微生物快速检测方法共33页
一般生菌数检验方法
一般生菌数检验方法
一般生菌数检验方法如下：
1.制备10倍品匀液。
按上一步操作程序，每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。
2.取样并制备平板。
同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内空白对照。
及时将15mL-20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃士1℃恒温水浴锅中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
3.待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃士1℃培养48h+2h。
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按2.1条件进行培养。
4.平板上菌落计数可使用自动化菌落计数仪，也可用肉眼观察（必要时可用放大镜观察）记录培养基上菌落数量和相应的稀释倍数。
选取菌落数在30-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
以上就是一般生菌数检验方法，希望对解决您的问题有所帮助。
微生物限度检测方法
微生物限度检测方法微生物限度检测是指在药品、食品、化妆品等产品中，对微生物的数量和种类进行检测，以确保产品的质量安全。
微生物限度检测方法的选择和执行对产品的质量控制和安全性评价具有重要意义。
本文将介绍常见的微生物限度检测方法及其应用。
一、培养法。
培养法是一种常见的微生物限度检测方法，它通过将样品接种在适当的培养基上，利用微生物在培养基上生长、分裂和形成可见的典型菌落的特性，来检测微生物的数量和种类。
培养法主要包括菌落计数法、膜过滤法等。
菌落计数法是将样品均匀涂布在含有营养物质的琼脂平板上，经过一定时间的培养后，根据菌落的数量来确定微生物的数量。
膜过滤法是将样品过滤到孔径为0.45μm的膜上，然后将膜放置在含有营养物质的琼脂平板上培养，根据在膜上形成的菌落数量来确定微生物的数量。
二、生物学法。
生物学法是利用微生物的生物学特性，通过培养微生物或者利用生物学试剂来检测微生物的数量和种类。
生物学法主要包括酶标记法、PCR法等。
酶标记法是利用酶标记的抗体或抗原来检测微生物的数量和种类，其原理是将酶标记的抗体或抗原与待检测微生物发生特异性反应，然后通过酶反应产生显色物质或荧光物质来进行检测。
PCR法是利用聚合酶链式反应技术，通过扩增微生物的特异基因序列来检测微生物的数量和种类。
三、物理化学法。
物理化学法是利用微生物的生理生化特性，通过测定微生物的生长代谢产物或者利用特定的物理化学性质来检测微生物的数量和种类。
物理化学法主要包括ATP生物发光法、流式细胞术等。
ATP生物发光法是利用微生物在生长过程中产生的ATP来进行检测，通过测定样品中的ATP含量来确定微生物的数量。
流式细胞术是利用流式细胞仪对微生物进行快速、高效的检测和鉴定，通过测定微生物在流式细胞仪中的光散射和荧光信号来确定微生物的数量和种类。
综上所述，微生物限度检测方法多种多样，每种方法都有其适用的范围和特点。
在实际应用中，需要根据产品的特点和检测的目的选择合适的检测方法，并严格按照相应的标准和规范进行执行，以确保产品的质量安全。
实验四微生物的菌落形态观察平板菌落计数及菌种保藏(张理珉)
当前第3页\共有70页\编于星期四\17点
实验内容一
——微生物菌落形态观察及区分
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一、微生物的形态和菌落特征的比较表
单细胞微生物
细菌
酵母菌
菌 主落 要 特 征细
胞
含水状态 外观形态 相互关系 形态特征
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实验内容二
——从分离平板上挑取单菌落
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▪ 挑取细菌单菌落接种于牛肉膏蛋白 胨培养基斜面上——接种环
▪ 挑取放线菌单菌落接种于高氏1号培 养基斜面上——接种环、接种钩
▪ 挑取霉菌单菌落接种于马丁氏培养基 斜面上——接种环、接种钩
比值小于2，应采取两者的平均数；若大于2，则 取其中稀释度(倍数)较小的计算菌落总数（见下 表，例2及例3）。
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4、若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度(倍数)最高的平均菌落数乘以稀释 倍数（见下表，例4）。
5、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则 应按稀释度(倍数)最低的平均菌落数乘以稀释倍 数（见下表，例5）。
适用具有特殊生理功能的类群——存在但不 能人工培养形成单菌落，可以利用生化手段检 测出；利用统计学原理计算，结果粗放，只能 得到数量级（近似数）。
当前第27页\共有70页\编于星期四\17点
（3）菌体浊度的测定（只针对单细胞微生 物）； 利用分光光度计在600nm测定吸光度值。
（4）细胞干重和湿重的测定（有时湿重以 体积计量）；
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微生物化验方法
微生物化验方法
微生物化验的方法有很多，以下为您推荐：
１．琼脂平板培养法：因培养基不同，琼脂平板法分为选择性培养基检测法和显色培养基检测法。
选择性培养基是在培养基中加入选择性抑制剂来抑制非目标微生物生长；显色培养基是在培养基中加入细菌特异性酶的显色底物，以菌落颜色区分目的菌落与非目的菌落。
２．显微镜镜检法：将待测样品中的微生物富集后，于油镜下直接计数。
显微镜镜检法通常与琼脂平板培养法结合使用，通过琼脂平板培养法对菌落进行定性分析，再用显微镜进行定量计数。
３．微生物测试片检测技术：一般情况下，微生物测试片由印有网格的聚丙烯薄膜和覆盖有培养基和显色物质的聚乙烯薄膜组成。
待测样品经过处理后可直接接种在微生物测试片上，然后放置在适宜的温度下培养——使固定在测试片上的显色物质与待检微生物生长产生的特异性酶发生显色反应，形成有颜色的菌落，通过对这些菌落进行计数便可实现检测。
微生物快速检测方法3篇
微生物快速检测方法第一篇：微生物快速检测方法是一种用于检测微生物数量和类型的技术，它排除了传统方法中需要多日甚至数周才能得到结果的限制。
目前，有多种不同的微生物快速检测方法可供选择，以下是其中几种。
1. PCR检测法聚合酶链式反应（PCR）是一种广泛使用的微生物检测方法。
该技术依赖于单个微生物细胞中的DNA模板，通过重复循环DNA引物扩增模板DNA，从而在富集的样品中检测出微生物DNA。
相比于传统方法，PCR不需要等待微生物生长，因此它可以极大地减少样品准备和数据分析的时间。
2. 荧光定量PCR检测法荧光定量PCR（qPCR）是PCR技术的一种变体，它使用荧光探针来实现DNA扩增的实时监测。
具体地，qPCR将荧光探针引入PCR反应体系中，当扩增过程中的DNA与荧光探针结合时，就会放出荧光信号。
这种方法在微生物检测中广泛应用，因为它可以定量检测微生物数量，同时还可以消除污染的干扰。
3. 基因测序技术基因测序技术是一种高通量的检测方法，它可以快速测定微生物所携带的基因序列。
基于DNA序列的比对和解码，可以对微生物进行鉴定和分类。
整个测序过程可以在几个小时内完成，可以检测出样品中的潜在病原微生物，并发现抗药性和毒力相关基因。
基因测序技术可以通过揭示微生物的全基因组，来理解微生物的生长和感染机制。
上述方法都可以提供快速并准确的微生物检测结果，可以用于食品、环境、医疗设备等领域。
但是，所有这些方法都需要具备高质量的DNA和RNA作为输入，否则检测结果可能会出现假阳性或假阴性。
第二篇：微生物快速检测方法在农业和食品安全领域中非常重要。
传统的分离和培养方法需要数天才能得到微生物检测结果，且很难检测到低浓度菌群。
为了更快速、准确地检测微生物，出现了一些新的技术，以下是几种常用的方法。
1. 生物传感器生物传感器技术利用大肠杆菌与质粒间的交互作用来检测特定代谢产物。
这种方法可以用于检测细菌、真菌和病毒等微生物。
生物传感器不仅可以检测单一代谢产物，还可以监测多种种类，可以在几分钟内获得结果。
9.6.186.食品微生物快速检测大肠菌群快速检测
食品中大肠菌群的测定依据
检样 无菌称取25g（mL）样品于225mL稀释液中，均质
10倍系列稀释
GB 4789.3-2016 食品微生物学检验
大肠菌群MPN计数法
适用于大肠菌群含量较低的食品中 大肠菌群的计数
选择适宜3个连续稀释度h
演示完毕，感谢您的聆听
不产气
产气
BGLB肉汤
36℃±1℃
48h±2h
不产气
产气
大肠菌群阴性
大肠菌群阳性
查MPN表 结果报告
结果判读
1 大肠菌群在测试片上生长后产酸。 2 pH指示剂使培养基颜色变深，在红色
菌落周围有气泡者为大肠菌群。 3 记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数。 4 根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。
是微生物检验诸多快速方法中比较成熟的方法之一。
已被广大卫生检验者所接受。目前已广泛应用于食品、 餐饮业、卫生、环保、水质检验等。
总结
思考题
1.大肠菌群快速检测方法与国标检测方法的异同？ 2.大肠菌群快速检测的测试片为什么会使产生使纸片颜 色加深周围并有气泡的菌落？ 3.如何对测试片的生长结果进行计数？ 4.大肠菌群快速检测适合在那些领域使用？
测试片结果解读
测试片可能会出现如下现象
1）没有任何菌落生长，不要计算圆形培养基外的菌落。因为泡棉上 已不含选择性培养基。
测试片结果解读
测试片可能会出现如下现象
2）当菌落数超过220时，可选择其中一个或几个有代表性的小方格，计算 平均菌落数，再乘以20得到整个测试片的菌落数。当有许多气泡，培养基 颜色变深暗，有很多小菌落时，记为多不可计。
测试片结果解读
测试片可能会出现如下现象
真菌【33页】
假菌丝和厚膜孢子
31
2、致病性
（1）入侵原因 ➢ 机体抵抗力下降（AIDS） ➢ 大量、长期使用抗菌药物，激素和免疫抑制剂。 （2）入侵部位 ➢ 皮肤粘膜感染：以鹅口疮、阴道炎最多见。 ➢ 内脏感染：有肺炎、肠胃炎、心内膜炎等，偶
而也可发生败血症。 ➢ 中枢神经感染：脑膜炎、脑炎。
32
霉菌性口腔炎
真 菌 学 mycology
1
概念
❖ 真菌（fungi）是一类真核细胞型微生物。有典 型的细胞核和完善的细胞器。
❖ 真菌广泛分布于自然界，种类繁多，有10余万种。 大多对人无害，只有少数可引起人类疾病。
2
一、生物学性状
1. 形态与结构
（1） 单细胞真菌 形态呈圆形或椭圆形，常见于酵母菌或类酵母 菌。它们以芽生方式繁殖产生子代。
主引起的超敏反应。
23
5、 致病性
➢特点：一种皮肤癣菌可在不同部位引起病 变，相同部位的病变也可由不同的皮肤 癣菌引起。
➢临床疾病：各种癣症。
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6、 微生物学检查法
1.标本：根据病变部位取材 2.直接镜检：观察菌丝和孢子结构
浅部感染真菌的病变标本如毛发、皮屑、甲屑置玻片 上，滴加10%KOH，加盖玻片微热熔化角质层，再将玻片 压紧，用吸水纸吸去周围多余碱液，在显微镜下观察，见 皮屑、甲屑中有菌丝，或毛发内部或外部有成串孢子，即 可初步诊断为癣菌感染，但不能确定菌种。
12
多细胞真菌菌落
13
有些真菌在不同寄生环境和培养条件下出现 两种形态，称二相性真菌(dimorphic fungi)，即 在机体内或含血培养中37℃孵育，呈现酵母型菌 落，而在沙保培养基上室温孵育，则形成丝状菌 落。如荚膜组织胞浆菌、皮炎芽生菌等。
微生物生长
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生长曲线可分： 停滞期 对数期 静止期 衰亡期
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1、停滞期（迟滞期或适应期）（lag phase）: 将细菌接种到某一培养基后，细菌并不立即繁
以生物量为指标测定微生物的生长
比浊法
在一定波长下，测定菌悬液的光密 度，以光密度(optical density, 即 O.D.) 表示菌量。
实验测量时应控制在菌浓度与 光密度 成正比的线性范围内，否则不 准确。
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5.比浊法
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（二） 测定活菌数
1、液体稀释培养基计数： 将待测样品作连续10倍稀释，一直稀释到稀释液的少量接种到
10-4
10 -5
与温热液态固体培养基
混合冷却。
第三步：培养
每一个细菌会生成一个 菌落
稀 释 度 可以计数 过 低 ， ，但数量 菌 落 密 过多，费 集 无 法 时费力 计数
数量合 数 量 太 少 适，统 ， 误 差 因 计计算， 素 太 大 ， 作为结 不做计数 果
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一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为 宜。 平
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2、薄膜计数法：如果测定量大而含菌浓度很低的样品 （如空气、水）中的活菌数，可将样品用微孔薄膜 （硝化纤维素薄膜）过滤，再与膜一起放到培养基或 浸透培养液支持物表面培养。
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膜过滤培养法
当样品中菌数很低时，可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样 品通过膜过滤器，然后将将膜转到相应的培养基上进行培养，对形 成的菌落进行统计。
PCR原理及检测方法
第12页，共53页。
dATP、 dGTP 、dCTP、dTTP——底物
0.02 ～
dNTPs 可与 Mg2+ 结合，应注意Mg2+ 浓度与 dNTPs 浓度之间的关系， Mg2+ 浓度比 dNTPs 浓 度高 0.2 ～ 2.5 mM。
扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合， 基本反应步骤分三步：
1. 变性 (Denaturation)： 加热使模板DNA双链间的氢键断裂而形成两条单
链。 2. 退火 (复性) (Annealling):
突然降温后模板DNA与引物按碱基配对原则互补 结合，也存在两条模板链之间的结合，但由于引物的 高浓度，结构简单的特点，主要的结合发生在模板与 引物之间。
0.1ul 0.5ul 0.5ul
第35页，共53页。
对每一个建立的反应确定反应数（n=拟进行的PCR管数，包括
阴性，阳性对）。考虑到阴性无模板对照，阳性对照，误差 ，制备过量的反应混合物是必要的。具体如下：
（1）如果包括对照，样品的数量（n）为1到14，那么 N=n+1；
（2）如果包括对照，样品的数量（n）大于15，那么 N=n+2。
DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段
， PCR 产物量的对数值与起始模板量之间存
在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行
定量分析。
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• 为了定量和比较的方便，在实时荧光定量 PCR
技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值 和 CT 值。荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为
设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩 增阶段任意位置上，但一般我们将荧光域值的 缺省设置是 3-15 个循环的荧光信号的标准偏差 的 10 倍。每个反应管内的荧光信号到达设定 的域值时所经历的循环数被称为 CT 值
微生物检测方法
微生物检测方法微生物检测是指对环境、食品、药品、生物制品等中的微生物进行检测和监测的过程。
微生物检测的方法多种多样，根据不同的检测对象和要求，可以选择合适的方法进行检测。
下面将介绍几种常见的微生物检测方法。
首先，传统的培养方法是一种常见的微生物检测方法。
这种方法是将样品在适宜的培养基上培养一段时间，然后观察培养基上是否有微生物生长，根据生长的数量和形态来判断样品中是否存在微生物。
这种方法简单易行，但需要较长的时间，且对于某些难以培养的微生物可能无法检测出来。
其次，PCR方法是一种快速准确的微生物检测方法。
PCR方法是利用聚合酶链式反应技术，通过扩增微生物DNA片段来进行检测。
这种方法具有高度的特异性和敏感性，可以快速准确地检测出微生物的存在和数量。
但是，PCR方法需要设备和技术的支持，成本较高，且对样品的前处理要求较高。
另外，免疫学方法也是一种常用的微生物检测方法。
这种方法是利用抗体与特定的微生物抗原结合的原理进行检测。
免疫学方法具有高度的特异性和灵敏度，可以快速准确地检测出微生物的存在和数量。
但是，免疫学方法需要较长的培养时间，且受到环境因素的影响较大。
此外，基因测序技术也是一种新兴的微生物检测方法。
这种方法是通过对微生物的基因进行测序分析，来确定微生物的种属和数量。
基因测序技术具有高度的准确性和全面性，可以对微生物进行全面的检测和分析。
但是，基因测序技术需要较长的分析时间和复杂的数据处理，且对设备和技术要求较高。
综上所述，微生物检测方法有传统的培养方法、PCR方法、免疫学方法和基因测序技术等多种选择。
在实际应用中，可以根据检测对象和要求选择合适的方法进行检测。
随着科学技术的不断发展，相信微生物检测方法会更加快速、准确、全面，为微生物监测和控制提供更好的技术支持。
细菌的分型及其检测技术PPT课件
过夜增殖噬菌体。分离纯化单斑
3次，至平板噬斑形态大小一致
纯第化11页/共70页
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• （三）噬菌体的增殖、保存
1、噬菌体增殖 液体增殖法：定时加入对数期菌体 固体增殖法：同时加大菌体和噬菌体的浓度 2、去除菌体
细菌滤器法和三氯甲烷法
3、噬菌体的保存
冷藏保存：无需防腐剂，分装后7d，不宜超过4w
冷冻干燥：2年
鉴定时不需活分析细菌在体外培养物中的代谢产物如厌氧菌产生的短链脂肪酸色谱图需氧菌的有机酸色谱图等临床标本中检出和鉴定细菌如检测脑脊液中的乳酸对细菌性脑膜炎做出明确诊断等热裂解气相色谱法鉴定细菌将样品干燥高温裂解碎片色谱图鉴定微生物如沙门菌属十种血清型鉴别高分辨气相色谱法分析冷冻条件下细菌的挥发性有机产物鉴定引起冷冻品腐败的微生物液相色谱法基于混合物中各组分对固定相和流动相亲和力的差异分离组分的
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(二)培养基和抗菌药物纸片
1．抗菌药物纸片：商品化，选择直径为，吸水量为20μl的专用药敏纸片，用逐片 加样或浸泡方法使每片含药量达规定要求。含药纸片密封贮存于超低温冰箱。
2．培养基：水解酪蛋白（M-H）培养基是兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培养 基，4℃保存。
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第二节 细菌素分型技术
一、概述
• 细菌素(bacteriocin)
• 是某些细菌产生的蛋白质类抗菌物质，这种物质仅 对与产生菌亲缘关系近的细菌有抗菌作用，而对产 生菌本身不敏感。如大肠菌素、绿脓菌素、蜡样芽 胞杆菌素等。
• 抗生素
• 抗菌素是细菌、真菌等微生物在生长过程中为了生 存竞争需要而产生的化学物质,这种物质可保证其自 身生存,同时还可杀灭或抑制其它微生物。细菌产生 的有多粘菌素、抗菌肽等。
微生物快速检测方法
微生物快速检测方法微生物快速检测方法是指能够在较短时间内迅速鉴定和检测微生物的方法。
这些方法广泛应用于医疗保健、食品加工、环境监测等领域，能够提高检测效率和准确性，有效地控制微生物污染的风险。
本文将介绍几种常见的微生物快速检测方法。
聚合酶链式反应（PCR）是一种常见的基因扩增技术，能够在较短时间内快速扩增微生物的DNA，并通过比对数据库实现快速鉴定和检测。
PCR技术可以用于检测细菌、病毒、真菌等微生物。
PCR技术具有高度敏感性和特异性，能够在几个小时内完成检测，但需要相对复杂的实验操作和专业设备。
质谱技术是一种基于物质的质量-荷电比分析的方法，广泛应用于微生物鉴定和检测。
质谱技术能够通过检测样品中微生物代谢产物的特征质谱图谱来快速鉴定微生物。
质谱技术具有高度准确性和快速性，能够在几分钟内完成鉴定，但需要相对昂贵的设备和专业的操作人员。
三、流式细胞术流式细胞术是一种基于悬浮细胞的快速检测方法，能够用于检测微生物的数量和种类。
流式细胞术将微生物样品分散成小颗粒，通过流式细胞仪进行激光照射和光散射的检测，得到细胞的数量和特征参数。
流式细胞术具有高通量和高灵敏性的特点，能够在几分钟内完成检测，但对于一些微生物的鉴定可能需要进一步的分析。
四、快速培养和生化检测传统的微生物检测方法通常需要较长的培养时间，但快速培养技术能够缩短培养时间并快速检测微生物。
快速培养方法通过优化培养基和培养条件，例如增加培养温度、增加营养物质等，能够在几小时内获得微生物的生长和菌落形成。
与快速培养相结合的生化检测方法，例如利用微生物的代谢产物进行检测，能够进一步提高检测的准确性和效率。
总结来说，微生物快速检测方法包括基于PCR的技术、基于质谱的技术、流式细胞术和快速培养生化检测等。
这些方法在微生物鉴定和检测方面具有高灵敏性和高准确性，并且能够在较短时间内完成检测，有助于减少风险和保护公共安全。
同时，这些方法还需要进一步的研究和发展，为微生物领域的快速检测技术提供更多选择和应用。
临床常见微生物标本采集法及影响临床微生物检验的因素
流行病学调查显示，临床感染病原菌种类 不断发生变化，对抗微生物药物的耐药性 不断增强，因此，临床医生在抗感染治疗 中越来越重视病原学的检测，对微生物室 的工作要求越来越高。微生物室任务越来 越爱繁重。
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临床医生要求微生物室应做到：
菌种鉴定准确 药敏试验准确 回报结果快速及时 做好咨询与解释工作
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粪便标本
送检目的：粪便标本病原学检查有助于对一 些肠道感染性疾病进行病原学诊断和鉴别诊 断；为临床治疗提供合理的抗生素选择；及
对肠道菌群进行监测，预防菌群失调。
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采集时间
总体原则：应在腹泻急性期(3天内)及用 药前采样。 1、腹泻患者于急性期，尽量在用药前采
当前8页，共82页，星期日。
• 标本留取是否正确 无菌部位的标本采集是要严格消毒，无菌操作，避免 污染。如：血液、无菌体液。主要注意两个方面，一 是穿刺部位的消毒，二是在将标本注入容器时的无菌 操作。
当前9页，共82页，星期日。
根据可疑感染的部采集相应的标本
如： 肺感染 ——痰
泌尿系感染——尿
脓肿——脓汁
（3）某些标本离体极易死亡，应在床边采取和接种或立即保温 送至实验室检验。室温放置或延迟送检，可使检出的阳性率降 低；不能使用冷藏的样本检验。
（4）厌氧菌样本采取必须隔绝空气，混入空气的样本影响检验结果， 不能使用。
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血液标本
正常人血液是无菌的，血液标本病原学检查有助 于菌血症、败血症的诊断和疑由菌血症所致其他症 状，如皮疹、肝脾肿大、关节疼痛、昏迷休克等的 鉴别诊断。并通过药敏试验为临床治疗提供合理的 抗生素选择。
微生物的检测
稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。
菌落总数操作步骤(GB 4789.2-2010)
5 及时将 15 mL～20 mL 冷却至 46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于 46 ±1 ℃ 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合 均匀。
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待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ±1 ℃培养48 h±2 h。
实验的仪器、设备、材料
恒温培养箱：36℃±1 ℃，28℃±1 ℃。 冰箱：2℃～5 ℃
天平：感量为 0.1 g。
净化操作台 恒温水浴箱：46 ±1℃ 无菌锥形瓶：容量 250 mL、500 mL。 放大镜或/和菌落计数器/显微镜 无菌培养皿：直径 90 mm 高压灭菌锅 蒸馏水器 酒精灯、灭菌试管、灭菌镊子、灭菌剪子等。 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液 器及吸头
应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（CFU）表示。
7 菌落计数 ：可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相 7.1 选取菌落数在 30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。 低于 30 CFU的平板记录具体菌落数，大于 300 CFU的可记录为多不可计。每个 稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 7.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生 长的 平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落 分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 7.3 平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计 数。
菌落总数结果与报告(GB 4789.2-2010)
例题：某微生物试验室对一食品样品进行菌落总数测定时，做 了1：100和1：1000两个稀释度的样液，每个稀释度分别吸取1ml样品 匀液加入两个无菌平皿内，同时分别取1ml稀释液加入两个无菌平皿做 空白对照。并及时将冷却至46℃的平板计数琼脂15ml~20ml倾注平皿，
微生物培养实验方法
(一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)
牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g
将上述物质溶解后，添加自来水，定 容至1000mL
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操作步骤
1．计算、称量 2．溶化 3．调pH： pH7．6 4．过滤：这一步可以省去。 5．分装：分装过程中注意不要使培 养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉 塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以 不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 6．加塞 7．包扎
培养皿放在火
2
焰旁的桌面上，
右手拿装有培
养基的锥形瓶，
左手拨出棉塞。
4
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倒平板技术
1 3
2.右手拿锥形
2瓶，Βιβλιοθήκη 瓶口迅速通过火焰。4
第6页/共33页
1 3
倒平板技术
3.用左手的拇指
和食指将培养皿
打开一条稍大于
瓶口的缝隙，右
2
手将锥形瓶中的
培养基(约10~
20mL)倒入培养
皿，左手立即盖
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微生物的恒温培养
微生物的恒温培养
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微生物的恒温培养
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斜面制备
培养基配制 分装 灭菌
摆放斜面
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接种的注意点
：（1）用接种环取菌种之前、每次划线之前和划线结束都要进行灼烧灭菌，灼烧后要在酒精灯附近冷却后再 操作；（2）划线时不要划破培养基，如果采用分段划线法操作从第二次操作应总在上一次划线末端开始， 首尾区不能相连；（3）操作必须始终在酒精灯火焰旁进行。
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微生物标本接种
痰培养-操作步骤
• 痰标本涂片染色显微镜检查的分类：判断标准
• 比较简单的方法就是确定鳞状上皮细胞数量：细胞数＞ 10/低倍视野，说明混有痰液。
4
7
球菌
Yeast 酵母菌
11
2
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大肠埃希菌与膀胱上皮细胞相互作用
伞状粘附
膀胱上皮细胞
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尿液运输方法
无需冷藏
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有症状妇女的尿路感染诊断性试验
Test 检测 >100 cfu >105 cfu
Sens 灵敏 度
95
Spec 特异度 PPV 阳性预 示值
• 将革兰染色结果立即向临床电话初级报告。 • 待细菌鉴定及药敏结果出来后再向临床发出最终报告。
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血液培养
• 【特别提醒】 • 厌氧菌 从血液中培养出厌氧菌的比率相对比较少，不
推荐每个病人常规增加一个厌氧血培养，但如果必要， 选用其配套的厌氧培养基来培养厌氧菌。 • 营养苛刻的细菌（Fastidious Bacteria） • 布鲁氏菌属可以在常规血液培养基中生长，并且尽管可 以在三天内分离到，但是推荐培养21天，且有必要进 行末次接种。 • HACEK群细菌—嗜泡沫嗜血杆菌（Haemphilus aphrophilus）、放线共生放线杆菌（Actinobacillus actinomycemcomitans）、人心杆菌 (Cardiobacterium hominis)、侵袭埃肯菌 (Eikenellus corrodens)和金氏杆菌（Kingella kingae）与细菌性心内膜炎有关，常规血培养基中可 以分离，但培养14天和进行肉汤末次接种会更有效。
微生物常见检测方法大全
微生物常见检测方法大全微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义。
常见的检测方法有：生长量测定法、微生物计数法、生理指标法和商业化快速微生物检测等。
微生物生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。
微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。
生长量测定法1、体积测量法：又称测菌丝浓度法。
原理：通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。
菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。
这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。
2、称干重法：原理：利用离心或过滤法测定。
一般干重为湿重的10-20%。
称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
3、比浊法：原理：微生物的生长引起培养物混浊度的增高。
通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。
该法主要用于发酵工业菌体生长监测。
4、菌丝长度测量法：方法：对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度。
微生物计数法1、血球计数板法:这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。
2、染色计数法：为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。
3、比例计数法：将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。
4、液体稀释法：对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样，接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN（most probably number）得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。
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24、勇气很有理由被当作人类德性之 首，因 为这种 德性保 证了所 有其余 的德性 。--温 斯顿． 丘吉尔 。 25、梯子的梯阶从来不是用来搁脚的 ，它只 是让人 们的脚 放上一 段时间 ，以便 让别一 只脚能 够再往 上登。
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