第一章环境监测中的微生物学方法.ppt
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为d90mm，有用d100mm的。 评价空气的清洁程度，需要测定空气中
的微生物数量和空气污染微生物。测定 的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌， 在必要时则测病原微生物。
2020-12-11
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(一)空气微生物的测定方法
1．固体法 固体法有平皿落菌法(沉降—平板法)、撞击
法(有缝隙采样器、筛板采样器、针孔采样 器)和过滤法。 (1)平皿落菌法：将营养琼脂培养基融化倒人 d90mm无菌平皿中制成平板。将它放在待 测点(通常设5个测点)，打开皿盖暴露于空 气5~10min，以待空气微生物降落在平板表 面上，盖好皿盖，置于培养箱中培养48h后 取出计菌落数，即为落菌数。
✓ 可监测到污染物对环境的综合影响，但不易精确反映 污染物的性质、浓度和数量。
2020-12-11
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第一节 空气的卫生学检验
一、空气微生物来源 空气并非微生物的繁殖场所，空气中缺乏水分
和营养，紫外线的照射对微生物也有致死作用。 土壤中飞扬起来的灰尘； 水面吹起的水雾、人和动物体表干燥脱落的物
2020-12-11
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通常平板转动一周，取出置于37℃恒温箱中 培养48h，根据空气中微生物的密度可调节 平板转动的速度。采集含菌高的空气样品时， 平板转动的速度要比含菌量低的空气样品的 转速快。根据取样时间和空气流量算出单位 空气中的含菌量。采样器的规格各国不一， 可按说明书操作。
2020-12-11
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可通过前苏联奥梅梁斯基公式换算出浮游 细菌数。
奥氏认为：5 min内落在面积100mm2营养 琼脂平板上的细菌数和10L空气中所含的 细菌数相同。
奥氏公式：C =
100 A
×
5 t
× 1000
10
×N
式中：C—空气细菌数；
A——捕集面积，cm2 ；
t ——暴露时间，min；
尘埃多的地方，如畜舍、公共场所、医 院、城市街道的空气中，微生物数量较 多。高山、海洋、森林、积雪的山脉和 高纬度地带的空气中，微生物较少。
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场所
表2-1 不同场所上空微生物的数量（个/m3 ）
畜舍
宿舍
城市 市区 海洋 街道 公园 上空
北纬 80º
微生物 (1~2)106 2×104 5×103 200 1~2
N——菌落数，个。
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简化后的奥氏公式：
1000×50N C=
A×t
➢ 经测定发现，用奥式公式计算的浮游细 菌数比实测的浮游细菌少。
➢ 此公式没有考虑尘埃粒子大小、数量、 气流情况、人员密度和活动情况。
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(2)撞击法：
❖ 以缝隙采样器为例，用吸风机或真空泵将 含菌空气以一定流速穿过狭缝(狭缝宽有 0.15 mm、0.33 mm和1 mm三种)而被抽吸 到营养琼脂培养基平板上。狭缝长度为平 皿的半径，平板与缝的间隙有2mm，平 板以一定的转速(1 r／min、5-60r／min、 60r／min)旋转。
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再以菌液体积和通入的空气量计算出单 位体积空气中的细菌数。
✓ 例如：将10m3含菌空气通入100mL的无 菌水中，使10m3空气中的微生物全部截 留在100mL水中。然后取0.1 mL菌液涂布 于平板上，若长出100个菌落，10mL水中 共含菌10,000个，则10m3空气含有10,000 个。1m3空气含有1,000个 。
第一章 环境监测中的微生物学方法
当环境受到污染后，环境的
物理性质 化学性质
发生变化
生物学特性
如：
➢ 重金属离子、NO3- 浓度增加； ➢ 水体污染变质，水生生物种类减wenku.baidu.com，甚
至灭绝；
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如何监测？
❖ 化学方法：快速、定性定量反映污染物 浓度，但为瞬时值；
❖ 生物学方法：利用生物种类、数量的变 化，生物学特性的改变来监测污染物对 环境的影响。
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撞击法检测空气中微生物数量
培养前
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培养后
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2 液体法
液体法用于测定空气中的浮游微生物， 主要是浮游细菌。该法将一定体积的含 菌空气通入无菌蒸馏水或无菌液体培养 基中，依靠气流的洗涤和冲击使微生物 均匀分布在介质中，然后取一定量的菌 液涂布于营养琼脂平板上，或取一定量 的菌液于无菌培养皿中，倒入15-18ml融 化(45℃)的营养琼脂培养基，混匀，待冷 凝制成平板，置于37℃恒温箱中培养48h， 取出计菌落数。
目前，还无统一的关于空气的卫生学指 标，一般以室内1m3 空气中细菌总数为 50~1,000个以上作为空气污染的指标。
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病原菌在空气中一般很易死亡，但结核 菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺 炎双球菌、炭疽杆菌、流感病毒和脊髓 灰质炎病毒等，也可以在空气中存活一 段时间。
0
表2-2 以细菌总数评价空气的卫生标准（个/m3 ）
清洁程度
细菌总数
最清洁的空气（有空调）
1~2
清洁空气
<30
普通空气
31~125
临界环境
~150
轻度污染
<300
严重污染 2020-12-11
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>301
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三、空气的微生物监测
通常采用营养琼脂平板计数法。 我国检测空气微生物所用的培养皿直径
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(二)空气微生物的检测点数
空气微生物的测点数越多越准确，为照 顾到工作方便，又相对准确，以20~30个 测点数为宜，最少测点数为5~6，见表。
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表2.1 日本有关标准测点数的规定
时
间
标准
质，微生物附着于这些物质的微粒上随气流传 播。
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微生物产生的孢子本身也可以飘浮到空 气中，形成 “气溶胶”，借风力传播。
空气中的微生物中，真菌的孢子数量最 多，细菌较少。而且藻类、酵母菌、病 毒都会存在于空气中 。
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二、空气微生物的卫生标准
名称
1987 JIS B 9920
洁净室中 浮游粒子
的微生物数量和空气污染微生物。测定 的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌， 在必要时则测病原微生物。
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(一)空气微生物的测定方法
1．固体法 固体法有平皿落菌法(沉降—平板法)、撞击
法(有缝隙采样器、筛板采样器、针孔采样 器)和过滤法。 (1)平皿落菌法：将营养琼脂培养基融化倒人 d90mm无菌平皿中制成平板。将它放在待 测点(通常设5个测点)，打开皿盖暴露于空 气5~10min，以待空气微生物降落在平板表 面上，盖好皿盖，置于培养箱中培养48h后 取出计菌落数，即为落菌数。
✓ 可监测到污染物对环境的综合影响，但不易精确反映 污染物的性质、浓度和数量。
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第一节 空气的卫生学检验
一、空气微生物来源 空气并非微生物的繁殖场所，空气中缺乏水分
和营养，紫外线的照射对微生物也有致死作用。 土壤中飞扬起来的灰尘； 水面吹起的水雾、人和动物体表干燥脱落的物
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通常平板转动一周，取出置于37℃恒温箱中 培养48h，根据空气中微生物的密度可调节 平板转动的速度。采集含菌高的空气样品时， 平板转动的速度要比含菌量低的空气样品的 转速快。根据取样时间和空气流量算出单位 空气中的含菌量。采样器的规格各国不一， 可按说明书操作。
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可通过前苏联奥梅梁斯基公式换算出浮游 细菌数。
奥氏认为：5 min内落在面积100mm2营养 琼脂平板上的细菌数和10L空气中所含的 细菌数相同。
奥氏公式：C =
100 A
×
5 t
× 1000
10
×N
式中：C—空气细菌数；
A——捕集面积，cm2 ；
t ——暴露时间，min；
尘埃多的地方，如畜舍、公共场所、医 院、城市街道的空气中，微生物数量较 多。高山、海洋、森林、积雪的山脉和 高纬度地带的空气中，微生物较少。
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场所
表2-1 不同场所上空微生物的数量（个/m3 ）
畜舍
宿舍
城市 市区 海洋 街道 公园 上空
北纬 80º
微生物 (1~2)106 2×104 5×103 200 1~2
N——菌落数，个。
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简化后的奥氏公式：
1000×50N C=
A×t
➢ 经测定发现，用奥式公式计算的浮游细 菌数比实测的浮游细菌少。
➢ 此公式没有考虑尘埃粒子大小、数量、 气流情况、人员密度和活动情况。
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(2)撞击法：
❖ 以缝隙采样器为例，用吸风机或真空泵将 含菌空气以一定流速穿过狭缝(狭缝宽有 0.15 mm、0.33 mm和1 mm三种)而被抽吸 到营养琼脂培养基平板上。狭缝长度为平 皿的半径，平板与缝的间隙有2mm，平 板以一定的转速(1 r／min、5-60r／min、 60r／min)旋转。
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再以菌液体积和通入的空气量计算出单 位体积空气中的细菌数。
✓ 例如：将10m3含菌空气通入100mL的无 菌水中，使10m3空气中的微生物全部截 留在100mL水中。然后取0.1 mL菌液涂布 于平板上，若长出100个菌落，10mL水中 共含菌10,000个，则10m3空气含有10,000 个。1m3空气含有1,000个 。
第一章 环境监测中的微生物学方法
当环境受到污染后，环境的
物理性质 化学性质
发生变化
生物学特性
如：
➢ 重金属离子、NO3- 浓度增加； ➢ 水体污染变质，水生生物种类减wenku.baidu.com，甚
至灭绝；
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如何监测？
❖ 化学方法：快速、定性定量反映污染物 浓度，但为瞬时值；
❖ 生物学方法：利用生物种类、数量的变 化，生物学特性的改变来监测污染物对 环境的影响。
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撞击法检测空气中微生物数量
培养前
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培养后
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2 液体法
液体法用于测定空气中的浮游微生物， 主要是浮游细菌。该法将一定体积的含 菌空气通入无菌蒸馏水或无菌液体培养 基中，依靠气流的洗涤和冲击使微生物 均匀分布在介质中，然后取一定量的菌 液涂布于营养琼脂平板上，或取一定量 的菌液于无菌培养皿中，倒入15-18ml融 化(45℃)的营养琼脂培养基，混匀，待冷 凝制成平板，置于37℃恒温箱中培养48h， 取出计菌落数。
目前，还无统一的关于空气的卫生学指 标，一般以室内1m3 空气中细菌总数为 50~1,000个以上作为空气污染的指标。
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病原菌在空气中一般很易死亡，但结核 菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺 炎双球菌、炭疽杆菌、流感病毒和脊髓 灰质炎病毒等，也可以在空气中存活一 段时间。
0
表2-2 以细菌总数评价空气的卫生标准（个/m3 ）
清洁程度
细菌总数
最清洁的空气（有空调）
1~2
清洁空气
<30
普通空气
31~125
临界环境
~150
轻度污染
<300
严重污染 2020-12-11
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三、空气的微生物监测
通常采用营养琼脂平板计数法。 我国检测空气微生物所用的培养皿直径
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(二)空气微生物的检测点数
空气微生物的测点数越多越准确，为照 顾到工作方便，又相对准确，以20~30个 测点数为宜，最少测点数为5~6，见表。
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表2.1 日本有关标准测点数的规定
时
间
标准
质，微生物附着于这些物质的微粒上随气流传 播。
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3
微生物产生的孢子本身也可以飘浮到空 气中，形成 “气溶胶”，借风力传播。
空气中的微生物中，真菌的孢子数量最 多，细菌较少。而且藻类、酵母菌、病 毒都会存在于空气中 。
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二、空气微生物的卫生标准
名称
1987 JIS B 9920
洁净室中 浮游粒子