微生物实验专题
实验五 微生物的分离、接种及培养法
实验五微生物的分离、接种及培养法一目的要求1.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。
2.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。
二实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离方法有： 1) 平板划线分离法；2）稀释平板分离法。
在食品发酵工业中，通过微生物的分离、纯化，选育优良的微生物菌种，以提高产品的质量和产量；在食品卫生管理方面，需要进行微生物检测，必须将微生物单一分离出来，加以鉴别和研究。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。
三实验材料1.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样品。
2.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼脂培养基（斜面、平板）。
3.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。
四实验内容与步骤（一）微生物的分离技术1. 平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个菌落，从而达到分离的目的。
具体方法如下：倒制平板→制备含菌样品稀释液→划线→倒置适温培养→观察记录（1)倒制平板：将固体培养基熔化→冷却至 50-55℃→注入培养皿内 15ml（无菌操作）→旋匀→静置凝固→即成平板→在皿盖边贴标。
（2)含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌悬液即可，能直接划线的样品（如体液、黏液、污水等），可省去这操作。
（3)划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸入培养皿，轻轻划线（切勿把平板表面划破）。
然后将培养皿倒置放入恒温培养箱37℃，培养24-48 小时，观察平板上出现的现象，注意菌落的形状，并做记录。
微生物试验
四、名词解释1. 消毒（disinfection）：指杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。
2. 灭菌（sterilization）：杀灭物体上所有微生物的方法，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。
3. 无菌（asepsis）：指不存在活菌的意思。
防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，称为无菌操作。
4. 防腐（antisepsis）：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。
细菌一般不死亡。
使用同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常为防腐剂。
5. 抑菌（bacteriostasis）：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。
常用的抑菌剂为各种抗生素，可在体内抑制细菌的繁殖，或在体外用于抑菌试验以检测细菌对抗生素的敏感性。
8. 抗链球菌溶血素O试验（antistreptolysin O test, ASO test）：是用已知的链球菌“O”溶血毒素抗原检测患者血清中是否有相应链球菌溶血素O抗体的中和试验。
它常用于辅助诊断急性风湿热的风湿活动期。
其效价大于1：400以上有参考意义。
9. 肥达试验（Widal test）：利用已知的伤寒沙门菌菌体(O)抗原和鞭毛(H)抗原以及甲型、乙型、丙型副伤寒沙门菌鞭毛（H）抗原分别与不同稀释度的患者血清做定量凝集试验。
根据抗体的动态变化，用于辅助诊断伤寒和副伤寒。
10. 外斐试验(Weil-Felix test)：是指某些普通变形杆菌X19、X2和Xk菌株含有的菌体(O)抗原，可与斑疹伤寒立克次体和恙虫病立克次体的部分抗原发生交叉反应，故可用以代替立克次体作为抗原与患者的血清进行凝集反应，此称为外斐试验，用以辅助诊断有关的立克次体病。
11. 锡克试验（Schick test）：用少量毒素测定机体内有无抗毒素免疫的一种方法。
在一侧皮内注射白喉毒素0.1ml，若无任何反应，表示机体对白喉有免疫力；若24h－48h注射部位开始出现红肿，直径1cm-2cm，表示机体对白喉易感，无免疫力，血液中无抗毒素中和毒素。
微生物工程实验报告
实验1 培养基的配制和灭菌一、目的要求1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
2.了解几种灭菌方法，掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
3.熟悉菌种分离筛选的前期准备工作及操作方法。
4.每2人一组，每人一份实验报告。
二、实验材料1.药品：酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、1N HCl、1N NaOH2.设备：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、75%酒精棉。
3.材料：天平、药匙、电炉、pH 试纸、烧杯、量筒、5mL、10mL 注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、移液器（1mL 0.2mL）、牛皮纸、线绳、标签等。
三、实验内容(一) 培养基的配制1．培养基的配制方法和步骤1)称量：按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。
2)溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。
3)调pH 值：用1N NaOH 或1N HCl 调pH，用pH 试纸对照。
4)加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当补水。
5)分装：注意不要污染试管塞或纱布。
6)包扎成捆：用记号笔注明何种培养基。
7)灭菌：在高压锅中， 115 °C 高温灭菌30min。
2．培养基的配制A.富集培养基（液体）：海水2216E 液体培养基（g/L）：蛋白胨5.0，酵母粉1.0，海水1L，pH 8.0。
取50mL 分装250mL 三角瓶后，8 层纱布封口，外包1层牛皮纸，121℃，高温灭菌20min。
B. 2216E 斜面（固体）：海水2216E 液体培养基中加入2%的琼脂粉，加热溶化琼脂，每支试管内。
加入3mL，121℃高温灭菌20min，灭菌后摆斜面。
C. 无菌生理盐水和保种液：生理盐水： NaCl 0.85% 蒸馏水配制。
每支试管加入5mL，盖上试管帽、包扎、121°C 高温灭菌20min。
保种液：生理盐水，加25%甘油D. 碳源优化培养基：以海水2216E 液体培养基（蛋白胨0.5%，酵母粉0.1%，磷酸铁0.01%，人工海水，pH7.6）为基础，碳源分别是：葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠、乳糖，每种碳源的添加量为1%。
微生物实验设计-产蛋白酶菌株的筛选
微生物实验设计-产蛋白酶菌株的筛选产蛋白酶菌株的筛选级分离一、实验原理自能够产生胞外蛋白酶的菌株在牛奶平板上生长后，其菌落周围可形成明显的蛋白水解圈，水解圈与菌落直径的比值，常被作为判断该菌株蛋白酶产生能力的初筛依据。
将腐烂的大豆浸泡液中的细菌接种在含有酪素的培养基上进行培养。
由于产蛋白酶菌株能在干酪素的培养基上形成无色透明圈，因此能将产蛋白菌株分离出来，分离出来的菌株经再次培养，就可获得纯种产蛋白酶的菌株。
二、实验器材1.菌种：从大豆浸泡液中获得2.培养基:(1)PDA斜面培养基：马铃薯200g，蔗糖20g,琼脂20g,水1000ml.马铃薯去皮，切成块，煮沸半小时后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补水至1000ml，121℃灭菌30min备用。
（2）干酪素琼脂培养基：干酪素4.0g，用20ml 0.1mol/L NaOH溶液溶解后再加20g琼脂，加蒸馏水煮沸加水至1000ml 121℃灭菌30min备用。
3.试剂：无菌水。
4.仪器：天平，电磁炉，烧杯，无菌试管，无菌培养皿，高压灭菌锅，锥形瓶，接种环，涂布棒，酒精灯，恒温培养箱。
三、实验步骤1.将腐烂的大豆放入无菌水中浸泡，制成细菌悬浮液。
2.用涂布棒蘸取菌液接种于PAD培养基中，26℃培养48h。
3.倒置于酪素琼脂培养基平板上，37℃培养24h。
4.挑取培养好的菌落接种于平板上，28℃培养48h。
5.观察各菌落周围形成的透明圈的情况。
6.选取透明圈较大的三个菌落分别接种在干酪素琼脂培养基上，28℃培养48h。
7.观察受否为单菌落，若为单菌落且有透明圈，则为纯种产蛋白酶菌株。
若有杂菌，则需要重复步骤6，直到培养出纯菌为止。
参考文献[1]代玉梅.蛋白酶高产菌株的筛选鉴定及酶学性质研究[D].青岛:青岛大学,2008.[2]黄志强,林白雪,谢联辉.产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选与鉴定[J].福建农林大学学报:自然科学版,2006,35(4):416-420.。
微生物实验3篇
微生物实验
第一篇：微生物实验的介绍
微生物实验是指对微生物进行实验，分析其特征和功能
的过程。
微生物包括细菌、病毒、真菌和原生生物等，对微生物进行实验旨在了解它们的形态、生理特征、代谢能力和感染机制等，以便对微生物进行研究和利用。
微生物实验的内容包括生物学、医学、食品科学、环境
科学、工业生产、农业生产等方面。
生物学方面，可以通过对微生物的形态结构、生命活动过程等进行实验，深入了解微生物的本质和特征。
在医学方面，可以通过对有毒菌株和致病菌株的实验检测，找出导致疾病的原因和传染机制。
在食品科学中，可以对食品中的微生物进行实验检测，确保食品的安全。
在环境科学中，可以通过微生物实验，深入了解微生物的影响和利用，以维护生态环境。
在工业生产中，可以利用微生物进行发酵、生产酶和药品等方面的实验研究，提高产品质量，降低生产成本。
在农业生产中，可以利用微生物研究土壤生态，增强生产效益。
微生物实验涉及到的方法主要有培养、鉴定、抗生素敏
感性试验、病原菌检测和感染模型等。
不同的实验目的需要不同的实验方法，以达到所需的实验效果。
在进行微生物实验时，需要注意实验操作的安全性和科学性，遵守实验操作规范和实验室安全要求，以防止对实验者和环境造成危害。
微生物实验
①标 本
③ 孔径 光栏
⑤ 光轴中心调节 螺钉
③ 视场 光栏
N.A聚=(0.6-0.8)N.A物
操作步骤如下: (1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水
平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可 变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的 中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。
实验一培养基的配置、灭菌与无菌操 作技术
1、明确培养基的配制原则，掌握配制培养基的一般方法 和步骤； 2、掌握玻璃器皿的洗涤和包扎方法，了解玻璃器皿的灭 菌方法和原理； 3、了解几种常用灭菌方法的基本原理及应用范围； 4、掌握高压蒸汽灭菌技术，。
微生物学实验所用的器皿，大多要进行消毒、灭 菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包 装方法均有一定的要求。清洁的玻璃器皿是实验 得到正确结果的先决条件，包扎方法要能保证防 止污染杂菌。空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若 用湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎。
为什么要将培养基倒置培养？
显微镜概述 微生物的个体微小，必须借助显微镜才能观察到。因
此，显微镜就成为微生物学研究工作者不可缺少的基本工 具。所以，了解显微镜的种类、结构、功能和正确地掌握 不同显微镜的使用方法是很有必要的。
显微镜可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。光学 显微镜有普通光学显微镜、相差显微镜、微分干涉差显微 镜、暗视野显微镜、紫外光显微镜、偏光显微镜和荧光显 微镜。下面主要介绍普通光学显微镜。
一、目的要求 1.学习显微镜的结构、功能和使用方法。 2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。 3.学习微生物涂片、染色的操作技术；
4.掌握细菌单染色和革兰氏染色的方法；
5.掌握革兰氏染色反应原理、操作步骤和意义。
实验六 微生物细胞大小的测定
实验六微生物细胞大小的测定一、目的要求1.学会测微尺的使用和计算方法。
2.掌握酵母菌细胞大小测定的方法。
二、基本原理微生物细胞大小, 是微生物的形态特征之一,也是分类鉴定的依据之一。
由于菌体很小, 只能在显微镜下测量。
用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片。
一般将1mm等分为100格（或2mm等分为200格）,每格长度等于0．01mm（即106μm）。
是专用于校正目镜测微尺每格长度的。
目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片, 其中央刻有精确的刻度, 有等分50小格或100小格两种, 每5小格间有一长线相隔。
由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同, 目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同, 因此,目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小, 在使用前必须用镜台测微尺进行校正, 以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值, 然后才可用来测量微生物的大小。
三、器材枯草芽孢杆菌染色玻片标本, 目镜测微尺, 镜台测微尺, 显微镜, 擦镜纸, 香柏油等。
四、操作步骤1. 目镜测微尺的标定(1)放置目镜测微尺取出接目镜, 旋开接目镜透镜, 将目镜测微尺的刻度朝下放在接目镜筒内的隔板上（图Ⅳ-4, B）, 然后旋上接目透镜, 最后将此接目镜插入镜筒内（图Ⅳ-4, C）。
(2)放置镜台测微尺将镜台测微尺置于显微镜的载物台上, 使刻度面朝上。
(3)校正目镜测微尺先用低倍镜观察, 对准焦距, 当看清镜台测微尺后, 转动接目镜, 使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行, 移动推动器, 使目镜测微尺和镜台测微尺的某一区间的两对刻度线完全重合, 然后计数出两对重合线之间各自所占的格数（图Ⅳ-6）。
根据计数得到的目镜测微尺和镜台测微尺重合线之间各自所占的格数, 通过如下公式换算出目镜测微尺每小格所代表的实际长度。
目镜测微尺每小格长度（μm）=同法校正在高倍镜和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。
微生物常用实验3篇
微生物常用实验第一篇：细菌涂片染色实验细菌涂片染色实验是微生物学中最基本的实验之一。
通过染色方法，使细菌变得可见，便于观察形态、结构、数量等特征，有利于研究其生长、代谢、致病性等方面。
下面，我们来介绍细菌涂片染色实验的具体步骤：一、制备细菌涂片1.取出培养基上生长良好的细菌菌落，用不锈钢嵌片环沿中心点轻压一下。
2.将嵌片环中的菌落涂匀于无菌载玻片上，制备成直径约1厘米的薄片。
3.待载玻片上的细菌涂片晾干，并用火焰消毒。
二、涂片染色1.用火焰将铺有细菌涂片的玻片烤干。
2.将烤干的玻片浸入甲醇中，固定一分钟，再用水漱洗。
3.将玻片浸入碘酒中，固定一分钟，再用水漱洗。
4.将玻片浸入乙醇中，使背景颜色褪去，再用水漱洗。
5.将玻片浸入洋红染色液中，染色时间不超过1分钟。
6.用水冲洗干净，晾干后可以在显微镜下观察。
通过细菌涂片染色实验，我们可以直观地观察到细菌的形态、大小、聚集情况、颜色等，有助于鉴定细菌种类，并进一步深入研究其生物学特性。
第二篇：厌氧培养实验厌氧菌是一类生长需要在完全无氧条件下进行的微生物。
在许多疾病的发病机制中，厌氧菌都发挥着重要作用，因此，研究厌氧菌对于认识疾病的发病机制具有极其重要的意义。
下面，我们来介绍厌氧培养实验的具体步骤：一、制备厌氧培养基制备厌氧培养基是进行厌氧菌培养的关键。
具体操作步骤如下：1.准备培养基，并在其中加入培养菌株所需的配方和其他适宜的添加剂。
2.将培养基分装到无菌针筒或暗口瓶中。
3.在体积的一半至三分之二处加入去氧剂（一般为Thioglycolate或Dithiothreitol）。
二、厌氧细菌接种与培养1.准备厌氧细菌培养物的接种种子。
一般情况下，把生长适应在厌氧条件下的细菌进行分生处理来获得设计数量的细胞，并将其重新悬浮在与培养基相同的缓冲液中。
2.在无氧条件下接种厌氧菌，避免暴露于空气中。
可以通过使用瓶盖和橡胶塞的局部替代或全封闭气密容器的方法来实现无氧条件。
微生物学实验报告
微生物学实验报告(格式标准)(生命科学专业)教师:黎勇目录索引实验一油镜的使用与细菌的简单染色法 3实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 5实验三常用培养基的配制7实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8实验五、微生物大小的测定与显微计数10实验六环境中微生物的检测与分离纯化11实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12实验八(综合实验)化能异养微生物的分离与纯化13课程名称: 微生物学实验班级:化生系生命科学本科实验日期: 指导教师:黎勇实验一油镜的使用与细菌的简单染色法〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术;观察细菌的基本形态;学习观察细菌的运动性的基本方法。
〔基本原理〕1、 N·A=n·sinα2、 D=λ/2N、A3、目镜可提高放大倍数,但有效放大率取决于镜口率。
已经分辨的物体不放大瞧不清,未分辨物放得再大也瞧不清。
4、用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时,可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。
〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸;细菌、放线菌等固定装片;培养18小时左右的B、subtilis、 S、arueus 菌斜面培养物;无菌水、生理盐水。
〔方法步骤〕:(一) 油镜的使用镜检装片在中倍(或高倍镜)下找到目的物,并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置,虹彩光圈开到最大,镜头转开成八字形在玻片的镜检部位(光斑处)滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台(缩短镜头与装片距离,镜头浸入油中,至油圈不扩大为止镜头几与装片接触) 粗调器徐徐下降载物台(密切注视视野,当捕捉到物像时,立即用细调器校正) 仔细观察并绘图取出装片,清洗油镜:擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留(用手指辅助,迅速拭擦一、二次) 用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯(2-3次)。
(二) 细菌的简单染色法:涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察(三) 细菌运动性的观察取洁净盖玻片,四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察〔结果分析〕1、画一圆圈表示视野,选取所观察的微生物绘图,注意特殊结构、形状与排列。
微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)
FOR PERSONAL USE ONLY IN STUDY AND RESEARCH; NOT FOR COMMERCIAL USE微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜（油镜）的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。
如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。
原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子。
如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。
如：霉菌6．白假私酵母菌（白念）生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3倍）致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1）球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌（蚕豆形）、四联菌2）杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3）螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌（Clostridium Tantenus）；霍乱弧菌（vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛（flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下图，已交。
微生物学实验
微生物学实验
实验一 细菌的形态和结构观察
观察细菌的菌落特征 掌握简单染色法和细菌涂片方法 在油镜下观察细菌个体的形态特征
【一】实验目的
【二】实验的差不多 原理 形态观察要紧包括群体的形态和个体的形态观察。
细菌的差不多形态要紧分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近年 还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养基成 分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。
【四】实验步骤
思
对各种来源的样品进行对比，如平板菌落数和菌落类型等？ 饭前为何要洗手？ 如何防止培养物的污染与防止细菌的扩散方面？
考
题
实验四 培养基的配制与灭菌
1.熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 2.掌握培养基和无菌水的制备方法。
3.掌握高压蒸气灭菌技术。
【一】实验目的
【二】实验的差不多
3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。
当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节
器，以免压碎玻片或损伤镜面。
4.观察
时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的适应，以免眼睛
疲劳，同时能够在左眼观察时，右眼注视绘图。
微生物学实验
微生物学实验实验一实验室环境和人体表面微生物的检查实验二油镜的使用和细菌的简单染色实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色实验四微生物大小的测定和酵母菌死活细胞的鉴定实验五培养基的配制与消毒灭菌实验六土壤微生物的分离纯化与鉴定实验七食品微生物检验 (一)细菌总数测定实验八食品微生物检验（二）大肠菌群数测定实验九大肠杆菌生长曲线的测定实验十IMViC与硫化氢试验实验一、实验室环境和人体表微生物的检查1.一、目的：1.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型；2.观察不同类型微生物的菌落形态特征；3.体会无菌操作的重要性。
2.二、原理：1.微生物无孔不入，无处不在。
2.微生物→营养琼脂平板→菌落或菌苔。
（37 ℃倒置培养24 h）3.描述：菌落的大小、表面光滑或粗糙、干燥或湿润、隆起或扁平、边缘整齐或锯齿状、菌落透明或不透明、颜色以及质地均匀与否、疏松或紧密等，以便检查环境中细菌的类?秃褪 俊?4.细胞、放线菌、酵母菌和霉菌四大类型都可能存在，本实验重点观察细菌。
3.三、器材：1.培养基：营养琼脂平板（牛肉膏蛋白胨培养基）2.器具：无菌水、灭菌棉签、接种环（针）、酒精灯等。
4.四、步骤：1.标记。
组号/姓名、日期、样品来源。
2.接种。
3.倒置培养，37℃ 24 h4.观察结果。
5.五、结果6.样品来源菌落数菌落类型特征描写本实验室（流动空气30 min）1 大小形态干湿扁/隆透明度颜色边缘23接种室（不流动空气30min）洗手前洗手后头发屑指甲垢实验台门把1.六、思考题：1.人多的实验室与少人走动的实验室比较，平板上的菌落数和菌落类型有区别吗？试解释。
2.通过本实验，在防止培养物的污染和防止细菌的扩散方面，你有何体会？3.4.实验二油镜的使用和细菌的简单染色一、实验目的1、学习和掌握油镜的原理和使用技术。
2、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。
二、实验原理1．油镜使用原理：光镜的几种物镜中以油镜的放大倍数最大，尤其适用于微生物学研究。
微生物实验室主要实验项目
综合性
7
火腿肠中亚硝酸盐的测定
1、准确称取绞碎后的样品
2、沉淀蛋白质
3、标准曲线的绘制
4、试样的侧定
5、数据记录和处理
4
综合性
8
微生物的分离纯化及鉴定（一）
1、稀释涂布平板法
2、平板划线分离法
4
综合性
9
微生物的分离纯化及鉴定（二）
1、淀粉水解试验
2、油脂水解试验
4
综合性
10
微生物的分离纯化及鉴定（三）
微生物实验室主要实验项目
序号
实验名称
实验内容
学时
类型
1
微生物的形态观察
1、细菌基本形态和特殊构造观察
2、放线菌的形态观察
3、酵母菌的形态观察
4、真菌的特征结构观察
5、显微藻类、原生动物和微型后生动物观察
2
综合性
2
微生物染色
1、细菌的简单染色
2、革兰氏染色法
2
综合性
3
微生物显微镜直接计数法
1、稀释样品
1、糖发酵实验
2、吲哚实验
3、甲基红实验
4、伏-普实验
5、柠檬酸盐实验
8
综合性
2、镜检计数室
3、显微镜计数
4、清洗血球计数板
2
综合性
4
培养基的制备和灭菌
1、培养基的制备
2、培养基的灭菌
2
综合性
5
水中细菌总数的测定
1、水样采集和保藏
水果汁中苯甲酸的检测
1、饮料中苯甲酸盐的溶剂萃取、提纯
2、苯甲酸标准溶液的配制及标准曲线的绘制
3、测定已处理好的（饮料）样品中苯甲酸盐的含量
2---1-微生物的实验室培养
第6页，共48页。
典例精析 2015·广元期中不同的微生物对营养物质的需要各不相
同。下列有关一种以 CO2 为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不 正确的是( )
A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素 B．碳源物质也是该微生物的能源物质 C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质 D．水是该微生物的营养要素之一
第11页，共48页。
菌落
细菌的菌落特征因 种而异
第12页，共48页。
常用的消毒与灭菌的方法
(1)消毒的方法： 1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min； 2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或
80℃下煮15min；
3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔
灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源； 4、紫外线消毒；
第3页，共48页。
液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
第4页，共48页。
沉淀生长
固体培养基：菌落，菌苔
第5页，共48页。
2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方。
3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和 氮源、无机盐等营养物质，另外还需要满足微生 物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细 菌生长必需，而自身不能合成的化合物，如维生 素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧
内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）的过程。
2.灭菌： 用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物（包括
芽孢和孢子），而达到完全无菌之过程。
灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也 是最重要的技术。
第9页，共48页。
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽 孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例
微生物学实验习题
实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒思考题1、培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的?2、在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么?3、培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么?4、培养基的配制原则是什么?5、高压蒸汽灭菌开始之前,为什么要将锅内冷空气排尽？6、灭菌完毕后,为什么要待压力降到0时才能打开排气阀,开盖取物？7、在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时,怎样杜绝一切不安全的因素？实验二、普通光学显微镜的使用思考题1、试列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。
为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作？2、什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？3、影响显微镜分辨率的因素有哪些？4、根据你的实验体会，谈谈应如何根据所观察微生物的大小，选择不同的物镜进行有效的观察。
实验三、革兰氏染色法思考题1、哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？2、进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题?3、革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色?4、不经过复染这一步，能否区别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌？5、你认为制备细菌染色标本时，应该注意哪些环节?6、为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?7、如果涂片未经热固定，将会出现什么问题?加热温度过高、时间太长，又会怎样呢?实验四、显微镜直接计数法思考题根据你实验的体会，说明用血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？实验五微生物接种技术思考题1、如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养？请写出为什么高氏I号培养基和马丁氏培养基中要分别加入酚和链霉素？如果用牛肉膏蛋白胨培养基分离一种对青霉素具有抗性的细菌，你认为应如何做？2、试述如何在接种中，贯彻无菌操作的原则?3、以斜面上的菌种接种到新的斜面培养基为例说明操作方法和注意事项。
微生物学实验试题及答案
微生物学实验试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 下列哪种微生物属于原核生物？A. 酵母菌B. 放线菌C. 霉菌D. 病毒答案：B2. 微生物学中，下列哪个术语描述的是微生物的形态？A. 菌落B. 菌丝C. 菌体D. 菌落形态答案：D3. 在微生物培养中，下列哪种培养基是选择性培养基？A. 普通肉汤培养基B. 营养琼脂培养基C. 含有抗生素的培养基D. 含有染料的培养基答案：C4. 微生物的代谢类型中，下列哪个是异养微生物的代谢类型？A. 光合作用B. 化学合成作用C. 异化作用D. 同化作用答案：C5. 微生物的分类中，下列哪个是按其细胞壁的组成来分类的？A. 革兰氏阳性菌B. 球菌C. 杆菌D. 螺旋菌答案：A6. 微生物学实验中，下列哪种染色方法可以区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌？A. 酸性染色B. 碱性染色C. 革兰氏染色D. 瑞氏染色答案：C7. 在微生物的遗传物质中，下列哪种物质是病毒特有的？A. DNAB. RNAC. 蛋白质D. 脂质答案：B8. 下列哪种微生物是严格厌氧菌？A. 大肠杆菌B. 酵母菌C. 乳酸菌D. 假单胞菌答案：C9. 微生物的培养中，下列哪种方法可以用于分离纯种？A. 划线法B. 涂布法C. 混合培养D. 液体培养答案：A10. 微生物的计数方法中，下列哪种方法可以提供活菌计数？A. 涂布法B. 稀释涂布法C. 显微镜直接计数法D. 活菌计数法答案：D二、填空题（每空1分，共20分）1. 微生物的分类单位由大到小依次为：_______、_______、_______、_______、_______。
答案：界、门、纲、目、种2. 微生物的培养基按其物理状态可分为_______培养基和_______培养基。
答案：固体、液体3. 微生物的_______是指微生物在适宜的培养基上生长后形成的肉眼可见的子细胞群体。
答案：菌落4. 微生物的_______是指微生物在特定条件下，经过一定时间后，其数量的增加。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
正面 侧面计数室（2个） 每个小格的面积盖玻片下液体高度 微生物实验专题一、探究酵母菌的呼吸方式【C 】（一）、实验原理：1. 酵母菌是兼性厌氧型生物，无氧和有氧呼吸都产生CO 2，无氧呼吸还能产生酒精。
2. 检测产生CO 2：→可使用澄清石灰水；或溴麝香草酚蓝溶液（现象：蓝→变绿→变黄）。
3．检测酒精产生：→用酸化的重铬酸钾。
实验现象：溶液由橙色变为灰绿色。
（二）、实验设计（及方法步骤）：→设计如下图装置进行对照实验：1. 设计成有氧条件（甲组）与无氧条件（乙组）进行对照实验。
2. NaOH 溶液的作用是：→除去空气中CO 2，排除对实验干扰。
3. 培养液要进行灭菌，灭菌后的培养液要冷却后才能接种酵母菌。
4. 进行乙组实验时，必须让B 瓶密封放置反应一段时间，才能将导管连通到澄清石灰水瓶中。
★其目的是：→消耗掉瓶内氧气，防止酵母菌进行有氧呼吸对实验结果的干扰。
5. 实验中要观察甲、乙组澄清石灰水的变化，并检测A 和B 瓶中有无酒精产生。
★检测酒精时，要将重铬酸钾溶于浓硫酸溶液中进行酸化处理，再加入到被检测溶液中。
（三）、实验结果（现象）及其分析：1. 甲、乙两组的澄清石灰水都变浑浊，甲组变浑浊快和程度大；说明酵母菌有氧和无氧条件下 都产生CO 2，有氧条件下比无氧条件下产生的CO 2多。
注意：据该实验现象不能确定呼吸方式。
2. 检测酒精时，若A 瓶中无酒精产生（检测时不变灰绿），则说明A 瓶酵母菌只进行有氧呼吸； 若B 瓶中有酒精产生（检测时变灰绿）；则说明B 瓶中酵母菌进行了无氧呼吸。
二、探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化【C 】（一）、实验原理：1. 液体培养酵母菌时，种群的增长受培养液营养成分、空间（含氧量）、温度和pH 等因素的影响。
2. 在理想条件下，酵母菌种群的增长呈“J ”型曲线；在各种资源有限或者存在环境阻力的情况下， 酵母菌种群增长呈“S ”型曲线。
◆酵母菌种群数量变化表现为：增长→保持稳定→衰减。
3. 对酵母菌进行观察计数，需要用到血球计数板和显微镜。
★血球计数板构造如下图：（二）、实验设计（方法和步骤）：1. 将10mL 无菌的5%的葡萄糖溶液加入试管。
2. 将酵母菌（干酵母）接种到试管培养液中，将试管在 28℃条件下连续培养7天。
3. 采用抽样检测法，每天取样测定酵母菌数目，每天抽测3次，取平均值。
【取样计数的操作方法】 （1）先将盖玻片盖在血球计数板计数室上，再用吸管吸取培养液滴于盖玻片边缘。
★特别提醒：→吸取培养液前，要振荡几下试管，摇匀培养液（否则数据会偏差较大）。
（2）让培养液自行渗入计数室内，用滤纸吸去多余的培养液。
（3）待酵母菌全部沉降到计数室底部时，将计数板放在载物台中央进行观察计数。
★计数区域：25（中）×16（小）型计数室为四顶角和中央的5个中格。
→★对于压在小方格界线上的酵母菌，应取两邻边及其顶角计数。
（4）计算出1mL培养液中酵母菌，换算后记录在设计的表格中。
1mL培养液中酵母菌数目＝4×106 ×每小格酵母菌数×稀释倍数=400×（每小格的面积1/400mm2）每小格酵母菌数×104 ×稀释倍数（三）、实验结果及其分析：——将记录在表格中的数据转换成曲线图，分析实验结果并得出结论。
★特别提醒1：→每天的计数时间要相同；培养至中后期时，要对培养液进行稀释后再计数。
★特别提醒2：→若视野中有气泡，应重新制片计数。
要对酵母菌进行染色后计数，否则数据偏大。
★特别提醒3：→清洗血球计数板时，应采用浸泡和冲洗方法，不能刷洗和擦拭。
三、固定化酵母细胞的制备与应用【B】1. 制备固定化细胞常用凝胶包埋法。
①★制备固定化酵母细胞常用海藻酸钠凝胶包埋法。
②★凝胶是多孔载体，调节凝胶溶液的浓度，可以改变凝胶的孔径大小。
2. 制备固定化酵母细胞的方法步骤：→关键步骤：配制海藻酸钠溶液。
（1）活化酵母细胞：→目的：→使酵母菌从休眠状态恢复到正常生活状态。
①操作：→将1克干酵母和10ml蒸馏水放在50ml烧杯中混合并搅拌均匀，放置1小时。
②注意事项：→容器要大一些，以防活化液溢出；混合后要进行搅拌。
（2）配制0.05mol/L的CaCL2溶液：①操作：→将0.83克无水CaCL2和150mL蒸馏水，放在200ml烧杯中使其充分溶解。
②★CaCL2溶液的作用：→（起凝胶聚沉作用）促使凝胶珠的形成。
（3）配制海藻酸钠溶液（最关键）：①操作：→将0.7g海藻酸钠和10ml蒸馏水加入50ml小烧杯中，小火间断加热至完全溶化，加蒸馏水定容至10ml。
②注意事项：→★应采用小火间断加热，以防焦糊；海藻酸钠浓度不宜过高过低。
③★海藻酸钠溶液浓度过高时：→难以形成凝胶珠或凝胶珠形态异常。
④★海藻酸钠浓度过低时：→凝胶珠中包埋的细胞数量少，凝胶珠色浅呈白色。
（4）海藻酸钠溶液与酵母细胞混合：★应将海藻酸钠溶液冷却至室温后，再加入已活化的酵母细胞；并充分搅拌均匀。
（5）固定化酵母细胞：①操作：→用注射器吸取混合液，以恒定的速度缓慢地滴加到CaCL2溶液中，并不断搅拌（磁力搅拌器搅拌），将凝胶珠在CaCL2溶液中浸泡30分钟。
②注意事项：→注射器距液面距离不能太近、凝胶珠浸泡时间不能过短。
③★注射器距液面距离过近时：→凝胶珠会出现拖尾现象。
④★凝胶珠浸泡时间过短时：→凝胶珠不能形成稳定结构，容易裂开。
（6）冲洗：→取出凝胶珠后，要用蒸馏水冲洗2～3次。
★冲洗的目的：→洗去凝胶珠表面的氯化钙溶液和杂菌。
（7）发酵实验：→将10%的葡萄糖溶液150ml加入200ml的锥形瓶中，加入固定化酵母细胞在25℃下发酵24h。
观察气泡产生（CO2）和闻酒味，并用重铬酸钾检测酒精。
3. 实验结果分析：——酵母细胞凝胶珠质量检测。
（1）合格凝胶珠的标准：①乳白色，圆形或椭圆形。
②摔打容易弹起。
③挤压不易破裂、无液体流出。
（2）凝胶珠异常的原因：①色浅呈白色：→海藻酸钠溶液浓度偏低，此种凝胶珠中包埋的酵母细胞数量少。
②不呈圆形或椭圆形：→海藻酸钠溶液浓度偏高。
★此种凝胶珠为制作失败，不能使用；需要重新制作。
③拖尾现象：→混合液浓度低，或注射器距氯化钙溶液液面距离太近。
④凝胶珠漂浮：→混合溶液中含气泡。
⑤★凝胶珠容易裂开：→凝胶珠在氯化钙溶液中浸泡时间过短。
四、腐乳的制作【A】1.制作腐乳的原理：→利用毛霉等微生物分泌的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶将豆腐中的蛋白质、脂肪和淀粉分解为多种氨基酸、有机酸等；使腐乳鲜香可口，易消化吸收。
（1）在腐乳制作中，多种微生物参与了豆腐的发酵，但起主要作用的是毛霉。
①毛霉是丝状真菌，其代谢类型属于异养需氧型；适宜生长温度：15℃～18℃。
②毛霉孢子分布广泛，空气中含有大量毛霉孢子。
（2）家庭和实验制作腐乳时，将豆腐坯暴露在空气中接种毛霉孢子。
（3）工业生产腐乳时，在严格无菌条件下接种优良毛霉菌种孢子。
★腐乳品质好。
①工业上生产腐乳步骤：→①接种孢子。
→②培养和晾花。
→③压坯与装坛②“晾花”的目的：→增强酶的作用，散失霉味。
（4）醉方（添加黄酒制成）、红方（添加红曲制成）、青方（不加调料制成）。
2. 腐乳制作的基本流程：→见下图：（1）让豆腐上长出毛霉：①将豆腐切成小块（4cm×4cm×1.5cm），用沸水消毒后微微晾干，制成腐乳坯。
在晾干过程中空气中毛霉孢子落到腐乳坯上，完成接种过程。
★所用豆腐含水量应控制在70%左右，含水过多腐乳不成形。
②将腐乳坯竖立放在清洁容器内彼此间隔1cm，将温度控制在15～18℃，并保持一定湿度让毛霉生长；当菌丝变成淡黄色，有大量灰褐色孢子形成时停止发酵。
★若某些豆腐上长出青霉，应剔除这种豆腐或重新制作。
（2）加盐腌制：→将长满毛霉的豆腐块用食盐水清洗后整齐地摆放在瓶中，用食盐腌制10天。
①★加盐方法：→逐层加盐，加盐量逐层递增，接近瓶口的表面盐要铺厚一些。
②盐量：腐乳坯量= 5 ：1。
★加盐过多会影响继续发酵，过少豆腐会腐败变质。
【加盐目的】→①析出豆腐中水分，使豆腐变硬，防止过早酥烂。
②抑制微生物生长，防止豆腐腐败变质。
③调节口味。
（3）配制卤汤：→用食盐、水和料酒及各种香辛料等进行配制。
①卤汤中酒含量控制在12%左右。
◆酒的作用：→抑制微生物的生长，并使腐乳具有独特酒香味。
★酒用量过多会抑制蛋白酶活性和影响腐乳风味；酒用量过少豆腐会腐败。
②香辛料的作用：→调味、防腐杀菌。
（4）加卤汤装瓶，密封腌制：→将配制好的卤汤加入瓶中，将瓶口通过酒精灯火焰，再用胶带密封瓶口，密封腌制6个月。
★装瓶时要迅速，瓶口要通过酒精灯的火焰，再密封。
2. 腐乳品质鉴定及有关提醒：（1）评价腐乳品质：→应从形状、色、香、味、质地等方面进行评价。
（2）影响腐乳品质的因素：→盐、酒、香辛料和发酵温度。
◆前期发酵温度为：15℃～18℃；后期发酵温度（腌制时）为常温或30℃。
★在腌制过程中，毛霉等微生物（酶的作用）仍可继续发酵一段时间。
（3）腐乳外表的皮是附着在豆腐上的毛霉菌丝形成的，可使腐乳成形。
（4）用于腌制的玻璃瓶洗刷干净后要用沸水消毒，装瓶、密封等环节要无菌操作。
五、果酒和果醋的制作【B 】（一）果酒制作：→果酒中酒精含量应控制在10%～20%。
1. 果酒制作方法步骤（及注意事项）：（1）对发酵瓶、纱布、榨汁机等进行清洗和消毒：★发酵瓶要用温水反复清洗后，再用75%酒精擦拭消毒，晾干。
（2）取葡萄500克，先冲洗干净，再去除枝梗和腐烂籽粒，再次冲洗。
①冲洗目的：→去除葡萄表面污物杂物。
★不能先去枝梗再冲洗。
②不能反复冲洗，否则会冲洗掉附着在葡萄表面的野生型酵母菌。
（3）用榨汁机榨取葡萄汁，之后将葡萄汁装入发酵瓶中，并盖好瓶盖：【注意】→果汁不能装满（装入量不超过发酵瓶总体积的2/3）。
★目的是：①让酵母菌有氧呼吸大量繁殖，保证发酵时有较大起始数量。
②防止发酵时发酵液溢出。
（4）将发酵瓶放置在18℃～25℃条件下发酵10～12天：（5）每天定期排气1～2次（排CO 2），以防瓶爆裂。
①为了防止发酵瓶爆裂，最好选用塑料瓶。
②排气时要防止杂菌污染，常拧松瓶盖排气，不能打开瓶盖。
③★右图发酵装置中排气管设计成长而弯曲状，既能排气，又能防止杂菌污染。
（6）取样检测酒精（10天后）：→用酸化重铬酸钾检测；也可闻酒味、镜检酵母菌。
【检测方法】→①取两支试管编号1、2，分别装入2mL 酒精、2mL 发酵液。
②向两试管中分别滴加3滴3mol/L 的硫酸溶液，并振荡混匀。
③再向两试管中各加入饱和重铬酸钾溶液3滴，振荡后观察溶液颜色变化。
2.★制作果酒和果醋中防止杂菌污染的措施：（1）对用具清洗并用酒精消毒。
（2）葡萄先清洗后除枝梗。
（3）排气管设计为长而弯曲状。