【CN109897908A】用于定量监测山核桃干腐病侵染和传播的qLAMP方法及所用引物【专利】
山核桃病虫害防治技术(一)2024
山核桃病虫害防治技术（一）引言概述：山核桃作为一种重要的经济作物，受到了各种病虫害的威胁。
为了确保山核桃的产量和质量，科学有效的病虫害防治技术显得尤为重要。
本文将针对山核桃的病虫害防治技术展开讨论，从害虫的种类、症状和损害程度，以及相应的防治策略等方面进行解析。
正文：一、主要害虫种类1. 昆虫类害虫- 叶蝉- 桃蚜- 桃小食心虫- 山偏蜂- 叶蛾2. 病原菌类害虫- 核桃锈病- 核桃炭疽病- 核桃疫病- 核桃立枯病- 核桃轮纹病3. 寄生虫类害虫- 栗瘿胡蜂- 土壤线虫- 核桃蚜虫- 核桃网蝽- 核桃螟二、症状和损害程度1. 昆虫类害虫的症状和损害程度- 叶蝉的叶片发黄、弯曲和凋落- 桃蚜的叶片被蚜虫污染和吸食，导致畸形和掉叶- 桃小食心虫在果实内寄生，使果实质量下降- 山偏蜂给核桃生长的新梢带来损害，影响生长发育- 叶蛾幼虫在叶片上形成蛹鞘，严重时可导致叶片凋落2. 病原菌类害虫的症状和损害程度- 核桃锈病引起叶片和嫩枝上出现红褐色的小斑点，影响光合作用- 核桃炭疽病使果实上出现黑色病斑，导致果实腐烂- 核桃疫病使树皮上出现黑色褪色斑点，降低光合效率- 核桃立枯病导致树冠逐渐萎缩，最终死亡- 核桃轮纹病使树叶上出现黄色的盘状斑点，严重时引起叶片下垂3. 寄生虫类害虫的症状和损害程度- 栗瘿胡蜂寄生在栗果上，使果实形成瘤状样子- 土壤线虫引起根系病变，严重时导致植株生长受阻- 核桃蚜虫吸食树汁，引起叶片畸形和叶片脱落- 核桃网蝽导致果实饼干化，严重时导致减产- 核桃螟在核桃内孵化，使果仁受损，影响食用价值三、病虫害防治策略1. 生物防治- 引进天敌昆虫，如天蓟马、瓢虫等，进行定期放飞2. 化学防治- 使用合适的农药，如吡虫啉、苦杏仁、氟氯虫脒等，进行喷洒处理3. 地域培育- 选取病虫害抗性强的品种进行培育和栽种4. 检疫和消杀- 定期对果园进行检查，发现病虫害即时采取措施进行消杀5. 环境调控- 维持果园的良好生态环境，合理的排水和施肥，改善土壤条件总结：山核桃病虫害对核桃的生产和质量产生了重大威胁，因此采取科学有效的防治策略十分必要。
山核桃主要病虫害防治
山核桃主要病虫害防治山核桃病虫害是影响山核桃产量的重要因子，防治病虫害可以起到保护树林，促进生长，增加产量等作用。
山核桃常见病害有山核桃枝枯病、果树腐烂病。
常见虫害有山核桃蝗虫、天社蛾、山核桃蚜虫、胡桃豹夜蛾、天牛类，近年还出现一些新的虫害，如眼班钩蛾、山核桃花蕾蛆等。
、山核桃病害防治：1、山核桃枝枯病：山核桃枝枯病是山核桃的重要病害之一，它为害1年生枝梢和2年生侧枝，并向下蔓延，引起大枝枯死削弱树势，降低产量。
该病始发于8月中下旬，盛发于10-11月，3月上旬到8月上旬不见有新的病害发生，所见枯枝都是上年遗留下来的老病枯枝。
病菌以菌丝体和分生孢子在有病枯枝上过冬。
分生孢子在4-5月和9-10月间在发病林内传播，风雨是传播媒介。
防治方法：、5月间往树枝上喷洒70%甲基托布津500-700倍液，或1%波尔多液，15天一次，连喷3次。
、春夏季节剪除枯枝，防止病害秋季向下蔓延和减少病菌来源。
2、山核桃果树腐烂病：该病多发生在主杆、主枝、侧枝上，有时主根基部也受害。
症状：病部树皮腐烂，且多发生在枝杆向阳面及枝杈部，初期稍隆起，呈浸状，按之下陷，轮廓呈长椭圆形，病组织松软，糟烂，流出黑水，散出洒糟气味，引起枝杆死亡。
防治方法：、5月份要及时刮除病斑或去掉病枝，有早期病斑的主枝、侧枝，要及时用锋利刮刀将树杆病皮表层刮去，一般要刮去1毫米表层活皮，到露出白绿色健皮为止。
注意要刮净病变组织，注意将刮下的病变组织和对严重的病枝或将死亡的主杆要及时锯掉，拿出果园烧毁。
、对刮除病组织的伤口要采用涂药杀菌措施，药剂可采用：5-10度石硫合剂或45%晶体石硫合剂20倍液或果富康10-15倍液涂抹病株部。
、山核桃虫害防治：1、山核桃天社蛾：山核桃天社蛾又叫山核桃青虫，是为害山核桃树叶的大害虫。
此虫一年四代，以蛹在地表过冬，翌年4月中旬羽化，交配产卵。
四代危害期分别为5月上旬-6月下旬；7月中旬-7月下旬；8月上旬-8月下旬；9月上旬-10月上旬。
泡核桃干腐病病原菌分离鉴定及杀菌剂室内筛选
泡核桃干腐病病原菌分离鉴定及杀菌剂室内筛选陈丽华;张家恒;吴毅歆;何鹏飞;刘凌;闫争亮;何月秋【摘要】为明确泡核桃干腐病的病原和筛选合适的化学防治药剂,从云南省楚雄州大姚县核桃病害标本中分离和鉴定了病原菌,测定了8种杀菌剂的毒力.通过柯赫氏法则验证,确定分离得到的该菌株能侵染泡核桃,产生干腐症状.依据形态特征和rDNA-ITS序列分析,将病原鉴定为茶藤子葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea).室内毒力测定的结果表明:8种杀菌剂的EC50从大到小依次为氟啶胺0.0604mg/L、戊唑醇0.169 0 mg/L、苯醚甲环唑0.177 8 mg,/L、嘧菌酯0.4769mg/L、福美双2.094 7 mg/L、噻呋酰胺3.961 0 mg/L、异菌脲4.219 0 mg/L、霜脲氰101.764 3 mg/L.【期刊名称】《云南农业大学学报》【年(卷),期】2016(031)004【总页数】6页(P624-629)【关键词】泡核桃;干腐病;茶蔗子葡萄座腔菌;杀菌剂;毒力测定【作者】陈丽华;张家恒;吴毅歆;何鹏飞;刘凌;闫争亮;何月秋【作者单位】云南农业大学植物保护学院,云南昆明650201;云南农业大学植物保护学院,云南昆明650201;云南农业大学农学与生物技术学院,云南昆明650201;微生物菌种筛选与应用国家地方联合工程研究中心,云南昆明650217;云南农业大学植物保护学院,云南昆明650201;微生物菌种筛选与应用国家地方联合工程研究中心,云南昆明650217;云南省林业科学院,云南昆明650204;云南省林业科学院,云南昆明650204;云南农业大学农学与生物技术学院,云南昆明650201;微生物菌种筛选与应用国家地方联合工程研究中心,云南昆明650217【正文语种】中文【中图分类】S436.64核桃(Juglans `spp.)是一种综合开发利用价值极高的木本油料及干果树种[1]。
山核桃主要病虫害防治
山核桃星天牛
症状
山核桃星天牛是一种常见的蛀干害虫，它们在树干下部或根颈部蛀洞，导致树体营养流失、水分供应受阻。受害 严重的树木可能会枯死。
防治方法
加强山核桃园的巡查，发现受害树木及时采取措施，如用铁丝钩出虫粪、用棉球蘸取农药塞入洞口等。同时，合 理施肥、增强树体抗性，以减少山核桃星天牛的侵害。
山核桃木蠹蛾
防治方法
加强虫情监测，及时发现并采取措施。在山 核桃蚜虫发生初期，使用吡虫啉、啶虫脒等
药剂进行喷雾防治，每隔7-10天喷施一次 ，连续喷施2-3次。同时，也可以使用黄色 粘虫板或蓝色粘虫板等物理方法进行诱杀。
案例三：山核桃综合防治措施的实施与效果
防治措施
为了有效地控制山核桃病虫害的发生和危害，需要采取 综合防治措施。这包括加强栽培管理、增强树势、合理 修剪、清除枯枝落叶等措施，同时结合药剂防治、生物 防治和物理防治等方法。
加强植物检疫
要点一
防止外来病虫害入侵
通过严格植物检疫措施，确保山核桃种苗、木材等不 带入外来病虫害，防止其对本土生态系统造成威胁。
要点二
早期发现与控制
建立病虫害监测网络，及时发现并采取措施控制病虫 害的传播和扩散。
农业防治
01
02
03
选用抗病品种
培育和选用对病虫害抗性 较强的山核桃品种。
科学施肥
防治方法
加强抚育管理，及时清除病叶、病果，消灭病原菌。发病初期，用50%多菌灵 可湿性粉剂600-800倍液或50%甲基托布津可湿性粉剂800-1000倍液喷雾防治 。
山核桃黑斑病
症状
叶片受害后，先产生黄褐色小斑点，后逐渐扩大成圆形或近圆形，边缘呈深褐色，直径5-10毫米。果 实受害后，先在果核周围产生圆形或不规则形的黑褐色小斑点，然后逐渐扩大并相互连接成片，后期 病斑边缘呈深褐色，中间呈灰褐色至灰黑色。
丁香等29种植物提取物抑菌活性的筛选
丁香等29种植物提取物抑菌活性的筛选姚翰文;葛康康;潘佳亮;刘伟璐;马玲【摘要】采用生长速率法测定了29种植物乙醇提取物对山核桃干腐病和油茶炭疽病的抑制作用,筛选出抑菌效果较好的植物提取物,并对2种病原菌进行室内毒力测定,得出抑菌效果最优的植物提取物,使用光学显微镜观察植物提取物处理后的油茶炭疽病菌菌丝形态变化.结果显示,质量浓度为20 g/L时,丁香和牡丹提取物对2种病原菌抑制效果明显高于其他植物提取物,丁香提取物对山核桃干腐病和油茶炭疽病的抑菌率均为100%,牡丹提取物对山核桃干腐病和油茶炭疽病的抑菌率分别为(93.81±0.51)%和100%;室内毒力试验中,丁香和牡丹提取物对山核桃干腐病的抑菌中浓度值(CE50)分别为2.566和10.268 g/L,对油茶炭疽病的CE50值分别为1.005和10.988 g/L,由它们的抑菌中浓度值可知,相同质量浓度时,丁香对2种病原菌抑菌效果更好;显微镜观察发现,丁香提取物处理后油茶炭疽病菌菌丝出现菌丝隔的数目增多,细胞内原生质体减少,液泡增多等形态变化.%The inhibitory effects of ethanol extracts of 29 plants on Botryosphaeria dothidea and Colletotrichum gloeosporioides were determined by the growth rate method .Two plant extracts with good antifungal effect were screened out and the labora-tory toxicity of the two pathogens was tested to find out the better plant extract .After using the plant extract , the hyphae morphological changes of C.gloeosporioides were observed by optical microscopy .The inhibitory effects of Syzygium aromat-icum extract and Paeonia suffruticosa extract on the two pathogens were higher than that of other plant extracts at the con -centration of 20 g/L.The inhibitory rates of S.aromaticum extract on the two pathogens were both 100%, and theinhibito-ry rates of Paeonia suffruticosa extract on B.dothidea andC.gloeosporioides were, respectively, (93.81±0.51)%and 100%.In the study of laboratory toxicity , the CE50 of the extracts of Syzygium aromaticum and P.suffruticosa on B.do-thidea were 2.566 and 10.268 g/L, and onC.gloeosporoi ideswere 1.005 and 10.988 g/L, respectively .Compared with the values of CE 50 , at the same content , the inhibitory effect ofS.aromaticum extract on the two pathogens was better .By mi-croscopic observation , there were changes in the morphology of hyphae ofC.gloeosporioides, involving the increased num-ber of the septum of hyphae , the reduction of intracellular protoplast , and the increased vacuoles .【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2017(045)010【总页数】5页(P35-39)【关键词】植物源农药;植物提取物;丁香;山核桃干腐病;油茶炭疽病;抑菌活性;室内毒力【作者】姚翰文;葛康康;潘佳亮;刘伟璐;马玲【作者单位】东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040【正文语种】中文【中图分类】S482.2+92在人类的生产生活中，自古就有利用植物源物质作为农药的历史[1]。
山核桃干腐病菌环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测体系的建立
１mmol/L,甜菜碱 Betaine 为０������６mmol/L)在等温(６４℃)条件下反 应 １h能 特 异 性 检 测 山 核 桃 干 腐 病 菌:以 山
核桃干腐病菌 DNA 为模板的反应液呈阳性(变为蓝色),而其 余 的 病 菌 均 为 阴 性 (仍 为 紫 色),该 技 术 的 最 低 检
测 限 为 １pg/μL.
关 键 词 :山 核 桃 干 腐 病 ;茶 藨 子 葡 萄 座 腔 菌 ;环 介 导 等 温 扩 增 技 术 (LAMP)
中 图 分 类 号 :S５１２������１＋１
文 献 标 志 码 :A
EstablishmentofloopＧmediatedisothermalamplificationassayforrapid detectionofBotryosphaeriadothideacausingcaryatreecanker
第 ４１ 卷 第 ４ 期 ２０１８ 年 ７ 月
河北农业大学学报
JOURNALOF HEBEIAGRICULTURAL UNIVERSITY
Vol．４１No．４ Jul．２０１８
ห้องสมุดไป่ตู้
文章编号:１０００ １５７３(２０１８)０４ ００８７ ０５
DOI:１０������１３３２０/j������cnki������jauh������２０１８������００８４
结果使用羟基萘酚蓝(HNB)作 为 反 应 指 示 剂,反 应 体 系 (BstDNA 聚 合 酶 ０������１６U/μL,外 引 物 F３ 和 B３ 均 为 ０������２μmol/L,内引物 FIP 和 BIP 均 为 １������６μmol/L,环 引 物 LB 为 ０������８μmol/L,Mg２＋ 为 ４ mmol/L,dNTP 为
一种山核桃干腐病的综合防治方法[发明专利]
![一种山核桃干腐病的综合防治方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/5f127a99f242336c1fb95e21.png)
专利名称：一种山核桃干腐病的综合防治方法专利类型：发明专利
发明人：林汉良,张有珍,邵香君
申请号：CN201711254414.7
申请日：20171204
公开号：CN107896755A
公开日：
20180413
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种山核桃干腐病的防治方法，所述防治方法包括如下步骤：(1)土壤修复：①将生物菌加入土壤中；②每年春季采用施以碱性山核桃专用肥；每年夏季再次施用碱性山核桃专用肥，同时辅以叶面喷施；每年秋季，山核桃采收后，施碱性生物酶肥；(2)加强林地管理：经常开展病枝清理工作，秋季落叶后或春季放叶前，清理病树病枝并集中烧毁；(3)病灶防止：a.药剂预防，b.药剂喷治；(4)药物涂干：每年3月底在山核桃树干上涂一层药物防护层。
采用本发明所述方法，能够有效预防和治疗山核桃干腐病，减少病原传播流行几率，有助于山核桃树增产。
申请人：浙江聚贤盛邦农业科技有限公司
地址：311309 浙江省杭州市临安市太湖源镇青云村
国籍：CN
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山核桃干腐病病原菌的鉴定
山核桃干腐病病原菌的鉴定王璇;马良进;吕全;孟娴静;张星耀【摘要】葡萄座腔菌科Botryosphaeriaceae真菌是很多木本植物溃疡病和枯梢病的重要病原菌.已有报道认为:山核桃干腐病病原菌为茶藨子葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea,但对于葡萄座腔菌科其他真菌与山核桃干腐病的关系还没有深入研究.分离得到了山核桃干腐病相关病原菌,通过比较其形态学特征和核糖体DNA内转录间隔区(rD-NA ITS)序列特征,将分离得到的供试菌株分为3组.根据形态学特征和基于ITS序列的系统发育分析,3组菌株分别鉴定为Botryosphaeria dothidea,B.fabicercianum和B.obtusa.其中B.dothidea为优势菌株,分离频率为71.42％,B.fabicercianum和B.obtusa分离频率分别为14.28％.经致病性测定,上述分离菌株均能引起健康山核桃Carya cathayensis枝条发病,但致病性存在差异.在山核桃上发现的B.obtusa和B.fabicercianum为首次报道.【期刊名称】《浙江农林大学学报》【年(卷),期】2014(031)002【总页数】8页(P238-245)【关键词】森林保护学;经济林学;溃疡病;葡萄座腔菌科;茶藨子葡萄座腔菌;系统发育;山核桃【作者】王璇;马良进;吕全;孟娴静;张星耀【作者单位】浙江农林大学林业与生物技术学院,浙江临安311300;中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所/国家林业局森林保护学重点实验室,北京100091;浙江农林大学林业与生物技术学院,浙江临安311300;中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所/国家林业局森林保护学重点实验室,北京100091;中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所/国家林业局森林保护学重点实验室,北京100091;中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所/国家林业局森林保护学重点实验室,北京100091【正文语种】中文【中图分类】S759.3;S763.1山核桃Carya cathayensis隶属于胡桃科Juglandaceae中的山核桃属Carya，是一种著名的干果树种，因其干果富含营养和经济价值较高而得到了广泛栽培[1]。
山核桃干腐病的防治
山核桃干腐病的防治2007年入春以来，浙江省淳安县山核桃产区瑶山、临岐、屏门、威坪等乡镇不同程度发生山核桃干腐病，发病程度为有史以来最严重的一次，个别地区株发病率达80%～100%。
受此病为害最重的是15～20年左右刚投产的山核桃树，有的整株枯死。
山核桃是淳安县主导产业，全县总种植面积达20万亩（1亩=667平方米，下同），2006年产量达4257吨，产值近2亿元。
2007年3～4月份高温多雨的天气，非常有利于山核桃干腐病病菌的生长，加之前几年发病轻，未进行有效防治，使病菌得到了一定的积累，近期呈暴发趋势。
山核桃干腐病又叫溃疡病、墨汁病、黑小病。
主要危害幼树，特别是刚投产前后的山核桃树，但老树也有波及。
该病开始发生于树干的中、下部，随着病程的进展，逐渐向树干的中上部和枝条上蔓延。
初期病斑明显，出现黄褐色、水渍状、近圆形或不规则形，随着病害的扩展，病斑呈黑色，树皮微突，用手指按压，流出带泡沫的液体，有酒糟气味。
该病的病原菌以菌丝体在病组织上越冬，翌年春季4～5月产生孢子，借风雨传播，并随带菌苗木和接穗等繁殖材料的调运而作远距离传播。
病菌从苗木伤口和皮孔侵入。
为害期从3月下旬开始，直到11月为止。
山核桃树种植密度大，氮肥施用多的发病重；幼树比大树发病重；管理粗放的林子及生长不良的树发病重；阳坡比阴坡重。
病株上的病斑少则几个，多则几十个，对山核桃的生长和产量影响很大，甚至可造成整株枯死。
林业技术人员通过反复对比试验，对此病开出了防治“药方”：首先是要在秋冬落叶后或春季新叶萌生前清除重病枝杆集中烧毁。
对病斑少的树干，可用小刀刮除并涂药，然后用拌有药剂的黄泥浆进行刮口处理；对病斑多的树干可在病斑处划几道横竖线，并喷药，药剂可用80%402抗菌剂200倍液，发病严重的林子要连喷3次，每隔5天一次，4～5月份为孢子释放期，对发病的山核桃树及地面进行喷药消毒，杀死病菌。
在对病树进行防治的同时，也要加强对其抚育管理，增施有机肥料，促进其健康生长，达到从源头上遏制疫情的目的。
【CN109609683A】一种检测橄榄组织中胶孢炭疽菌的LAMP检测引物【专利】
[0010] 4、实用性好：本发明所设计出的LAMP引物，可用于带胶孢炭疽菌的组织中高灵敏 度快速检测 ，因此本方法的实 用性强 ，可满足对带菌组织中存在的 胶孢炭疽菌进行快速可 靠的检测和鉴定的需要；
5、操作简便快速 ：应 用本发明方法 ，对带胶孢炭疽菌的组织进行检测可在数小时内完 成，且LAMP核酸扩增是在等温条件下进行，只需一个水浴锅即可，不需要复杂的仪器设备和 昂贵的分子试剂，结果肉眼直接可见。
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CN 109609683 A
说 明 书
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一种检测橄榄组织中胶孢炭疽菌的LAMP检测引物
技术领域 [0001] 本发明属于植物病理学领域，具体涉及一种快速检测橄榄组织中胶孢炭疽菌的方 法。
背景技术 [0002] 胶孢炭疽菌(C .gloeosporioides)寄主繁多，有2200多种植物，引起炭疽病，给农 业生产造成严重的经济损失。传统病原菌的分类、鉴定主要基于形态学特性、致病性测定 等，但炭疽菌种间甚至种内菌株间形态变异大，近似种之间的分类特征差异微小，造成该属 的分类较难操作。胶孢炭疽菌作为该属内一个主要种和重要种，从形态特征来看，具有集合 种群和复合种的特征，种内菌株间变异大，有多个专化型或生理小种。由于种内菌株从形态 至生理特性存在较大的 变异性 ，使该 种在鉴定上常与一些近似种混淆 ，为此类病害的 有效 防治带来很多困难和问题。同时传统分类鉴定方法耗时长、灵敏度低、易受人为及环境等诸 多因素的干扰 ，不能在病害潜伏期和初发期做出诊断 ，很难对病害发生进行及时的监测和 有效控制。 [0003] 目前传统的病原菌形态学鉴定：费时费力，而且要求操作者需具备扎实的真菌分 类学知识。由于橄榄炭疽病具有潜伏性 ，当橄榄果实表现症状采集样本进行分离时 ，已 错过 了最佳防治时期。以ITS为靶标的普通PCR分子检测、RAPD-PCR方法、巢式PCR技术等：这些检 测方法需要的检测时间比较长，准确性、灵敏度偏低，或需要昂贵的仪器。这些缺陷使其在 基 层农业部门 和资 源不足的 发 展中国 家的 使 用受 到了一定的限 制。根 据I T S设 计 引物的 LAMP技术：由于ITS2区域存在非同源拷贝，致使其不能真实准确地用于病原菌分类。 [0004] 在LAMP检测技术研发中靶标基因的选取和引物的设计与筛选是重要环节。前人的 研究认为ITS2区域存在非同源拷贝，致使其不能真实准确地用于病原菌分类，而翻译延长 因子可以 。翻译延长因子是在种的水平上信息量很高的单拷贝基因 ，利 用翻译延长因子基 因序列设计得到的引物非常适用于病原菌种间的鉴定。本研究利用翻译延长因子序列设计 的特异性引物，可为胶孢炭疽菌的准确鉴定和快速检测提供技术和方法。对病害进行快速 检测可及时防治病害，对于橄榄生产具有重要意义。 [0005] 本发明在LAMP技术的基础上，选取新的靶标基因设计与筛选引物，使这个技术更 准确地用于检测胶孢炭疽菌，为橄榄炭疽病的及时防治提供技术支持。
9种药剂防治山核桃干腐病试验研究
9种药剂防治山核桃干腐病试验研究吴继来;潘伟华;王方;胡景青;楼君芳;叶立前;胡国良【摘要】分别于2016年和2017年,采用林业施药试验测定了不同稀释倍数的30％苯甲·丙环唑乳油、32.5％苯甲·嘧菌酯悬浮剂、40％腈菌唑可湿性粉剂等9种不同农药对山核桃干腐病病斑复发和新病斑形成的影响,比较了凿破病斑和不凿破病斑对喷药的防治效果.结果表明:供试的9种药剂对山核桃干腐病病斑复发及新病斑发生均有显著的抑制效果;凿破病斑处理能显著提高药剂防治效果,2016年,30％苯甲·丙环唑乳油和50％喹啉铜可湿性粉剂防治后病斑复发率分别降低了57.52％和61.14％,新病斑发生率分别降低了36.19％和34.75％;2017年,处理后均无病斑复发和新病斑产生.【期刊名称】《江苏林业科技》【年(卷),期】2018(045)004【总页数】4页(P25-28)【关键词】山核桃干腐病;药剂防治;凿破病斑;茶藨子葡萄腔菌【作者】吴继来;潘伟华;王方;胡景青;楼君芳;叶立前;胡国良【作者单位】浙江省杭州市临安区植物检疫站,浙江杭州311300;浙江省杭州市临安区植物检疫站,浙江杭州311300;浙江省杭州市临安区植物检疫站,浙江杭州311300;浙江农林大学林业与生物技术学院,浙江杭州311300;浙江省杭州市临安区植物检疫站,浙江杭州311300;浙江省杭州市临安区湍口镇林业站,浙江杭州311300;浙江省杭州市临安区植物检疫站,浙江杭州311300【正文语种】中文【中图分类】S664.1;S763.13山核桃(Carya cathayensis)是我国特有的树种，也是浙江省主要特色经济林之一。
浙江省常年种植面积在3.1万 hm2左右，是当前推动浙西北山区新农村建设的优势产业。
近年来，山核桃干腐病在浙江临安、桐庐、淳安等主产区普遍发生，其中临安山核桃干腐病发生面积约为2.67万 hm2，发病率高达86.5%，造成了巨大的经济、生态损失[1]。
山核桃干腐病拮抗细菌的鉴定及其抑菌效果
山核桃干腐病拮抗细菌的鉴定及其抑菌效果葛康康;姚翰文;潘佳亮;郝昕;马玲【摘要】在山核桃干腐病病原菌的培养过程中,发现1株具有抑菌活性的生防细菌BS111,通过划线培养、形态学及分子生物学的方法进行了山核桃干腐病病原菌拮抗菌的分离纯化及鉴定,并采用平板对峙培养法研究了拮抗菌对山核桃干腐病病原菌的抑菌活性,分别测定了拮抗菌的生长曲线以及无菌滤液不同培养时间不同浓度的抑菌活性,同时对拮抗菌无菌滤液的抑菌活性稳定性进行了研究,并通过光学显微镜研究了其抑菌机理.鉴定结果表明,BS111为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).对峙培养结果显示,该拮抗菌菌体对山核桃干腐病病原菌具有明显的抑制作用,抑菌圈直径为18 mm.对拮抗菌生长曲线以及抑菌活性随时间的变化的测定结果显示,拮抗菌BS111在12～24 h为对数期,24 h后进入稳定期,36 h后进入衰亡期,无菌滤液在前12 h抑菌率几乎为0,在24 h时抑菌率迅速增长至70.65％,在60～72 h,抑菌效果有明显提高,最高抑菌率为83.26％.对不同浓度无菌滤液抑菌活性的测定结果表明,抑菌活性随体积分数的降低而下降,EC50值为4.16％.抑菌活性稳定性研究结果表明,无菌滤液对温度不敏感,随pH的升高抑菌活性上升,经紫外光照射后抑菌活性有部分提高.通过光学显微镜观察,无菌滤液能使菌丝变粗,弯曲,有褶皱,部分原生质体消失,菌丝顶端膨大变粗等.%In order to explore one kind of bio-control agent against canker disease of Carya cathayensis which was caused by Bot-ryosphaeria dothidea, the antagonistic bacteria strain BS111 was found, isolated and identified by the method of streak cul-tivation, morphology and molecular biology.The antibacterial activity of antagonistic bacterium against B.dothidea was studied by confronting incubation.The grow curve of antagonistic bacteria strain and theantibacterial activity of different in-cubation time and different concentration were measured.The antibacterial activity stability was studied.Primary antibacte-rial mechanism was studied by optical microscope.BS111 was identified as Bacillus subtil s.Confronting incubation showed that antagonistic bacteria BS111 thallus had significant inhibition effect against B.dothidea.The diameter of the inhibition zone was 18 mm.BS111 was in the logarithmic phase between 12 and 24 h.It went into the stable phase after 24 h, and in-to the decline phase after 36 h.The antibacterial rate of sterile culture filtrate was nearly 0 during the first 12 h.The anti-bacterial rate was increased to 70.65％rapidly during 24 h, and the antibacterial effect was improved significantly from 60 to 72 h with the highest antibacterial rate of 83.26％.With the decrease of the content, the bacteriostatic activity decreased and EC50 was 4.16％.The results of the stability of antibacterial activity showed that the sterile culture filtrate was not sen-sitive to temperature and the antibacterial activity increased with the increase of pH.After UV irradiation, antibacterial ac-tivity was improved partly.Analysis of the probable antifungal mechanism indicated that sterile culture filtrate could make hypha coarsen, bent and fold, it could also make part of the protoplast disappear, and the top of the hypha was enlarged and thickened.【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2018(046)001【总页数】6页(P95-100)【关键词】山核桃干腐病;枯草芽孢杆菌;抑菌活性;光学显微镜;菌种鉴定【作者】葛康康;姚翰文;潘佳亮;郝昕;马玲【作者单位】东北林业大学,哈尔滨, 150001;东北林业大学,哈尔滨, 150001;东北林业大学,哈尔滨, 150001;东北林业大学,哈尔滨, 150001;东北林业大学,哈尔滨, 150001【正文语种】中文【中图分类】S436.64山核桃(Carya cathayensis)是胡桃科(Juglandaceae)山核桃属(Carya)的一种干果树种，落叶乔木[1],具有很高的经济价值和广阔的发展前景[2]。
山核桃干腐病研究进展
山核桃干腐病研究进展刘锦;于炜【摘要】Canker(Botryosphaeria dothidea)is one of the major diseases to Carya cathayensis. In recent years, the disease occurred in the main producing areas, caused large reduction of the nut yield. Presentations were made on the occurrence characteristics of the disease, species of pathogenic bacteria, impact factors and control measures. Analysis showed that isolation and identification of pathogenic bacteria of canker had different results,and it is difficult to control.Suggestions were offered such as studying pathogenesis of canker,taking comprehensive management for better tree health.Meanwhile,disease resistant trees are needed to be selected.%山核桃干腐病Botryosphaeriadothidea是山核桃Caryacathayensis 最主要的病害.近年来该病在山核桃主产区发生严重,造成山核桃大量减产,给山核桃产业带来严重威胁.对山核桃干腐病的发生特点、病原菌种类、影响因子及防治措施等研究内容进行了综述,分析认为山核桃干腐病病原菌分离及鉴定结果不尽相同,缺乏全面系统研究,防治难度高.建议掌握其致病机理,采取综合治理措施促进树体健康,同时还应积极开展山核桃抗病品种的选育工作.【期刊名称】《浙江林业科技》【年(卷),期】2017(037)006【总页数】4页(P99-102)【关键词】山核桃;山核桃干腐病;防治;研究进展【作者】刘锦;于炜【作者单位】杭州植物园,浙江杭州310013;杭州植物园,浙江杭州310013【正文语种】中文【中图分类】S436.64山核桃Carya cathayensis属胡桃科Juglandaceae山核桃属Carya植物，是我国特有的经济树种，其干果也是浙江省特色产品之一。
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910201728.3
(22)申请日 2019.03.18
(71)申请人 浙江农林大学
地址 311300 浙江省杭州市临安区武肃街
666号
(72)发明人 张传清 王琼伟 刘亚慧 徐炳潮
(74)专利代理机构 杭州中成专利事务所有限公
司 33212
代理人 金祺
(51)Int.Cl.
C12Q 1/6895(2018.01)
C12Q 1/6851(2018.01)
C12Q 1/06(2006.01)
C12N 15/11(2006.01)
C12R 1/645(2006.01)
(54)发明名称
用于定量监测山核桃干腐病侵染和传播的
qLAMP方法及所用引物
(57)摘要
本发明公开了一种用于监测山核桃干腐病
病菌孢子数量动态的定量环介导等温扩增引物，
q -LAMP引物组合物由以下4条引物组成：上游外
引物(F3)、下游外引物(B3)、上游内引物(FIP)、
下游内引物(FIB)。
本发明还同时提供了包含上
述q -LAMP引物组合物的定量环介导等温扩增试
剂盒，以及提供了利用该试剂盒进行的山核桃干
腐病病菌孢子数量动态的定量环介导等温扩增
方法，从而获得孢子数量、DNA浓度。
采用本发明
的方法能定量监测雨水、树体和土壤等处的山核
桃干腐病菌孢子数量。
权利要求书1页 说明书11页序列表1页 附图2页CN 109897908 A 2019.06.18
C N 109897908
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109897908 A
1.用于监测山核桃干腐病病菌孢子数量动态的定量环介导等温扩增引物，其特征在于：
q-LAMP引物组合物由以下4条引物组成：
上游外引物(F3)：5’—TGTCCATAGGTTCACCTCCA—3’；
下游外引物(B3)：5’—AGATGGTCTGCCTGTGGT—3’；
上游内引物(FIP)：5’—CAAAGTCAGCGCGATGCAGCGACCGGCCAATGCGTAAG—3’；
下游内引物(FIB)：5’—AGGGTAACCAAATCGGTGCTGCGTCGATTCGCGTTAGCGG—3’。
2.用于监测山核桃干腐病病菌孢子数量动态的定量环介导等温扩增试剂盒，其特征在于：包含如权利要求1所述的q-LAMP引物组合物。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：正/反内向引物FIP/BIP的浓度为1.6μM，正/反向外引物F3/B3的浓度为0.125μM。
4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于：试剂盒还包含定量环介导等温扩增反应预混液，所述反应预混液包含10×ThermoPol Buffer、dNTPs、MgCl2、甜菜碱、10×SYBR Green I、Bst DNA聚合酶、ddH2O。
5.利用权利要求2～4任一所述的试剂盒进行的山核桃干腐病病菌孢子数量动态的定量环介导等温扩增方法，其特征在于：
1)、q-LAMP反应
q-LAMP反应体系：
10×ThermoPol Buffer 2.0μL、10mM的dNTPs 2.0μL、25mM的MgCl2 5.0μL、5M的甜菜碱2.4μL、10×SYBR Green I 1.2μL、8U/μL的Bst DNA聚合酶1μL，20μM的FIP引物1.6μL、20μM 的BIP引物1.6μL、10μM的F3引物0.25μL、10μM的B3引物0.25μL、DNA模板1μL，ddH2O补足至20μL；
扩增条件为恒温65.9℃，1min，进行80个循环；80℃反应10min，终止反应；
2)、获得孢子数量、DNA浓度。
6.根据权利要求5所述的定量环介导等温扩增方法，其特征在于：
孢子数量(个)计算公式为
DNA浓度计算公式为
y为C T值。
2。