不同色谱条件对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠色谱分离的影响

不同色谱条件对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠色谱分离的影响摘要：目的：采用RP-HPLC法对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠进行分离。研究不同色谱条件对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠色谱分离的影响，建立较优的色谱流出曲线。方法：采用不同型号C-18柱；流动相：0.02mol/L乙酸铵∶甲醇（比例分别采用82∶18、85∶15以及88∶12）；流速：分别采用0.8、1.0以及1.2 mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL。检测波长：254nm、230 nm。结果：流速、流动相、波长对分离均有不同程度的影响。

关键词：高效液相色谱，色谱条件，色谱分离，影响

添加剂苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，它直接关系到人们的身体健康，这些添加剂的长期过量食用对人体有一定危害,在我国食品添加剂使用卫生标准[1](GB2760-1996)中对这些添加剂的使用范围和最大使用限量均有明确规定。目前，高效液相色谱（HPLC）作为化学分离分析的一种重要手段得到广泛应用。高效液相色谱分析实现了分析速度快、分离效率高、样品用样量少且灵敏度高和操作自动化。采用RP-HPLC法对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠进行分离。研究不同色谱条件对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠色谱分离的影响，建立较优的色谱流出曲线具有重要意义。

1 仪器与试剂

1.1仪器：Shimadzu高效液相色谱仪（SPD-10A VP紫外-可见检测器、LC-6A 高压泵、CTO-10AS VP柱温箱〈含7725i型手动进样器〉），浙大智达N2000工作站；Sartorius CP225D型电子天平；Millipore Milli-Q型纯水仪；Sartorius BP-20型pH计。

1.2试剂：甲醇为色谱纯；苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠对照品（Dr. Ehrenstorfer 公司提供）；其余试剂均为分析纯。

2 材料与方法：

2.1色谱条件

色谱柱：不同型号C-18柱；流动相：0.02mol/L乙酸铵∶甲醇（比例分别采用82∶18、85∶15以及88∶12）；流速：分别采用0.8、1.0以及1.2 mL/min，柱温：30℃；进样量：10μL。检测波长：254nm、230 nm。

3 结果与分析

3.1 不同波长对分离的影响

3.1.1波长对半峰宽、保留值、理论塔板数、分离度的影响

由表一可看出，在检测波长分别为230nm 和245nm ，流速为1.0ml/min ，流动相0.02mol/L 乙酸铵∶甲醇比例为82:18、85：15、88：12时，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的半峰宽、保留值、理论塔板数以及分离度的变化不大，说明波长对苯甲酸、山梨酸、糖精钠的半峰宽、保留值、理论塔板数以及分离度影响不大。 3.1.2波长对峰面积的影响

由表一看出，不同流动相下，在波长为230nm 时苯甲酸、山梨酸、糖精钠的峰面积比在254nm 时的峰面积要大许多，表明波长对峰面积影响显著。同一种物质对不同波长光的吸光度不同，在波长为230nm 时苯甲酸、山梨酸、糖精钠吸光度大于在254nm 时的吸光度。

表一：不同波长对分离的影

3.2 流速对分离的影响

3.2.1流速对半峰宽、保留值、理论塔板数的影响

流动

相比

例

波长

(nm) 半峰宽 保留值 理论塔板数 分离度 平均峰面积

苯甲

酸 山梨酸

糖精钠

苯甲酸

山梨酸

糖精钠

苯甲酸

糖精钠

山梨

酸

R1 R2 苯甲酸 山梨酸 糖精钠

82:18

254

0.107 0.138 0.098 2.612 3.206 3.013 3301 5237 2990 2.3 0.96 404006 885600 354049

230 0.106 0.131 0.097 2.607 3.163 3.061 3351 5517 3230 2.6 0.53 3721749 435656 2408864 85:15

254

0.092 0.096 0.099 2.777 3.089 3.434 5048 5736 6666 2

2.1 416059

915127

372397

230 0.092 0.095

0.1

2.772

3.082 3.421 5029 5831 6484 1.95

2 3806739 459759 2408277 88:12

254

0.098 0.098 0.098 3.087 3.529 4.038 5497 7184 7603

2.7 2.9 405044 899624 359094 230

0.093 0.1

0.106

3.18

3.623 1.172 6477 7272 8582

2.7

3.2

845622

138164

527348

由表二可看出，在三个比例不同的流动相下，流速分别为流速1：0.8ml/min、流速2：1.0ml/min、流速3：1.2ml/min时，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的半峰宽、保留值和理论塔板数均随流速的增大而减小，柱效减小。

3.2.2流速对分离度的影响

由表二可知，流速对分离度影响不大。无论流速怎样改变，在流动相比例为82：18时，糖精钠与山梨酸分离度均小于1.5，不利于糖精钠与是山梨酸分离。其他情况下分离度均大于1.5，分离较好。

表二流速对分离的影响

检测波长：254nm

流动相比例流速

ml/min

半峰宽W1/2保留值tR理论塔板数n分离度R 苯甲

酸

山梨

酸

糖精

钠

苯甲

酸

山梨

酸

糖精

钠

苯甲

酸

山梨

酸

糖精

钠

R1 R2

82:18 0.80.127 0.174 0.119 3.249 3.982 3.744 3626 2901 5484 2.4 0.95

1.00.107 0.138 0.098

2.612

3.206 3.013 3301 2990 5237 2.3 0.96 1.20.093 0.123 0.093 2.188 2.678 2.52 3067 2626 4068 2.1 0.8

85:15 0.80.11 0.114 0.120 3.471 3.861 4.293 5516 6355 7090 2 2.1

1.0 0.092 0.095 0.100

2.772

3.082 3.421 5029 5831 6484 2 2 1.2 0.081 0.084 0.087 2.326 2.585 2.865 4568 5247 6008 1.9 1.9

88:12 0.8 0.113 0.117 0.124 3.748 4.276 4.853 6095 7400 8486 2.7 2.8

1.0 0.098 0.098 0.098 3.087 3.529 4.038 5497 7184 7603

2.7 2.9 1.2 0.088 0.087 0.097 2.642

3.017 3.475 4994 6662 7110 2.5 2.9

（注：流动相0.02mol/L乙酸铵∶甲醇比例为82：18时，R1为苯甲酸与糖精钠的分离度，R2为糖精钠与山梨酸的分离度，流动相比例为85：15与88：12时，R1为苯甲酸与山梨酸的分离度，R2为山梨酸与糖精钠的分离度，下同。）

3.3 不同流动相对分离的影响

3.3.1流动相对半峰宽的影响

由表三可看出，在检测波长为230nm与流速为 1.0ml/min条件下，流动相：