乳酸菌的生理生化特性
乳酸菌定义
乳酸菌乳酸菌（Lactobacillus）是发酵糖类且主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。
凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。
是一种存在于人类体内的益生菌。
乳酸菌可用于制造酸奶、乳酪、德国酸菜、啤酒、葡萄酒、泡菜、腌渍食品和其他发酵食品。
1、形态特征乳酸链球菌族，菌体球状，通常成对或成链。
乳酸杆菌族，菌体杆状，单个或成链，有时成丝状、产生假分枝。
2、生活习性繁殖：在固体培养基上菌落较小，生长缓慢。
在液体发酵培养基内可以很快地生长，离心洗涤可以获得纯度较高的菌体且兼具需氧和厌氧的性能。
运动：大多数不运动，少数以周毛运动。
活性：普通的乳酸菌，活力极弱，它们只能在相对受限制的环境中存活，一旦脱离这些环境，其自身也会灭亡。
只有经过特殊工艺处理的乳酸菌才能到达肠道。
进入肠内的乳酸菌，必须具备数量多、活力强，才能发挥其生物功效。
3、类型乳酸菌大体上可分为两大类：（1）动物源乳酸菌取自动物，因菌种常处于相对不稳定状态，其生物功效也较不稳定，且在大量食用时，很容易导致人体动物蛋白过敏，即排斥反应。
（2）植物源乳酸菌因为取自植物易被人体吸收，不论摄取多大的量，人体不会产生异体蛋白排斥反应，且植物源乳酸菌比动物源者更具有活力，能比动物源多8倍的数量到达人体小肠内定植，从而发挥其强大而稳定的生物功效。
4、研究历史早在20世纪初，著名的生物学家梅契尼柯夫（Mechnikoff,1845-1916），在他获得诺贝尔奖的“长寿学说”里已明确指出，保加利亚的巴尔干岛地区居民，日常生活中经常饮用的酸奶中含有大量的乳酸菌，这些乳酸菌能够定植在人体内，有效地抑制有害菌的生长，减少由于肠道内有害菌产生的毒素对整个机体的毒害，这是保加利亚地区居民长寿的重要原因。
5000年前人类就已经在使用乳酸菌。
到目前为止，人类日常食用的泡菜、酸奶、酱油、豆豉等，都是应用乳酸菌这种原始而简单的随机天然发酵的代谢产物。
乳酸菌的形态
乳酸菌的形态乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，它们以其特殊的形态和功能在人类生活中发挥着重要的作用。
本文将以乳酸菌的形态为标题，详细介绍乳酸菌的特点和相关知识。
一、乳酸菌的形态特征乳酸菌是一种革兰氏阳性菌，其形态特征主要有以下几个方面：1. 菌体形态：乳酸菌的菌体呈革兰氏阳性，通常为直杆状、短杆状或球形。
这些形态的变化主要受到环境条件的影响。
2. 菌落形态：乳酸菌在琼脂培养基上形成的菌落多为白色、乳白色或乳黄色，呈圆形或不规则形状。
3. 产酸特性：乳酸菌具有产生乳酸的特性，这是其命名的主要依据。
乳酸是一种有机酸，具有酸味和保鲜作用。
二、乳酸菌的分类乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的菌群，根据其形态和生理特征，可以将其分为以下几个属：1. 嗜酸乳杆菌属（Lactobacillus）：这是乳酸菌中最常见的属，包括了很多种类。
它们通常是革兰氏阳性、无芽胞、非运动的杆菌，主要存在于动物的消化道和人类的口腔、肠道等部位。
2. 双歧杆菌属（Bifidobacterium）：这是一类革兰氏阳性、无芽胞、非运动的杆菌。
双歧杆菌主要存在于人类的肠道中，对维持肠道微生态平衡具有重要作用。
3. 乳酸链球菌属（Streptococcus）：这是一类革兰氏阳性、无芽胞、非运动的球菌。
乳酸链球菌广泛存在于自然界中，有些种类对人类的健康具有重要意义。
三、乳酸菌的功能和应用乳酸菌以其特殊的代谢特性和功能，在食品工业、医药保健等领域有着广泛的应用。
以下是乳酸菌的一些功能和应用：1. 发酵食品制作：乳酸菌可以利用食品中的糖分，产生乳酸和其他有益物质，从而改善食品的口感和营养价值。
例如，乳酸菌在酸奶、酸乳等乳制品的发酵过程中发挥着重要作用。
2. 肠道健康调节：乳酸菌可以改善肠道微生态平衡，促进有益菌的生长，抑制有害菌的繁殖，从而维护肠道健康。
乳酸菌的益生作用已被广泛研究和应用。
3. 免疫调节：乳酸菌可以增强人体的免疫功能，提高机体抵抗力。
乳酸菌的生理生化鉴定
乳酸菌的生理生化鉴定①过氧化氢酶试验在产细菌素菌株和指示菌菌株的MRS固体平板上分别取适量菌体涂于干净载玻片，滴加15%H 2 O2 溶液。
有气泡产生为阳性反应，无气泡产生为阴性反应。
②糖醇发酵试验不同的糖、醇分别按1%或0.5%的比例加入PY 培养基中，同时加入0.16g/L溴甲酚紫溶液作产酸指示剂。
分别将产细菌素菌株和指示菌菌株按1%接种量接种，37℃培养1～2d，培养液变为黄色则表示产酸，确定为阳性反应。
③淀粉水解试验将产细菌素菌株和指示菌菌株分别按1%接种量接种到含有0.5%可溶性淀粉的PY培养基中，37℃培养1d～2d。
向培养液中加入几滴卢戈氏碘液，如不显色表示淀粉水解阳性反应，显蓝黑色或蓝紫色表示淀粉水解阴性反应。
④精氨酸产氨试验在PY培养基中加入精氨酸溶液，调pH至7.0，灭菌后取新鲜液体培养物2 滴加入精氨酸水解培养基内，将产细菌素菌株和指示菌菌株分别按1%接种量进行接种，同时接种于不含精氨酸的培养基作对照，分别于37℃培养72h。
取少量培养液于比色盘中，加奈氏试剂数滴，产生黄色沉淀且强于不添加精氨酸的对照时才能确定为阳性反应。
⑤从葡萄糖产气试验向PY培养基中加入3%葡萄糖和0.5mL Tween80，再添加6g琼脂和0.16g/L溴甲酚紫1.4mL，做成软琼脂柱。
将产细菌素菌株和指示菌菌株的新鲜培养物穿刺接种到软琼脂柱，37℃培养72h，指示剂变黄表示产酸，琼脂柱内产生气泡证明产气。
⑥生长试验将产细菌素菌株和指示菌菌株分别接种至MRS固体培养基斜面，分别置于15℃和45℃，观察菌体是否能够生长。
⑦pH 耐受性试验将产细菌素菌株和指示菌菌株分别以1%接种量接种在pH4.0 和pH9.0 的MRS液体培养基中，观察菌体是否能够生长。
⑧耐盐性试验将产细菌素菌株和指示菌菌株分别按1%接种量接种于含6.5% 和10% NaCl 的MRS 液体培养基中，观察菌体生否能否生长。
乳酸菌报告
乳酸菌报告引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，它们具有许多益生作用，对人类的健康有着重要的影响。
本文将介绍乳酸菌的特点、作用以及应用领域。
乳酸菌的特点乳酸菌是一类革兰氏阳性菌，属于乳杆菌目（Lactobacillales），乳酸菌的特点主要有： 1. 好气性：乳酸菌属于好气菌，可以在有氧环境下进行代谢活动。
2. 发酵能力：乳酸菌具有良好的发酵能力，可以通过发酵代谢产生乳酸等有益物质。
3. 不产生孢子：乳酸菌不产生孢子，这意味着它们易受外界环境的影响。
乳酸菌的作用乳酸菌在人类健康中发挥着重要的作用，主要包括： 1. 促进消化：乳酸菌可以分解食物中的复杂碳水化合物，促进消化吸收，减少腹胀和消化不良的发生。
2. 改善肠道菌群：乳酸菌可以调节肠道菌群的平衡，抑制有害菌的生长，增加有益菌的数量，维护肠道健康。
3. 增强免疫力：乳酸菌可以增强人体的免疫力，提高机体对抗病原微生物的能力，预防疾病的发生。
4. 降低胆固醇：乳酸菌可以分解和代谢胆固醇，降低血液中的胆固醇水平，预防心血管疾病的发生。
乳酸菌的应用领域乳酸菌在食品和医药领域有着广泛的应用，下面介绍几个常见的应用领域： 1. 益生菌饮品：乳酸菌可以制作成益生菌饮品，如酸奶和发酵乳等，通过饮用可以摄入大量的乳酸菌，增加肠道有益菌的数量。
2. 益生菌补充剂：乳酸菌制成的益生菌补充剂可以作为药物或保健品使用，帮助调节肠道菌群平衡和增强免疫力。
3. 化妆品：乳酸菌可以应用于化妆品领域，用于改善皮肤的微生态环境，调节皮肤PH值，改善肌肤质量。
4. 饲料添加剂：乳酸菌可以作为饲料添加剂应用于畜牧业中，改善动物肠道菌群的平衡，促进动物生长和健康。
总结乳酸菌作为一类益生菌，具有重要的生物学作用和应用价值。
通过促进消化、改善肠道菌群、增强免疫力等方面的作用，乳酸菌对人类健康有着积极的影响。
在食品和医药领域，乳酸菌的应用也得到了广泛的认可和推广。
相信随着科学技术的不断发展，乳酸菌的作用和应用将得到进一步的研究和应用。
乳酸菌的概念及其分布
乳酸菌的概念及其分布乳酸菌一词并非生物分类学名词，而是指能够利用发酵性糖类产生大量乳酸的一类微生物的统称．虽然有些霉菌也能产生大量乳酸。
但以乳酸细菌为主要类群。
因而通常将乳酸细菌称之为乳酸菌。
乳酸菌在自然界中广泛分布。
它们不仅栖息在人和各种动物的肠道及其他器官中．而且在植物表面和根际．人类食品．动物饲料．有机肥料．土壤．江．河．湖．海中都发现大量乳酸菌的存在；这类细菌在工业．农业．医药等领域具有很高的应用价值．(二)乳杆菌属1.乳杆菌属的形态特征细胞呈多样形杆状：长或细长杆状．弯曲形短杆状及棒形球杆状，一般成链排列。
革兰氏染色阳性，有些菌株革兰氏染色或甲烯蓝染色显示两极体，内部有颗粒物或呈现条纹。
通常不运动．有的能够运动具有周生鞭毛。
无芽孢。
无细胞色素，大多不产色素．2.乳杆菌属的生理生化特点化能异氧型，营养要求严格，生长繁殖需要多种氨基酸．维生素、肽、核酸衍生物，根据碳水比合物发酵类型，可将乳杆菌属划外力三个类群，即1.同型发酵群：发酵葡萄糖产生85%以上的乳酸，不能发酵戊糖和葡萄糖酸盐。
2.兼异性发酵群：发酵葡萄糖产生85%以上的乳酸，能发酵某些戊糖和葡萄糖酸盐。
3.异型发酵群：发酵葡萄糖产生等物质量的乳酸．乙酸和或乙醇．CO2、PH6．o以上可还原硝酸盐，不液化叫胶．不分解酪素．联苯胺反应阴性，不产生吲哚和H2S，多数菌株可产生少量的可溶性氮；微好氧性，接触酶反应阴性，厌氧培养生长良好，生长温度范围5.5~6.2，最适生长温度30~40℃。
耐酸性强，生长最适PH为5.5~6.2，在PH<=5的环境中可生长．而中性或初始碱性条件下生长速率降低。
自然界分布广泛，极少有致病性菌株。
3.乳杆菌属的代表种（1）保加利亚乳杆菌。
细胞形态长杆状，两端钝圆。
固体培养基生长的菌落量棉花状。
易与其他乳酸菌区别．能利用葡萄糖．果糖．乳糖进行同型乳酸发酵产生D型乳酸(有酸涩味，适口性差），不能利用蔗糖。
该菌是乳酸菌中产酸能力最强的菌种，其产酸能力气菌体形态有关，菌形越大，产酸越多，最高产酸量2%。
乳酸菌的简介
乳酸菌的简介一、乳酸菌的起源根据圣经旧的书上记载，公元前4000多年，人类已经开始发酵乳酸肉制品及蔬菜腌渍物。
直到公元1857年，巴斯德(Pasteur)发现酸乳(sour milk)中有微小生物体存在，将其定名为”levue lactique”，发酵乃微生物作用所致的秘密才首次得以揭露；这是发现乳酸菌的开端。
1873年李斯特(Lister)利用稀释法，由酸乳中纯化分离出Bacterium lactis，也就是目前的Lactococcus lactis，这是乳酸菌最早被分离出来的纪录(廖,1998；李,2000)。
二、乳酸菌的定义乳酸菌一般是指能将碳水化合物发酵分解为乳酸的细菌群(佐佐木隆,1998)。
乳酸菌群具有以下几点特性：1.为革兰氏阳性(gram positive)球菌或杆菌。
2.不产生孢子(nonsporting)且无运动性(nonmotile)3.不具分泌催化酶(catalase negative)之能力。
4.可在有氧环境生长，但以无氧状态下生存较佳，亦有绝对厌氧者。
5.需有碳水化合物、胺基酸、维生素等多种生长因子方能生长之复合营养需求性(complex nutritional requirements)。
6.依代谢途径与最终产物的不同，可分为同质发酵(homofermentative)及异质发酵(heterofermentative)两种乳酸菌。
同质发酵性乳酸菌含有aldolase，最终产物90％-100％为乳酸；异质发酵性乳酸菌具有phosphoketolase，其最终产物除了40％-50％的乳酸外，还包括乙醇、二氧化碳及醋酸等多项产物(Ingledew,1995)。
乳酸菌普遍存在动物体消化道中，因耐酸性佳且可分泌乳酸及抗菌物质等有利于生存的条件，故消化道三大菌群当中最占优势(Nemcova et al. 1997)三、乳酸菌的分类乳酸菌一般包括Lactobacillus (L)、Leuconostoc (Leuc.)、Streptococcus (S)及Pediococcus (Ped.)四属；广义的乳酸菌尚包括Bifidobacterium与Sporolactobacillus 两个属(Jay, 2000)。
乳酸菌微生物
（三）明串珠菌属（Leuconostoc）
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乳酸菌在食品工业中的应用
精品课件
乳酸菌：发酵食品行业中应用最广泛。 乳酸发酵食品：经过乳酸菌发酵作用制 成的食品。 乳酸菌对人体健康有益。因而，乳酸发 酵食品受到人们重视，在食品工业中占 有重要地位。
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1．发酵乳制品 （1）酸牛乳（Yoghurt） –①凝固型酸乳 –②搅拌型酸乳（纯酸奶） –③饮料型酸乳（活性乳） （2）干酪（Cheese）。 （3) 酸性奶油 2．果蔬汁乳酸菌发酵饮料 3．益生菌制剂
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凝固型酸乳的生产
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一凝、固酸型牛酸乳牛发乳酵的剂制生备产的：工艺流程：
弊端：牛乳变粘、制糖业中糖液黏度增大
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（四）片球菌属（Pediococcus）
2．生理生化特点:
乳酸菌的检测实训报告
一、实训目的本次实训旨在通过实验操作，掌握乳酸菌的检测方法，了解乳酸菌的基本特性，提高对微生物检测技术的实际操作能力，并加深对乳酸菌在食品、医药等领域的应用认识。
二、实训时间2023年10月25日至2023年11月5日三、实训地点生物实验室四、实训内容1. 乳酸菌样品的采集与处理2. 乳酸菌的分离纯化3. 乳酸菌的形态观察4. 乳酸菌的生理生化特性鉴定5. 乳酸菌产酸能力的测定五、实训方法1. 乳酸菌样品的采集与处理（1）采集：从市场上购买含有乳酸菌的酸奶、酸奶饮料等样品。
（2）处理：将样品用无菌生理盐水进行梯度稀释，制成系列稀释液。
2. 乳酸菌的分离纯化（1）平板划线法：将稀释后的样品涂布在MRS平板上，用无菌接种针进行划线。
（2）培养：将平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
（3）挑取单菌落：根据菌落的特征，挑取疑似乳酸菌的单菌落。
3. 乳酸菌的形态观察（1）制作临时玻片：将挑取的单菌落涂布在载玻片上，用无菌盖玻片覆盖。
（2）显微镜观察：在显微镜下观察乳酸菌的形态、大小、排列等特征。
4. 乳酸菌的生理生化特性鉴定（1）革兰氏染色：将挑取的单菌落涂布在载玻片上，进行革兰氏染色。
（2）生化反应：进行糖发酵试验、氧化酶试验、V-P试验等。
5. 乳酸菌产酸能力的测定（1）制作MRS培养基：按照实验要求配制MRS培养基。
（2）接种：将挑取的单菌落接种于MRS培养基中。
（3）培养：将培养皿置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
（4）测定pH值：使用pH计测定培养基的pH值，计算产酸能力。
六、实训结果与分析1. 乳酸菌样品的采集与处理采集了5个样品，均成功制成系列稀释液。
2. 乳酸菌的分离纯化共分离纯化出10个疑似乳酸菌的单菌落。
3. 乳酸菌的形态观察在显微镜下观察到乳酸菌为杆状，大小约为0.5～1.0μm，排列呈链状。
4. 乳酸菌的生理生化特性鉴定10个疑似乳酸菌均呈革兰氏阳性，能发酵乳糖，不产生硫化氢，氧化酶试验阴性。
发酵食品中乳酸菌的分离与鉴定
发酵食品中乳酸菌的分离与鉴定乳酸菌是一类重要的微生物，在食品发酵过程中扮演着不可替代的角色。
乳酸菌不仅能够提高食品的营养价值，还具有促进肠道健康、增强免疫力等益生作用。
因此，分离和鉴定发酵食品中的乳酸菌是食品科学领域中的一项重要研究内容。
要进行乳酸菌的分离与鉴定，首先需要从发酵食品样品中分离乳酸菌。
一般而言，我们可以选择将样品通过稀释后接种于选择性培养基上，以便只有乳酸菌能够生长。
接种后，将培养基放置于适宜的温度下，培养一段时间。
乳酸菌具有较强的酸性产生能力，因此在培养过程中会形成明显的酸性环境。
可通过测量培养基的pH值来初步判断是否有乳酸菌生长。
在分离乳酸菌的培养基上，我们可能会观察到许多不同形态的菌落。
这些菌落在形状、颜色、质地等方面可能存在差异。
我们可以选择几个具有代表性的菌落进行后续的鉴定。
对于乳酸菌的鉴定，有许多方法可供选择。
一种常用的鉴定方法是形态学观察。
乳酸菌具有一些特征性的形态特征，如菌落的形状、边缘的特点、质地的柔软程度等。
此外，乳酸菌的细胞形态也具有一定的特征，如形状、大小、胞内结构等。
通过在显微镜下观察乳酸菌的形态特征，可以初步判断其种属。
除了形态学观察外，乳酸菌的生理生化特性也是鉴定的重要依据。
例如，乳酸菌通常能够在不产生气体的条件下发酵葡萄糖。
此外，乳酸菌对于一些特定的碳源、氮源等具有较强的利用能力。
通过对乳酸菌进行代谢特性的测试，可以进一步确认其种属。
分子生物学方法也为乳酸菌的鉴定提供了新的手段。
通过对乳酸菌的DNA进行提取和PCR扩增，可以得到乳酸菌的16S rRNA序列。
将这些序列与已知种属的乳酸菌进行比对，可以准确鉴定乳酸菌的种属。
在发酵食品中，常常存在多种乳酸菌同时存在的情况。
因此，对于从发酵食品中分离到的乳酸菌，进行种属鉴定是至关重要的。
只有确定了乳酸菌的种属，才能更好地利用其在食品工业中的潜力。
发酵食品中乳酸菌的分离与鉴定是一项科学而有趣的工作。
通过对乳酸菌的研究，我们可以更好地了解乳酸菌在食品发酵过程中的功能和作用，为食品工业的发展提供更多的可能性。
乳酸菌概述及其应用
引言概述乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，其能力包括发酵和产生乳酸。
乳酸菌不仅具有益生菌的作用，还对人体健康有着多种积极影响。
本文将对乳酸菌的概述及其应用进行详细阐述。
正文内容1.乳酸菌的分类及特点乳酸菌属于革兰氏阳性菌，可以根据其形态和生理特性进行分类。
常见的乳酸菌种类有乳酸杆菌、嗜热链球菌、纤维链球菌等。
乳酸菌通常具有产酸能力，能够将碳水化合物通过发酵代谢产生乳酸。
2.乳酸菌的功效及机制乳酸菌具有多种益生功效，包括调节肠道菌群平衡、增强肠道屏障功能、促进营养物质吸收等。
乳酸菌可以通过产生抗菌物质、调节免疫系统等机制来实现这些功效。
乳酸菌可以产生抗菌物质，如乳酸、双歧杆菌素等，具有抑制有害菌生长的作用。
乳酸菌能够调节宿主免疫系统，增强机体的免疫力。
乳酸菌能够降低肠道内毒素的，保护肠道黏膜免受损伤。
3.乳酸菌在食品工业中的应用乳酸菌在食品工业中有着广泛的应用。
乳酸菌能够促进食品发酵过程，改善食品的品质和口感。
乳酸菌还可以用于制作乳酸饮料、酸奶、奶酪等乳制品，并能提高这些产品的保质期。
乳酸菌在酸奶制作中起到重要作用，可以通过发酵代谢产生乳酸，使酸奶呈现出酸味和特殊的口感。
乳酸菌还可以用于面包发酵，能够增加面包的松软度和口感。
乳酸菌能够改善肉制品的质地和风味，提高食品的营养价值。
4.乳酸菌在保健品和医药领域中的应用乳酸菌在保健品和医药领域中具有重要的应用前景。
乳酸菌作为一种益生菌，可以改善人体肠道菌群的平衡，提高人体的免疫力。
因此，乳酸菌常被应用于保健品的生产。
乳酸菌可以调节人体肠道菌群，预防和缓解腹泻等肠道疾病。
乳酸菌可以促进食物消化和营养吸收，有助于改善消化系统功能。
乳酸菌还可以预防和缓解女性尿路感染和阴道感染等问题。
5.乳酸菌在环境修复中的应用除了在食品工业和医药领域中的应用，乳酸菌还可以用于环境修复。
乳酸菌具有一定的降解能力，能够降解有机废弃物，并减少环境污染。
因此，乳酸菌在废水处理、土壤修复等领域中具有潜在的应用价值。
乳酸菌的简介
乳酸菌的简介一、乳酸菌的起源根据圣经旧的书上记载，公元前4000多年，人类已经开始发酵乳酸肉制品及蔬菜腌渍物。
直到公元1857年，巴斯德(Pasteur)发现酸乳(sour milk)中有微小生物体存在，将其定名为”levue lactique”，发酵乃微生物作用所致的秘密才首次得以揭露；这是发现乳酸菌的开端。
1873年李斯特(Lister)利用稀释法，由酸乳中纯化分离出Bacterium lactis，也就是目前的Lactococcus lactis，这是乳酸菌最早被分离出来的纪录(廖,1998；李,2000)。
二、乳酸菌的定义乳酸菌一般是指能将碳水化合物发酵分解为乳酸的细菌群(佐佐木隆,1998)。
乳酸菌群具有以下几点特性：1.为革兰氏阳性(gram positive)球菌或杆菌。
2.不产生孢子(nonsporting)且无运动性(nonmotile)3.不具分泌催化酶(catalase negative)之能力。
4.可在有氧环境生长，但以无氧状态下生存较佳，亦有绝对厌氧者。
5.需有碳水化合物、胺基酸、维生素等多种生长因子方能生长之复合营养需求性(complex nutritional requirements)。
6.依代谢途径与最终产物的不同，可分为同质发酵(homofermentative)及异质发酵(heterofermentative)两种乳酸菌。
同质发酵性乳酸菌含有aldolase，最终产物90％-100％为乳酸；异质发酵性乳酸菌具有phosphoketolase，其最终产物除了40％-50％的乳酸外，还包括乙醇、二氧化碳及醋酸等多项产物(Ingledew,1995)。
乳酸菌普遍存在动物体消化道中，因耐酸性佳且可分泌乳酸及抗菌物质等有利于生存的条件，故消化道三大菌群当中最占优势(Nemcova et al. 1997)三、乳酸菌的分类乳酸菌一般包括Lactobacillus (L)、Leuconostoc (Leuc.)、Streptococcus (S)及Pediococcus (Ped.)四属；广义的乳酸菌尚包括Bifidobacterium与Sporolactobacillus 两个属(Jay, 2000)。
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌分离鉴定及试验方法一、引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，具有重要的生物学功能和应用价值。
乳酸菌可以通过发酵作用，将葡萄糖、果糖等碳源转化为乳酸和其他有机酸，同时还会产生一些对人体有益的物质，如维生素、酶、抗生素等。
乳酸菌在食品工业、医药工业、农业等领域具有重要的应用前景。
乳酸菌的分离鉴定及试验方法对于深入研究乳酸菌菌种的特性、功能以及在不同领域中的应用具有重要意义。
本文将介绍乳酸菌的分离鉴定及试验方法，旨在为相关研究人员提供参考和指导。
二、乳酸菌分离方法1. 采样乳酸菌的分离首先需要进行采样工作。
可以从发酵食品、乳制品、蔬菜、水果、土壤、肠道等多种来源进行采样。
在采样过程中应注意样品的新鲜性和卫生性，避免外部污染对实验结果造成影响。
2. 培养基的选择乳酸菌可以利用多种培养基进行分离和培养，常用的培养基有MRS培养基、乳清培养基等。
根据具体的分离目的和需求选择适合的培养基。
3. 分离将采样得到的样品进行系列稀释，取适量的稀释液均匀涂布在含有适当培养基的琼脂平板上，培养温度一般在30-37摄氏度之间，培养时间约48-72小时。
4. 纯化观察培养基上的菌落形态，选择典型的菌落进行分离单菌培养，通过多次传代稀释可以纯化获得纯种的乳酸菌。
5. 形态观察利用显微镜对分离得到的菌株进行形态学观察，包括细胞形状、大小、排列方式等。
三、乳酸菌鉴定方法1. 生理生化鉴定通过对分离得到的菌株进行生理生化特性的研究，包括乳酸发酵能力、氧耐受性、温度、pH值的适应能力等，可以初步判断乳酸菌的种属。
2. 生化试剂法利用生化试剂对乳酸菌进行鉴定，如气体发生试验、氧化还原酶试验、酶活性试验等。
3. 分子生物学鉴定通过PCR扩增乳酸菌的16S rRNA基因序列，测序后与数据库比对，确定乳酸菌的种属分类。
四、乳酸菌试验方法1. 发酵活性测定通过测定菌株在不同条件下的发酵活性，如发酵速率、产酸速率、产酶能力等。
2. 抗菌活性测定测定乳酸菌对一些有害菌的抑菌作用，判断其在抗菌方面的潜力。
乳酸菌的生理生化特性.
1.形态和培养特征观察采用牛肉膏蛋白胨培养基,将已纯化后的甘油菌种活化后于37℃下培养20～24h ,并进行革兰氏染色及菌体形态和菌落特征的观察。
染色方法参照微生物鉴定实验指导2.生长条件试验(1)耐盐性试验(NaCl 浓度:0. 85 、1. 20 和1. 71) (mol/ L) ;(2)耐酸碱试验(p H :4. 3 、5. 7 、6. 8 、8. 4 、8. 6 和8. 7) ;(3)温度梯度试验(温度: 10℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃和65℃) 。
分别将参试菌接种于以上处理的液体培养基中培养48 h ,记录生长状况。
3.生理生化试验⑴过氧化氢酶测定将实验菌接种于PGY培养基斜面上,37℃培养20h—24h,取一环接种的培养物,涂于干净的载玻片上,然后在其上滴加3%－—15%的过氧化氢,有气泡则为阳性反应,无气泡为阴性反应。
⑵葡萄糖产酸产气实验在PY基础培养基内加入30g葡萄糖和5%吐温-80,1.6g/100mL的溴甲酚紫1.4mL作指示剂, 在培养基内放置一小倒管,分装试管置37℃培养24h, 经培养后,指示剂变黄表示产酸,倒管内出现气泡,表示产气。
⑶淀粉水解实验接种新鲜的菌种于含有0.5g可溶性淀粉的PY基础培养基中,取少许培养液于比色盘内,同时取未接种的培养液作对照,分别在其中加入卢哥氏碘液.不显色表示淀粉水解,显蓝黑色或蓝紫色时,表示淀粉未水解或水解不完全。
⑷明胶液化实验将实验菌接种于明胶基础培养基中,置37℃培养,以一支未接种的试管作为对照。
将接种的和未接种的对照管置于冰箱或冷水中,等待对照管凝固后记录实验结果,反复观察对比多次。
如对照管凝固时,接种管液化为阳性反应,凝固为阴性反应⑸甲基红（M.R）试验接种实验细菌于PYG培养基，于37℃培养2天后，于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液，如呈红色，表示阳性。
⑹乙酰甲基甲醇V-P实验接种新鲜的实验菌种于培养基中, 37℃培养2天后,取培养液1mL在其中加入1ml 10％的NaOH，混匀，再加入3－4滴2%氯化铁溶液。
食品中乳酸菌的分离与鉴定
食品中乳酸菌的分离与鉴定乳酸菌是一类重要的微生物，在食品加工和保质过程中起着关键作用。
乳酸菌具有产生乳酸的能力，能够抑制有害菌的生长，提高食品的质量和安全性。
因此，乳酸菌的分离与鉴定对于食品工业具有重要意义。
乳酸菌的分离方法多种多样，常用的有直接涂布法、稀释涂布法和差减分离法等。
其中，直接涂布法是最常用的方法之一。
直接涂布法是将食品样品均匀涂布于含有特定培养基的琼脂平板上，利用乳酸菌对特定培养基的选择性生长来分离乳酸菌。
稀释涂布法则是将食品样品稀释到一定程度后，涂布于琼脂平板上进行分离。
差减分离法是相对于稀释涂布法的一种改进方法，通过两个不同培养基的对比，进一步筛选出乳酸菌。
乳酸菌的鉴定方法主要包括形态学观察、生理生化特性鉴定和分子生物学鉴定等。
形态学观察是最基本的鉴定手段之一，通过显微镜观察菌落和细胞形态特征，可以初步判断出乳酸菌的种类。
生理生化特性鉴定是将分离出的菌株在不同条件下进行相关实验，如气体产生、温度耐受性、胞外酶产生等，通过对比不同特性的表现，进一步鉴定乳酸菌的种类。
而分子生物学鉴定则能够更准确地确定乳酸菌的种属和亚属，如通过PCR扩增特定基因序列，利用DNA测序技术进行序列比对，从而鉴定乳酸菌的种类。
乳酸菌的分离与鉴定在实际食品加工中具有重要意义。
首先，通过分离和鉴定乳酸菌，可以确定食品中乳酸菌的种类和数量，进而判断食品是否存在质量和安全性问题。
其次，乳酸菌的鉴定有助于选择合适的培养条件，促进乳酸菌的生长和产酸过程，从而提高食品品质。
此外，乳酸菌的鉴定也有利于乳品行业中的产品研发和工艺改进，为创新和提高乳制品的营养和口感贡献力量。
然而，乳酸菌的分离与鉴定也面临一些挑战。
首先，食品中的乳酸菌种类繁多，分离出纯种菌株的难度较大。
其次，乳酸菌的生理生化特性相似，需要较为精确的实验手段和技术设备来进行鉴定。
此外，乳酸菌与其他微生物的相互作用也需要考虑，有时候必须结合其他鉴定方法才能得出准确结论。
乳酸菌是什么(两篇)
引言概述：正文内容：一、乳酸菌的生理特性1. 产酸能力：乳酸菌通过一系列代谢反应将碳水化合物转化为乳酸，这种代谢过程称为乳酸发酵。
2. 耐酸能力：乳酸菌可以在较低的pH值环境下生存和繁殖，这使得它们能够在胃酸等恶劣环境中存活。
3. 抑菌作用：乳酸菌通过产生有益物质如乳酸和抑菌物质来抑制有害菌的生长。
4. 耐受性：乳酸菌对高温、低温、干燥等环境变化具有一定的耐受性，这使得它们能够在不同条件下生存和繁殖。
5. 营养需求：乳酸菌对一些特定的营养物质，如氨基酸和维生素等有一定的需求。
二、乳酸菌的应用领域1. 食品工业：乳酸菌广泛应用于乳制品、酸奶、乳酸发酵食品等的制作过程中，赋予其特殊的风味和保健功能。
2. 医药领域：乳酸菌可以改善肠道菌群失衡导致的胃肠道问题，如腹泻、便秘等，并且具有抗菌和抗炎作用。
3. 环境工程：乳酸菌在废水处理、土壤修复等环境工程方面有一定的应用潜力，可以帮助降解有害物质和改善环境质量。
4. 生物制药：乳酸菌可以被用作生物制药中的载体，将一些基因或蛋白质导入到乳酸菌中进行表达和生产。
5. 基因组学研究：乳酸菌的基因组学研究可以帮助我们深入了解乳酸菌的遗传特性和代谢途径，以及其在环境中的生存策略。
三、乳酸的产生机制1. 糖代谢途径：乳酸菌通过糖解和糖酵解途径将碳水化合物分解成乳酸和能量。
2. 乳酸发酵型乳酸菌：乳酸发酵型乳酸菌具有高产酸能力和较低的产乳酸特性，如乳酸杆菌和嗜热链球菌等。
3. 乳酸代谢途径：乳酸菌通过乳酸还原途径将乳酸再转化为产能和需氧代谢所需的物质。
4. 气体产生机制：乳酸菌在发酵过程中会产生一定量的二氧化碳和氢气，这对于发酵食品的纹理和口感有一定的影响。
5. 乳酸菌发酵条件的调控：适宜的温度、pH值和营养物质浓度是乳酸菌发酵过程中乳酸产量的重要调控因素。
总结：乳酸菌是一类具有多种益生功能的微生物，它们在食品工业、医药领域、环境工程、生物制药和基因组学研究等领域具有广泛的应用潜力。
乳酸菌的氮源
乳酸菌的氮源引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的益生菌，它们以乳糖为主要能源，通过发酵过程产生乳酸。
然而，乳酸菌的生长和代谢过程也需要氮源的供应。
本文将探讨乳酸菌所需的氮源以及其相关的生理、生化特性。
乳酸菌对氮源的需求乳酸菌对氮源的需求主要体现在两个方面：生长和代谢。
对于乳酸菌的生长，氮源是必不可少的营养物质。
氮元素在乳酸菌的蛋白质合成、核酸合成以及其他重要代谢过程中起到关键作用。
此外，氮源还是乳酸菌调节菌落结构和竞争功能的重要调节因子。
乳酸菌的氮源分类根据乳酸菌对氮源的利用方式，氮源可以分为无机氮源和有机氮源两类。
无机氮源无机氮源主要包括铵根（NH4+）和硝酸根（NO3^-）。
乳酸菌通过转运蛋白将这些无机氮源转化为可利用的氨基酸和氨基酸前体。
有机氮源有机氮源主要包括氨基酸、肽和蛋白质等。
乳酸菌可以通过胞外酶的作用将有机氮源降解为氨基酸，然后再通过转运蛋白将其转运进入细胞内。
乳酸菌的氮源利用机制乳酸菌对氮源的利用主要通过几个关键酶系统实现。
氨基酸转运与降解系统乳酸菌通过氨基酸转运和降解系统将外源氨基酸转运进入细胞内，并通过脱羧酶和氨基酸水解酶分解为酮酸和氨基酸。
氨基酸合成系统乳酸菌通过氨基酸合成系统合成非必需氨基酸。
这个过程需要耗费能量和还原力，并受到内源和外源因素的调控。
氨基酸代谢与能量生成系统乳酸菌通过氨基酸的代谢与能量生成系统将氨基酸降解产生的酮酸和能量剩余部分进一步氧化，并将其转化为乳酸。
氮源对乳酸菌的影响适宜的氮源可以促进乳酸菌的生长和代谢。
不同的氮源对乳酸菌的生理、生化特性产生不同的影响。
pH值的调节乳酸菌在利用不同氮源时产生的酸碱度不同，从而改变其生境的酸碱度。
这一特性在乳品加工过程中有重要应用。
菌落形态的变化不同氮源对乳酸菌的菌落形态有不同的影响。
一些氮源可以促进乳酸菌菌落的生长，而另一些则可能抑制其生长。
乳酸产量的变化不同氮源对乳酸菌的乳酸产量也有显著影响。
一些氮源可以提高乳酸产量，而另一些则可能降低其产量。
乳酸菌——精选推荐
乳酸菌饮料中乳酸菌的检验1 生物学特性1.1 乳酸菌乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。
凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸菌的细菌统称为乳酸菌。
这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。
除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。
目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的直接关系。
乳酸菌是一种存在于人类体内的益生菌。
乳酸菌能够将碳水化合物发酵成乳酸，因而得名。
益生菌能够帮助消化，有助人体肠脏的健康，因此常被视为健康食品，添加在酸奶之内。
1．2 乳杆菌Lactobacillaceae细菌的一科。
为革兰氏染色阳性、无芽孢杆菌。
分解糖的主要终产物是乳酸，不发酵乳酸盐，很少致病。
广泛分布于含有碳水化合物的动植物发酵产品中，也见于温血动物的口腔、阴道和肠道内。
该科仅包括乳杆菌属一属。
该属细菌分解糖的能力强，分解蛋白质类的能力极低。
乳杆菌耐酸，最适pH值为5.5～5.8，甚至更低。
包括乳杆菌在内的乳酸菌在自然界中分布很广，在植物体表、乳制品、肉制品、啤酒、葡萄酒、果汁、麦芽汁、发酵面团、污水以及人畜粪便中，均可分离到。
中国传统的食品，如泡菜、榨菜、腌菜和酿酒等的制作保藏技术就是利用了乳酸菌的这一作用。
1.3 双歧杆菌中文学名：双歧杆菌属拉丁学名：(Bifidobacterium Orla-Jensen,1924)形态描述：形态很不一致的杆菌，0.5～1.3 μm×1.5～8μm，常呈弯、棒状和分支状。
单生、成对、V字排列，有时成链，细胞平行成栅栏状，或玫瑰花结状。
偶尔呈膨大的球杆状。
革兰氏阳性，通常染色不规则。
不运动，不产芽孢，抗酸染色阴性，厌氧生长，少数几个种可在含10％CO2的空气中生长。
pH低于4.5和高于8.5时不生长。
化能有机营养。
发酵碳水化合物活跃，发酵产物主要是乙酸和乳酸，二者的摩尔比是3∶2；不产生CO2。
乳酸菌的培养
工 业 技 术93科技资讯 S CI EN CE & T EC HNO LO GY I NF OR MA TI ON 乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)是一类可发酵碳水化合物产生乳酸的革兰氏阳性细菌的总称,主要包括乳杆菌、乳球菌、明串珠菌、片球菌、链球菌及双歧杆菌等。
1 乳酸菌的生理功能乳酸菌的生理功能主要有:(1)具有粘附性和定植能力。
(2)产生抑菌活性的代谢产物。
(3)降低胆固醇。
(4)具有抗变异原性。
(5)改善肝脏功能。
(6)增强免疫功能。
2 乳酸菌的类型乳酸菌大体上可分为两大类。
一类是动物源乳酸菌,一类是植物源乳酸菌。
3 材料与方法3.1材料3.1.1样品市售进口奶酪。
3.1.2培养基(1)MRS液体培养基:蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、乙酸钠5g、柠檬酸三铵1.45g、K 2HPO 4·H 2O 2.6g、MgSO 4·7H 2O 0.58g、MnSO 4·4H 2O 0.25g、吐温80 1.0g、蒸馏水1000mL。
(pH 6.2～6.4,121℃,灭菌20min)。
(2)BC G培养基:A 、B 液灭菌后混匀。
A 液:脱脂奶粉50g ,1.6%溴甲酚绿酒精液0.35m l ,蒸馏水250ml.(90℃,开盖灭菌10min).B液:酵母膏5g,琼脂10g,蒸馏水250ml。
(pH 6.8,121℃灭菌20min)A、B液灭菌后在无菌状态下混匀后倒平板。
3.2方法3.2.1样品的处理奶酪的处理:以无菌操作取奶酪1g ,放入含有9mL灭菌加热至含40℃左右的生理盐水的灭菌广口瓶内,待奶酪溶解制成1∶10的均匀稀释液,并用无菌生理盐水逐级稀释至10-3、10-4、10-5。
3.2.2乳酸菌的分离纯化采用B C G 牛乳培养基对稀释样品中的微生物通过平板倾注法进行分离纯化。
以无菌操作取奶酪稀释液10-3、10-4、10-5各0.1m L 置于灭菌后的平板中,加入15m L BCG牛乳培养基,带培养基凝固后放入恒温培养箱中,37℃恒温培养24h。
乳酸菌的生理特性和生物学功能
4$P;"&$!4PJQ4P&PQ4&&PR4PJQ4P"&PR4&" ,,,, （ "）双歧杆菌按下式发酵葡萄糖 "4$P;"&$!"4PJQ4P&PQ4&&PRJ4PJ4&&P S,,乳酸菌的生物学功能 S8;,,促进营养成分的分解、吸收
乳酸菌的菌体蛋白可增加蛋白质含量。乳酸菌能将食物 中的大分子蛋白质，部分降解为小分子肽和游离氨基酸，利 于胃肠消化吸化。 乳酸菌可分解乳糖成为葡萄糖和半乳糖，进而进一步分 解为小分子化合物，有助于儿童脑及神经系统的发育。 乳酸菌在代谢过程中消耗部分维生素，有利于增加肠内 维生素的稳定性。乳酸菌产生有机酸使钙、磷、铁等元素处 于易吸收的离子状态，提高利用率。
强免疫力等方面的作用。 关键词：乳 酸 菌 ； 生 理 特 性 ； 生 物 学 功 能 中图分类号：U!JQJJ,,,,,,,,,,,,,,,,,文献标识码：*,,,,, 文章编号：;##T — ";VSW"##"X#" — ###$ — #"
,,,, 乳 酸 菌 系 指 那 些 发 酵 糖 获 得 能 量 生 成 乳 酸 的 细 菌 的 总
4$P;"&$!"4PJ4P&PQ4&&P ,,,,异型乳酸发酵：异型乳酸发酵菌缺乏果糖—二磷酸途径 的关键酶 Q 醛缩酶和丙糖—磷酸异构酶。因此葡萄糖的起始 降解完全是通过戊糖—磷酸途径，根据产物不同，又分为 "
种类型： （ ;）明串珠菌按下式发酵葡萄糖
;,,乳酸菌的生理特性
乳酸菌均归类于乳酸菌科 （ 。这些 +<=>6?<=>@AB<=@<@） 细菌形态上差异颇大，既有长杆状或短杆状的，又有圆形 的；所有种类都是革兰氏阳性菌，不形成芽孢，也不会运动 （ 有例外） 。它们从碳水化合物得到能量，分泌乳酸。是专性 发酵菌。乳酸菌能够在空气或氧气下生长，它们是厌氧菌， 但是耐氧的。一方面乳酸菌的生长需要辅助因子，他们大多 需要某些维生素 （ 核黄素、硫胺素、泛酸、烟酸、叶酸、生 物素） 、氨基酸、嘌呤和嘧啶。另一方面乳酸菌具有大部分 微生物所没有的利用乳糖的能力。
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1.形态和培养特征观察采用牛肉膏蛋白胨培养基,将已纯化后的甘油菌种活化后于37℃下培养20～24h ,并进行革兰氏染色及菌体形态和菌落特征的观察。
染色方法参照微生物鉴定实验指导2.生长条件试验(1)耐盐性试验(NaCl 浓度:0. 85 、1. 20 和1. 71) (mol/ L) ;(2)耐酸碱试验(p H :4. 3 、5. 7 、6. 8 、8. 4 、8. 6 和8. 7) ;(3)温度梯度试验(温度: 10℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃和65℃) 。
分别将参试菌接种于以上处理的液体培养基中培养48 h ,记录生长状况。
3.生理生化试验⑴过氧化氢酶测定将实验菌接种于PGY培养基斜面上,37℃培养20h—24h,取一环接种的培养物,涂于干净的载玻片上,然后在其上滴加3%－—15%的过氧化氢,有气泡则为阳性反应,无气泡为阴性反应。
⑵葡萄糖产酸产气实验在PY基础培养基内加入30g葡萄糖和5%吐温-80,1.6g/100mL的溴甲酚紫1.4mL作指示剂, 在培养基内放置一小倒管,分装试管置37℃培养24h, 经培养后,指示剂变黄表示产酸,倒管内出现气泡,表示产气。
⑶淀粉水解实验接种新鲜的菌种于含有0.5g可溶性淀粉的PY基础培养基中,取少许培养液于比色盘内,同时取未接种的培养液作对照,分别在其中加入卢哥氏碘液.不显色表示淀粉水解,显蓝黑色或蓝紫色时,表示淀粉未水解或水解不完全。
⑷明胶液化实验将实验菌接种于明胶基础培养基中,置37℃培养,以一支未接种的试管作为对照。
将接种的和未接种的对照管置于冰箱或冷水中,等待对照管凝固后记录实验结果,反复观察对比多次。
如对照管凝固时,接种管液化为阳性反应,凝固为阴性反应⑸甲基红（M.R）试验接种实验细菌于PYG培养基，于37℃培养2天后，于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液，如呈红色，表示阳性。
⑹乙酰甲基甲醇V-P实验接种新鲜的实验菌种于培养基中, 37℃培养2天后,取培养液1mL在其中加入1ml 10％的NaOH，混匀，再加入3－4滴2%氯化铁溶液。
数小时后，培养基表面的下层出现红色者，为阳性⑺柠檬酸盐取幼龄菌种接种于柠檬酸盐斜面培养基上，适温培养3－7天，培养基呈碱性（蓝色）者为阳性反应，不变者则为阴性⑻酪素水解试验牛奶平板的制备：取5g脱脂奶粉加入50mL蒸馏水中（或用50mL脱脂牛奶），另称1.5g琼脂溶于50mL蒸馏水中，将两液分开灭菌。
待冷至45－50℃时，将两液混匀倒平板，即成牛奶平板。
将平板倒置过夜，使表面水分干燥，然后将菌种点接在平板上，每皿可点接3－5株菌。
适温培养1、3、5天，记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明。
配制该培养基时，切勿将牛奶和琼脂混合灭菌，以防牛奶凝固⑼厌氧生长测定将菌种接入营养肉汤平板后,用密封带包好放入CO2培养箱37℃培养2天后,观察生长情况,生长则为阳性(10)厌氧硝酸盐产气接种封油：以斜面菌种用接种环接种后，用凡士林油（凡士林和液体石蜡为1:1）封管，封油的高度约1厘米。
必须同时接种不含有硝酸钾的肉汁胨培养液作对照。
观察结果：培养2－7d，观察在含有硝酸钾的培养基中有否生长和产生气泡。
如有气泡产生，表示反硝化作用产生氮气，为阳性反应。
但如不含硝酸钾的对照培养基也可产生气泡，则只能按可疑或阴性处理。
(11)石蕊牛奶的反应牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。
石蕊在中性时呈淡紫色，酸性时呈粉红色，碱性呈蓝色，还原时则自上而下地褪色变白。
观察其产酸、产碱、胨化、酸凝固、凝乳酶凝固、还原情况(12)糖发酵实验将需要测定的糖或醇类等碳水化合物加入PY基础培养基中,按表分装含5mL培养基的试管.分别取0.2mL,被鉴定菌株接到灭菌后的碳水化合物培养基中37℃培养24h,振荡培养。
检测时取培养液少许置于比色盘内,同时取未加碳水化合物的PY培养液作为对照,滴加试剂比较颜色的变化,记录产酸的强弱.附一些培养基：①PY培养基（100mL）：蛋白胨1.0g,酵母提取物1.0g,无机盐溶液4.0mL[盐溶液成分:无水CaCl2 0.2g,MgSO420.0g ,K2HPO4 1.0g, ,KH2PO4 1.0g,NaHCO3 10.0g,NaCl 2.0g](将CaCl2和MgSO4一起溶解于300mL蒸馏水中,再加500mL蒸馏水,一边搅拌一边缓慢加入其他盐类.继续搅拌直到全部溶解,加蒸馏水定容至1000mL,混合后贮备于4℃)②PYG培养基:PY在基础培养液内加入1.0g葡萄糖③营养明胶蛋白胨5g、牛肉膏3g、明胶120g、蒸馏水1000mL、pH6.8～7.0；加热溶解、校正至pH7.4～7.6，分装小管，121℃高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。
复查最终pH应为6.8～7.0④柠檬酸盐斜面培养基：柠檬酸钠3g NH4H2PO4 1g MgSO4 0.2gK2HPO4 1g NaCl 5g 琼脂15—20g 水1000mL 加热溶解后，调pH至7，再加入1.6%溴麝香草酚蓝指示剂10mL,培养基呈绿色，分装试管，每管5mL，121灭菌30min⑤含硝酸钾的营养肉汤加入2g硝酸钾入营养肉汤4.16S rDNA 序列分析这个LZ另外查好了，很多学问。
5.生长曲线活菌计数方法：采用涂布法,进行菌落计数，每隔一段时间（2-4小时）测实验九细菌的生理生化试验[日期：2009-5-30] 来源：作者：孔庆学[字体：大中小]实验九细菌的生理生化试验1 目的1.1 了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理1.2 掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法2 原理各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。
由于细菌特有的单细胞原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。
不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。
即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。
3 材料3.1 菌种大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种3.2 培养基葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）3.3 试剂40％NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。
3.4 器具超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。
4 流程糖发酵试验→V-P试验→甲基红试验→吲哚试验5 步骤(一) 糖类发酵试验1 目的了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法．2 原理可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。
是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。
是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。
3 材料3.2菌种大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）的斜面菌种3.３培养基葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管４流程发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录5 步骤5.1 试管标记图9-1 糖发酵产气取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各Ａ不产气；Ｂ产气4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。
5.2 接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对照均不接菌。
将装有培养液的杜氏小管倒置放入试管中（图9-1），置37℃恒温箱中培养，分别在培养24h、48h、和72h观察结果。
5.3 观察记录与对照管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表明该菌不能利用该种糖，记录用“－”表示；如培养液呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，记录用“＋”表示。
培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸并产气，记录用“＋”表示；如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，记录用“－”表示。
（二）乙酰甲基甲醇试验(V．P试验)1 目的了解鉴别不同肠杆菌科各菌属的乙酰甲基甲醇试验原理，并掌握其操作方法．2 原理某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧，氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
3 材料3.1 菌种大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种3.2 培养基葡萄糖蛋白胨培养液的试管４流程培养液试管→标记→接种→培养→观察→记录5 步骤5.1 标记试管取5支装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
5.2 接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37℃恒温箱中，培养24～48h。
5.3 观察记录取出以上试管，振荡2min。
另取5支空试管相应标记菌名，分别加入3～5ml以上对应管中的培养液，再加入40％NaOH溶液10～20滴，并用牙签挑入约0.5～1mg微量肌酸，振荡试管，以使空气中的氧溶入，置37℃恒温箱中保温15～30min后，若培养液呈红色，记录为V.P.试验阳性反应（用“＋”表示）；若不呈红色，记录为V.P.试验阴性反应（用“－”表示）。
注意：原试管中留下的培养液用作甲基红试验。
（三）甲基红试验（M.R.试验）1 目的了解鉴别肠杆菌科各菌属的甲基红试验原理，并掌握其操作方法．2 原理肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
3 材料3.1 菌种同V．P试验3.2 培养基同V．P试验4 流程培养液→指示剂→观察→记录结果5 步骤于V.P.试验留下的培养液中，各加入2～3滴甲基红指示剂，注意沿管壁加入，仔细观察培养液上层，若培养液上层变成红色，即为阳性反应；若仍呈黄色，则为阴性反应，分别用“＋”或“－”表示。
（四）吲哚试验1 目的掌握吲哚试验(Ehrlich法)的原理和方法2 原理有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚(靛基质)。