重组DNA技术培训课件

1. 具有特定的识别和切割位点
II型限制性内切酶的识别位点举例（'示切割位点）
限制性内切酶
Apa I BamH I
Pst I EcoR I
识别位点
GGGCC’C C’CCGGG
G’GATCC CCTAG’G
CTGCA’G G’ACGTC
G’AATTC CTTAA’G
限制性内切酶
Sma I Sau 3A I
常用于PCR；产物的3′末端带有A，可用于T-A克隆
催化多聚核苷酸5´羟基末端磷酸化，或标记探针
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一、限制性处核，请酸联系内网站切或本酶人用删除于。 切割DNA
定义: 限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE)是识别DNA的特异序列, 并在识别位点或其周 围切割双链DNA的一类内切酶。限制性核酸内切 酶是重组DNA技术中重要的工具酶。
Bam HⅠ GGATCC CCTAGG
Bg lⅡ AGATCT TCTAGA
GCCTAG+
GATCC G
A
+GATCT
TCTAG
A
本文档所提供的5信. 不息仅同供处参的，考酶请之联用可系，网不以站能识或作本为别科人同学删除依一据。，个请序勿模列仿；如有不当之
能识别同一序列（切割位点可同或不同）但来源不同 的两种酶互称同工异源酶（isoschizomer）或同裂酶。
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重组DNA技术（recombinant DNA technology）
又称分子克隆（molecular cloning）或DNA克隆 （DNA cloning）或基因克隆（gene cloning) 技术， 是指在体外利用酶学方法将目的DNA片段与能自主复 制的遗传元件（又叫载体）连接，形成重组DNA分子， 进而在受体细胞中复制、扩增，从而获得单一DNA分 子的大量拷贝。
切除末端磷酸基
合成cDNA；替代DNA聚合酶I进行填补，标记或DNA序列分析
在3´羟基末端进行同聚物加尾
合成双链cDNA分子或片段连接；缺口平移制作高比活性探针； DNA序列分析；填补3´末端
又名DNA聚合酶I大片段，具有完整DNA聚合酶I的53聚合、 35外切活性，而无53外切活性。常用于cDNA第二链合成， 双链DNA 3末端标记等
Not I Sfi I
识别位点
CCC’GGG GGG’CCC
GATC’ ’CTAG
GC’GGCCGC CGCCGG’CG
GGCCNNNN’NGGCC CCGGN’NNNNCCGG
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2. 识别的核苷酸序列通常为回文结构（palindrome）
6. 切割会受其他因素的影响 限制性内切酶通常不能切割在识别位点内有
特异碱基甲基化的序列。 缓冲液或环境温度也会影响一些酶的特异性。
例如，EcoR I在正常情况下识别“-GAATTC-” 序列，但在甘油浓度大于5%（v/v）或反应温 度较低时识别序列可变为“-AATT-”或“-嘌呤 嘌呤AT嘧啶嘧啶-”，这种现象称为星号活性 （star activity），以EcoR I*表示。
重组处D，N请A联技系术网站中或常本用人删的除工。具酶
工具酶 限制性核酸内切酶 DNA连接酶
碱性磷酸酶 反转录酶 末端脱氧核苷酰转移酶 DNA聚合酶Ⅰ
Klenow片段
Taq DNA聚合酶 多核苷酸激酶
功
能
识别特异序列，切割DNA
催化DNA中相邻的5´磷酸基和3´羟基末端之间形成磷酸二酯键， 使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接
Bam HⅠ GGATCC CCTAGG
G CCTAG
+
GATCC G
BstⅠ
GGATCC CCTAGG
G CCTAG
+
GATCC G
XmaⅠ
CCCGGG GGGCCC
C CCCGG
+wk.baidu.com
CCGGG G
SmaⅠ
CCCGGG GGGCCC
CCC + GGG
GGG CCC
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G
黏端切口 （sticky end）
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4. 不同处的，酶请联可系以网站产或本生人同删除样。的末端
同尾酶（isocaudarner） 有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切 割DNA后，产生相同的黏端，这样的酶彼此互称为同尾 酶。这两个相同的黏端称为配伍末端(compatible end)。
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3. 切割双处链，D请N联A系分网子站或后本产人删生除黏。端或平端
HindⅡ
GTCGAC CAGCTG
Bam HⅠ
GGATCC CCTAGG
GTC CAG
+
GAC CTG
平端切口 （blunt end）
G +GATCC
CCTAG
Bam HⅠ
GGATCC CCTAGG
GCCTAG+
GATCC G
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命名
Hin dⅢ Haemophilus influenzae d株
流感嗜血杆菌d株的第三种酶
本文档所二提供、的D信息N仅A供连处参，考接请之酶联用系，用网不于站能或作催本为科人化学删D除依N据。A，请片勿段模仿连；接如有不当之
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第一节
重组DNA技术中常用的 工具酶
Frequently Used Enzymes in Recombinant DNA Technology
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属种 株 序
第一个字母取自产生该酶的细菌属名，用大写斜体； 第二、第三个字母是该细菌的种名，用小写斜体； 第四个字母（有时无）代表株（可大写或小写）； 用罗马数字表示发现的先后次序。
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（二）Ⅱ型限制性内切酶具有一些共性和特性