计仪器的光栅槽，轻轻将光栅插入槽中。
确保光栅与槽底平行，并确保没有指纹或污渍。
4.设置波长。
通过仪器上的波长调节器，选择所需测量的波长。
通常情况下，波长可以通过查阅物质的吸收光谱图来确定。
5.调节光强。
通过调节仪器上的光强调节器，将光强设置到适当的强度，以确保测量结果的准确性。
6.校准仪器。
根据仪器的要求，进行零点校准或空白校准。
零点校准是指在没有样品的情况下，将仪器的读数调零。
空白校准是指将仪器的读数调至纯溶剂的吸光度，以消除纯溶剂的吸光度对测量结果的干扰。
7.准备测量。
取适量的样品溶液，注意使用量要适中，不要超过光程比耦合器的容量，否则可能会导致测量误差。
8.测量样品。
将样品溶液注入光程比耦合器中，确保没有泡沫或气泡。
9.读取测量结果。
将耦合器放入光栅槽中，确保与光栅有良好的接触。
通过仪器上的读数显示屏，记录样品的吸光度值。
10.清洁仪器。
在测量完毕后，用纯溶剂或清洁溶液清洗耦合器和光栅，以确保下次测量的准确性。
总结：分光光度计操作步骤主要包括准备样品溶液、插入光栅、设置波长、调节光强、校准仪器、准备测量、测量样品、读取测量结果和清洁仪器。
正确操作分光光度计可以获得准确的测量结果，并进行分析和研究。
分光光度计使用方法
分光光度计使用方法分光光度计是一种用于测量溶液中物质浓度或溶液中特定物质含量的仪器，它利用光的吸收特性来进行测量。
在实验室中，分光光度计被广泛应用于化学、生物、环境等领域。
下面将介绍分光光度计的使用方法，希望能对您有所帮助。
1. 准备工作。
在使用分光光度计之前，首先要进行仪器的准备工作。
确保仪器处于正常工作状态，检查光源、光栅、检测器等部件是否完好。
同时，还需要校准仪器，以确保测量结果的准确性。
2. 样品处理。
在进行光度测量之前，需要对待测样品进行处理。
通常情况下，样品需要进行稀释或者过滤，以确保测量结果的准确性。
另外，还需要注意避免气泡的产生，因为气泡会影响光的透过性，从而影响测量结果。
3. 设置参数。
在进行光度测量之前，需要根据样品的特性来设置分光光度计的参数。
包括选择合适的波长、设定光程、调整灵敏度等。
这些参数的设置将直接影响到测量结果的准确性，因此需要认真对待。
4. 测量操作。
当准备工作完成并且参数设置好之后，就可以进行光度测量操作了。
将样品装入光度计的样品室中，关闭样品室，并启动仪器进行测量。
在测量过程中，需要确保仪器的稳定性，避免外界因素对测量结果的影响。
5. 数据处理。
测量完成后，得到的数据需要进行处理和分析。
根据实际情况选择合适的数据处理方法，比如绘制标准曲线、计算浓度等。
同时，还需要对测量结果进行验证，确保数据的准确性和可靠性。
6. 仪器维护。
在使用分光光度计之后，需要对仪器进行及时的清洁和维护工作。
清洁仪器表面和样品室，保持仪器的整洁和干净。
另外，还需要定期对仪器进行维护和保养，延长仪器的使用寿命。
总结。
分光光度计是一种非常重要的实验仪器，它在科研和实验室工作中扮演着重要的角色。
正确的使用方法和维护保养对于保证测量结果的准确性至关重要。
希望通过本文的介绍，能够帮助您更好地掌握分光光度计的使用方法，提高实验工作的效率和准确性。
分光光度计的操作方法
分光光度计的操作方法
1.准备工作：
-打开光源开关，预热分光光度计，一般需要预热10-15分钟。
-将分光光度计的光程调节控制旋钮调至最小位置。
-准备样品溶液。
2.调零：
-提前调零是为了保证准确测量样品的吸光度值。
将纯溶剂（作为空白）倒入比色皿中，将比色皿放置于分光光度计的样品槽中。
-打开分光光度计，调节光程旋钮，直到显示屏的数值稳定在0附近。
-可选择"调零"按钮进行自动调零。
3.设置波长：
-根据需要的波长，选择合适的滤光片或进入光纤。
-打开分光光度计，使用波长调节旋钮设置所需的波长。
波长调节旋
钮上通常有独立的目录盘，可直接选择波长。
-调节波长时，观察光束的响应，当显示屏上的数值稳定后即可。
4.测量样品吸光度：
-将样品溶液倒入比色皿，并将其放入样品槽中。
-关闭样品槽盖，并调节光程旋钮，直到显示屏上的数值稳定。
-将样品槽中的溶液吸光度读数记录下来，这个数值即为样品的吸光度。
-执行上述操作之前，最好将比色皿和样品槽进行清洁和干燥，以避
免外界因素对读数的干扰。
5.计算结果：
-根据测得的吸光度值，结合吸光度对应的摩尔吸光度，使用贝尔-朗
伯定律计算物质的浓度。
6.注意事项：
-在操作前注意检查仪器的光源是否正常，是否需要更换滤光片。
-避免直接用手触摸比色皿，以免污染样品。
-在进行波长选择时，应避免过多的频繁操作，以维持仪器的稳定性。
-操作完成后，及时关闭分光光度计，将光程旋钮调至最小位置。
分光光度计的使用操作
分光光度计的使用操作
使用分光光度计进行测量的基本操作包括以下几个步骤：
1. 准备工作：确保分光光度计处于正常工作状态，检查光源、接收器、滤光片等部件是否正常，若有需要则进行调整或更换。
2. 校零操作：将分光光度计调零，使得光度计读数为零。
一般情况下，先关闭光源，然后将空白试样放入仪器并调整至零点读数。
3. 设置波长：根据需要进行波长调整，选择合适的波长。
通常，可根据样品的特性确定适当的波长。
4. 放入样品：将待测样品放入分光光度计的样品室中，确保样品与测量器件充分接触，防止遮光等干扰。
5. 读取光度：打开光源，并开始测量。
根据设备的使用说明，可在显示屏上读取相应的光强度或透过率数值。
6. 记录和分析结果：根据测量结果，记录光强度或透过率数值，并根据需要进行数据分析和处理。
7. 清洁和保养：使用完毕后，注意清洁分光光度计的各个部件，尤其是样品室，以免污染下一次测量。
需要注意的是，不同型号的分光光度计可能有一些差异，因此
在使用前最好先参考设备的相关操作说明书或咨询专业人士了解具体的操作步骤。
分光光度计的操作步骤
分光光度计的操作步骤1.打开仪器电源：先将分光光度计通电打开，确认仪器的电源开关必须处于“关”状态。
2.预热测量室：一般情况下，分光光度计需要在电源打开后预热。
在预热时，应关闭测量室顶部的光源，这样可以减少样品室内温度的波动。
预热时间通常为15-20分钟。
3.校准仪器：为了确保测量的准确性，需要对仪器进行校准。
校准可以通过使用标准样品，根据所测定的吸光度值和已知浓度之间的关系进行。
4.设置所需的波长：根据需要测量的物质的最大吸收峰位，选择相应的波长。
通常分光光度计上有一个波长选择器。
5.设置石英比色皿：将所需的样品装入石英比色皿中，并且保持表面平整和清洁。
确保液面平整，避免产生气泡对测量结果的影响。
6.定位样品架：将样品架放置在仪器上，确保石英比色皿正确定位。
7.调节参照光线：参照光线用于确认样品光线在入射光源前没有透射过程，通常采用空白试液（即没有任何吸光物质的溶液）进行校准。
8.测量吸光度：在完成所有前置操作后，即可开始测量。
按下“测量”按钮，然后采集所需的数据。
分光光度计会测量由样品吸收的特定波长上的光量，记录吸光度值。
9.记录和分析数据：根据测量所得的吸光度值，可以计算样品中组分的浓度。
在进行计算时，应考虑校准曲线以及所采集的空白试液的吸光度值。
10.清洁和关闭仪器：在完成测量后，应将测量用的石英比色皿彻底清洗，并将仪器关闭。
同时，注意清洁仪器的其他部分，以保持仪器的运行和使用寿命。
总之，分光光度计操作的关键步骤包括打开电源、预热测量室、校准仪器、设置波长、装载样品、调节参照光线、测量吸光度，记录和分析数据，清洁和关闭仪器。
通过正确的操作，我们可以使用分光光度计准确测量溶液中吸光物质的浓度。
分光光度计 操作规程
分光光度计操作规程
《分光光度计操作规程》
一、仪器准备
1. 将分光光度计放置在水平台面上，并确认仪器处于稳定状态。
2. 打开仪器电源，等待仪器进行自检和初始化。
二、样品处理
1. 准备样品溶液，并确保样品溶液清澈透明，没有悬浮物或沉淀。
2. 将样品溶液装入样品池中，并用无色透明玻璃片轻轻覆盖在样品池上。
三、设置光度计参数
1. 根据样品溶液的特性选择合适的检测波长，并将光度计波长设置为该值。
2. 设置光度计的扫描速度和数据采集间隔。
3. 进行基准校准，确保零点和百分比透射率的校准值准确无误。
四、测量样品
1. 双击“开始扫描”按钮，开始测量样品。
2. 在测量过程中，确保仪器周围环境无干扰。
3. 测量完成后，保存数据并进行必要的数据处理。
五、清洁与维护
1. 使用无纤维的软布轻轻擦拭光度计表面。
2. 定期对光度计进行校准和验证，确保仪器的准确性和稳定性。
3. 关闭仪器电源，清理工作台面并将仪器放置在干燥通风的地方。
以上就是《分光光度计操作规程》，希望能够帮助用户正确操作和维护分光光度计，保证测量准确性和仪器稳定性。
分光光度计的使用方法
分光光度计的使用方法
首先，准备工作。
在使用分光光度计之前，需要对仪器进行一些准备工作。
首
先要确保仪器处于正常工作状态，检查光源、检测器、光栅等部件是否正常。
接着要校准仪器，调节零点和灵敏度，以确保测量的准确性。
另外，还需要准备好待测溶液，并将其装入专用的样品池中。
接下来是操作步骤。
首先，打开分光光度计的电源，待仪器启动完成后，选择
所需的波长。
然后将样品池放入样品架中，调节光程长度，使其与实验要求相符。
接着将待测溶液倒入样品池中，注意不要溅出。
关闭样品池盖，使其与样品池密封。
然后进行基准校准，校准后即可进行测量。
在测量过程中，要注意以下几点。
首先要保持实验环境的稳定，避免外界光线、震动等因素对测量结果的影响。
其次要及时记录测量数值，并进行多次测量取平均值，以提高测量的准确性。
另外要注意样品池的清洁和保养，避免污染影响测量结果。
最后是数据处理和结果分析。
在测量完成后，要及时保存测量数据，并进行数
据处理和结果分析。
可以利用分光光度计软件进行数据处理，绘制吸光度曲线或浓度曲线，从而得到所需的测量结果。
根据测量结果进行分析，得出结论并撰写实验报告。
总之，分光光度计是一种十分重要的实验仪器，正确的使用方法可以确保实验
结果的准确性和可靠性。
希望本文能够帮助大家更好地掌握分光光度计的使用方法，提高实验效率和准确性。
简述分光光度计的操作步骤和注意事项
简述分光光度计的操作步骤和注意事项分光光度计（Spectrophotometer）是一个用于测量样品吸收光的工具，它允许我们分析和确定液体或溶液中化学物质的量，从而得出数据和结论。
本文将对分光光度计的操作步骤和注意事项进行简述。
操作步骤：1. 准备工作：首先，将分光光度计放置于平整的表面上并插上电源插头。
打开仪器时，必须确保它处于独立稳定的电源插座上，以保证仪器的正常工作；2. 准备样品：测量前，必须准备好样品。
将样品放入样品池中，并在样品池中加入适量的溶液。
确保样品池的槽中没有气泡，否则可能会影响读数的准确性。
还可以将纯溶液作为参照物；3. 调整波长：选择正确的波长是非常重要的，因为仪器只能测量特定波长下的吸光度值。
通过旋转选择红色的波长选择器，可以使波长显示的显示值与主显示器上的指定波长相同；4. 设置基准线：将分光光度计的基准线调节为零。
这个步骤需要在测量样品之前进行。
将空样品池放入样品槽中，调节基准线为零。
如果调节基准线的过程中观察到了波动，则需要进行多次调整，以确保稳定的零基准线；5. 测量样品：将样品池插入样品槽中并关闭池盖。
等待样品测量，待数据稳定后可以记录测量值并进行进一步的分析。
注意事项：1. 样品切记不要直接倒入吸光池中。
应将样品放入标准量筒中，并根据需要添加溶液，并保持其稳定；2. 准备空样品（空白样品），确保基准线为零；3. 在样品池中应尽可能减少空气和泡沫的存在，否则可能会影响读数；4. 选择正确的波长、透过率（Transmittance）和吸光度（Absorbance）来确保准确度和可靠性；5. 在使用过程中，要及时清洁仪器以保持其清洁，以避免吸附了杂质或污垢，影响测试结果。
总体而言，分光光度计是一种非常重要的科学实验设备。
每次使用前，都应仔细检查设备是否正常并遵循正确的操作步骤。
通过正确的使用方法，可以获得可靠，一致和精确的结果。
简述分光光度计的操作步骤与注意事项
简述分光光度计的操作步骤与注意事项分光光度计是一种常用的实验室仪器，用于测量样品的吸收光谱和浓度。
本文将简要介绍分光光度计的操作步骤和注意事项。
一、操作步骤1. 准备样品：将待测样品制备好，并将其转移到透明的石英比色皿中。
为了避免污染和误差，应在实验前清洗比色皿，并使用纯水或样品溶液进行预洗。
2. 打开分光光度计：打开电源，启动分光光度计。
在启动后，应等待几分钟，以使仪器稳定。
3. 选择波长：根据实验需要，选择合适的波长。
在选择之前，应了解样品的吸收峰位置和波长范围。
4. 调节光路：将比色皿放入样品室，然后调节光路，以使光线穿过样品。
在调节光路时，应注意比色皿的位置和角度，以避免光路阻塞或反射。
5. 零点校准：在测量前，应进行零点校准。
将比色皿中的纯水或溶剂放入样品室，然后调节到零位。
在零点校准中，应注意清洁比色皿和样品室，以避免污染和误差。
6. 测量样品：将待测样品放入比色皿中，然后放入样品室。
调节光路，使光线穿过样品。
然后按下“读取”按钮，进行测量。
在测量中，应注意比色皿的位置和角度，以避免光路阻塞或反射。
7. 记录结果：在测量后，应记录测量结果。
如果需要计算浓度，可以使用标准曲线或校准系数进行计算。
在记录结果时，应注意单位和精度，以避免误差。
二、注意事项1. 样品制备：在制备样品时，应注意样品的稳定性和纯度。
如果样品不稳定或含有杂质，可能会影响测量结果。
2. 比色皿清洗：在使用比色皿前，应进行清洗。
使用纯水或样品溶液进行预洗，然后用纯水或酒精进行彻底清洗，以避免污染和误差。
3. 光路调节：在调节光路时，应注意比色皿的位置和角度。
如果比色皿放置不当，可能会导致光路阻塞或反射，影响测量结果。
4. 零点校准：在进行零点校准时，应注意清洁比色皿和样品室。
如果比色皿或样品室有污垢或杂质，可能会影响零点校准和测量结果。
5. 波长选择：在选择波长时，应了解样品的吸收峰位置和波长范围。
如果选择错误的波长，可能会导致测量误差。
分光光度计的操作与注意事项
分光光度计的操作与注意事项
一、操作程序
1.1将仪器的电源开关接通，仪器预热约20分钟。
打开比色皿暗箱盖，选择需用的单色波
长，按“0”电位器使显示“0”，然后将比色皿暗箱盖合上，比色皿座处于蒸馏水校正位置，使光电管受光，按“100%”电位器使显示“100”。
1.2预热后，按1.1连续几次调整“0”和“100%”，仪器即可以进行测定工作。
1.3如果大辐度改变测试波长时，在调整“0”和“100%”后稍等片刻，钨灯在急剧改变亮
度后需要一段热平衡时间，当指针稳定后重新调整“0”和“100%”即可工作。
二、注意事项
2.1为确保仪器稳定工作，电压波动较大的地方，220V电源要预先稳压。
2.2 仪器要接地良好。
2.3 仪器底部有两只干燥剂筒，应保持其干燥性，发现变色立即换新的或加以烘干再用。
2.4 当仪器停止使用后，应将另两包硅胶放在比色皿暗箱内，也应刻定期烘干。
2.5 当仪器停止工作时，必须切断电源，开关放在“关”。
2.6 为了避免仪器积灰和玷污，在停止工作时间内，再用塑料套子罩住整个仪器，在套子内
应放数袋防潮硅胶。
2.7 仪器工作几日或搬动后，要检查波长精确性等方面，以确保仪器的使用和测定的精确。
分光光度计操作说明
1.测试仪器
〔1〕仪器名称：分光光度计
〔2〕仪器型号:Color-Eye 7000A
2.待测样品
样品要求：样品外表干净平整，无外观缺陷等
3.测试环境 环境要求：温度：15~35℃；湿度：80%RH 不结露。
4.测试步骤：
〔1〕翻开分光光度计电源开关〔图1〕，并使其预热约10分钟。一 般情况下选用小孔径〔图2〕，翻开主机外壳并将分光仪内部镜头 拉至最外面后往回推一格的位置(LENS SAV)如图〔3〕，然后在触 摸垫上选择客户所需的标准光源和状态模试，一般选择UVD65和 SCI〔图4〕，最后合拢仪器外壳〔图5〕。
图6 图8
图7 图9
〔3〕取下校正白板，将检查无缺陷、干净的随 料色板放置在固定架上，待测面与孔密合(图 10)，点击如下图的图标叫出标准
数据库(图11)，并输入与随料色板一样的名称 查找标准板数据，找到后点击“RECALL〞即 可叫出此标准色板数据，再点击
“关闭〞键关闭视窗(图12)。
图10 图11
图12
〔4〕点击如下图的图标会出现测量界面，输入所测量的样板的名 称与测量的次序〔图13〕，然后依次点击“测量〞、
“是〞、“确定〞“确定〞“确定〞进展测量〔图14、15、16、 17〕，在测量过程中每测1组应各测2个点,取2个点测量的平均值 作为1组数据。 重复此步骤共测量5组数据。
图13
图14
图15 图16
图18
图19
图20
图21图22〔6来自假设标准数据库中没有与随料色板名称一样的标准数据，那 么需要用标准板建立标准数据。重复步骤〔1〕、〔2〕，在校 正完成出现软体界面后，点击如图〔23〕所示图标后会弹出测 量标准对话框〔图24〕，输入标准板名称点击“Measure〞后 会弹出测量窗口，依次点击“是〞和“确定〞后标准板测量完 成。
分光光度法操作
分光光度法操作
分光光度法是化学分析中常用的一种测量物质浓度的方法，也称为分光光度法操作。
下面是分光光度法操作的具体步骤：
一、准备样品和标准溶液
首先需要准备待测样品和标准溶液，如果是在溶液中测定，可以将样品和标准溶液分别配置成一定浓度。
二、调节分光光度计
将分光光度计打开，调节波长选择器选择要测定的波长。
同时，调节光强度控制器控制光源强度，保证光源强度足够强，而且均匀。
三、设置比色皿
将待测样品和标准溶液分别倒入比色皿中，注意不要使皿壁上有气泡和污染物。
四、测定吸光度
将标准溶液测定其吸光度，然后利用已知浓度的标准溶液测定样品的吸光度。
将数据记录下来。
五、绘制标准曲线
将标准溶液吸光度与其浓度相对应，绘制出标准曲线。
然后利用标准曲线，计算出样品的浓度。
六、分析结果
根据标准曲线计算出样品浓度之后，可以根据所需进行进一步分析。
通过以上步骤，分光光度法操作就完成了。
分光光度法可以在很多领域应用，例如生物化学、环境监测等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
分光光度计的操作方法
1.开721-A分光光度计的开关，将比色池的盖子打开，通电20分钟使仪器预热。
2.将波长旋至测定的波长。
3.将空白液、校准液或待测液放入比色池，将空白液置于光路中。
4.将开关置于T位，打开比色池盖子，用光量粗调和光量细调调节T为0.0,关上比色池盖子，调节T为100.0。
5.将开关置于A，用消光调零调节A为0.0
6.重复步骤4和5
7.将校准液或待测液推入光路，测量溶液的吸光度（A）
1．把波长调到580nm，11号旋钮共有5档，放在第一档。
2．4号旋钮T/A放在T档，仪器开机预热20分钟。
3．打开样品室盖板，调8号旋钮调到数字显示00.0
4．盖上样品室盖板调9号旋钮调到数字显示100.0，如调节不到100.0，可把11号旋钮调到2挡，再调不到可升至3档。
5．把4号旋钮调到A档，数字显示（0.000），如显示的数值不为
（0.000），调5号旋钮调到显示（0.000）
6．把4号旋钮置于T档，用9号旋钮调到显示为50为止。
7．把4号旋钮调到A档，斜率显示为0.301，如显示误差，可用6号小旋钮调节至0.301为止
备注：
仪器应经常调试，校准后再测试，最后一位数字可以不看。
1/ 1。