RFect小核酸转染试剂说明(单核细胞 转染)
RFect siRNA淋巴细胞转染
RFect siRNA淋巴细胞转染产品描述RFect siRNA转染试剂是专为将RNAi双链(siRNA)转染真核细胞而设计的新一代动物源性游离脂质转染试剂。
RFect由不同的脂质组成，在大多数细胞系中表现优异，但也存在一定的差异。
无论血清存在与否，SiRNA-RFect复合物可直接添加到培养基中的细胞中。
转染后无需去除复合物或改变/添加培养基，但复合物可在4-6小时后去除。
RFect siRNA转染试剂的优点转染效率高90%或更多的速度和明显的基因击倒效果(如。
在A549细胞中，Lamin A/C基因敲除效率达95%以上)。
最小的细胞毒性(少于10%的细胞转染后死亡率),以减少非特异性作用和细胞压力。
需要低浓度的siRNA获得高水平的可拆卸的。
广泛的转染细胞:我们可以获得理想的大多数附着细胞系转染结果。
储存、稳定、特殊处理RFect核转染试剂在室温下稳定运输和长期储存(12个月)在4°C。
RFect siRNA转染试剂仅供研究使用。
转染的重要指南转染过程中不要向培养基中添加抗生素，因为这可能导致细胞死亡。
以10nm siRNA为起始点，虽然siRNA浓度可以远低于10nm。
正向转染和反向转染协议可用于大多数细胞株。
协议:向前转染使用以下步骤将siRNA以24孔的形式转染到细胞中。
有关其他格式，请参见放大或缩小转染。
优化转染如优化转染中所述，特别是在首次转染细胞株时。
所有数量和体积均按每口井计算。
答:板细胞在转染前的一天,500μl板细胞生长介质没有抗生素,这样细胞将30 - 50%时汇合的转染。
B.准备siRNA-RFect复合物1. 稀释6 pmol siRNA 50μl没有血清的培养基。
2. 稀释2μl RFect 50μl没有血清的培养基。
轻轻搅拌，室温下孵育5分钟。
注意:在25分钟内进行第3步。
3.5分钟后孵化,结合稀释的稀释siRNA RFect(总量= 100μl)。
轻轻搅拌，室温下孵育20分钟。
RFectPM原代细胞小核酸转染试剂说明书
货 号：BIOG-11014: 0.5ml BIOG-11015: 1.0ml BIOG-11016: 1.5ml
产品特点
◎卓越的原代细胞转染性能：细胞转染阳性率一般在 80%以上，基因敲 除效果明显，肝细胞 Lamin A/C 基因敲除效率在 95%以上
◎极低的细胞毒性：转染细胞死亡率不到 10%，大大降低了因细胞毒性 对实验结果的影响
siRNA Amount (pmol)
RFectPM (µl)
96-well
0.3
100
2 x 10
1.2
0.4
48-well
0.8
250
2 x 25
3
1
24-well
2
500
2 x 50
6
2
12-well
4
1000
2 x 100
12
4
6-well
10
25002 x 250 Nhomakorabea30
10
储存和运输 蓝冰运输，4°C 保存，长期不用于-20°C 储存，避免反复冻融 有效期 -20℃保存条件下，有效期为 1 年
操作步骤：本说明书适用于 24 孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。 A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在 30-50% 。 B. siRNA-RFectPM 混合物准备： 1. 6pmol siRNA 用 50μl 无血清培养基稀释。 2. 2μl RFectPM 用 50μl 无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育 5min。注意：确保在 25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。 3. 孵育 5min 后，将 siRNA 稀释液与 RFectPM 稀释液混合（总体积 100μl）。轻轻混匀，室温孵育 20 min。 C. 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）： 1. 将 100μl 混合物加入培养孔内，培养孔内含有 0.5ml 培养的细胞。轻轻晃动培养板，混匀。 2. 37°C 培养 18-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养 4-6h 时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、
RFectSP悬浮细胞小核酸(RAW 转染)
RFect SP 悬浮细胞小核酸转染货 号：BIOG-11024: 0.5mlBIOG-11025: 1.0ml 储存条件：-20℃BIOG-11026: 1.5ml产品特点产品介绍RFect SP 悬浮细胞小核酸转染试剂是我公司研发团队在RFect PM 原代细胞小核酸转染试剂的基础上加以改进研发成功的专门用于悬浮细胞小核酸转染的试剂。
RFect SP 可用来转染siRNA 、antisense RNA 、microRNA 等200bp 以内的小分子RNA 和DNA ，可转染绝大多数悬浮细胞。
目前，无论国外还是国内，悬浮细胞的核酸转染都是个热点难题，市场还缺乏真正有效的商品化的悬浮细胞小核酸转染试剂。
RFect SP 能够高效转染绝大多数悬浮细胞，获得比较理想的基因敲除效果。
对于大多数悬浮细胞，RFect SP 的细胞转染阳性率都在75%以上，而转染细胞死亡率不到10%。
RFect SP 的使用也极其简便，先将sRNA 与RFect SP 室温混合，再将siRNA-RFect SP 混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。
操作步骤：本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。
A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在30-40% 。
B. siRNA-RFect SP混合物准备：1. 6pmol siRNA 用50μl 无血清培养基稀释。
2. 2μl RFect SP 用50μl 无血清培养基稀释。
轻轻混匀，室温孵育5min 。
注意：确保在25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。
3. 孵育5min 后，将siRNA 稀释液与RFect MN 稀释液混合（总体积100μl ）。
轻轻混匀，室温孵育20 min 。
C. 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）：转染实验优化: 为了提高转染效率，最好对转染条件进行优化，特别是首次使用。
Xfect转染试剂操作中文手册(clontech)
Xfect 质粒DNA 转染试剂• 操作简便且兼容血清 • 转染效率高 • 细胞毒性极低 • 细胞类型广泛操作流程图：Xfect 质粒DNA 转染试剂操作步骤(6-孔板)：1. 转染前的准备贴壁细胞: 在转染的前1d ，接种1ml 合适密度的细胞于6-孔板的单孔中，使转染当天细胞融合度能够达到50–80%。
悬浮细胞: 在混匀Xfect Polymer 前，将细胞以5 x10e5–1.25 x10e6/1ml 接种于6-孔板中培养。
2. 漩涡混匀Xfect Polymer 。
3. 对于单孔转染，分别在2个离心管中混匀以下试剂： Tube 1 (质粒DNA)---μl (5 μg) 质粒DNA---μl Xfect 反应缓冲液 100 μl 总体积T ube 2 (Polymer) 1.5 μl Xfect Polymer (100μg /μl ) 98.5 μl Xfect 反应缓冲液 100 μl 总体积注意:• 上述为6-孔板单孔转染所需的量。
• 每1μg 质粒DNA 加0.3 μl Xfect Polymer 。
• 对于大多细胞来说，5 μg 的质粒DNA 是最佳使用量。
若您是首次使用Xfect 转染细胞，需要按照2.5 μg ，5 μg 和7.5 μg 的质粒DNA 的量进行梯度实验，确定质粒DNA 的最优使用量。
实验证明，质粒DNA 的量不能少于2.5 μg ，不然会造成转染效率低（经转染Hela 细胞实验验证）。
• Xfect Polymer 预混液室温放置不要超过30min 。
4. 漩涡混匀每管混合物。
5. 将Xfect Polymer 预混液和DNA 预混液混合，再将混合液以适中的速度漩涡10sec 。
6. 室温孵育10 min ，形成Xfect/DNA 复合物。
7. 将200μl 纳米复合物逐滴加入细胞培养基中，轻柔地前后摇晃混匀。
注意:无需去除培养基中的血清，当纳米复合物加入培养基后，培养基的颜色会有些改变，这是正常的。
说明RFectSP悬浮细胞小核酸转染试剂(THP-1 转染)
RFect SP 悬浮细胞小核酸转染试剂说明货 号：BIOG-11024: 0.5mlBIOG-11025: 1.0ml 储存条件：-20℃BIOG-11026: 1.5ml 产品特点产品介绍RFect SP 悬浮细胞小核酸转染试剂是我公司研发团队在RFect PM 原代细胞小核酸转染试剂的基础上加以改进研发成功的专门用于悬浮细胞小核酸转染的试剂。
RFect SP 可用来转染siRNA 、antisense RNA 、microRNA 等200bp 以内的小分子RNA 和DNA ，可转染绝大多数悬浮细胞。
目前，无论国外还是国内，悬浮细胞的核酸转染都是个热点难题，市场还缺乏真正有效的商品化的悬浮细胞小核酸转染试剂。
RFect SP 能够高效转染绝大多数悬浮细胞，获得比较理想的基因敲除效果。
对于大多数悬浮细胞，RFect SP 的细胞转染阳性率都在75%以上，而转染细胞死亡率不到10%。
RFect SP 的使用也极其简便，先将sRNA 与RFect SP 室温混合，再将siRNA-RFect SP 混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。
有关RFect SP 悬浮细胞小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际专利，并通过PCT 覆盖国际上多个国家和地区。
操作步骤：本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。
A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在30-40% 。
B. siRNA-RFect SP混合物准备：1. 6pmol siRNA 用50μl 无血清培养基稀释。
2. 2μl RFect SP 用50μl 无血清培养基稀释。
轻轻混匀，室温孵育5min 。
注意：确保在25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。
3. 孵育5min 后，将siRNA 稀释液与RFect MN 稀释液混合（总体积100μl ）。
各种转染试剂中文说明
FuGENE6（Roche）转染步骤:转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。
将细胞以1-3×105/2ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。
将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。
使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。
1.在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100ul。
2.将3-6ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。
3.加入1-2ug的DNA溶液（0.02－2.0ug/ul），轻弹管壁混合。
4.室温孵育20分钟。
5.将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2ml不含血清和双抗的营养液。
6.将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。
7.3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。
Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）：1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。
细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2.对于每孔细胞，使用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0ugDNA，轻轻混匀。
3.使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。
Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。
NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
4.混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。
室温放置20分钟。
5.（optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。
加入2ml无血清配养基。
软骨细胞 siRNA转染原理及转染试剂的选择
软骨细胞 siRNA转染原理及转染试剂的选择RNA干扰（RNA interference，RNAi）是近年来生命科学领域最为重大的发现之一。
它是指小分子双链RNA可以特异性地降解同源mRNA,从而抑制或关闭特定基因表达的现象。
人们只要知道了某种疾病的致病基因，就可以设计出针对该基因mRNA的小分子干扰RNA（Small interfering RNA，siRNA），抑制或封闭该致病基因的表达，从而达到治疗疾病的目的。
siRNA是目前最为热门的生命科学研究领域，也是未来最有发展前途的新药开发领域。
除此之外，siRNA技术还可以广泛应用于农业、林业、畜牧业和渔业等多种领域，进行良种培育、良种筛选和疾病治疗等。
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。
其中，化学转染技术是目前最为常用的方法，由于电转的方法对细胞损伤比较大，一般不建议选择电转。
化学转染能否成功的关键在于转染试剂的选择，目前常用的转染试剂有RFect系列转染试剂、Lipo2000、RNAiMAX等。
如何选择合适的转染试剂，一般可从以下几个方面考虑：一、对siRNA有较高的转染效率。
转染效率的确定，常用的是使用荧光定量PCR、荧光显微镜和流式细胞仪检测的方法。
金标准无疑是检测目标基因的mRNA 水平，因为转染试剂不仅要把siRNA转染进入细胞，还应及时把转入细胞的siRNA 释放出来，发挥抑制基因表达的作用。
通过荧光显微镜判断转染效率至少存在两方面的问题：1、荧光显微镜看到的荧光点可能是非特异吸附的结果；2、有些转染试剂能够将siRNA转染入细胞，但不能充分释放，导致基因抑制效率并不高。
因而，判断转染试剂转染效率的金标准应该是荧光定量检测mRNA水平，仅靠观察荧光显微镜判断转染效率、选择转染试剂往往会导致误判，影响实验的进展。
目前国内应用最广的转染试剂有RFect系列转染试剂、Lipo2000、RNAiMAX等，其中，Lipo2000、RNAiMAX为国外知名品牌，RFect转染试剂虽在国内生产，但实际上是在美国研发成功，拥有国际发明专利。
RFect小核酸转染试剂说明(单核细胞 转染)
RFect 小核酸转染试剂货 号：11011: 0.5ml11012: 1.0ml 储存条件：-20℃11013: 1.5ml产品特点 应 用产品介绍RFect 小核酸转染试剂是国际知名科学家崔坤元博士领导我公司研发团队在美国西雅图实验室研发成功的一种新型的小核酸转染试剂。
RFect 可用来转染siRNA 、antisense RNA 、microRNA 等200bp 以内的小分子RNA 和DNA ，转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞，如一般细胞株、肿瘤细胞株等。
目前，无论国外还是国内，转染试剂的主要成分均为脂质体或聚乙烯亚胺(Polyethylenimine, PEI)，这两种成分都具有很大的细胞毒性，并且转染效果不好。
RFect 采用新型的动物源性的纳米材料，毒性很低并且拥有非常卓越的转染性能。
与其它品牌的小核酸转染试剂相比，RFect 的细胞转染阳性率一般在90%以上，Lamin A/C 基因抑制效率在95%以上，而其它品牌转染试剂的细胞转染阳性率一般不超过70%，Lamin A/C 基因抑制效率不超过75%。
RFect 细胞毒性很低，转染细胞死亡率不到10%，而其它品牌试剂的转染细胞死亡率一般在30%以上。
血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。
有关RFect 小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际专利，并通过PCT 覆盖国际上多个国家和地区。
操作步骤：本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。
A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在30-50% 。
B. siRNA-RFect 混合物准备：1. 6pmol siRNA 用50μl 无血清培养基稀释。
2. 2μl RFect 用50μl 无血清培养基稀释。
轻轻混匀，室温孵育5min 。
注意：确保在25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。
各种转染试剂中文说明
FuGENE6（Roche）转染步骤:转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。
将细胞以1-3×105/2ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。
将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。
使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。
1.在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100ul。
2.将3-6ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。
3.加入1-2ug的DNA溶液（0.02－2.0ug/ul），轻弹管壁混合。
4.室温孵育20分钟。
5.将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2ml不含血清和双抗的营养液。
6.将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。
7.3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。
Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）：1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。
细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2.对于每孔细胞，使用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0ugDNA，轻轻混匀。
3.使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。
Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。
NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
4.混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。
室温放置20分钟。
5.（optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。
加入2ml无血清配养基。
sirna转染试剂说明书
3
1
24-well
2
500
2 x 50
6
2
12-well
4
1000
2 x 100
12
4
6-well
10
2500
2 x 250
30
10
转染实验优化: 为了提高转染效率，最好对转染条件进行优化，特别是首次使用。例如：24 孔培养板，调整 siRNA 与 RFect 试剂的用量。
siRNA 用量在 0.6-30 pmol(final concentration 1- 50 nM)之间调整，RFect 试剂用量在 1.0 - 3.0μl 之间调整。客户可按照习惯用量进行预实验，
所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。
转染实验要点： 转染过程不可添加抗生素，否则会导致细胞死亡； 首次实验 siRNA 的用量可稍大（一般 10 nM） ，后续实验根据实验结果修改。
RFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels
传真: 0519-83382790
◎转染细胞范围广，绝大多数贴壁细胞株都能获得比较理想的转染结果
储存条件：-20℃
应用 ◎siRNA 转染 ◎antisense RNA 转染 ◎200bp 内的小分子 DNA 转染
产品介绍
RFect 小核酸转染试剂是国际知名科学家崔坤元博士领导我公司研发团队在美国西雅图实验室研发成功的一种新型的小核酸转染试剂。RFect 可用来转染 siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以内的小分子 RNA 和 DNA，转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞，如一般细胞 株、肿瘤细胞株等。目前，无论国外还是国内，转染试剂的主要成分均为脂质体或聚乙烯亚胺(Polyethylenimine, PEI)，这两种成分都具有很 大的细胞毒性，并且转染效果不好。RFect 采用新型的动物源性的纳米材料，毒性很低并且拥有非常卓越的转染性能。与其它品牌的小核酸 转染试剂相比，RFect 的细胞转染阳性率一般在 90%以上，Lamin A/C 基因抑制效率在 95%以上，而其它品牌转染试剂的细胞转染阳性率一 般不超过 70%，Lamin A/C 基因抑制效率不超过 75%。RFect 细胞毒性很低，转染细胞死亡率不到 10%，而其它品牌试剂的转染细胞死亡率 一般在 30%以上。血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。有关 RFect 小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了 国际专利，并通过 PCT 覆盖国际上多个国家和地区。
转染试剂使用说明书
2. 3).
配制转染工作液： （ 6 孔板或 35 mm 平皿， 2 ml 培养液） 取 5~8μ g DNA （起始用量 5μ g） ，加入稀释液中至总体积为 100μ l，轻轻混匀，室 温放置。
4).
先将 GenFectin TM 涡旋振荡混匀。取 GenFectinTM 1~4μl（起始用量 2μl,） ，加入稀 释液中至总体积为 100μl，轻轻混匀，室温放置 5 分钟。
5).
将稀释的 GenFectinTM 逐滴加入稀释的 DNA 溶液中，轻轻混匀，所得的转染工作 液在室温放置 15 分钟。
6).
将转染工作液轻轻混匀，逐滴加入 2 ml 培养液中，轻轻混匀培养液，置 37℃，5% CO 2 培养。
3. 细胞后续处理： 7). 24~48 小时后，观察或收取细胞。
-4-
8).
稳定转染时，于转染后 24~48 小时消化细胞分至 3~5 个培养皿中，加适当浓度的 相应抗生素（如 G418）筛选。
建议的起始转染条件 : 培养容器
96 孔板 24 孔板 6 孔板 35mm 培养皿 60mm 培养皿
转染前一天 接种细胞数
1-1.510 个 0.5-1 10 个 2-4 10 个 2-4 10 个 4-6 105 个
5 5 5 4
转染时 培养液体积
0.1 ml 0.5 ml 2 ml 2 ml 4 ml
DNA 用量 与稀释后体积
0.25 μg 1.25 μg 5 μg 5 μg 10 μg 5 μl 25 μl 100 μl 100 μl 200 μl
GenFectin 量 与稀释后体积
0.1 μl 0.5 μl 2 μl 2 μl 4 μl 5 μl 25 μl 100 μl 100 μl 200 μl
neofect转染试剂说明书中文
NeoFect是一种用于将DNA或RNA转染到真核细胞中的转染试剂。
以下是一个简化的、假设性的NeoFect转染试剂说明书的中文翻译，请注意，这不是官方翻译，仅供参考。
实际使用时，请参考随产品附带的正式说明书和安全数据表（SDS）。
---NeoFect转染试剂说明书【产品名称】通用名：转染试剂商品名：NeoFect【成分】主要成分为阳离子脂质体，用于促进核酸分子与细胞膜的融合。
【性状】本品为透明至微浑浊的液体，通常以小瓶或多孔板包装。
【适应症】用于科研实验中，将DNA或RNA高效转染到哺乳动物细胞中，以进行基因表达、基因沉默、基因编辑等研究。
【使用方法】1. 准备待转染的细胞和核酸溶液（DNA或RNA）。
2. 根据实验设计，将适量的NeoFect转染试剂加入无血清培养基中，轻轻混匀。
3. 将核酸溶液加入含有NeoFect的培养基中，轻轻混匀，室温孵育15-30分钟。
4. 将混合物加入到细胞培养皿中，轻轻摇晃使混合均匀。
5. 根据细胞类型和实验目的，孵育一定时间后更换为完全培养基继续培养。
【不良反应】本品仅供实验室使用，不适用于临床治疗。
【禁忌】对本品成分过敏者禁用。
【注意事项】1. 使用前请检查试剂是否清澈，如有沉淀或颜色变化请勿使用。
2. 避免反复冻融，分装后请立即使用。
3. 使用过程中请遵守实验室安全操作规程，佩戴适当的个人防护装备。
4. 请在无RNA酶和DNA酶的环境中操作RNA转染实验。
5. 转染效率受多种因素影响，如细胞状态、核酸浓度、孵育时间等，建议优化实验条件。
【贮藏】存放于4°C冰箱中，避免冷冻。
【有效期】请参考包装标签上的说明。
【生产批号】见包装标签。
【生产企业】（请填写生产企业名称和联系方式）---以上信息仅供参考，实际使用时请遵循产品附带的正式说明书和安全数据表（SDS）的内容。
在操作前，务必了解所有相关的安全和健康信息。
转染试剂使用注意事项
转染试剂使用注意事项1.细胞密度：转染DNA（质粒）时，细胞密度为80-100%，转染RNA(siRNA或miRNA)时，细胞密度为60-80%，具体细胞密度必须结合考虑核酸种类、转染试剂种类和细胞生长密度极限；2.DNA用量：0.5-1ug/孔（以24孔板为例），具体用量根据转染效率检测实验确定；3.RNA用量：10-30 pmol/孔（以24孔板为例），具体用量根据转染效率检测实验确定；4.转染试剂的用量：转染试剂说明书推荐了一个使用范围，具体用量根据转染效率检测实验确定；5.根据转染效率检测实验确定核酸的用量及转染试剂的用量（核酸与转染试剂的比例关系），转染效率检测实验一般在24孔板中进行，其他格式的培养器皿请根据底面积的比例（表1）进行计算；6.转染试剂使用前才从4℃中取出，取用前，先短暂离心（转速达到3000RPM时即可停止），然后放在涡旋振荡器上点动混匀三次，每次持续1秒，混匀后短暂离心（转速达到3000RPM时即可停止），上述措施是为了混匀转染试剂，保证使用效果，使用后立即放回4℃保存；7.核酸和转染试剂分别用Opti-MEM（这是专用的转染稀释培养基，如果没有Opti-MEM，可以用细胞对应的基础培养基代替）稀释，稀释的核酸可以通过弹匀，吹打均匀，颠倒混匀或涡旋点动混匀（三次，每次持续1秒），稀释的转染试剂可以通过弹匀，颠倒混匀或涡旋点动混匀（三次，每次持续1秒），不可使用吹打均匀；混匀后均需短暂离心；8.把稀释的核酸和稀释的转染试剂复合混匀时，应该把稀释的核酸加入稀释的转染试剂中（顺序不可调转）；加入后立即进行（不要耽搁）弹匀或颠倒混匀（稀释的核酸和稀释的转染试剂一旦复合，转染复合物的形成立即启动，如果不及时混匀，所形成的转染复合物的效率就会很低），先不进行短暂离心，待所有的管子复合完毕后，在一起进行涡旋点动混匀三次，每次持续1秒，然后短暂离心；9.转染复合物孵育形成时尽量避光室温或37℃放置；10.如果进行RNA转染时，尽量使用无酶及灭菌处理的耗材；11.Opti-MEM用量参照转染说明书建议的用量；表1：资料仅供参考!!!。
A549细胞转染操作说明
A549细胞转染操作说明货 号：11011: 0.5ml11012: 1.0ml 储存条件：-20℃11013: 1.5ml产品特点 应 用产品介绍RFect 小核酸转染试剂是国际知名科学家崔坤元博士领导我公司研发团队在美国西雅图实验室研发成功的一种新型的小核酸转染试剂。
RFect 可用来转染siRNA 、antisense RNA 、microRNA 等200bp 以内的小分子RNA 和DNA ，转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞，如一般细胞株、肿瘤细胞株等。
目前，无论国外还是国内，转染试剂的主要成分均为脂质体或聚乙烯亚胺(Polyethylenimine, PEI)，这两种成分都具有很大的细胞毒性，并且转染效果不好。
RFect 采用新型的动物源性的纳米材料，毒性很低并且拥有非常卓越的转染性能。
与其它品牌的小核酸转染试剂相比，RFect 的细胞转染阳性率一般在90%以上，Lamin A/C 基因抑制效率在95%以上，而其它品牌转染试剂的细胞转染阳性率一般不超过70%，Lamin A/C 基因抑制效率不超过75%。
RFect 细胞毒性很低，转染细胞死亡率不到10%，而其它品牌试剂的转染细胞死亡率一般在30%以上。
血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。
有关RFect 小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际专利，并通过PCT 覆盖国际上多个国家和地区。
操作步骤：本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。
A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在30-50% 。
B. siRNA-RFect 混合物准备：1. 6pmol siRNA 用50μl 无血清培养基稀释。
2. 2μl RFect 用50μl 无血清培养基稀释。
轻轻混匀，室温孵育5min 。
注意：确保在25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。
RFect小核酸转染试剂说明书
操作步骤：本说明书适用于 24 孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。 A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在 30-50% 。 B. siRNA-RFect 混合物准备： 1. 6pmol siRNA 用 50μl 无血清培养基稀释。 2. 2μl RFect 用 50μl 无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育 5min。注意：确保在 25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。 3. 孵育 5min 后，将 siRNA 稀释液与 RFect 稀释液混合（总体积 100μl）。轻轻混匀，室温孵育 20 min。 C. 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）： 1. 将 100μl 混合物加入培养孔内，培养孔内含有 0.5ml 培养的细胞。轻轻晃动培养板，混匀。 2. 37°C 培养 18-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养 4-6h 时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、
◎转染细胞范围广，绝大多数贴壁细胞株都能获得比较理想的转染结果
储存条件：-20℃
应用 ◎siRNA 转染 ◎antisense RNA 转染 ◎200bp 内的小分子 DNA 转染
产品介绍
RFect 小核酸转染试剂是国际知名科学家崔坤元博士领导我公司研发团队在美国西雅图实验室研发成功的一种新型的小核酸转染试剂。RFect 可用来转染 siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以内的小分子 RNA 和 DNA，转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞，如一般细胞 株、肿瘤细胞株等。目前，无论国外还是国内，转染试剂的主要成分均为脂质体或聚乙烯亚胺(Polyethylenimine, PEI)，这两种成分都具有很 大的细胞毒性，并且转染效果不好。RFect 采用新型的动物源性的纳米材料，毒性很低并且拥有非常卓越的转染性能。与其它品牌的小核酸 转染试剂相比，RFect 的细胞转染阳性率一般在 90%以上，Lamin A/C 基因抑制效率在 95%以上，而其它品牌转染试剂的细胞转染阳性率一 般不超过 70%，Lamin A/C 基因抑制效率不超过 75%。RFect 细胞毒性很低，转染细胞死亡率不到 10%，而其它品牌试剂的转染细胞死亡率 一般在 30%以上。血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。有关 RFect 小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了 国际专利，并通过 PCT 覆盖国际上多个国家和地区。
Xfect RNA转染试剂瓶商品说明书
Certificate of AnalysisTakara Bio USA, Inc.2560 Orchard Parkway, San Jose, CA 95131, USAU.S. Technical Support: *******************************United States/Canada 800.662.2566 Asia Pacific+1.650.919.7300Europe+33.(0)1.3904.6880Japan+81.(0)77.565.6999Page 1 of 1(011623) Xfect™ RNA Transfection ReagentCatalog No. Amount Lot Number631450 1.2 ml Specified on product label. DescriptionXfect RNA Transfection Reagent is a complete system for highly efficient transfection of mammalian cells with all types of RNA, including messenger RNA (mRNA), small interfering RNA (siRNA), and single guide RNA (sgRNA). The protocol is simple, and transfections can be carried out entirely in the presence of serum. Xfect RNA Transfection Reagent creates biodegradable nanoparticles when combined with RNA, resulting in very low cytotoxicity.Package Contents• 2 x 600 µl Xfect RNA Transfection Polymer• 2 x 12 ml Xfect Reaction BufferStorage Conditions•Store Xfect RNA Transfection Polymer and Xfect Reaction Buffer at –20°C. Do not thaw until ready to use. Once thawed, store at 4°C for up to 12 months.NOTE: The Xfect RNA Transfection Polymer is a milky suspension and should be vortexed briefly prior to use to ensure that it is fully resuspended.Expiration Date•Specified on product label.Shipping Conditions•Dry iceProduct DocumentsDocuments for our products are available for download at /manualsThe following documents apply to this product:•Xfect RNA Transfection Reagent Protocol-At-A-GlanceQuality Control DataTransfection Test for Xfect RNA Transfection PolymerHeLa cells were transfected with 1 µg of GFP mRNA in one well of a 12-well plate, according to the protocol outlined in the Xfect RNA Transfection Reagent Protocol-At-A-Glance. 48 hours post-transfection, the transfection efficiency was determined via flow cytometry and found to be greater than 70%.Sterility TestThere was no evidence of bacterial or fungal growth after inoculation on blood agar, thioglycolate medium, or Sabouraud dextrose agar.It is certified that this product meets the above specifications, as reviewed and approved by the Quality Department.CATALOG NO.631450NOTICE TO PURCHASER:Our products are to be used for Research Use Only . They may not be used for any other purpose, including, but not limited to, use in humans, therapeutic or diagnostic use, or commercial use of any kind. Our products may not be transferred to third parties, resold, modified for resale, or used to manufacture commercial products or to provide aservice to third parties without our prior written approval.Your use of this product is also subject to compliance with the licensing requirements, listed below if applicable, and described on the product´s web page at . It is your responsibility to review, understand and adhere to any restrictions imposed by these statements.STATEMENT 91This product is intended for in vitro research purposes only. It may not be used for (i) any human or veterinary use,including without limitation therapeutic and prophylactic use, (ii) any clinical use, including without limitation diagnostic and prognostic use, (iii) screening of chemical and/or biological compounds for the identification of pharmaceutically active agents (including but not limited to screening of small molecules), target validation,preclinical testing services, or drug development or (iv) any commercial purposes, including without limitation the performance of contract research or provision of services to a third party and the manufacture of products for general sale. Any use of this product for any of the abovementioned purposes requires a license from the Massachusetts Institute of Technology.TRADEMARKS:©2023 Takara Bio Inc. All Rights Reserved.All trademarks are the property of Takara Bio Inc. or its affiliate(s) in the U.S. and/or other countries or their respective owners. Certain trademarks may not be registered in all jurisdictions.。
lipofectaminernaimax转染试剂的原理
lipofectaminernaimax转染试剂的原理Lipofectamine RNAiMAX是一种常用的转染试剂，用于进行RNA干扰（RNA interference）实验。
它的工作原理主要涉及到以下几个步骤：细胞接触、内化、溶酶体逃逸和小RNA释放。
细胞接触：Lipofectamine RNAiMAX由阳离子脂质和特殊的PEG修饰的小RNA （siRNA或miRNA）组成。
细胞在培养基中与Lipofectamine RNAiMAX混合后，正电荷的脂质会与负电荷的细胞膜表面相互作用，形成脂质-细胞膜复合物。
这种相互作用是通过静电吸引力以及脂质尾部的亲疏水性所引起的。
内化：一旦形成脂质-细胞膜复合物，这些复合物将被细胞通过内胞吞作用（endocytosis）并包裹在生物膜内部。
这一过程可以分成两个主要步骤：小泡形成和小泡融合。
小泡形成发生在细胞表面，并将复合物通过内陷形成细胞内的小泡。
然后，这些小泡经过融合形成一个大的内泡，将脂质-细胞膜复合物运输到细胞内。
溶酶体逃逸：一旦脂质-细胞膜复合物进入细胞内，它会寻找逃逸出溶酶体的机会。
溶酶体是细胞质膜系统中的囊泡，主要用于降解和分解外源物质。
为了避免被溶酶体降解，脂质-细胞膜复合物必须逃逸到细胞质中。
逃逸的机制有很多，其中可能包括复合物与溶酶体膜结合不稳定、复合物与内泡膜的破裂，以及复合物能够改变胞质pH和离子浓度等方面的特性。
小RNA释放：一旦脂质-细胞膜复合物逃逸到细胞质中，小RNA会从复合物中释放出来。
这种释放可能是通过复合物的解离或免疫应答所引起的。
释放出来的小RNA分子将进一步参与到RNA干扰过程中，抑制特定基因的表达。
总结起来，Lipofectamine RNAiMAX是一种通过静电吸引力将小RNA转染到细胞中的转染试剂。
一旦转染到细胞中，它会通过内吞作用进入细胞内，并逃逸出溶酶体到达细胞质。
随后，小RNA会从复合物中释放出来，参与到RNA干扰过程中，抑制特定基因的表达。
Lfet转染说明
Lipofectamine TM 2000CAT. NO. 11668-027 Size:CAT. NO. 11668-019 Size: ml4℃储存（不要冻存）说明：Lipofectamin TM 2000是核酸（DNA或RNA）转染真核细胞的一个专用的试剂盒，其有如下优点：对各种细胞及细胞板（如96孔板）都有高的转染效率，在的细胞系数据库中有各种细胞转染成功的实例。
在含有或是不含有血清的培养基中，DNA- Lipofectamin TM 2000复合物能够直接加给细胞。
在转染之后不需要除去复合物以及添加或是更换培养液，但在培养4-6小时后需要除去复合物。
关于转染的一些重要建议：1.不要用即将要介绍的转染程序进行RNAi的转染实验。
在上有转染步骤，登陆后点击说明。
2.对于大多数细胞系，转染复合物中DNA(μg)与Lipofectamine TM 2000(μl)的比例在1：2到1：3之间，最好达到最优化的比例。
注意：在混合之前，我们建议用Opti-MEM I 低血清培养基（Cat: ）（reduced serum medium）稀释Lipofectamine TM 2000和DNA.3.为了实现高的转染效率、高的目的基因表达水平以及低水平细胞毒效应，受体细胞最好达到高的浓度：在转染时，细胞的培养液的混浊度建议为90%-95%并最优化混浊度。
此外，在实验过程中保证相同的接种条件。
4.为避免细胞死亡，在培养基中不要加抗生素。
5.由于一些无血清复合物（如CD239、SFM II、VP-SFM）会抑制阳离子脂质体介导的转染，因此有必要检测一下无血清培养基和Lipofectamine TM 2000的相容性。
转染步骤（用于DNA）：按照如下步骤在24孔板中转染哺乳动物细胞。
对于其它种类细胞板请参照转染量度标准。
步骤中均按照一个细胞孔的量给出质量和体积。
1.贴壁细胞：转染的前一天，在500μl无抗生素培养基中接种×105个细胞，以保证在转染时候细胞的混浊度达到90%-95%。
attractene transfection reagent 说明书
Attractene Transfection Reagent: 一种高效的基因转染工
具
在生命科学领域，基因转染是一种重要的技术，用于将外源性核酸分子如DNA 或RNA引入到细胞中。
这种技术的应用范围广泛，包括研究基因功能、蛋白质表达和药物筛选等。
本文将介绍一款名为Attractene的转染试剂，它是如何工作的以及如何使用。
Attractene转染试剂是由Qiagen公司开发的一种非脂质体转染试剂。
它通过与核酸结合形成复合物，然后通过细胞膜进入细胞内部。
与其他转染试剂相比，Attractene具有更高的转染效率和更低的细胞毒性。
Attractene转染试剂适用于多种类型的细胞，包括贴壁细胞和悬浮细胞。
此外，它还可以用于多种类型的核酸，包括DNA、siRNA和miRNA。
其操作过程简单，只需将Attractene与核酸混合，然后加入到细胞培养液中即可。
根据Attractene的说明书，为了获得最佳的转染效果，需要根据细胞类型和核酸类型来调整Attractene和核酸的比例。
此外，转染后也需要适当的孵育时间以允许核酸进入细胞。
总的来说，Attractene转染试剂是一款高效且易于使用的基因转染工具。
它的出现极大地提高了基因转染的效率和成功率，为生命科学研究提供了有力的支持。
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RFect 小核酸转染试剂
货 号：11011: 0.5ml
11012: 1.0ml 储存条件：-20℃
11013: 1.5ml
产品特点 应 用
产品介绍
RFect 小核酸转染试剂是国际知名科学家崔坤元博士领导我公司研发团队在美国西雅图实验室研发成功的一种新型的小核酸转染试剂。
RFect 可用来转染siRNA 、antisense RNA 、microRNA 等200bp 以内的小分子RNA 和DNA ，转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞，如一般细胞株、肿瘤细胞株等。
目前，无论国外还是国内，转染试剂的主要成分均为脂质体或聚乙烯亚胺(Polyethylenimine, PEI)，这两种成分都具有很大的细胞毒性，并且转染效果不好。
RFect 采用新型的动物源性的纳米材料，毒性很低并且拥有非常卓越的转染性能。
与其它品牌的小核酸转染试剂相比，RFect 的细胞转染阳性率一般在90%以上，Lamin A/C 基因抑制效率在95%以上，而其它品牌转染试剂的细胞转染阳性率一般不超过70%，Lamin A/C 基因抑制效率不超过75%。
RFect 细胞毒性很低，转染细胞死亡率不到10%，而其它品牌试剂的转染细胞死亡率一般在30%以上。
血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。
有关RFect 小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际专利，并通过PCT 覆盖国际上多个国家和地区。
操作步骤：本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。
A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在30-50% 。
B. siRNA-RFect 混合物准备：
1. 6pmol siRNA 用50μl 无血清培养基稀释。
2. 2μl RFect 用50μl 无血清培养基稀释。
轻轻混匀，室温孵育5min 。
注意：确保在25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。
3. 孵育5min 后，将siRNA 稀释液与RFect 稀释液混合（总体积100μl ）。
轻轻混匀，室温孵育20 min 。
C. 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）：
1. 将100μl 混合物加入培养孔内，培养孔内含有0.5ml 培养的细胞。
轻轻晃动培养板，混匀。
2. 37°C 培养18-72h ，检测基因抑制效果。
如果需要，细胞培养4-6h 时可以更换培养基，但不是必须。
孵育时间的长短，取决于细胞类型、
所干扰基因本身及分析方法。
可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。
转染实验要点：
● 转染过程不可添加抗生素，否则会导致细胞死亡；
● 首次实验siRNA 的用量可稍大（一般10 nM ） ，后续实验根据实验结果修改。
RFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels
Culture vessel Surface area/well
(cm 2) Vol. of growth medium
(µl) Vol. of dilution medium
(µl) siRNA Amount
(pmol) RFect
(µl)
96-well 0.3 100 2 x 10 1.2 0.4 48-well 0.8 250 2 x 25 3 1 24-well 2 500 2 x 50 6 2 12-well
4
1000
2 x 100
12
4
◎卓越的细胞转染性能：细胞转染阳性率高达90%以上，基因敲除效果明显，A549细胞Lamin A/C 基因敲除效率在95%以上
◎极低的细胞毒性：转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响
◎转染细胞范围广，绝大多数贴壁细胞株都能获得比较理想的转染结果 ◎siRNA 转染 ◎antisense RNA 转染
◎200bp 内的小分子DNA 转染
转染实验优化: 为了提高转染效率，最好对转染条件进行优化，特别是首次使用。
例如：24孔培养板，调整siRNA与RFect试剂的用量。
siRNA 用量在0.6-30 pmol(final concentration 1- 50 nM)之间调整，RFect试剂用量在1.0 - 3.0μl之间调整。
客户可按照习惯用量进行预实验，如实验结果不理想，可适当调整并摸索转染试剂用量。
储存和运输
蓝冰运输，4°C 保存，长期不用于-20°C 储存，避免反复冻融有效期
-20℃保存条件下，有效期为1年质量控制
本产品经严格的质量检验证明，无生物污染注意：
本产品仅用于科研实验
6-well 10 2500 2 x 250 30 10。