分子生物学检验
分子生物学检验技术
分子生物学检验技术分子生物学检验技术是一种用于研究和分析生物分子如DNA、RNA和蛋白质的技术手段，广泛应用于生命科学研究、医学诊断、药物研发等领域。
它的发展给生物学和医学研究带来了革命性的变化，为人类健康和疾病治疗提供了重要手段。
分子生物学检验技术有多种方法，其中最常见的包括：聚合酶链反应（PCR）、核酸杂交、DNA测序、蛋白质电泳等。
这些技术在生物学研究和医学诊断中发挥着重要作用。
聚合酶链反应（PCR）是一种通过体外扩增DNA片段的技术。
它利用DNA聚合酶酶和引物，通过多次循环反应，在较短的时间内扩增出大量目标DNA片段。
PCR技术广泛应用于基因检测、病原体检测、遗传疾病筛查等领域。
核酸杂交是一种通过互补配对原理来检测目标序列的技术。
它利用标记的探针与待测样品中的目标DNA或RNA序列互相结合，通过检测探针的标记物来确定目标序列的存在与否。
核酸杂交技术广泛应用于基因表达研究、病原体检测、基因定位等领域。
DNA测序是一种确定DNA序列的技术。
它通过化学或物理方法对DNA 分子进行断裂、扩增和测序，最终确定DNA的碱基序列。
DNA测序技术是基因组学研究的重要工具，也是研究基因突变、病因分析等领域的基础。
蛋白质电泳是一种通过电场作用使蛋白质在凝胶中分离的技术。
它根据蛋白质的大小、电荷和结构差异，将混合样品中的蛋白质分离成不同的条带，从而实现对蛋白质的分析和检测。
蛋白质电泳技术广泛应用于蛋白质组学研究、疾病标志物筛查等领域。
除了上述常见的技术，分子生物学检验技术还包括许多其他方法，如基因芯片技术、原位杂交技术、蛋白质质谱等。
这些技术在不同领域有着特定的应用，为科学研究和医学诊断提供了更多的手段和思路。
分子生物学检验技术的发展不仅推动了科学研究的进展，也在医学诊断和治疗中发挥着重要作用。
例如，在基因检测中，通过分子生物学检验技术可以检测人体携带的致病基因，帮助人们了解自己的遗传状况，预防或早期干预遗传性疾病。
临床分子生物学检验技术
概念临床分子生物学检验技术是一种通过检测核酸或蛋白质分子的特异性探针，结合PCR扩增等技术手段，对患者进行疾病诊断、评估和监测的生物学检测技术。
其主要原理是通过检测局部基因组的DNA序列变异或特定基因表达的差异，较快地、精准地检测出有关疾病的相关信息。
常见的临床分子生物学检验包括基因测序、实时荧光定量PCR、基因芯片、蛋白质组学等。
应用临床分子生物学检验技术在诊断和治疗疾病等方面有广泛的应用。
它包括以下方面：病毒感染检测病毒感染检测是临床分子生物学检验技术的最常见应用之一。
例如，病毒性肝炎、艾滋病等病毒可以通过PCR扩增等技术检测其DNA或RNA序列，快速、准确地诊断出相关病情。
遗传疾病检测临床分子生物学检验技术可以用来检测遗传疾病，例如囊性纤维化、血友病等。
通过测试特定基因的变异，可以帮助提供准确的诊断和治疗方案。
肿瘤检测临床分子生物学检验技术可以用于肿瘤的检测和治疗。
例如，可以通过检测特定基因的变异来确定病程、判断预后、评估生存率。
此外，分子靶向治疗可以根据肿瘤基因异质性搭配治疗，旨在找到更好的治疗方案。
发展趋势随着分子生物学技术的不断发展，临床分子生物学检验技术也有了新的发展方向，主要包括以下几个方面：个性化医疗个性化医疗是临床分子生物学检验技术的重要发展所趋，它利用分子层面的信息，识别和分析患者的基本和环境因素，以针对性和定制性地制定最佳治疗方案，提高临床疗效。
基于大数据的检测随着数据采集和处理技术的不断提高，数据已成为生物医学研究中最重要的资源之一。
临床分子生物学检验技术在未来还将集成可视化数据分析、机器学习等技术，打造更开放、高效、便捷的医学数据系统。
智能化诊断随着人工智能技术的崛起，临床分子生物学检验技术将融合人工智能技术，利用计算机进行大数据分析和诊断，打造智能化临床检测平台，大大改进诊断效率和准确性，从而进一步提升疾病的治疗效果和预测准确性。
总的来说，临床分子生物学检验技术在治疗、预防及生物医学研究方面持有巨大潜力。
检验科分子生物学常见检测项目解读
检验科分子生物学常见检测项目解读分子生物学在现代医学检验中扮演着重要的角色，它通过研究细胞和分子水平的生物学过程，为疾病的诊断和治疗提供了有效的手段。
在检验科中，有一些常见的分子生物学检测项目，本文将对这些项目进行解读，以帮助读者更好地了解这些检测的意义和应用。
1. 基因突变检测基因突变是导致一些遗传性疾病的重要原因，通过进行基因突变检测，可以帮助医生确定患者是否携带了相关的基因突变。
这对于一些常见的遗传病如囊性纤维化、遗传性乳腺癌等的早期诊断和预防具有重要意义。
2. RNA表达谱检测RNA表达谱检测可以帮助科研人员了解基因在转录水平上的表达情况，揭示基因调控的机制和功能。
此外，通过与正常样本的对比，可以发现异常的表达模式，从而找到潜在的疾病相关基因。
3. DNA甲基化检测DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰方式，它在基因组稳定性和基因功能中起着重要作用。
通过DNA甲基化检测，可以了解到甲基化修饰在疾病发生过程中的变化，为疾病的早期诊断和治疗提供依据。
4. 微生物基因组测序微生物基因组测序是对微生物的基因组进行全面测序的技术，可以识别出样本中存在的各种微生物，并揭示其在致病机制中的作用。
这对于致病微生物的准确鉴定和疾病的治疗非常重要。
5. 肿瘤突变谱分析肿瘤突变谱分析是通过对肿瘤样本中的基因组进行测序，了解其中存在的基因突变情况。
这对于肿瘤的诊断和治疗选择具有重要意义，可以帮助医生制定个体化的治疗方案。
6. 微生物菌群检测微生物菌群检测通过对样本中的微生物进行测序，了解不同微生物种群的组成和分布情况。
这对于了解人体与微生物的共生关系，以及微生物在健康和疾病中的作用起到关键的作用。
7. 病毒感染检测病毒感染检测是通过检测血液、体液等样本中的病毒核酸来判断是否存在病毒感染。
包括常见的病毒如乙肝病毒、人类免疫缺陷病毒（HIV）等的检测。
这对于疫情监测、疾病预防和治疗具有重要意义。
总结：分子生物学的常见检测项目在现代医学诊断和治疗中起到了重要的作用。
临床分子生物学检验技术
04
优势：快速、准确、灵敏度高
05
局限性：成本高、技术要求高、需要专业人员操作
遗传病诊断
基因检测：通过基因测序技术， 检测遗传病相关基因突变
产前诊断：通过基因检测，评估 胎儿遗传病风险，指导优生优育
遗传咨询：根据基因检测结果， 提供遗传病风险评估和预防建议
药物治疗：根据基因检测结果， 制定个性化的药物治疗方案
04 跨界合作：与其他领域的技 术相结合，如人工智能、大 数据等，为分子生物学检验 技术带来更多的市场机遇。
汇报人：xxx
液体活检技术的发展： 通过血液样本检测肿瘤 细胞，提高了肿瘤检测
的准确性和便捷性
生物芯片技术的应用： 用于基因表达分析、 基因分型等，提高了 检测效率和准确性
单细胞测序技术的发展： 实现了对单个细胞的基 因表达分析，提高了检
测的灵敏度和分辨率
基因编辑技术的发展： CRISPR/Cas9等基因 编辑技术的出现，为基 因治疗提供了新的可能
市场前景与机遇
01 市场需求：随着人们对健康 重视程度的提高，分子生物 学检验技术在医疗领域的应 用将越来越广泛。
02 技术进步：随着分子生物学 技术的不断发展，检验技术 将更加精准、高效，为市场 带来更多机遇。
03 政策支持：政府对医疗领域 的投入加大，为分子生物学 检验技术的发展提供了有利 的政策环境。
生物学与工程学的融合：分子 生物学检验技术需要利用工程 学原理和方法，如微流控芯片、 纳米材料等，进行生物大分子 的检测和分析。
技术瓶颈与难题
技术难度：分子生物学检验技术涉及 多个学科，技术难度较大
成本问题：分子生物学检验技术成本 较高，难以普及
检测准确性：分子生物学检验技术检 测准确性有待提高
临床分子生物学检验技术名词解释
临床分子生物学检验技术名词解释临床分子生物学检验技术是一种应用分子生物学原理和技术的方法，用于检测和诊断临床样本中的遗传变异、基因表达和蛋白质水平等。
它可以为临床医生提供有关疾病发生、发展和治疗反应的重要信息。
以下是一些常见的临床分子生物学检验技术及其解释：1.聚合酶链反应（PCR）：PCR是一种用于扩增DNA片段的技术。
它可以从极小的DNA样本中扩增特定的DNA片段，以检测和诊断遗传性疾病、感染和肿瘤等。
2.基因测序：基因测序是一种用于确定DNA或RNA序列的技术。
它可以揭示个体的遗传信息，检测基因突变和多态性，帮助诊断遗传性疾病、肿瘤和药物反应等。
3.核酸杂交：核酸杂交是一种用于检测目标DNA或RNA序列的技术。
它利用DNA或RNA探针与目标序列互补结合的原理，可以检测病毒感染、基因突变和融合基因等。
4.蛋白质电泳：蛋白质电泳是一种用于分离和检测蛋白质的技术。
它通过在凝胶中进行电泳，可以分离不同大小、电荷和亲和性的蛋白质，用于疾病标记和生物标志物的检测。
5.免疫组化：免疫组化是一种用于检测蛋白质在细胞或组织中的表达和定位的技术。
它利用特异性抗体与目标蛋白质结合，通过染色或荧光信号来检测和定量蛋白质的表达水平。
6.质谱分析：质谱分析是一种用于分析和鉴定化合物的技术。
它可以通过将样本中的分子离子化，利用质谱仪测量其质量和电荷比，从而确定样品的组成和结构，用于肿瘤标记物和药物代谢产物的检测。
这些临床分子生物学检验技术在临床实践中起着重要的作用，可以帮助医生进行准确的诊断和治疗决策，为患者提供更好的医疗服务。
随着技术的不断发展和突破，我们可以预期未来将出现更多更精确的分子生物学检验技术，为临床医学带来更大的进步和革新。
分子生物学检验技术的临床应用
分子生物学检验技术的临床应用分子生物学检验技术是一种应用于临床诊断和治疗的重要工具。
它基于分子生物学的原理和方法，通过对生物体内分子水平的研究，为医生提供了更准确、快速和个体化的诊断和治疗方案。
本文将从分子生物学检验技术的原理、临床应用及其优势等方面进行探讨。
一、分子生物学检验技术的原理分子生物学检验技术主要包括核酸提取、聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量PCR、基因测序等。
其中，核酸提取是从样本中提取出核酸分子，PCR是通过扩增特定DNA片段来检测目标基因的存在，实时荧光定量PCR则可以定量检测目标基因的数量，基因测序则是对DNA序列进行测定。
这些技术的基本原理是在体外模拟生物体内的核酸复制和扩增过程，从而实现对目标基因的检测和分析。
二、分子生物学检验技术在临床中的应用1. 基因突变检测：分子生物学检验技术可以对致病基因的突变进行检测，从而帮助医生确定遗传性疾病的诊断和治疗策略。
例如，通过PCR技术可以检测乳腺癌基因BRCA1/BRCA2的突变，帮助判断患者是否具有乳腺癌的遗传风险。
2. 微生物检测：分子生物学检验技术可以快速、准确地检测各类病原微生物，包括细菌、病毒、真菌等。
利用PCR技术可以检测结核分枝杆菌、艾滋病病毒等病原体的存在，帮助医生确定感染性疾病的诊断和治疗方案。
3. 肿瘤标志物检测：分子生物学检验技术可以检测肿瘤标志物的存在和表达水平，帮助医生判断肿瘤的类型、分级和预后。
例如，通过实时荧光定量PCR技术可以检测前列腺特异性抗原（PSA）的表达水平，辅助诊断和监测前列腺癌。
4. 基因型鉴定：利用分子生物学检验技术可以对个体基因型进行鉴定，帮助医生制定个体化的药物治疗方案。
例如，通过基因测序技术可以确定患者对某些药物的代谢能力，从而避免不良药物反应或提高药物疗效。
三、分子生物学检验技术的优势1. 高灵敏度：分子生物学检验技术可以在非常低浓度的样本中检测到目标基因的存在，具有非常高的灵敏度。
分子生物学检验技术
1、分子生物学检验技术：是以核酸或蛋白质为分析材料;通过分析基因的结构、表达的变化和由此而导致的基因功能的改变;为疾病的研究和诊断提供更准确、更科学的信息和依据的一门学科..2、请说明分子生物学检验技术在临床试验诊断中的应用.. 1感染性微生物的检测..如：用PCR技术进行甲型肝炎病毒的检测、乙型肝炎病毒的检测和解脲脲原体的检测等..2基因突变的检测..如：用PCR一限制性片段长度多态性RFLP 技术检测地中海贫血基因突变..3法医学检测..如：用PCR微卫星检测技术进行亲子关系的鉴定和个体识别..4基因异常表达的检测..如：用cDNA表达的芯片技术进行基因异常表达的检测..5基因定位..如：用原位杂交技术进行组织与细胞中基因表达的定位..3、基因组：是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质..4、基因：是基因组中一个功能单位;是贮存有功能的蛋白质多肽链信息或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列..5、原核生物：是细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌和蓝绿藻等原始生物的总称;是最简单的细胞生物体..6、操纵子结构：是原核生物基因组的功能单位..7、质粒：是指细菌细胞染色体外;能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子..8、转座因子：又称为转座元件;是一类在细菌染色体、质粒和噬菌体之间自行移动并具有转位特性的独立的DNA序列..9、原核生物基因组的结构特征：1原核生物基因组通常仅由一个DNA分子构成;基因组中只有一个复制起点;具有类核结构..2具有操纵子结构;模板mRNA为多顺反子mRNA..编码区远远大于真核生物基因组;但又远远小于病毒基因组..在基因组中存在多功能的识别区域;如复制起始区、转录启动区和终止区等;这些区域常常含有反向重复序列..3结构基因通常为单拷贝基因;编码顺序一般不重叠..4具有编码同工酶的基因..5含有可移动的DNA序列..10、病毒基因组的结构特点：1与细菌和真核生物基因组相比;病毒基因组结构简单;基因数少;所含信息量也少..2病毒基因组的核酸类型较多;有双链DNA、单链DNA、双链RNA 和单链RNA；有环状分子;也有线性分子..但无论是哪种核酸类型;一种病毒颗粒中核酸成分只能为一种;或DNA;或RNA.. 3基因组中有基因重叠现象;这种结构的意义在于使较小的基因组能携带较多的遗传信息..4基因组中具有操纵子结构..5病毒基因可连续也可间断..6基因组中重复序列少..7基因组中非编码区少..8病毒基因组是单倍体..9病毒基因组核酸序列中功能相关的蛋白质基因往往丛集在基因组的一个或几个特定部位;形成一个功能单位或转录单元..10病毒基因组含有不规则的结构基因..11、真核生物基因组的结构特点：1真核生物基本上不存在操纵子结构;一个结构基因转录生成一条mRNA;即mRNA是单顺反子;许多蛋白是由相同或不同的亚基构成;因此涉及多个基因的协调表达..2基因组中非编码的区域多于编码区域;并且;编码蛋白质的基因一般是不连续的断裂基因;即有外显子和内含子;在转录后经剪切成成熟mRNA后;才能翻译成蛋白质..3基因组DNA有重度、中度和低度三种重复序列..4基因组DNA 具有多基因家族与假基因..5基因组DNA结构存在不同程度的差异;即基因多态性..6基因组DNA也有基因重叠现象..7真核细胞的染色体末端存在一种由DNA片段和蛋白质组成的独特结构;即端粒..它能维持染色体的稳定性..12、乙型肝炎病毒HBV基因组的结构：HBV基因组的长度为3.2kb;是带有部分单链区的环状双链DNA分子;是目前已知感染人类最小的DNA病毒..HBV的两条链长度不等;长的链为负链;用“L-”表示;其长度是固定的;携带有病毒全部的编码信息；短的为正链;用“S+”表示;正链在不同的分子中长度不等;一般长约1.6-2.8kb;大约是负链的50%-100%;并且短链的5’端位置是固定的;而3’端的位置是可变的..在负链的5’端有一低分子量的蛋白质;在正链的末端则有一段短RNA;它们是引导DNA合成的引物..两条链的5’端有约250-300bp可互补结合;所以也称为黏性末端;这种互补结合是DNA保持双链环状的基础..此外;这部分核苷酸序列也是HBV最常整合到肝细胞染色体DNA中得序列..在黏性末端的两侧还各有11个核苷酸构成的顺向重复序列;分别称为DR1和DR2;DR1在负链5’端;DR2在正链5’端;中间相隔223个核苷酸..DR区域是DNA成环及病毒复制的关键区域..HBV基因组已经确定在负链DNA核苷酸序列为模板转录的RNA上含有4个公认的开放阅读框;分别成为S、C、P、X区..13、丙型肝炎病毒基因组HCV的结构：呈球形颗粒;直径约50nm;有一脂质包膜..基因组为单链正链RNA病毒;链长约9.5kb;整个基因组只有一个ORF;编码3011或3010个氨基酸..5’端和3’端分别有短的非编码区UTR ..5’端UTR由324-341个核苷酸组成;可能在病毒的复制和翻译过程中起重要的调节作用..5’端UTR的核苷酸序列保守性强;可用于基因检测诊断..3’端UTR由27-55个核苷酸组成;其长度取决于病毒的来源;由病毒固有顺序与各种长度的“多U序列”组成;是HCV的独特结构..HCV基因产物均来自一个大的多蛋白前体;经宿主与病毒编码的蛋白酶的联合作用;在翻译中或翻译后被加工成为结构蛋白及非结构蛋白..结构蛋白包括两种：核心蛋白和包膜糖蛋白..非结构蛋白包括四种：NS2、NS3、NS4、NS5..14、人类免疫缺陷病毒基因组HIV的结构：主要有两型：HIV-1和HIV-2..两型病毒的核苷酸序列差异超过40%;世界范围的AIDS大多由HIV-1所致;HIV-2只在西非呈地区性流行..HIV 基因组由2条相同的正链RNA在5’端通过氢键互相连接在一起形成二聚体;其单链RNA含有9749个核苷酸..HIV基因组共有9个基因;其中3个是结构基因;6个是调控基因..在病毒基因组的5’端和3’端各有相同的一段核苷酸序列;称为长末端重复序列LTR..LTR中含有启动子、增强TATA序列等;它们对病毒基因组转录的调控起关键作用..15、质粒的一般性质：质粒作为一个完整的复制子;在转化菌细胞后能自主复制;并对细菌的一些代谢活动和抗药性表现具有一定的作用..在质粒只有在宿主细胞内才能完成自我复制;一旦离开宿主细胞就无法复制和扩增;相反;宿主细胞失去了质粒依旧能存活..质粒也是一种游离基因;既可整合到细菌染色体中;又可在游离出来..质粒具有不相容性..16、基因结构异常：广义上是指染色体畸变和基因突变;狭义上一般是指基因突变..17、基因结构异常的类型：通常分为单基因病和多基因病..单基因病包括：三联体重复、血红蛋白病、苯丙酮尿症和遗传性原发痛风..多基因病包括：原发性高血压、糖尿病和实体瘤..18、端粒：真核细胞染色体末端存在着一种由DNA片段和蛋白质组成的独特结构;即为端粒..它对维持染色体的稳定性具有重要作用..19、端粒的主要作用：1维持染色体的稳定性;防止染色体重组及末端被降解..2保证细胞在有丝分裂时染色体准确的分离;在减数分裂是保证染色体的成对及运动..3端粒在细胞生长中有很大的作用;其与肿瘤和衰老有关..20、人类基因组：包括细胞核内的核基因组和细胞质内的线粒体基因组..核基因组由3.16×10９bp组成;线粒体基因组由16569bp组成..21、核酸：是以核苷酸为基本组成单位的生物信息大分子..天然存在的核酸有两类;即DNA和RNA..22、核酸分离纯化应遵循的原则：一是保证核酸一级结构的完整性;因为完整的一级结构是核酸结构和功能研究的基本要求；二是尽量排除其他分子的污染;保证核酸样品的纯度..23、简述核酸分离纯化技术路线的设计：1核酸的释放：①细胞破碎方法中机械剪切法不能用于基因组DNA的提取；②非机械法常用化学试剂或酶细胞溶解法.. 2核酸的分离与纯化：①除去蛋白质、多糖、脂类等大分子物质；②除去非目的核酸组分；③除去实验溶液和试剂.. 3核酸的浓缩、沉淀于洗涤：①浓缩：提高样品浓度；②沉淀：常用的浓缩方法;如醋酸钠、醋酸铵等；③洗涤：除去共沉淀的盐;常用70%-75%的乙醇..24、简述酚抽提法分离纯化基因组DNA的方法;并绘制出流程示意图：1将分散好的真核生物组织、细胞在含EDTA、SDS及无DNA酶裂解缓冲溶液裂解细胞;破坏细胞膜、核膜;EDTA能抑制细胞中DNA酶的活性;使DNA分子完整地以可溶形式存在于溶液中..SDS主要引起细胞膜的降解并能乳化脂质和蛋白质;并使它们沉淀;同时还有降解DNA酶的作用..再经蛋白酶K处理后;用PH8.0的Tris饱和酚抽提DNA;重复抽提至一定纯度后;得到的DNA溶液经乙醇沉淀进一步纯化;此法可获得100-200kb的DNA片段..2书本82页25、简述低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法如何回收基因组DNA;有何优点：本方法是从低熔点琼脂糖凝胶中切出含待回收的DNA凝胶块;利用其纯度高、熔点低及凝固温度低的特点;对DNA片段回收的方法..该法对高分子量的DNA特别有用;也能有效的分离小分子量的DNA片段..26、质粒DNA纯化的主要方法与原理：1cscl-EB法：是一种沉降平衡离心法..经超速离心;离心介质cscl形成一连续的密度梯度;在过量EB存在的条件下;各种不同密度的物质经离心平衡后得以分开..该法主要用于纯化容易出现切口的极大质粒DNA和具有某些特殊用途的闭环质粒DNA..2聚乙二醇沉淀法：是一种分级沉淀法..质粒DNA的粗制品首先用LiCl沉淀大分子RNA;并用RNase消化小分子RNA;然后在高盐条件下;用PEG选择性地沉淀大的质粒DNA;沉淀的质粒DNA进一步用酚/氯仿抽提和乙醇沉淀..PEG沉淀法简单、经济、试用广泛;尤其对碱裂解法提取的质粒纯化效果好;适用于分子克隆中所有常规的酶学反应;也能用于高效的哺乳动物细胞学的转染..但不能有效分离带切口的环状质粒DNA与闭环质粒DNA..3柱层析法：柱层析法纯化质粒DNA的关键是用于填充层析柱的树脂..树脂可分两类：一类是利用疏水的相互作用纯化质粒DNA样品；另一类是通过离子交换与吸附的相互作用进行纯化..以硅基质作为填充材料的柱层析作用原理是：在多盐条件下;依靠DNA与硅基质的可逆性结合进行纯化..多盐造成磷酸二酯骨架的脱水;通过暴露的磷酸盐残基;是DNA吸附到硅基质上..以50%的乙醇溶液洗去RNA和糖类等生物大分子后;加入TE缓冲液或水溶液使DNA分子重新水合;并通过离心洗脱出来..DNA与硅基质的吸附作用与DNA的碱基组成和拓扑结构无关;因此可用于环形质粒DNA和线性DNA的纯化..由于＜100-200bp的DNA分子与硅基质的吸附力很弱;因此柱层析不能用于小分子DNA片段的纯化..27、简述RNA提取的关键步骤：91页28、DNA重组：不同来源的DNA通过磷酸二酯键连接而重新组合成新的DNA分子的过程;称为DNA重组..29、DNA重组技术分子克隆或基因工程：用人工手段对DNA进行改造和重新组合的技术..包括对DNA分子的精细切割、部分序列的去除、新序列的加入和连接、DNA分子扩增、转入细胞的复制繁殖、筛选、克隆、鉴定和序列测定等等;是基因工程技术的核心.. 30、克隆：来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合..31、DNA克隆：是指应用DNA重组技术;在体外对DNA进行重组;构建成具有自主复制能力的重组DNA分子;再导入宿主细胞;然后从单个细胞开始大量扩增;最终获得大量同一的DNA分子..32、限制性内切酶：是存在于细菌体内;能识别和水解双链DNA分子内特定序列的核苷酸水解酶类..33、DNA连接酶：催化双链DNA或RNA中并列的5′-磷酸和3′-羟基之间形成磷酸二酯键的酶..34、载体：时携带靶DNA目的DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运载工具..35、作为载体应具备的条件：①在宿主细胞中具有自主复制能力或能整合到宿主染色体上与染色体基因组一同复制的能力；②有合适的限制性酶切位点供外源DNA片段插入；③分子量不宜过大;以便于容纳较大的外源DNA片段并获得较高的拷贝数;也有利于体外重组操作；④具有合适的筛选标记;以便于区分阳性重组体和阴性重组体;常用的筛选标记有抗药性、酶基因、营养缺陷型或形成噬菌斑的能力等；⑤配备与宿主相适应的调控元件;如启动子、增强子和前导序列等..36、用作克隆载体的理想质粒应具备的特点：①具有松弛复制子;复制子是质粒自我增殖所必不可少的基本条件;并可协助维持使每个细胞含有一定数量的质粒拷贝；②在复制子外存在数个单一的酶切位点;以便目的DNA片段插入；③具有插入失活的筛选标志;理想的质粒载体应具有两种抗生素抗性标志；④分子量相对较小和较高的拷贝数..*37、重组DNA的步骤：：①获得目的基因；②与克隆载体连接;形成新的重组DNA分子；③用重组DNA分子转化或感染宿主细胞;并能在宿主细胞中复制和遗传；④对重组子的筛选和鉴定；⑤DNA序列测定..38、原核生物表达体系对外源目的基因的要求：要求真核生物的目的基因不应具有5′端非编码区以及内含子结构.. 39、原核生物表达载体的特点：①含大肠杆菌适宜的选择标志；②具有能调控转录、生产大量mRNA的启动子；③含适当的翻译调控序列；④含合理设计的多接头克隆位点;以确保目的基因按一定的方向与载体正确连接..40、真核生物基因在原核细胞中的表达类型：包括融合型表达蛋白、非融合型表达蛋白和分泌型表达蛋白..41、酵母重组表达蛋白的分离与纯化：包括酵母细胞内表达的蛋白和分泌型蛋白的分离与与纯化..1酵母细胞内表达的重组蛋白的分离与纯化：这种蛋白质的分离与纯化过程比较简单;以α-蛋白酶抑制剂的纯化为例：收集酵母细胞→玻璃珠破碎→离心取上清液→DEAE Sepharose柱层析→梯度洗脱→收集活性部分→浓缩→葡聚糖凝胶G75柱层析→收集、浓缩→SDS-PAGE纯度鉴定..2酵母表达分泌型重组蛋白的分离与纯化：以酵母表达干扰素纯化为例：发酵液用0.45um孔径滤膜过滤浓缩→DEAE-Trisacryl柱层析→梯度洗脱→收集干扰素部分→SephadexG75柱层析→洗脱→收集干扰素→稀释→层析聚焦缓冲液洗脱→电泳鉴定..42、RNAi小干扰RNA的作用机制与设计原则：1作用机制：①起始阶段：外源的DsRNA通过导入或者转基因、病毒感染、转座子活化及特异重复序列或其他未知方式进入细胞;被Dicer酶识别并将dsRNA切割成21-23个核苷酸的由正反义链组成的小分子干扰RNAsiRNA；②效应阶段：siRNAs 的双链结构需被解螺旋后组装到RNA诱导的沉默复合物中;该复合物中解旋酶活性将siRNA双链解开;并定位到siRNA的反义链互补的靶mRNA转录本上;在距离siRNA3′12个碱基的位置切割mRNA；③倍增阶段：仅需少量siRNA即可引起强烈的同源基因表达抑制..2设计原则：①siRNA中G+C碱基含量：一般为30%-70%;50%时siRNA产生的沉默效应较高;但过高的G+C碱基含量会降低沉默活性；②siRNA的作用位点：一般选择2-4个不同序列针对目的DNA;3′端非编码区域可以作为目的序列;避免选择起始密码下游500-100个碱基处、终止密码上游100碱基处及5′端非编码区域;因为此区域中含有阻止靶向识别的蛋白质结合位点；③ siRNA序列：避免连续四个以上腺嘌呤及3个鸟嘌呤或胞嘧啶核苷酸的序列；④siRNA碱基数：选择以A或G开始的21-23碱基大小的目的mRNA；⑤环碱基数：一般为9个碱基;其序列为TTCAAGAGA；⑥对照系统：将以设计的siRNA碱基序列随机排列;以保证与其他基因无同源性;才可作为实验的对照系统..43、核酸分子技术杂交：单链的核酸分子在合适的条件下;与具有碱基互补序列的异源核酸形成双链杂交体的过程称作核酸分子杂交..44、探针：是用放射性核素或非放射性物质标记的一段单链或双链核苷酸;可依碱基配对规律与具有互补序列的待测核酸进行杂交;以探测它们的同源程度..45、变性：在一定条件下;双螺旋之间氢键断裂;双螺旋解开;DNA分子成为单链;形成无规则线团;这一过程称作变性..46、融解温度：DNA的变性会在一个狭窄的温度范围内发生;这一温度范围的中点被称为溶解温度..47、复性：变性DNA只要消除变性条件;;具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链;这一过程称之为复性.. 48、杂交：将一种核酸单链标记成为探针;再与另一种核酸单链进行碱基互补配对;可以形成异源核酸分子的双链结构;这一过程称作杂交..49、核酸分子杂交原理：互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链;即能够进行杂交..这种结合是特异的;即严格按照碱基互补的原则进行;它不仅能在DNA和DNA之间进行;也能在DNA和RNA之间进行..因此;当用一段已知基因的核酸序列作出探针;与变性后的单链基因组DNA接触时;如果两者的碱基完全配对;它们即互补地结合成双链;从而表明被测基因组DNA中含有已知的基因序列..50、杂交核酸分子的种类：液相杂交、固相杂交、原位杂交和基因芯片技术..51、原位杂交：是应用核酸探针与组织或细胞中的核酸按碱基互补配对原则进行特异性结合形成杂交体;然后应用组织化学或免疫组织化学法在显微镜下进行细胞内定位的检测技术..52、试述Southern印记杂交的基本操作步骤：149页53、简述核酸分子杂交过程：包括核酸分子与固相介质的结合、杂交和杂交后信号的检测3个过程..而杂交又可分为预杂交、杂交和洗脱三个步骤..54、聚合酶链反应PCR：一种在体外特异性地复制已知序列的DNA片段的重要技术..55、PCR反应原理及反应过程：1原理：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程;其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物..2反应过程：PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①变性：将被复制片段的DNA在94℃-95℃条件下加热;使DNA双螺旋的氢键断裂;形成单链分子作为反应的模板；②退火：将温度降至寡核苷酸引物的融点温度以下55℃左右;使引物能与模板互补结合形成杂交链；③延伸：将温度升至72℃左右;反应体系按照模板链的序列以互补的方式依次把dNTP加至引物的3′端;TaqDNA聚合酶使杂交双链不断延伸;直至形成新的DNA双链..56、PCR反应条件为：温度、时间和循环次数..57、PCR的特点：特异性强..对标本的纯度要求低..灵敏度高..58、PCR反应的特异性决定因素为：①引物与模板DNA特异正确的结合；②碱基配对原则；③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；④靶基因的特异性与保守性..59、PCR反应的成分主要是：模板、引物、脱氧核苷三磷酸dNTP、TaqDNA聚合酶和缓冲液等..60、荧光定量PCR的原理和方法：176页61、PCR产物的检测：185页62、PCR引物的设计原则是什么如何设计引物1原则：①用于PCR反应的引物需要有两条被扩增目的基因的两端;并分别与模板正负链序列互补；②引物长度一般以18-25个核苷酸为宜；③两条引物之间尤其在3′端的序列不能有互补;以免形成引物二聚体；④引物的碱基组成应平衡;避免出现嘌呤、嘧啶碱基堆积..⑤PCR扩增中得退火温度是根据引物的Tm值决定的;两条引物的Tm值不能差别太大；⑥根据需要;可以在合成引物时于其5′端加修饰成分..2设计引物最好用电脑软件进行分析;有助于综合考虑上述各因素.63、微卫星：又称短串联重复STR;人类基因组中存在6-12个核苷酸重复序列;它们可以以正向或反向方式串联;并分布于基因的多个位点上;存在的重复序列数目不同;其中2-6个核苷酸组成的重复序列称为微卫星..。
分子生物学检验完整版
1病原生物基因组在医学上有何应用？详见书P3a菌种鉴定b确定病毒感染和病毒载量c病毒分析d细菌耐药监测和分子流行病学调查2什么是原癌基因，原癌基因有什么特性，原癌基因可以分为哪些种类以及原癌基因常见的激活机制有哪些？原癌基因是指人类或其他动物细胞(以及致癌病毒)固有的一类基因，能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称。
特性：进化上高度保守，负责调控正常细胞生命活动，可以转化为癌基因。
功能分类：生长因子，生长因子受体，信号转导蛋白，核调节蛋白，细胞周期调节蛋白，抑制凋亡蛋白激活机制：插入激活，基因重排，基因点突变，基因扩增，基因转录改变3试述Down综合征（21三体综合征）的主要临床特征及核型。
临床特征：生长发育障碍，智力低。
呆滞面容，又称伸舌样痴呆。
40%患者有先天性心脏畸形。
肌张力低，50%患者有贯通手，男患者无生育能力，女患者少数有生育能力，遗传风险高。
核型：92.5%患者游离型：核型为47，XX(XY),+212.5%患者为嵌合型：46，XX(XY)/47，XX(XY),+215%患者为易位型：46，XX(XY),-14，+t(14q21q)4简述淋球菌感染的主要传统实验室诊断方法及其主要特点，对比分析分子生物学方法的优势1直接涂片染镜检：敏感度和特异性差，不能用于确诊。
2分离培养法：诊断NG感染的金标准，但是其对标本和培养及营养要求高，培养周期长，出报告慢，难以满足临床要求。
3免疫学法：分泌物标本中的非特异性反应严重以及抗体法间的稳定性和条件限制，推广受限。
分子生物学的优点：敏感，特异，可直接从了临床标本中检出含量很低的病原菌，适应于快速检测5、在单基因遗传病的分子生物学检验中，点突变检测常用方法有哪些？1异源双链分析法（HA）2突变体富集PCR法3变性梯度凝胶电泳法4化学切割错配法5等位基因特异性寡核苷酸分析法6DNA芯片技术7连接酶链反应8等位基因特异性扩增法9RNA酶A切割法10染色体原位杂交11荧光原位杂交技术6、简述白假丝酵母菌的分子生物学检验方法白假丝酵母菌分子生物学检验主要包括白假丝酵母菌特异性核酸（DNA RNA）的检测、基因分型和耐药基因分析等。
临床分子生物学检验技术重点
临床分子生物学检验技术重点
临床分子生物学检验技术是一种用于研究生物分子的技术，它可以用于诊断、治疗和预防疾病。
以下是该技术的几个重点：
1. PCR（聚合酶链反应）技术：PCR技术是一种从微量DNA样本中扩增特定DNA片段的方法。
它可以用于检测病原体、基因突变和基因型分析等。
PCR技术的优点包括高度敏感、特异性强、快速、简单易行等。
2. 荧光原位杂交技术（FISH）：FISH技术是一种用于检测染色体异常的方法，它可以用于诊断染色体异常疾病、肿瘤和遗传病等。
该技术通过使用荧光探针与目标DNA序列互补，使目标序列在细胞核内染色体上可视化。
3. 基因芯片技术：基因芯片技术是一种用于同时检测大量基因表达的方法。
它可以用于研究疾病的发生机制、预后和治疗反应等。
基因芯片技术的优点包括高通量、高灵敏度、高效性等。
4. 基因测序技术：基因测序技术是一种用于确定DNA序列的方法。
它可以用于分析基因变异、疾病遗传学研究和个性化治疗等。
基因测序技术的优点包括高度精确、高通量、高灵敏度等。
以上是临床分子生物学检验技术的几个重点，这些技术在疾病诊断和治疗中具有
重要的应用价值。
检验科常见分子生物学检测方法与解读
检验科常见分子生物学检测方法与解读分子生物学检测方法是现代医学检验科技中不可或缺的一部分，在疾病诊断、预后评估、治疗效果监测等方面发挥着重要的作用。
本文将介绍几种常见分子生物学检测方法，并解读其结果的意义。
一、PCR（聚合酶链反应）PCR是一种体外扩增DNA的方法，可以在短时间内快速复制DNA，从而达到检测基因、病原体等目的。
PCR主要包括三个步骤：变性、退火和延伸。
通过引物和DNA聚合酶的作用，可以在样本中扩增目标片段。
PCR结果通常以荧光信号表示阳性或阴性，用于检测病原体、基因突变等。
二、实时荧光定量PCR实时荧光定量PCR是PCR的一种改进方法，可以精确计量PCR反应产生的DNA量。
通过在PCR反应体系中加入荧光探针，利用荧光信号的增强与反应产物DNA量的增加成正比关系，从而实现DNA的定量检测。
实时荧光定量PCR广泛应用于检测病原体、基因表达水平等领域。
三、核酸杂交核酸杂交是一种基于互补配对的分子识别方法。
通过采用标记的探针与待检测样品中的目标序列发生互补配对，并利用标记物的检测手段检测信号，可以实现对目标序列的检测。
核酸杂交广泛应用于基因型鉴定、病原体检测等领域。
四、蛋白质电泳蛋白质电泳是一种常用的蛋白质分离和定量方法。
通过将待测样品中的蛋白质经过电泳分离，可以获得一条包含不同大小蛋白质的蛋白条带。
根据蛋白条带的相对迁移距离和分子质量，可以分析样品中蛋白质的组成和含量，用于血清蛋白分析、肿瘤标志物检测等。
五、蛋白质质谱蛋白质质谱是一种高通量的蛋白质分析技术，可以通过测量蛋白质分子的质量和序列来鉴定和定量蛋白质。
蛋白质质谱常用的方法包括质谱分析和液相色谱质谱联用技术。
通过蛋白质质谱分析，可以深入了解蛋白质的组成、修饰以及功能，广泛应用于蛋白质组学研究和生物标记物检测等领域。
以上介绍的是几种常见的分子生物学检测方法，它们在疾病检测与诊断中发挥着重要的作用。
当然，在实际应用中，分子生物学检测结果的解读也是至关重要的。
临床分子生物学检验知识点
临床分子生物学检验知识点
临床分子生物学检验是一种应用分子生物学技术进行的检验，旨在诊断疾病、研究疾病发生机制、预测疾病发展趋势等。
下面是这方面的一些重要知识点：
PCR技术
PCR技术是临床分子生物学检验的基础，主要用于扩增DNA 片段。
PCR技术可以用于基因检测、病原体检测、基因编辑等。
基因检测
基因检测是通过对DNA样本进行PCR扩增、纯化和检测，确定某种基因的序列和变异情况。
基因检测可以用于预测某些遗传疾病的患病风险、明确一些疑难病例的诊断、指导个体化用药等。
基因编辑
基因编辑是针对某些单基因遗传疾病，通过调整或替换异常基因进行治疗。
目前基因编辑主要有ZFN、TALEN和CRISPR-Cas9等三种技术。
无创产前基因检测
无创产前基因检测是利用孕妇外周血中由胎儿胎盘分泌的游离胎儿DNA进行基因检测。
该技术可以检测染色体异常、单基因遗传病等。
无创产前基因检测不会对胎儿产生任何伤害。
以上是临床分子生物学检验的一些常见知识点，希望对您有所帮助。
分子生物学检验完整版
分子生物学检验完整版分子生物学检验是一门在生命科学领域中具有重要地位的学科，它通过对生物大分子，如核酸和蛋白质的研究和分析，为疾病诊断、遗传咨询、法医学鉴定、农业和畜牧业的改良等众多领域提供了关键的技术支持和科学依据。
首先，让我们来了解一下分子生物学检验的基本原理。
其核心在于利用分子生物学的技术手段，对生物样本中的核酸（DNA 和 RNA）和蛋白质进行检测和分析。
DNA 是遗传信息的携带者，它的序列和结构变化能够反映出个体的遗传特征、疾病易感性以及疾病的发生发展过程。
RNA 则在基因表达调控中起着重要作用，对 RNA 的分析可以帮助我们了解基因的活性和表达水平。
而蛋白质作为生命活动的执行者，其种类、数量和结构的变化也与各种生理和病理过程密切相关。
在实际应用中，分子生物学检验涵盖了众多技术方法。
其中，聚合酶链式反应（PCR）技术是最为常见和重要的之一。
PCR 能够在体外快速扩增特定的 DNA 片段，使其数量达到可检测的水平。
通过设计针对特定基因或序列的引物，PCR 可以用于检测病原体的存在、基因突变的鉴定以及基因分型等。
实时荧光定量 PCR 技术则在 PCR 的基础上，实现了对扩增产物的实时定量监测，大大提高了检测的准确性和灵敏度。
另一个重要的技术是核酸杂交。
它基于核酸分子碱基互补配对的原理，通过将待测核酸与已知序列的探针进行杂交，从而检测待测样本中是否存在特定的核酸序列。
这种技术在基因诊断、病毒检测以及遗传性疾病的筛查中发挥着重要作用。
除了核酸检测，蛋白质的分析也是分子生物学检验的重要组成部分。
蛋白质免疫印迹（Western blotting）技术可以检测特定蛋白质的表达水平和分子量。
酶联免疫吸附测定（ELISA）则能够对蛋白质进行定量分析，广泛应用于疾病标志物的检测和药物研发等领域。
在疾病诊断方面，分子生物学检验展现出了巨大的优势。
例如，对于传染病的诊断，它可以快速准确地检测出病原体的核酸，如新型冠状病毒的核酸检测，为疫情防控提供了有力的支持。
分子生物学检验技术的临床应用
分子生物学检验技术的临床应用分子生物学检验技术是指利用DNA、RNA等核酸作为检验对象，通过PCR、序列测定等技术进行检测的一种生物学检验技术。
这种技术特点是高灵敏度和高特异性，已经被广泛应用于疾病诊断、预后评估、药物治疗监测等方面。
分子生物学检验技术的临床应用主要包括以下方面：1. 病原体诊断：分子生物学检验技术可以快速、准确地检测各种病原体，如细菌、病毒、真菌等，对于疾病的诊断具有重要意义。
例如，PCR技术可以检测艾滋病毒、乙型肝炎病毒、结核杆菌、HPV病毒等，替代了传统的细菌培养和病毒抗原检测等技术，大大缩短了诊断时间和提高了诊断准确性。
2. 遗传性疾病诊断：分子生物学检验技术可以检测患者基因突变和遗传疾病的易感性基因多态性等，对于遗传疾病的诊断和家族遗传咨询具有重要意义。
例如，PCR技术可以检测囊性纤维化、地中海贫血、肌萎缩性侧索硬化等遗传疾病。
3. 肿瘤诊断和治疗监测：分子生物学检验技术可以检测肿瘤相关的突变基因和异常表达基因等，对于肿瘤诊断和治疗监测具有重要意义。
例如，PCR技术可以检测BCR/ABL转座子和JAK2突变基因等，对慢性粒细胞白血病等血液系统疾病的诊断和治疗监测有重要作用。
4. 药物代谢基因检测和个体化用药：分子生物学检验技术可以检测药物代谢基因的多态性和药物靶点基因表达等，对于个体化用药和药物不良反应的预防具有重要意义。
例如，PCR技术可以检测CYP2C9和VKORC1基因多态性，用于华法林等抗凝药物的个体化用药。
总之，分子生物学检验技术在临床医学中应用广泛，已经成为现代医学的重要组成部分，对于疾病的诊断、治疗和预后评估具有重要意义。
未来随着技术的不断进步，分子生物学检验技术将继续对临床医学的发展做出更大的贡献。
分子生物学检测
生态系统的监测与评估
检测方法：DNA条形码技术、 宏基因组学等
应用领域：生物多样性评估、 生态系统健康评估等
监测内容：物种多样性、生态 系统功能、生态系统稳定性等
评估指标：物种丰富度、物种 均匀度、生态系统生产力等
生物多样性的研究
生物多样性的定 义：生物种类的 多样性、基因的 多样性和生态系 统的多样性
控制措施：制定生物入侵防控策略，如生物防治、化学防治等 案例分析：介绍一些成功的生物入侵检测与控制案例，如澳大利亚的兔子 入侵等
06
分子生物学检测的未来 发展
高通量测序技术的进一步发展
技术进步：高通量测序技术的不断发展，提高了检测速度和准确性
应用领域：高通量测序技术在医学、农业、环境等领域的应用越来越广泛
遗传性疾病的检测
遗传性疾病：由基 因突变引起的疾病
检测方法：基因测 序、基因芯片、 PCR等
应用领域：癌症、 遗传病、罕见病等
检测意义：早期发 现、早期治疗、预 防遗传性疾病
肿瘤的检测与诊断
基因突变检测：通过检测肿瘤细胞中的基因突变，判断肿瘤类型和分期
生物标志物检测：通过检测肿瘤细胞中的生物标志物，判断肿瘤的恶性 程度和预后
分子生物学检测的原理
利用DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的特性进行检测 通过PCR、基因测序、蛋白质分析等技术进行检测 检测结果可用于疾病诊断、遗传病筛查、药物研发等领域 检测过程需要严格的实验操作和精确的数据分析
分子生物学检测的应用
基因诊断：检测基因突变、基因表达异常等，用于疾病诊 断和预后评估
注意事项：探 针设计、杂交 条件、荧光显
微镜操作等
基因芯片法
原理：利用基因芯片技术，将大量基因片段固定在芯片上，通过检测基因片段的表达情况， 实现对基因的检测。
检验科分子生物学常见检测项目解读
检验科分子生物学常见检测项目解读分子生物学是一门研究生物分子结构、功能与相互作用的学科，广泛应用于医学、生物学、遗传学等领域。
在检验科中，分子生物学常见的检测项目有很多，通过解读这些检测项目，可以帮助医生更准确地诊断疾病，制定有效的治疗方案。
本文将针对检验科分子生物学常见检测项目进行解读，帮助读者更好地了解这些项目的意义与应用。
1. 基因突变检测基因突变是导致许多遗传性疾病或肿瘤发生的重要原因之一。
通过基因突变检测，可以帮助医生诊断患者是否存在某种遗传性疾病或肿瘤，并确定相应的治疗方案。
常见的基因突变检测项目包括单核苷酸多态性（SNP）检测、基因组测序、蛋白质结构分析等。
2. 病毒感染检测病毒感染是导致许多传染病的重要原因，包括艾滋病、流感等。
通过检测患者体内的病毒DNA或RNA，可以确定是否感染了某种病毒，并帮助医生选择合适的抗病毒治疗方案。
常见的病毒感染检测项目包括乙肝病毒DNA检测、HPV病毒检测、HIV病毒检测等。
3. 微生物检测微生物是导致许多感染性疾病的重要致病因子，包括细菌、真菌、病毒等。
通过微生物检测，可以确定患者是否感染了某种微生物，并确定相应的抗生素或抗真菌治疗方案。
常见的微生物检测项目包括细菌培养鉴定、真菌培养鉴定、病毒培养鉴定等。
4. 遗传性疾病检测遗传性疾病是由基因遗传导致的一类疾病，包括先天性疾病、遗传性代谢病等。
通过遗传性疾病检测，可以帮助医生诊断患者是否患有某种遗传性疾病，并制定相应的治疗和预防措施。
常见的遗传性疾病检测项目包括新生儿遗传病筛查、染色体核型分析、单基因遗传病检测等。
5. 肿瘤标志物检测肿瘤标志物是在肿瘤细胞或人体的其他组织中特异性表达的蛋白质或其他生物分子，通过检测肿瘤标志物的水平，可以帮助医生诊断患者是否患有肿瘤，并进行肿瘤的辅助诊断、预后评估和疗效监测。
常见的肿瘤标志物检测项目包括癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）、乳腺癌特异性抗原（CA15-3）等。
临床分子生物学检验技术
临床分子生物学检验技术是应用于临床诊断和治疗的一种重要检验技术，它主要通过对生物样本（如血液、组织等）中的分子水平信息进行分析，从而实现对疾病的诊断、预后评估和治疗效果监测等目的。
以下是一些常见的临床分子生物学检验技术：
1. 聚合酶链式反应（PCR）：PCR是一种用于复制DNA片段的技术，可以在体外迅速扩增特定DNA序列，常用于检测病原体的核酸、基因突变和基因表达水平等。
2. 实时荧光定量PCR（qPCR）：qPCR结合了PCR和荧光探针技术，可以实时监测PCR反应过程中的DNA扩增情况，适用于定量检测特定DNA序列的含量。
3. 核酸序列分析：通过对DNA或RNA序列进行测序，可以揭示基因组中的突变、异质性和基因表达差异等信息，有助于疾病诊断和个体化治疗的实施。
4. 基因组学分析：利用高通量测序技术对整个基因组进行测序和分析，可以发现与疾病相关的遗传变异，为精准医学提供支持。
5. 蛋白质组学分析：通过质谱法等技术对生物样本中的蛋白质进行分析，有助于发现疾病标志物和治疗靶点。
6. 细胞遗传学检测：包括FISH（荧光原位杂交）和CGH（比较基因组杂交）等技术，用于检测染色体异常和基因拷贝数变异。
7. 免疫组化检测：通过对组织中特定蛋白质的免疫反应进行检测，用于肿瘤标志物的检测和疾病诊断。
这些临床分子生物学检验技术在癌症诊断、遗传性疾病筛查、微生物感染检测等领域发挥着重要作用，为临床医生提供了更精准的诊断信息和治疗方案制定依据。
分子生物学检验技术
1、分子生物学检验技术：是以核酸或蛋白质为分析材料，通过分析基因的结构、表达的变化和由此而导致的基因功能的改变，为疾病的研究和诊断提供更准确、更科学的信息和依据的一门学科。
2、请说明分子生物学检验技术在临床试验诊断中的应用。
（1）感染性微生物的检测。
如：用PCR技术进行甲型肝炎病毒的检测、乙型肝炎病毒的检测和解脲脲原体的检测等。
（2）基因突变的检测。
如：用PCR一限制性片段长度多态性（RFLP)技术检测地中海贫血基因突变。
（3）法医学检测。
如：用PCR微卫星检测技术进行亲子关系的鉴定和个体识别。
（4）基因异常表达的检测。
如：用cDNA表达的芯片技术进行基因异常表达的检测。
（5）基因定位。
如：用原位杂交技术进行组织与细胞中基因表达的定位。
3、基因组：是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质。
4、基因：是基因组中一个功能单位，是贮存有功能的蛋白质多肽链信息或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。
5、原核生物：是细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌和蓝绿藻等原始生物的总称，是最简单的细胞生物体。
6、操纵子结构：是原核生物基因组的功能单位。
7、质粒：是指细菌细胞染色体外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子。
8、转座因子：又称为转座元件，是一类在细菌染色体、质粒和噬菌体之间自行移动并具有转位特性的独立的DNA序列。
9、原核生物基因组的结构特征：（1）原核生物基因组通常仅由一个DNA分子构成，基因组中只有一个复制起点，具有类核结构。
（2）具有操纵子结构，模板mRNA为多顺反子mRNA。
编码区远远大于真核生物基因组，但又远远小于病毒基因组。
在基因组中存在多功能的识别区域，如复制起始区、转录启动区和终止区等，这些区域常常含有反向重复序列。
（3）结构基因通常为单拷贝基因，编码顺序一般不重叠。
（4）具有编码同工酶的基因。
（5)含有可移动的DNA序列。
10、病毒基因组的结构特点：（1）与细菌和真核生物基因组相比，病毒基因组结构简单，基因数少，所含信息量也少。
常见的分子生物学检验技术
常见的分子生物学检验技术常见的分子生物学检验技术包括PCR、Western blot、Northern blot、Southern blot、DNA测序等。
PCR（聚合酶链式反应）是一种能够在试管中扩增DNA片段的技术。
它利用DNA聚合酶酶活性的特性，通过不断重复的循环反应，在体外合成大量的目标DNA。
PCR技术广泛应用于基因重组、基因突变检测、DNA测序等领域。
Western blot是一种分析蛋白质表达的常用技术。
它可以通过将蛋白质从复杂的混合物中分离出来，并使用特异性抗体检测目标蛋白质的存在和数量。
Western blot技术在生物医学研究中常用于研究蛋白质的变化、鉴定蛋白质亚型等。
Northern blot是一种检测RNA表达的方法，类似于Western blot。
它可以在RNA样品中检测特定的RNA序列，并用于研究基因表达调控、寻找新的RNA转录本等。
Northern blot技术已被更先进的技术如RT-PCR取代，但在某些特定情况下仍然有其应用价值。
Southern blot是一种检测DNA序列的技术。
通过将DNA片段在电泳中分离，然后用特异性探针与目标DNA结合，可以检测特定的DNA序列。
Southern blot技术在基因组学研究中常用于检测基因突变、DNA重组等。
DNA测序是一种确定DNA序列的技术，也是分子生物学中最重要的技术之一。
通过测序反应和测序仪的分析，可以准确地确定DNA 的碱基序列。
DNA测序技术在基因组学、遗传学、进化生物学等领域中有广泛的应用，为科学家们提供了大量的基因信息。
除了以上几种常见的分子生物学检验技术，还有一些衍生的技术，如RT-PCR、荧光定量PCR、原位杂交等。
RT-PCR是一种能够通过逆转录将RNA转化为DNA，并在PCR反应中扩增的技术，常用于研究基因表达调控。
荧光定量PCR是一种在PCR反应中利用荧光信号定量检测DNA或RNA的技术，具有高灵敏度和高特异性。
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第二章临床分子生物学检验标志物
1、分子生物标志物:指可以反映机体生理,病理状态的核酸、蛋白质、代谢产物等生物分子,就是生物标志物的一种类型。
2、中心法则:指遗传信息从DNA传递给RNA,再从RNA传递给蛋白质,即完成遗传信息的转录与翻译的过程。
也可以从DNA传递给DNA,即完成DNA的复制过程。
这就是所有有细胞结构的生物所遵循的法则。
在某些病毒中的RNA自我复制(如烟草花叶病毒等)与在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的过程(某些致癌病毒)就是对中心法则的补充。
3、基因组:就是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质,包括基因与非编码DNA。
4、原核生物基因组特征:
1)原核生物基因组较小:大小一般在106—107碱基对之间;
2)原核生物的类核结构:原核生物基因组DNA位于细胞中央的核区,没有核膜将其与细胞质隔开在蛋白质的协助下,以一定的形式盘曲,折叠包装起来,形成类核;
3)原核生物的操纵子结构:原核生物的结构基因大多数按功能相关性成簇地串联排列于染色体上。
结构基因同其上游的调控区以及下游的转录终止信号,共同组成了一个基因表达单位,即操纵子结构;
4)原核生物的结构基因:原核生物的结构基因中无内含子成分,多数就是单拷贝基因,基因与基因之间有重复序列存在;
5)具有编码同工酶的基因:这类基因表达产物的功能相同,但基因结构不完全相同;
6)含有可移动DNA序列:可移动的DNA序列通过不同的转移方式发生基因重组,改变生物体的遗传性状,使生物体更适应环境的变化;
5、质粒:指细菌细胞染色体以外,能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子;
6、人类基因组包括细胞核内的核基因组(3X109bp)与细胞质内的线粒体基因组(16569bp),人类基因组中存在大量的非编码序列与重复序列;
7、小卫星DNA:由10—100bp组成的重复单位重复几十到几百甚至几千次,形成的1—5bp 的短DNA,又称可变数目串联重复;
8、微卫星DNA:核心序列为1—6bp,可以重复上百次,又称短串联重复;
9、多基因家族:指由某一祖先基因经过重复与变异所产生的一组基因,在多基因家族中,某些成员并不产生有功能的基因产物,这些基因称为假基因;
10、多态性:当某种变异相对常见,在群体中的频率高于1%时,则称为多态性,频率低于1%的
变异称为突变;(错义突变,无义突变,RNA加工突变);
11、多态性类型:限制性片段长度多态性;小卫星与微卫星多态性;单核苷酸多态性(主要指在
基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性);拷贝数多态性(指基因组中较大的片段(200bp—2Mb)发生了拷贝数的变化);
12、DNA甲基化:
(1)定义:指生物体在DNA甲基转移酶的催化下,以S—腺苷甲硫氨酸为甲基供体,将甲基转移到特定的碱基上的过程;
(2)作用位点:腺嘌呤的N—6,胞嘌呤的N—4,鸟嘌呤的N—7,胞嘧啶的C—5;
(3)作用机理:
13、微小RNA:就是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约20~25个核苷酸,
在细胞内主要发挥基因转录后水平调控作用;
14、长链非编码RNA:长度大于200bp的非编码RNA;
第四章:核酸杂交技术
1、融解温度(Tm):DNA的变性会在一个很狭窄的温度范围内发生,这一温度范围的中点被称
为融解温度;Tm值的大小取决于核酸分子的G-C含量。
G-C碱基含量越高,Tm值越高; 2、变性:在一定条件下,双螺旋之间氢键断裂,双螺旋解开,DNA分子成为单链,形成无规则线
团的过程;
3、复性:变性DNA只要消除变性条件,具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链的
过程;
4、Southern印迹杂交:
过程:1)将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物(硝酸纤维素膜或尼龙膜)上,即印迹;2)固定于膜上的核酸同位素标记的探针在一定的温度与离子强度下退火,即分子杂交过程;
原理:利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其她固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA 分子的含量;
特点:特异性与灵敏度高;
5、Northern杂交靶核酸就是RNA,Southern杂交靶核酸就是DNA;
第五章:核酸扩增技术
1、聚合酶链反应技术(PCR):由美国Cetus公司K、Mullis博士于1983年建立,它就是一个能在试管内模仿细胞内核酸复制过程,也就就是能在体外特异地扩增一段特定核酸序列的技术;
2、PCR的基本原理:根据DNA半保留复制的机理与体外DNA分子于不同温度下可变性,复性的性质,通过人为控制体外合成系统的温度,通过变性、退火、延伸三个步骤扩增目的DNA 片段;
3、PCR的基本过程:
1)变性:将被复制的DNA片段在高于其熔点温度(Tm)的条件下(94~95℃)加热,使DNA双螺旋结构的氢键断裂而解螺旋,形成两条单链分子作为扩增反应的模板,以便与引物结合;
2)退火:将反应体系的温度降低至引物的熔点温度以下(<Tm 5℃),以便使引物能与模板DNA 序列互补结合,形成杂交链;
3)延伸:将反应体系的温度升至72℃,此时反应体希按照模板链的序列以碱基互补配对的原则依次把dNTP加至引物的3’端,在Taq DNA聚合酶的存在下,杂交链不断延伸,直至形成新的DNA双链;
4、当温度升至其熔点温度(Tm)时荧光量急剧下降而形成熔点曲线,其波峰所在温度即代表被检DNA分子的Tm值。
Tm值的大小取决于DNA分子的长度与其序列中G/C碱基含量; 第六章:核酸实时定量检测技术
1、实时荧光定量PCR技术:指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR反应过程,最后通过相关数据分析方法对目的基因进行定量分析的技术;
2、扩增曲线:指在实时荧光PCR扩增过程中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测与连续地分析扩增相关的荧光信号,随着反应时间的进行,检测到的荧光信号的变化可以绘制成一条以循环数为横坐标,以PCR反应过程中实时荧光强度为纵坐标所做的曲线;
3、荧光阈值:指在实时荧光定量PCR扩增曲线上人为设定的一个值,它可以设定在指数扩增阶段的任意位置上;
4、循环数:PCR扩增过程中扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值所经过的循环次数;
5、扩增效率:指PCR反应一个循环后的产物增加量与这个循环的模板量的比值,其值在0~1之间;
6、
7、
第七章:核酸序列分析
1、双脱氧链终止法测序原理:ddNTP比普通的dNTP在3’位置缺少一个羟基,可以通过其5’
三磷酸基因掺入到正在增长的DNA链中,但由于缺少3’-OH,不能同后续的dNTP形成3’,5’-磷酸二酯键。
因此,正在增长的DNA链不在延伸,使这条链的延伸终止于这个异常的核苷酸处;
2、人类基因组测序的步骤:
第八章:蛋白质组学技术
1、蛋白质组:包括一个细胞或一个组织或一个机体的基因所表达的全部蛋白质;
2、蛋白质组学:以蛋白质为研究对象,从整体水平揭示细胞内动态变化的蛋白质组成、结构、
表达水平与修饰状态,研究蛋白质间,蛋白质与生物大分子之间的相互作用,揭示蛋白质的功能与生命活动的规律;
3、双向凝胶电泳:第一向电泳就是依据蛋白质的等电点不同,通过等电聚焦将带不同净电荷
的蛋白质在PH梯度介质中外加电场作用形成分离的蛋白质区带。
第一向等电聚焦完成后,将凝胶包埋在SDS—PAGE凝胶板上端,依据蛋白质分子量的不同,在垂直或水平方向进行SDS—PAGE,即第二次分离;
4、双向凝胶电泳用于确定差异,质谱法用于鉴别结构;
第十三章:单基因遗传病的分子生物学检验
1.单基因遗传病分类:常染色体遗传,X连锁遗传,Y连锁遗传;
2.在分析基因结构的变化时,通常用DNA作为检测材料;在检测转录水平异常时在,将RNA
作为检测材料;当基因较大时,突变区不甚明了时,也可直接从cDNA水平开始进行筛检; 3.镰刀细胞贫血的分子机制:患者由于β珠蛋白基因中第6位密码子存在单个碱基的突变,
由原来的GAG变为GTG,结果使β珠蛋白链的第6位氨基酸残基由原来的谷氨酸变为缬氨酸,红细胞发生镰状;
4.β珠蛋白生成障碍性贫血的分子机制:
第十五章:线粒体病的分子生物学检验:
1．母系遗传:在一个家系中,有缺陷的遗传性状通过母系成员从亲代连续稳定传递到子代的现象,即母亲可以将有缺陷的遗传性状传递给子代,男性子代个体不再继续传递,而女性子
代个体可继续将此有缺陷的遗传性状往下一代传递;
2．遗传早发:指越就是严重的线粒体功能异常,其个体发病的年龄也将越早;
3．遗传瓶颈:线粒体在卵母细胞成熟时数目会出现锐减的现象;
4．线粒体基因表达系统及特点:
第十六章:肿瘤的分子生物学检验
1.原癌基因:指人类或其她动物细胞固有的一类基因,能诱导细胞正常转化并使之获得新生
物特征的基因总称;
2.原癌基因激活机制:1)插入激活,2)基因重排/染色体易位;3)基因点突变/移码突变;4)基因
扩增;5)基因转录改变;
3.抑癌基因:就是一类可编码对肿瘤形成起阻抑作用蛋白质的基因,正常情况下负责控制细
胞的生长与增殖;
4.肿瘤基因表现遗传学异常的分子机制:1)基因组印记丢失;2)DNA甲基化;3)组蛋白修饰与
染色质重塑;。