利用聚乙二醇为媒介物进行细胞融合
peg诱导原生质体融合的原理
peg诱导原生质体融合的原理1. PEG是什么？首先，我们得聊聊PEG，没错，就是“聚乙二醇”这个小家伙。
听上去可能有点拗口，但它其实是个超级好帮手，特别是在生物技术领域。
你想象一下，PEG就像是个热情洋溢的调解人，它能让两个本来不太搭的原生质体（就像两个陌生人）心甘情愿地走到一起，融合成一个和谐的小团队。
说白了，PEG就是帮助原生质体搞“联谊”的桥梁，帮它们建立联系，让它们的“感情”升温。
2. 原生质体的融合2.1 原生质体是什么？那么，原生质体到底是什么呢？简单来说，原生质体就是植物细胞去掉细胞壁后的样子。
你可以把它想象成一颗颗小水珠，里面充满了各种细胞成分。
在没有细胞壁的束缚下，这些原生质体可以自由移动，仿佛是在水中畅游的小鱼儿。
嘿，听上去是不是挺美的？2.2 融合的意义好，既然有了原生质体，我们就要说说它们融合的意义。
融合就像是一场细胞界的大party，两个不同的原生质体互相拥抱，形成一个新的细胞。
这样一来，它们可以共享彼此的优点，产生新的性状，甚至还能提高抗病性和产量，真是一举多得！想想看，如果你能和朋友一起合作做一件事情，效果肯定事半功倍，原生质体也是这个道理。
3. PEG诱导融合的原理3.1 PEG的工作机制那么，PEG究竟是怎么做到这一点的呢？其实，PEG的主要工作就是改变原生质体的表面性质。
它能让细胞膜的流动性增强，像是给细胞“打了鸡血”。
这样一来，原生质体之间的距离就变得更近，最终就会自然而然地融合在一起。
这种神奇的化学作用，让细胞膜变得像水一样柔软，使得原生质体之间的结合更加顺畅。
就好比一群人围在一起，随着音乐的节奏翩翩起舞，最终组成了一支默契的舞蹈团队。
3.2 注意事项不过，话说回来，虽然PEG很神奇，但也不是万无一失的哦。
在使用PEG的时候，要控制好浓度和时间，不能太多也不能太少，就像做菜时盐的量，得掌握得当。
要是PEG用得过量，可能会导致细胞损伤，甚至让细胞“拒绝”融合，搞得最后连个毛都没得。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理PEG诱导细胞融合原理。
细胞融合是指两个或两个以上的细胞融合成一个细胞的现象，它在生物学研究中具有重要的意义。
PEG（聚乙二醇）是一种常用的细胞融合剂，通过PEG诱导细胞融合可以实现不同细胞的融合，从而产生新的细胞群体。
本文将介绍PEG诱导细胞融合的原理及其在细胞生物学研究中的应用。
首先，PEG诱导细胞融合的原理是利用PEG的高渗透性和毒性，使细胞膜受到破坏，从而促使细胞融合。
在实验中，将两种不同类型的细胞分别与PEG混合，PEG能够破坏细胞膜，使得两种细胞的质膜融合在一起，形成一个新的细胞。
这种方法可以用于融合不同细胞系，或者将外源基因导入目的细胞中。
其次，PEG诱导细胞融合在细胞生物学研究中有着广泛的应用。
通过细胞融合技术，可以将两种不同类型的细胞融合在一起，从而研究它们的互补性和相互作用。
例如，将癌细胞与正常细胞融合，可以研究癌细胞的恶性特性和调控机制；将干细胞与成熟细胞融合，可以研究干细胞的分化能力和再生潜力。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于细胞杂交技术，将两种不同细胞的染色体融合在一起，研究染色体的配对和重组。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于细胞治疗和再生医学研究。
通过将患者的细胞与健康捐赠者的细胞融合，可以修复患者受损的组织和器官。
例如，将患者的干细胞与健康捐赠者的成熟细胞融合，可以使干细胞具有更强的分化能力，从而用于治疗各种疾病和损伤。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于再生医学研究，研究干细胞的再生潜力和分化机制，为再生医学的发展提供重要的实验基础。
综上所述，PEG诱导细胞融合是一种重要的细胞生物学技术，通过破坏细胞膜促使细胞融合，具有广泛的应用价值。
在细胞生物学研究中，PEG诱导细胞融合可以用于研究细胞互补性和相互作用，染色体配对和重组，以及细胞治疗和再生医学研究。
相信随着科学技术的不断发展，PEG诱导细胞融合技术将会在细胞生物学和医学领域发挥越来越重要的作用。
细胞融合实验报告
聚乙二醇介导的细胞融合2012年2月19星期一陈倩倩（118627140313）同作者：郑梦璐谢雨后赵松1、文摘细胞能不受种属的局限可实现种间生物体细胞的融合,使远缘杂交成为可能,因而是改造细胞遗传物质的有力手段。
它的意义在于从此打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限,扩大了遗传物质的重组范围。
但融合后获得的杂种细胞具有染色体异倍性,致使细胞株的遗传性不稳定、植株不育性、畸形、生育迟缓等不符合育种要求的性状出现,直接利用杂种细胞作育种材料目前还有许多障碍。
细胞融合技术避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作,在技术和仪器设备上的要求不像基因工程那样复杂,投资少,有利于广泛开展研究和推广,有着重大的实践意义,正得到科学界的日益重视。
自从20世纪70年代Kao和Michayluk用聚乙二醇( PEG, polyethyleneglycol) 诱导大麦、大豆等植物原生质体融合后PEG 法诱导细胞融合以其容易制备、活性稳定、不需要特别的仪器设备、操作简便等优点, 被普遍地应用于生物、遗传、医药等研究领域. 高体积分数、高相对分子质量的PEG会对细胞产生毒性,是限制其被广泛应用的瓶颈, 此外,由于该方法涉及的影响因素较多, 进一步加大了获得理想细胞融合率的难度.本实验主要研究PEG的浓度和细胞浓度对细胞融合率的影响。
2、背景介绍细胞融合现象最初是在动物细胞中发现的。
1958年日本学者阅田善雄用紫外光灭活的仙台病毒在体外诱导艾氏腹水红纲胞相互融合。
1965年他和Harris等在此基础上各自分别采用灭活的仙台病毒,诱导产主了第一个种间融合并培养成活。
一年后Yerganzan又进一步使用仙台病毒获得了能够增殖的杂种细胞。
后来Littlefield 用缺陷型细胞HGPRT-XTK-细胞杂交,用HAT 选择培养基选出杂种细胞,开创了细胞工程的新纪元,继而推动了整个生物工程的发展。
1975年英国科学家Milestein 和Kohler在体细胞杂交基础上创立了B淋巴细胞杂交瘤技术,他们将在体外不能长期生存的经绵羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）与在体外能迅速增殖的小鼠骨髓溜细胞在聚乙二醇（PEG）或汕台病毒的作用下融合而产生杂交瘤细胞,所得杂交瘤细咆承袭了两种亲代细胞的遗传特性,既保存了瘤细胞在体外迅速增殖传代的能力,又继承了免疫细胞合成和分泌的能力,即能分泌抗绵羊红细胞的抗体。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理
PEG诱导细胞融合原理
PEG是聚乙二醇的缩写，是一种具有高分子量的线性聚合物。
PEG在
生物学研究中被广泛应用，其中最常见的应用之一就是诱导细胞融合。
细胞融合是指将两个或多个细胞融合成一个单独的细胞。
这种技术被
广泛应用于生物学研究中，例如制备杂交瘤细胞、制备单克隆抗体和
产生转基因动物等。
PEG诱导细胞融合的原理是利用PEG分子与细胞膜相互作用，使得两个或多个不同类型的细胞在PEG存在下发生融合。
具体来说，PEG通过以下机制促进了细胞融合：
1. 破坏细胞膜结构
PEG分子可以与水形成氢键，并且可以与亲水性区域结合。
当PEG溶液与细胞接触时，它会插入到细胞表面，并破坏部分磷脂双层结构，
从而使得两个或多个不同类型的细胞暴露出其内部的细胞质。
2. 促进细胞膜的接触
PEG分子可以通过两种方式促进细胞膜的接触。
首先，PEG可以降低水的表面张力，使得两个或多个细胞之间的距离缩小。
其次，PEG可以与细胞膜表面的亲水性区域结合，从而增加了两个或多个细胞之间的吸引力。
3. 促进细胞融合
当两个或多个不同类型的细胞表面接触时，PEG会形成一个临时性的孔道，使得两个或多个细胞质混合在一起。
这些孔道很快就会关闭，并且新形成的单一细胞会拥有所有原始细胞中所包含的遗传物质和生物学特性。
总之，PEG诱导细胞融合是一种简单、有效、广泛应用于生物学研究中的技术。
它利用PEG分子与细胞膜相互作用来促进不同类型细胞之间发生融合，并且可以产生许多重要的研究工具和应用。
PEG促进细胞融合的原理
PEG促进细胞融合的原理PEG（聚乙二醇）是一种无色透明液体，由于其高度亲水性和低毒性，被广泛应用于生物医学领域。
PEG可以促进细胞融合，其原理可以解释为下面三个方面：1.PEG对细胞膜造成的物理和化学效应：PEG在细胞膜表面形成一个涂层，改变了细胞膜的物理和化学特性。
PEG的亲水性导致其与水分子结合形成水合层，使细胞膜表面变得更加亲水，减少了两个细胞膜之间的疏水作用力。
此外，PEG还可以扩大细胞膜的面积，增加细胞膜表面的接触点，有利于细胞膜的相互贴合。
2.PEG对细胞膜孔隙的形成：PEG可以通过提高细胞膜的渗透性使细胞膜发生孔隙的形成。
PEG分子可以通过聚合物链的引导作用，插入到细胞膜的脂质双层中，破坏细胞膜的结构，形成通道或孔隙，使细胞膜之间的融合更容易发生。
PEG对细胞膜的渗透作用有选择性，可以使一些特定的细胞融合，而对其他细胞没有影响。
3.PEG增加细胞融合的反应速率：PEG可以提高细胞融合的反应速率，使融合过程更快进行。
PEG分子与细胞膜表面形成的涂层可以有效降低融合能量的阻碍，缩短融合的时间。
此外，PEG分子的动态行为可以使细胞融合更加容易。
PEG分子可以自发地在细胞膜表面形成流动的涂层，与细胞膜自身发生物理和化学相互作用，使细胞膜的相互贴合更加快速和稳定。
综上所述，PEG促进细胞融合的原理主要包括改变细胞膜的物理和化学特性，形成细胞膜孔隙，以及增加细胞融合的反应速率。
PEG在细胞融合领域的应用已经得到广泛认可，例如用于细胞融合实验、克隆动物的制备等。
然而，PEG的使用也存在一些局限性，例如对细胞存活率的影响、融合产物的不稳定性等问题。
因此，在使用PEG促进细胞融合时，需要根据具体实验条件进行优化，并且配合其他辅助剂或技术手段，以获得更好的融合效果。
PEG诱导细胞融合
科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合日期姓名*** 系年级2011级生物基地学号***实验一利用聚乙二醇为媒介物进行细胞融合摘要细胞融合(cell fusion)是在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。
基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。
诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（离心，震动，电刺激）。
某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusion protein），可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合，因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。
化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变，去掉作用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。
关键词细胞融合；人工诱导；PEG前言人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。
由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。
基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体（homokaryon）；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体（heterokaryon）。
细胞融合不仅可用于基础研究，而且还有重要的应用价值，在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。
细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体，单克隆抗体可以用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物，具有准确，高效，简易，快速等优点。
因此，融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。
这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。
一．实验目的1.了解动物细胞融合的常用方法及原理。
2.掌握利用PEG为介导物对细胞进行诱导融合的方法。
peg介导细胞融合的原理
peg介导细胞融合的原理细胞融合是指将两个或更多的细胞融合成一个细胞，使它们的细胞膜和细胞质合并。
细胞融合在生物学研究和生物医学应用中起着重要的作用。
PEG（聚乙二醇）作为一种常用的介导剂，可以促进细胞融合。
PEG介导细胞融合的原理是利用PEG的特殊化学性质和细胞膜的特性。
PEG是一种高分子化合物，具有良好的生物相容性和溶解性。
当PEG溶液与细胞接触时，PEG分子会与细胞膜上的脂质双层相互作用。
PEG分子通过疏水作用与细胞膜上的疏水基团结合，形成一个覆盖在细胞膜上的PEG层。
这个PEG层可以降低细胞膜的表面能，使细胞膜变得柔软和易变形。
同时，PEG层还可以增加细胞膜之间的相互吸引力，促进细胞的接近。
当两个带有PEG层的细胞接触到一起时，PEG层会相互交叉和扩展，形成一个连续的PEG层。
这个连续的PEG层将两个细胞包裹在内，使细胞膜之间的距离缩短，进而促使细胞融合。
细胞融合发生后，细胞膜和细胞质会合并成一个整体。
融合后的细胞将具有两个或更多细胞的特性和功能。
这种细胞融合可以用于研究细胞的功能、信号传递和细胞重编程等领域。
除了PEG，还有其他一些物质也可以用作细胞融合的介导剂，如电脉冲、病毒和细胞融合素等。
不同的介导剂具有不同的融合效率和细胞存活率。
PEG介导细胞融合的优势在于操作简单、成本低、融合效率高以及对细胞的毒性较小。
然而，PEG介导细胞融合也存在一些限制。
首先，PEG介导的细胞融合需要细胞表面具有一定的疏水性，否则PEG与细胞膜的相互作用较弱，融合效果较差。
其次，PEG介导的细胞融合对细胞的膜完整性要求较高，如果细胞膜受损或破裂，将影响细胞融合的效果。
总结起来，PEG介导细胞融合的原理是通过PEG与细胞膜的相互作用，降低细胞膜的表面能，使细胞膜变得柔软和易变形，促进细胞融合。
PEG介导的细胞融合在生物学研究和生物医学应用中具有重要的作用，但也存在一些限制。
随着科学技术的进步，相信细胞融合技术会不断得到改进和应用，为生物学研究和医学治疗带来更多的突破。
细胞生物学实验报告——动物细胞融合
山东大学细胞生物学实验报告聚乙二醇（PEG ）法诱导的动物细胞融合实验2012/9/11实验目的：了解细胞融合技术的发展过程和主要方法的基本原理，用聚乙二醇(PEG)化学诱导法进行鸡血红细胞的融合实验，掌握实验的基本操作，观察鸡血红细胞融合的不同时期。
实验原理：1. 细胞融合的概念两个或两个以上的细胞或原生质体在自然或人为诱导的情况下细胞质膜相互融合，细胞质相互混合成为一个整体杂合细胞的现象被称为细胞融合。
细胞融合可以发生在同种细胞之间也可以在不同物种间实现。
2. 细胞人工融合的主要方法及基本原理细胞体外融合的主要方法分为病毒诱导，化学诱导和物理诱导。
1953年，M. Kuroya 在临床中第一次分离到仙台病毒（HVJ ）[1]。
1958年，日本学者Okada 发现仙台病毒（HVJ ）能诱导动物细胞融合[2]，其基本原理是仙台病毒的衣壳上有细胞表面受体的结合位点，可以诱导不同细胞凝集，最终使不同细胞的细胞膜相互融合。
1974年，加拿大学者高国楠发明了细胞的聚乙二醇（Polyethyleneglycol ，PEG ）化学融合法，由于该方法对实验条件要求极低，试剂易得，操作简单，成为应用最广泛的细胞融合方法。
化学诱导细胞融合的基本原理是PEG 等化学物质能够诱导细胞膜磷脂分子的极性基团发生结构重排，相互接触的细胞在细胞膜恢复过程中借助磷脂分子的亲和作用和表面张力实现融合。
比之于仙台病毒诱导法，PEG 诱导法的效率提高了几百倍。
80年代，科学家发明了细胞电融合法[4, 5]，电融合法将细胞融合的产率提高到了50%-80%。
电融合法的建立是基于细胞膜表面带电荷的性质。
当在细胞悬液周围加入特定方向的电场时，细胞表面会发生极化现象，相邻的细胞将吸附在一起。
这时突然提高电场强度，细胞间彼此接触的细胞膜会被击穿，细胞膜修复时受到磷脂分子间的亲和作用和细胞膜表面张力的作用将会发生融合。
图2. 以电融合方法得到的3T3-C2融合细胞 （引自J. Teissie 等，1982 )。
PEG法诱导细胞融合
PEG法诱导细胞融合PEG法诱导细胞融合是一种常用的细胞生物学实验技术，通过聚乙二醇（PEG）作为诱导剂，促进两个或多个细胞之间的融合。
这种方法常用于制备单克隆抗体、诱导染色体加倍、诱导基因转移等研究领域。
以下是PEG法诱导细胞融合的详细步骤和注意事项。
一、实验准备1.细胞株：选择需要进行融合的细胞株，可以是两种或多种不同种类的细胞。
2.培养基：选择适合细胞生长和繁殖的培养基，一般采用含10%胎牛血清的DMEM或RPMI-1640培养基。
3.聚乙二醇（PEG）：选择合适浓度的PEG，根据实验需求选择PEG分子量。
常用的PEG分子量有4000、6000、8000等。
4.抗体：选择适当的抗体进行融合后检测，如抗细胞表面抗原的单克隆抗体、抗细胞内抗原的单克隆抗体等。
5.仪器设备：细胞融合仪、显微镜、离心机、培养箱等。
二、实验步骤1.细胞传代：将待融合的细胞株按照常规方法进行传代，使细胞生长到对数生长期。
2.细胞洗涤：将传代后的细胞洗涤两次，去除培养基中的杂质和未贴壁的细胞。
3.细胞融合：将两种或多种细胞按照一定的比例混合在一起，加入适量的PEG，充分摇匀，使细胞充分融合。
4.细胞洗涤：将融合后的细胞洗涤两次，去除未融合的细胞和PEG残留。
5.细胞培养：将融合后的细胞接种到培养基中，加入适量的抗生素和生长因子，置入培养箱中培养。
6.检测和观察：在融合后的不同时间点进行细胞形态学观察和免疫学检测，如荧光染色、ELISA等方法，以评估融合效果。
三、注意事项1.细胞株的选择：PEG法诱导细胞融合适用于大多数动物细胞，但不同种类的细胞融合难度和最佳条件可能不同。
因此，在选择细胞株时需要考虑其种类、状态和生长特性等因素。
2.PEG浓度的选择：PEG浓度是影响细胞融合的关键因素之一。
不同浓度的PEG对细胞的毒性作用和融合效果也不同。
因此，需要根据实验需求和细胞特性选择合适的PEG浓度。
3.细胞的活性：在进行细胞融合之前，需要确认细胞的活性和数量。
PEG促细胞融合实验报告
PEG促细胞融合实验报告实验目的：通过PEG促细胞融合实验，探究细胞融合的原理和过程，以及利用细胞融合实验来研究细胞生物学和生物医学相关领域的应用。
实验原理：PEG（聚乙二醇）促进细胞融合是一种流行的实验方法。
PEG具有双亲性分子，在水溶液中既溶于水，又溶于脂质双层。
通过PEG融合神经元，可以融合细胞的细胞膜，使其形成一个大的细胞。
实验材料：1.神经元细胞系2.细胞培养培养基3.聚乙二醇（PEG）4.显微镜检查设备5.细胞培养相关试剂实验步骤：1.准备两个相同类型的细胞培养皿，将细胞预先培养至适当的密度。
2.将细胞培养基抽取掉，用无血清的培养基洗涤细胞。
并将细胞置于含有2g/LPEG的无血清培养基中。
3.轻轻撤离培养皿，将第一个细胞制备物转移到第二个相匹配的细胞制备物上。
4.将含有PEG的细胞悬液迅速转运到冷缓冲液中禁止PEG分子的扩散。
并禁止PEG浓度随温度变化引起细胞融合。
5.分离悬浮细胞，使用显微镜观察新形成的细胞结构。
实验结果与讨论：在经过实验之后，我们观察到了细胞融合的现象。
在尝试不同类型的细胞融合时，我们注意到不同类型的细胞在融合后可以形成具有新功能的细胞。
细胞融合可以通过PEG分子的作用，在较短的时间内实现细胞膜的融合。
PEG作为双亲性分子，能够同时溶解在水和脂质双层中，在融合时充当桥梁的作用。
实验的关键参数之一是PEG的浓度，不同浓度的PEG可能导致不同程度的细胞融合。
较低浓度的PEG可能只形成微小的细胞团，而高浓度的PEG则可能导致更大的细胞聚集。
细胞融合实验常用于细胞融合技术的开发和细胞混合实验的需要。
该技术可以应用于多个领域，包括研究免疫细胞抗原识别，细胞生物学和生物医学研究。
细胞融合的原理和实验方法的深入理解对于相关领域的研究和应用具有重要意义。
通过细胞融合实验，可以研究不同细胞类型之间的相互作用和交流，为细胞生物学和生物医学研究提供新的视角和手段。
综上所述，PEG促细胞融合实验是一种重要的实验方法，可以用于深入研究细胞融合的原理和应用。
实验二聚乙二醇(PEG)介导的细胞融合
【结果观察】 在高倍镜下可以看到有两个或两个以上 的鸡红细胞膜融合在一起，形成一个同 核体细胞。要注意辨别融合细胞与重叠 的鸡红细胞。
【结果观察】 在高倍镜下可以看到有两个或两个以上 的鸡红细胞膜融合在一起，形成一个同 核体细胞。要注意辨别融合细胞与重叠 的鸡红细胞。
【实验报告】 l．在显微镜下按顺序绘制所观察到的细 胞融合各阶段，并注明主要特点。 2．什么是同核体、异核体? 细胞融合主 要有哪几种方法？简述细胞融合的应用。
【实验用品】 1．材料 鸡红细胞 2．器材和仪器：显微镜、离心机、水浴 箱、刻度离心管、试管、载玻璃片、盖 玻片 3．试剂 Alsver液(pH7.4)、0.85％生理盐 水、GKN液、50％PEG（MW 4000） Nhomakorabea
【方法步骤】 1．采血及鸡红细胞悬液的制备（同教材57页）。 2．（共2组）取鸡红细胞悬液1mL，移人10mL离心管， 加入4mL 0.85％生理盐水混匀。1000r／min离心5 min。 3．弃上清液(用吸管吸去)，加0.85％生理 盐水5mL，用 指弹法（或吸管轻吹）将细胞团块弹散，混匀后1000r ／min离心5min；重复上述条件，再离心洗涤1次。 4．收集最后1次离心沉淀的血细胞，加入适量（5－ 8mL）的GKN液，轻吹散，混匀。 5．（每4人）取悬液1mL到1个试管中，加入0.5 mL预 热的50％PEG混匀，置于30℃水浴中温浴3－5min；取 未融合和融合的血细胞悬液各1滴分别滴于载玻片上的 两侧，盖上盖玻片。 6．利用光学显微镜 (高倍) 以未融合细胞为对照观察2个 靠近细胞形成融合的过程。
实验二：聚乙二醇（PEG）介导 的细胞融合
【课前预习】 1．介导细胞融合的方法有哪些？ 2．细胞融合技术有哪些方面的应用？
细胞生物实验设计-细胞融合
一、实验目的1.了解聚乙二醇PEG诱导细胞融合的原理与技术2.学习并了解细胞融合技术二、实验原理细胞融合又称细胞杂交，是指两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的现象。
细胞融合技术是细胞工程骨干技术，除了用于一些基础性研究外，在植物方面主要用于合成新药，在动物方面主要用于产生单克隆抗体。
,诱导细胞融合的因素主要有三类：生物因数，物理因数，化学因素。
本实验主要应用化学因数PEG诱导细胞融合。
聚乙二醇PEG结构为HOH2C（CH2OCH2）n CH2OH，相对分子质量在200~6000。
PEG能够改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。
三、实验材料与器械胃粘膜上皮细胞，脐血干细胞20ml离心管若干，试管若干，50%聚乙二醇，PKH26染料，RPIM1640完全培养基，/无血清培养基，完全培养基，低俗离心机，恒温水浴锅， 96孔板，荧光显微镜四、实验步骤（一）1.胃粘膜上皮细胞洗涤后去除消化酶，制备成单细胞悬液，在室温下进行试验:2.将处理后的细胞置于离心管中，添加适当无血清培养洗涤，400rpm离心5min3.去除上清液，残留液量<25ul，用1ml Diluent C重悬细胞4.将细胞悬液与1ml PKH26染料迅速混合5 .25℃培养2~5min，期间轻轻颠倒试管数次6.加入2ml兼容蛋白液（1% BSA）培养1min，终止染色^7.加入4ml完全培养基，25℃,400rpm 离心5min8.去除上清后将细胞移至新的离心管内再洗涤细胞三次9.用完全培养基洗涤细胞，离心后调节至所需细胞浓度10.按照实验步骤1~9方法处理脐血干细胞（二）-1.将处理后的胃粘膜上皮细胞和脐血干细胞溶液加入5ml PBS混合均匀，吹悬2.室温下400rpm离心5min，去掉大部分上清液，留下液体将沉降的细胞分散与其中，制成细胞悬液3.轻轻摇动试管，逐滴加入37℃下预热的50%聚乙二醇溶液4.将此悬液置于37℃水浴中培育15s，缓慢的加入无血清培养液5ml，终止PEG的作用5.缓慢倾斜离心管4~5次，以1500rpm离心5min，去除大部分上清液，留下液体悬浮细胞6.加入5ml RPIM1640完全培养基，混匀后加入96孔板中培养7. 12小时后倒置荧光显微镜下照相观察五、预计实验结果1.部分细胞发生融合。
利用聚乙二醇(简称PEG)为媒介物进行细胞融合
细胞生物学实验报告题目：利用聚乙二醇（简称PEG）为媒介物进行细胞融合姓名：余振洋学号：200900140156 系年级：09级生科3班时间：2011/3/10一、【实验目的】1、了解细胞融合的基本原理。
2、掌握利用聚乙二醇（PEG）为介导物对各类细胞的融合方法。
二、【实验材料】试剂：1、Alsver液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠0.80g，NaCl 0.42g，溶于100ml双蒸水中。
2、0.85％生理盐水3、GKN液：NaCl 8g、KCl 0.4g、Na2HPO4·2H2O 1.77g、Na2HPO4·H2O 0.69g，葡萄糖2g，酚红（phenolrad）0.01g，溶于1000ml蒸馏水中。
4、50％PEG液：实验前临时配制，根据需要称取定量PEG（Mw=4000），放入刻度试管或刻度离心管内，在沸水浴中加热，使其熔化，待冷却至50℃时，加入预热至50℃等体积的GKN液，混匀。
器材：显微镜，离心机，水浴箱，离心管，滴管，载玻片，盖玻片三、【实验原理】细胞融合(cell fusion)是指两个或多个细胞通过质膜融合形成单个双核或多核细胞的现象称为细胞融合,结果产生杂交细胞(hybrid)，亲本相同的融合细胞称为同核体(homokaryon),反之称为异核体(heterokaryon)。
当前普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。
本实验所用材料为鸡的血细胞，这是因为：1.鸡血细胞具有细胞核，便于对融合细胞进行鉴别；2.实验材料便宜、易得。
细胞融合与否，可通过观察细胞内核的数目来进行鉴别。
细胞内只有一个核，定为未融合细胞；有二至多个核，定为融合细胞。
四、【操作步骤】1、取鸡血2ml和2ml Alsever液，再加入6ml Alsever液，混匀后制悬液（可在4℃保存）2、取（1）中溶液1ml加上4ml 0.85％的NaCl溶液，混匀后1200r/min离心5分钟，去除上清液。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理
PEG诱导细胞融合原理
细胞融合是指两个或多个细胞融合在一起形成一个细胞的过程。
细胞融合技术在生物医学领域有着广泛的应用，尤其在细胞治疗和生物医学研究中发挥着重要作用。
PEG（聚乙二醇）诱导细胞融合是一种常用的细胞融合方法，其原理是利用PEG的特殊性质将细胞膜融合在一起，促使细胞融合。
PEG是一种聚合物，具有疏水性和亲水性双重特性。
在细胞融合实验中，PEG可以渗透细胞膜，打破细胞膜的完整性，从而促使细胞融合。
具体来说，当两个细胞暴露在含有PEG的溶液中时，PEG会与细胞膜上的脂质分子相互作用，降低了细胞膜的表面张力，使细胞膜之间更容易发生融合。
在实际操作中，研究人员首先将待融合的细胞分别悬浮在含有PEG 的溶液中，然后通过离心等方法将两种细胞混合在一起。
接着，将混合后的细胞放回培养皿中进行培养，待细胞融合完成后，可以观察到形成了融合细胞。
PEG诱导细胞融合的优点在于操作简单、效率高、适用于多种类型的细胞。
然而，也存在一些局限性，比如融合后的细胞可能存在细胞周期不同、染色体数目不同等问题，需要在实验设计和数据解读时进行考虑。
除了在生物医学研究中的应用，PEG诱导细胞融合还被广泛应用于融合细胞疫苗的制备、融合抗体的生产等领域。
通过探究PEG诱导细胞融合的原理，可以更好地理解细胞融合的机制，为相关领域的研究和应用提供理论支持。
总的来说，PEG诱导细胞融合是一种重要的细胞融合方法，通过利用PEG的特殊性质促使细胞融合，为细胞治疗、生物医学研究等领域提供了重要的技术手段。
随着科学技术的不断发展，相信PEG诱导细胞融合技术将在未来发挥更加重要的作用。
PEG法诱导细胞融合
实验十PEG法诱导细胞融合一、实验目的1.了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合的基本原理。
2.通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。
二、实验原理细胞融合（cell fusion）又称体细胞杂交，是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞，随后，异核体同步进入有丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞（hybrid cell）。
细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。
依据融合过程采用的助融剂的不同，细胞融合可分为：①病毒诱导的细胞融合，如仙台病毒(hemagglutinating virus of Japan,HVJ);②化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇（polyethyleneglycol ,PEG）;③电场诱导的细胞融合；④激光诱导的细胞融合。
PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子量的多聚体。
PEG可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，引起细胞融合。
该方法应用相对分子质量为400~6000的PEG溶液引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。
融合的频率和活力与所用PEG分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。
三、实验仪器、材料和试剂（１）仪器、用具：注射器、刻度离心管、离心机、血细胞记数板、水浴锅、滴管、显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒精灯等。
（２）材料：成年家鸡。
（３）试剂1）0.85%NaCl溶液。
2）GKN液：8.0gNaCl，0.4g KCl,1.77 g Na2HPO4·2H2O，0.69 g NaH2PO4·H2O,2.0g葡萄糖,0.01g酚红,溶于1000ml重蒸水中。
3）50%（m/v）PEG溶液：①取50gPEG （相对分子量=4 000）放入100ml瓶中，高压灭菌20min.②让PEG 冷却至50-60℃，勿让其凝固。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理PEG（Polyethylene glycol）是一种聚合物化合物，由重复的乙二醇单元组成。
在生物学中，PEG常被用作诱导细胞融合的工具。
细胞融合是指将两个或多个细胞融合在一起形成一个细胞，使其合并为一个细胞体。
PEG诱导细胞融合的原理是通过PEG的特殊性质，促进细胞膜的融合，使细胞内的物质互相交流和共享。
了解细胞融合的背景是很重要的。
细胞融合在生物学研究中有着广泛的应用，可以用于细胞的混合和杂交，从而产生新的细胞型态，用于研究细胞的功能和特性。
细胞融合还可以用于生物医学领域，例如将癌细胞与正常细胞融合，以研究癌细胞的特性和机制。
此外，细胞融合还可以用于克隆动物和干细胞研究等领域。
在细胞融合实验中，PEG起到了至关重要的作用。
PEG具有一种特殊的性质，即可以在细胞膜上形成孔道，促进细胞膜的融合。
这是因为PEG在水中具有很强的溶解性，可以与细胞膜上的脂质相互作用，改变膜的结构，使细胞膜之间的距离缩短，从而促进融合。
具体而言，PEG诱导细胞融合的过程可以分为以下几个步骤。
首先，将需要融合的细胞分别收集，并用培养基或缓冲液洗涤干净，以去除细胞外的杂质。
然后，将细胞悬浮于含有PEG的溶液中，使PEG 与细胞膜相互作用。
PEG通过与细胞膜上的脂质相互作用，改变细胞膜的结构，使细胞膜之间的距离缩短。
此时，细胞膜上会形成孔道，细胞膜之间的融合就可以发生。
最后，将处理后的细胞培养在适当的培养基中，以促进融合细胞的生长和分裂。
PEG诱导细胞融合的原理并不复杂，但它在细胞融合实验中起到了至关重要的作用。
通过PEG的作用，细胞膜之间的距离缩短，细胞膜上形成孔道，从而促进细胞融合。
细胞融合的应用领域广泛，可以用于研究细胞的功能和特性，以及生物医学领域的应用。
同时，PEG诱导细胞融合的实验过程相对简单，只需要将细胞与含有PEG 的溶液接触即可。
因此，PEG诱导细胞融合成为了一种常用的实验方法。
PEG诱导细胞融合是一种重要的实验方法，通过PEG的特殊性质，可以促进细胞膜之间的融合，实现细胞的融合。
细胞融合技术常用的方法和聚乙二醇作促融剂的原理
细胞融合技术常用的方法和聚乙二醇作促融剂的原理细胞融合技术常用的方法问题的提出细胞融合技术是细胞工程中的一项核心基础技术。
细胞融合技术在基因定位、基因表达产物、肿瘤诊断核治疗、生物新品种培育及单克隆抗体技术等领域有着非常广泛的应用前景。
单克隆抗体技术就是通过细胞融合技术发展起来的，在生命科学研究和应用方面产生了重大影响。
生物技术发展也很快，细胞融合技术也在发展，到底哪一种技术是最常用，教材也没有统一说法，所以也很难说哪种最常用。
问题：常用的细胞融合技术有哪些？聚乙二醇（P E G）诱导细胞的机理是怎么样的？01诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。
1.病毒诱导融合有许多种类的病毒能介导细胞融合，最常用的是灭活的仙台病毒（H V J），为R N A病毒。
病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合，胞浆相互交流，最后形成融合细胞。
2.化学融合剂诱导融合化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚乙二醇（P E G）。
P E G用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个打和的双核或多核融合细胞。
聚乙二醇是人工合成药剂，它具有高融合性，且每批融合活性始终如一，融合效率稳定，对细胞毒性亦较低，使用简单，成为细胞触合的良好促融剂。
3.电融合是指细胞在电场中极化成偶极子，并沿着电力线排列成串，然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。
优点：融合率高、重复性强、对细胞伤害小；装置精巧、方法简单、可在显微镜下观察或录像观察融合过程；免去P E G诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。
植物细胞杂交过程示意图02聚乙二醇是一种用于原生质体融合中的优良化学促融剂。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理- 引言在生物学和医学领域，细胞融合是一项重要的技术，其应用广泛，包括胚胎学研究、克隆技术、组织重建和干细胞研究等。
近年来，一种名为PEG诱导细胞融合的方法受到了广泛关注和应用。
本文将深入探讨PEG诱导细胞融合原理的多个方面，从基本概念到应用领域，以期帮助读者更好地理解这一重要技术。
1. PEG诱导细胞融合的基本原理PEG，全称聚乙二醇（Polyethylene glycol），是一种无机化合物，在细胞融合中被用作诱导剂。
PEG能够在一定条件下促使细胞膜的融合，从而使细胞融合成为可能。
2. PEG诱导细胞融合的条件在进行PEG诱导细胞融合时，需要考虑一些关键条件。
细胞必须处于活跃状态，以确保融合的成功性。
PEG的浓度和温度也是非常重要的参数，过高或过低的浓度和温度都会影响融合效果。
融合细胞的类型和比例也对融合结果有一定影响。
3. PEG诱导细胞融合的作用机制PEG诱导细胞融合的作用机制尚不完全清楚，但目前的研究认为其主要是通过对细胞膜的作用来促使细胞融合。
PEG可以改变细胞膜的性质，增加膜的可塑性，从而使细胞融合点的形成成为可能。
PEG还可能通过改变膜蛋白的构象和作用，进一步促进细胞融合。
4. PEG诱导细胞融合的应用领域PEG诱导细胞融合在多个领域具有广泛的应用。
在胚胎学研究中，利用PEG诱导的细胞融合可以用于制造嵌合胚胎，以研究胚胎发育过程和基因调控机制。
在克隆技术中，PEG诱导的细胞融合可以用于制造嵌合胚胎，进一步获得胚胎干细胞。
PEG诱导细胞融合还可以应用于组织重建和干细胞研究等领域。
5. 我对PEG诱导细胞融合的观点和理解在我看来，PEG诱导细胞融合是一种非常有潜力的技术，可以在多个领域带来重要的突破和进展。
通过PEG诱导细胞融合，我们可以更好地理解细胞融合的机制，揭示细胞发育和生命过程中的重要信息。
PEG诱导细胞融合还可以应用于医学研究和治疗，如干细胞治疗和组织工程等。
细胞融合常用的化学融合剂
细胞融合常用的化学融合剂细胞融合是将两个或多个细胞融为一体的过程，常用于细胞基因工程、细胞杂交和免疫细胞学等领域。
化学融合剂是实现细胞融合的一种常见方法，本文将介绍常用的化学融合剂及其作用机制。
1. 聚乙二醇（Polyethylene glycol, PEG）PEG是一种水溶性聚合物，具有良好的生物相容性和生物相似性。
PEG可在低温下与细胞膜相互作用，使细胞膜破裂，并促进细胞融合。
PEG的作用机制是通过提高细胞膜的流动性和可塑性，使膜上的蛋白质和脂质发生变形和扭曲，从而形成细胞融合孔。
PEG的优点是操作简便、成本低廉、融合效率高，但也存在一些缺点，如对细胞的毒性较大、融合后的细胞易于分离等。
2. 聚乙烯亚胺（Polyethyleneimine, PEI）PEI是一种带正电荷的高分子化合物，可与带负电荷的细胞膜相互作用，促进细胞融合。
PEI的作用机制是通过与细胞膜上的负电荷分子相互作用，形成融合孔。
PEI的优点是不具有毒性、融合效率高、融合后的细胞稳定性较好等，但也存在一些缺点，如操作复杂、融合条件较为苛刻等。
3. 甘油（Glycerol）甘油是一种三价醇，具有良好的生物相容性和生物可降解性。
甘油可与细胞膜相互作用，使细胞膜发生变形和破裂，并促进细胞融合。
甘油的作用机制是通过与细胞膜上的磷脂相互作用，降低膜的表面张力，形成细胞融合孔。
甘油的优点是操作简便、成本低廉、不具有毒性等，但也存在一些缺点，如融合效率低、融合后的细胞易于分离等。
4. 聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol, PVA）PVA是一种水溶性高分子化合物，具有良好的生物相容性和生物可降解性。
PVA可与细胞膜相互作用，使细胞膜发生变形和破裂，并促进细胞融合。
PVA的作用机制是通过与细胞膜上的脂质相互作用，降低膜的表面张力，形成细胞融合孔。
PVA的优点是不具有毒性、操作简便、融合效率高等，但也存在一些缺点，如融合后的细胞易于分离、融合条件较为苛刻等。
实验5诱导细胞融合——聚乙二醇法
一、实验目的 了解细胞融合的原理，初步掌握用PEG诱导
细胞融合的方法。 二、实验原理 聚乙二醇（PEG）结构为： CH2(OH)-(CH20CH2)n-CH2OH； 相对分子质量在2000-6000均可用作细胞融合剂。
普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构， 使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组， 由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼 此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。
50％PEG混合液配置：称取少许PEG放人刻度离心 管内，在沸水浴中加热， 使其溶化，待冷却至50℃ 时，加入预热至50℃的等体积的GKN液，混匀。注 意使用前配制。
6.取悬液1mL到7ml离心管中，加入0.5～0.8 mL预热 的50％PEG （慢慢沿着离心管壁逐滴加入，边加边 轻摇离心管,使混匀），38℃水浴中温浴30min。
2.取细胞悬液1mL，移人7mL离心管， 加入4mL 0.85％生理盐水混匀；2000r/min离心5 min。
3.弃上清液（用吸管吸去），加0.85％生理 盐水至 5mL，混匀后2000r/min离心5min。
4.重复上述条件，再离心洗涤1次。
5.收集最后1次离心沉淀的血细胞，加入 适量的 GKN液溶液，按压积红细胞体积配成10％的红细胞 悬液。
细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融 合的细胞其细胞核总数与该视野内所有细胞(包括 已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百分比 表示。
三、实验材料与用品
材料：鸡血红细胞 试剂：
（1）Alsver液： （2）0.85％生理盐水： （3）GKN液： （4）Ringer溶液： （5）Hanks液： （6）50％PEG混合液 （7）0.2%次甲基蓝
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验报告
课程名称： 细胞生物学 指导老师： 成绩：
实验名称： 利用聚乙二醇为媒介物进行细胞融合 实验类型： 细胞结构观察 同组学生姓名： 一、实验目的和要求（必填） 三、主要仪器设备（必填） 五、实验数据记录和处理 七、讨论、心得
二、实验内容和原理（必填） 四、操作方法和实验步骤 六、实验结果与分析（必填）
一、实验目的和要求
⒈掌握小鼠脾脏细胞的提取方法。
⒉学习细胞融合技术，观察不同处理条件获得的融合细胞的形态及变化，计算融合率 。
二、实验内容和原理
细胞融合是两个或以上保持完整的细胞在特殊条件的作用下，相互接触进而发生膜融合， 最终使细胞融合成双核或多核细胞的现象。
细胞融合得以发生，是基于细胞质膜的流动性以 及至双分子层自组装的特点。
细胞融合是细胞工程试验技术之一，对于动、植物细胞均取得了重要的研究和应用成果。
例如，能够产生抗体的淋巴细胞与肿瘤细胞间的细胞融合是制备单克隆抗体的基础。
早熟染 色体凝集的研究与有丝分裂促进因子的发现也是基于细胞融合技术。
植物细胞原生质体融合 是植物细胞工程的一种技术手段，在植物育种等方面有着较为广泛的应用。
实现细胞融合的方法主要有化学诱导融合、电刺激诱导融合以及灭活病毒诱导融合，本 实验采用化学诱导融合，用 PEG 处理小鼠脾脏细胞。
在使用PEG 溶液处理提取的小鼠脾脏细胞后，再以GKN 液清洗，细胞的融合效果较好。
PEG 是一种高分子化合物，相对分子质量在200~6000 之间的均可用作细胞融合剂，常用质量
浓度是200~500g/L。
PEG 能诱导细胞融合的机制是由于PEG 能够吸收大量水分，当两个相邻
的细胞间的水分被PEG 大量吸收时，细胞质膜磷脂分子的排列发生改变；为了使细胞处于较
为稳定的状态，相邻的细胞由于接口处双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质
流通。
这种方法稳定性好，但对细胞有一定的毒性。
电刺激融合的基本原理为：在瞬时的强电场的作用下，细胞膜发生可逆性的电击穿，可
诱导相互接触的细胞膜的融合，从而发生细胞融合。
这种方法无化学毒性，对细胞损伤小。
灭活病毒诱导细胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋
白发生作用，是细胞相互凝集，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，
细胞发生融合。
在本实验中，细胞融合的效率可以用融合率来衡量。
取一视野，融合率=发生融合的细胞
数/视野中的所有细胞数。
其中，判断细胞是否融合的依据是两个细胞核是否有部分重合。
影
响效率的因素包括细胞密度、融合剂的浓度和处理时间。
为研究这些因素对实验的影响，可
以设置多组对照（时间梯度、浓度梯度对照，空白对照）。
三、主要仪器设备
⒈材料
小白鼠
⒉器材
冷冻离心机、解剖盘、镊子、剪刀、载玻片、盖玻片、滴管、小烧杯、显微镜、离心管、移液枪。
⒊试剂
装
生理盐水、固定液（甲醇-冰醋酸3:1）、75mmol/L KCl溶液、GKN 液、PEG 溶液、90%乙醇、吉姆萨染订
线
液。
四、操作方法和实验步骤
⒈取脾脏
小鼠断颈处死，酒精棉球消毒后在方盘上解剖，打开腹腔，取出脾，去除多余脂肪组织，放入培养皿中，
37 ℃GKN液清洗3次。
每次5mL。
⒉取脾脏细胞、计数
用1毫升注射器向脾内注射0.2mL，置于含有5毫升GKN液的培养皿中，将注射器针头折弯成L型，将脾细胞轻轻挤出，吹打使细胞散开。
不锈钢网过滤细胞悬液，加入5mLGKN液1500r/min离心10min，弃上清液。
5mlGNK重悬，细胞计数。
⒊融合
40℃水浴预热1-2min。
在预热的离心管中迅速加入不同浓度的PEG溶液。
这里要求一滴一滴加入，但加入时间不超过30秒，边加边摇动离心管，加完后室内静置10分钟。
1500r/min离心10分钟，弃上清液。
⒋制细胞悬液
加入少量GKN液，吹打使细胞散开
⒌制片
涂片, 烘干或电吹风吹干
⒍固定
少量90%乙醇滴于玻片上固定90s
⒎染色
添加Gimsa工作液于玻片上染色20min。
弃染液，水冲洗（注意：水冲洗时候不要直接冲洗有细胞面，可以冲洗玻片反面）
⒏镜检
在低倍镜下找到融合的细胞，进行融合细胞的计数，计算融合率。
实验名称：_ __________________姓名：学号：
五、实验结果
装
订
线
图一.细胞计数
细胞计数结果
五个区域取平均后计算细胞悬液的细胞密度
（76+94+69+95+102）÷5×25÷10-4 =2.18×107（个）/cm3
后面的实验因为固定没有成功，未能观察到染色成功的细胞，故后续实验采用同班其他小组的实验数据和图：（图2-图6）
实验名称：_ __________________姓名： 学号：
下文比例均为染色细胞液：PEG
1:14 1:1
图
2. 1:14细
胞融合染
色图 图3. 1:1细胞融合染色图
融合效率： 融合效率：
0÷1×100% =0% 12÷21×100% =57.14%
装
订
线
4:1 9:1
图4. 4:1细胞融合染色
图
实验名称：_ __________________姓名： 学号：
融合效率： 融合效率：
63÷146×100% =43.15% 64÷272×100% =23.53% 14:1
装
订
线
图5 9:1细胞融合染色图
图6. 14:1细胞融合染色图
融合效率：
155÷378×100% =41.01%
将上面的实验结果总结到下表：
表1.不同PEG浓度下细胞的融合效率
细胞悬液：PEG 1：14 1:1 4:1 9:1 14:1 融合效率（%）0 57.14 43.15 23.53 41.01
结论：从1:1至9:1，融合效率是下降的，9:1到14:1，融合效率反而有所上升。
六、分析与讨论
⒈结果分析
数据存在较大误差，固定误差为人工计数的判断误差，细胞扎堆而未融合的情况。
经过分析与查资料得出影响细胞融合率的因素，如下：
①PEG的分子量与浓度: 细胞融合效果与PEG的分子量及其浓度成正比；但PEG的分子量越大、浓度
越高, 对细胞的毒性也就越大。
为了兼顾二者，在实验时常常采用的PEG分子量一般为1000~4000，浓
度一般
实验名称：_ __________________姓名：学号：
为40~60%。
②PEG的pH值: 经验证，PEG的pH值在8.0~8.2之间融合效果最好。
③PEG的处理时间: 处理时间越长，融合效果越好, 但对细胞的毒害也就越大。
故一般将处理时间限制在
1分钟之内。
本实验中细胞融合后无需继续培养, 故处理时间可适当放宽至数分钟。
④融合时的温度: 由于生物膜膜的流动性与温度成正比，故细胞的融合效果也与温度成正比。
因此，为了
获得更好的融合效果, 在细胞可能承受的温度范围内可适当提高处理的温度。
结合实验情况，总结出14:1融合效率出现反常性增高的原因可能为融合时间延长（该组是制片最晚的一组，融合的时间比其他组长）。
装
订
线。