体内药物分析问答题

SPE：固相萃取(Solid Phase Extraction，SPE)就是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的。

1、简述体内药物分析的对象及特点

体内药分的对象：人体和动物体液、组织、器官、排泄物

特点：（1）样品量少，不易重新获得

（2）样品复杂，干扰杂质多

（3）供临床用药监护的检测分析方法要求简便、快速、准确，以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒解救措施。

（4）实验室拥有多种仪器设备，可进行多项分析工作。

（5）工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易。需相关学科参与.

2、简述血浆中游离型药物浓度测定的方法？

平衡透析法、超滤法(UF)、超速离心法和凝胶过滤法

3、常见的生物样品有哪些？简述常用的去除蛋白质的方法？

常见的生物样品有：血液，尿液，唾液，组织，毛发。

去除蛋白质的方法：（1）加入与水相混溶的有机溶剂加入水溶性的有机溶剂；可使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，使与蛋白质结合的药物释放出来。常用的水溶性有机溶剂有：乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃等。（2）加入中性盐加入中性盐，使溶液的离子强度发生变化。中性盐能将与蛋白质水合的水置换出来，从而使蛋白质脱水而沉淀。常用的中性盐有：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐及枸橼酸盐等。（3）加入强酸当pH低于蛋白质的等电点时，蛋白质以阳离子形式存在。此时加入强酸，可与蛋白质阳离子形成不溶住盐而沉淀。常用的强酸有：10％三氯醋酸、6％高氯酸、硫酸-钨酸混合液及5％偏磷酸等。（4）加入含锌盐及铜盐的沉淀剂当pH高于蛋白质的等电点时，金属阳离子与蛋白质分子中带阴电荷的羧基形成不溶性盐而沉淀。常用的沉淀剂有CuSO4-NaWO4、ZnSO4-NaOH等（5）酶解法在测定一些酸不稳定及蛋白结合牢的药物时，常需用酶解法。最常用的酶是蛋白水解酶中的枯草菌溶素。

4，生物样品预处理的目的是什么？应考虑哪些问题？

目的：（1）使药物从缀合物及结合物中释放。（2）纯化与富集样品（3）满足测定方法对分析样品的要求。（4）保护仪器性能，改善分析条件

主要应考虑下列问题：（1）生物样品的种类（2）被测定药物的结构、理化及药理性质、存在形式、浓度范围（3）药物测定的目的（4）样品预处理与分析技术的关系

5，用液液萃取发提取生物样品中的药物时，应考虑那些影响因素？

要考虑所选有机溶剂的特性、有机溶剂相和水相的体积及水相的pH值等。

对所选用的有机溶剂，要求对被测组分的溶解度大：沸点低，易于浓集、挥散；与水不相混溶以及无毒、化学稳定、不易乳化等。最常用的溶剂是乙醚和氯仿等。提取时所用的有机溶剂要适量。一般有机相与水相（体液样品）容积比为1：1或2：1。根据被测药物的性质及方法需要，可从实验中考察其用量与测定响应之间的关系，来确定有机溶剂的最佳用量。PH 的影响在溶剂提取中十分重要。水相的pH随药物的理化性质的不同而异，但生物样品一般多在碱性下提取。这是因为多数药物是亲脂性的碱性物质，而生物样品中的内源性物质多是酸性的，一般不含脂溶性碱性物质，所以在碱性下用有机溶剂提取时内源性杂质不会被提取出来。

6，固相萃取法的洗脱方式有哪两种？以亲脂性固相萃取柱为例，简述操作过程。

一种是药物比干扰物质与固定相之间的亲和力更强，因而在用冲洗溶剂洗去干扰物时药物被保留，然后用一种对药物亲和力更强的溶剂洗脱药物。另一种干扰物质较药物与固定相之间

的亲和力更强，则药物被直接洗脱，干扰物质被保留在萃取柱上。

操作步骤：1吸附柱的选择：据检测量大小、待检物质理化性质。2活化填料：采用甲醇活化，有利于吸附剂和目标物质相互作用，提高回收率，还能起到除杂作用。3进样：使样品流经吸附柱进行吸附。4冲洗：用水或者是适当的缓冲溶液对吸附柱进行冲洗，将杂质冲洗掉。5洗脱：选择适当的洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，然后进行浓缩检验或者是直接在线检验

7.以色谱法为例，简述色谱条件优化时可进行哪些试验？

（1）试剂与溶剂试验。照拟定的分析方法进行衍生化反应，萃取分离等样品预处理（反应试剂，衍生化试剂，萃取溶剂等）后，进样分析以考察反应试剂对测定的干扰。通过改变反应条件、萃取方法或萃取条件，甚至检测器类型。使空白试剂信号不干扰药物的测定（如R ＞1.5）。

本步骤主要考察需经化学反应的预处理过程，若预处理过程仅为生物样品的提取分离，则可不进行该步骤，直接进行空白生物基质试验。

（2）空白生物介质试验。取空白生物介质，如空白血浆，按照拟定的生物样品预处理与样品分析方法操作。考察生物介质中内源性物质对测定的干扰，在待测药物(或特定的活性代谢物、内标物质等)的“信号窗”内不应出现内源性物质信号。

（3）质控样品试验。取空白生物基质，加入待测药物制成标准样品和质控样品，照“生物介质试验”项下方法试验，建立分析方法的定量范围与标准曲线，并进行方法的精密度与准确度、灵敏度、药物的萃取回收率等各项技术指标的评估。同时进一步考察待测药物(或内标物)与内源性物质(或其它药物)的分离情况。

8.生物样品分析中标准曲线建立的一般步骤（以色谱法为例）

步骤：（1）标准系列溶液的制备。精密称取待测药物的标准物质适量，用甲醇或其他适宜溶剂溶解并定量稀释制成一定浓度的标准贮备液，冰箱保存备用；精密量取标准贮备液适量，用水或其他适宜溶剂定量稀释制成系列标准溶液。标准溶液的浓度以标准样品中药物浓度的10~50倍为宜，加入量为标准样品总体积的2%~10%。若为难溶性药物，可使用有机溶剂或适当降低溶液浓度，但应除去溶剂后再加入生物基质，否则,在实际样品测定时应加入等体积的溶剂并涡旋混匀，以抵消溶剂的影响。线性模式的标准曲线至少应包含6个浓度点(不包括零点,即空白)。

（2）内标溶液的制备。设定最高浓度为100，最低浓度为1(个体差异)，内标溶液的浓度一般选择与标准系列溶液的中间浓度相当。如：某标准溶液5、10、20、40、80、160、320μg/ml，则内标的浓度应配制成40μg/ml3.

（3）标准系列标准样品的制备。取空白生物基质(如血浆)，加入标准系列溶液适量，涡旋混匀。为防止在标准溶液加入及涡旋混合时造成的损失：①先加入标准溶液②再加入空白生物基质③涡旋混匀实验中的注意事项：①标准模拟生物样品的最高浓度应高于生物体用药后的达峰浓度，最低浓度应低于最高浓度的10％～5％。②应先在离心试管中加入标准溶液，再加入空白生物基质后混悬。③标准溶液加入到试管中后，应先挥干溶剂再加入空白生物基质。

（4）标准曲线的绘制。以待测药物的检测响应(如色谱峰面积或峰高)或与内标物质的检测响应的比值(内标法)(因变量,y)对模拟血药浓度(自变量,x)求得回归方程(y＝a＋bx)及其相关系数（γ）。

在一组由至少7个浓度(不包括零点)构成的标准曲线中，至多可有2个浓度点数据，可予剔除。但应有确切原因，如：（1）样品处理有损失；（2）色谱图有问题；（3）显著偏离标准曲线。其余应有至少5个浓度点在标准曲线上。

9.萃取回收率能否说明方法具有较高的准确度？