微生物与环境监测 PPT..

（3）排出至环境后，该菌存活时间与肠道致 病菌相当或略长；
（4）对氯等消毒剂及其他不良因素的抵抗力 略强于肠道致病菌；
（5）检出与鉴定方法比较简便迅速。
大肠杆菌较理想 ，109个／ml；但鉴定 方法比较复杂 ；
含有大肠杆菌在内的总大肠菌群与粪大 肠菌群。
总大肠菌群（total co1iform），也称大 肠菌群（coliform group或co1iform）；
上述可能为大肠菌群的菌落再次接人乳糖蛋白陈 培养液，置37℃温箱培养24h后观察结果。
观察结果：
复发酵试验中仍有产酸产气者即最后确证为有 大肠菌群存在。
根据初发酵管的数目及试验所用的检样量，利 用数理统计原理或查阅专用统计表，最后算出 每毫升检样中大肠菌群的最可能数目。
2.滤膜法（membrane filtration technique，MFT）
结果：
以每毫升或每克检样中菌落形成单位 （cfu／m1或g）来表示。
病原菌一般在环境中存在的数量不大， 而且检测方法较复杂，难以直接测定。
其他微生物作为代表，间接指示肠道病 原菌存在。
粪便污染指示菌。
理想条件：
（1）是人畜粪便中的正常菌，且数量比粪便 中其他菌为多；
（2）受人畜粪便污染的环境中可检出，而未 受污染环境无该菌存在；
土壤 大肠菌群值＝l g／大肠菌群数
方法评价
（1）发酵法：（MPN法）步骤多，耗时长，得到结 果需要72h，不能及时指导实践工作。
（2）滤膜法（MFT法）：操作简单，可现场过滤水 样，避免运送水样的麻烦，且缩短时间。但此法不 适用于混浊度高的水样。
（3）总大肠菌群中细菌并非全部来自粪便，可能由 腐败的植物、土壤等其他环境带来，放可能导致某 些不准确性。
微生物与环境监测
Microbiology Department. College of Resource & Environment SWU. Li Yong
指示微生物（indicator microorganism） 或称指示菌（indicator bacteria）
是在常规环境监测中，用以指示环境样品 污染性质与程度，并评价环境卫生状况的 具有代表性的微生物。
单位体积、单位表面积或单位质量检样 中的菌落形成单位。
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
细菌总数的卫生标准
我国公共场所空气细菌总数标准*
霉菌和酵母菌数（fungi and yeast count）是指环境中被测样品经过处理， 在一定条件下培养后，所得1g或lm1检样 中所含的霉菌和酵母菌菌落数。
它们是一群能在37 ℃，24 h内发酵乳糖 产酸产气，需氧或兼性厌氧的革兰氏阴 性无芽孢杆菌。
形成特殊的菌落特征；
大肠菌群不是分类学上的一个名称，而 是人为定义的名词。
肠杆菌科细菌主要包括4个菌属：
埃希氏菌属（Escherichia）在此菌属中与人类 生活密切相关的仅有一个种，即大肠埃希菌也 称大肠杆菌；
霉菌和酵母菌是异养型微生物，能致病 或产毒素。
检测方法
用倾注培养平板法。多采用孟加拉红 （虎红）培养基、高渗察氏培养基或加 有抗菌素的马铃薯—葡萄糖培养基。
环境样本作一定倍数稀释后，定量注入 灭菌平皿。
倾入培养基混匀，凝固后置入25～28 ℃ 温箱培养3～5天观察平板上菌落生长情 况并计数。
细菌总数（total bacteria count）： 指环境中被测样品，在一定条件下（培 养基成分、培养温度和时间、pH、通气 状况等）培养后所得的1m1或lg检样中所 含的细菌菌落总数。
它反映环境中异养型细菌的污染度，也 间接反映一般营养性有机物的污染程度。
1．液态与固态对象中的细菌总数
天然水体、饮水、饮料等液体物
土壤、污泥、堆肥、食品、化妆品、药 品等固态物，
常用倾注平板培养法或平板表面涂布培 养法。
国家卫生标准中规定：
营养肉汤琼脂培养基，
将经过一定倍数稀释的样品悬液，定量 接种于琼脂培养基平板，或倾注混匀， 或表面均匀涂布；
在有氧条件下，37℃培养48h观察平板上 菌落生长结果。
2．空气中的细菌总数
平板暴露沉降法 仪器法
平板暴露沉降法：
采用直径9cm平皿，将营养琼脂平板在 1.2 m高处暴露5 min，37℃培养48h，计 数生长菌落数。
测定的结果不是十分准确。 经济方便，有实用价值。
仪器法中以固体撞击式采样器多用。
结果： 采用个／m1为单位来表示 cfu（colony forming unit）表示 ：指
其次有柠檬酸杆菌属或称枸橼酸杆菌属 （Citrobacter）、
克雷伯菌属（Klebsiella）、
肠杆菌属（Enterobacter）。
1．多管发酵法（multiple-tube fermentation），又称最
大可能数法（most probable number，MPN） 主要步骤：
①初发酵试验：
加入含有乳糖蛋白陈培养基（液）中，经37 ℃培养 24 h，
观察产酸产气情况以初步判别是否有大肠菌群存在。
②平板分离。
将初发酵试验产酸产气的发酵管分别接种在伊红 美蓝琼脂平板上，置37℃培养24h，观察菌落形 态。
挑选可疑为大肠菌群细菌的菌落涂片、革兰氏染 色、镜检和进行证实试验。
③复发酵试验（证实试验）。
结果表达方式 ：
大肠菌群数
又称大肠菌指数，其表示方法有多种，地表水环境 质量标准、生活饮用水卫生标准、游泳池水卫生标 准中以个／L表示之；食品卫生标准中用个／m1表 示。
大肠菌群值
是指水样可检出1个大肠菌群细菌的最小水样容积， 此值愈大即表示水中大肠菌群数愈少。
水： 大肠菌群值＝1 000 m1／大肠菌群数
水样 滤膜 抽滤细菌 滤膜培养， 鉴定并计数典型菌落， 计算总大肠菌群数。
主要步骤：
①水样过滤
②培养 观察结果：
通过菌落特征及镜检菌体形态初步确定大肠菌群 细菌；
凡革兰氏阴性无芽孢杆菌再接入含乳糖蛋白陈培 养基中以确证为大肠菌群细菌；
最后根据通过水量及滤膜上长出的肯定为大肠菌 的菌落数换算出每升水中大肠菌群数。