植物生理学实验：实验四 植物可溶性糖含量的测定(蒽酮比色法)
植物组织中可溶性糖含量的测定
九植物组织中可溶性糖含量的测定一．实验目的学习可溶性糖测定的蒽酮比色法二．实验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。
了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。
本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。
糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm 的OD值与糖含量成正相关。
该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。
三．实验用品721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。
稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。
四．实验步骤1.可溶性糖的提取称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。
在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。
2.显色及比色吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。
从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。
3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80μg。
按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。
第二章实验四可溶性糖含量的测定_蒽酮比色法
认知目标：了解植物体内的碳素营养状况以及农产品 的品质性状。 能力目标：掌握蒽酮与可溶性糖反应的原理，蒽酮法 测定可溶性糖的步骤和注意事项。 素养目标：培养学生严谨规范的实验态度，引导学生 树立安全的实验意识。
一、实验背景
蒽酮（Anthrone），淡黄 色针状晶体。不溶于水， 溶于乙醇和热苯。 分子式：C14H10O
四、结果计算
3. 数据计算：
W=(CV/m)×100%
W—糖的质量分数（%） C—标准曲线查出的糖含量mg·mL-1 V—样品稀释后的体积（mL） m—样品的质量（mg）
五、注意事项
样品中含水量不能太多，试管应该干燥无水， 否则蒽酮会在测定液中析出而影响测定。
不同显色温度和时间对产物的吸光度影响较 大，沸水浴时间过长会破坏糠醛衍生物的结 构，颜色会消退。
浓H2SO4
戊糖
糠醛
蒽酮
浓H2SO4
己糖
羟甲基糠醛
蓝绿色
糠醛衍生物
二、材料、仪器设备及试剂
1、材料 植物叶片、水果果实等 2、仪器设备 分光光度计、水浴锅、具塞刻度试管、移液管、容量瓶、 定性滤纸等 3、试剂 浓硫酸（比重1.84）、分析纯蔗糖、分析纯蒽酮、乙酸 乙酯 蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50mL乙酸乙 酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，用时微热 溶解结晶。
分子量：194.23
植物体内的碳素营养状是农产品的品质评价的重要 内容，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标。蒽 酮比色法是一个快速而简便的定糖方法；糖在浓硫酸 作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲 基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定 范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。糖类与蒽酮 反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为630 nm， 可在此波长下进行比色，故可用于糖的定量。
可溶性糖含量测定(蒽酮法)实验的改进
ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗ ａ ｓ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ｅ ｄ ．Ｔ ｈ ｅ ｃ ｅ ｎ ｔ ｉ ｒ ｆ ｕ ｇ ｅ ｔ ｕ ｂ ｅ ｗｉ ｔ ｈ ｓ ｃ ａ ｌ ｅ ｓ ｗ ａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｔ ｈ ｅ ｓ ｏ ｌ ｕ ｂ ｌ ｅ ｓ ｕ ｇ ｒ． ａ Ｓ ｈ ａ ｋ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｍｉ ｘ ｔ ｕ ｒ ｅ ｗｅ ｌ ｌ ｓ ｅ ｖ ｅ ｒ ｌ ａ ｔ ｉ ｍｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｄ ｉ ｌ ｕ ｔ ｉ ｎ ｇ ｉ ｎ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｕ ｍ ｔ ｉ ｍｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ． Ａ ｌ ｌ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｉ ｍ— ｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｍｅ ｎ ｔ ｈ ｅ ｌ ｐ ｅ ｄ ｔ ｏ ｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ａ ｃ ｙ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｍ ｉ ｒ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｉ ｆ ｙ ｔ ｈ ｅ ｏ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ． Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ：ｓ ｏ ｌ ｕ ｂ ｌ ｅ ｓ ｕ ｇ ｒ ａ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ；ｅ ｎ ｔ ｈ ｒ ｏ ｎ ｅ ｃ ｏ ｌ ｏ ｒ ｉ ｍｅ ｔ ｒ ｉ ｃ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ；ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｍｅ ｎ ｔ
！
垒 ！ 二 塑
实
验
室
科
学
第１ ６卷
第 ２期
２ ０ １ ３年 ４月
ＣＮ１ ２—１ ３ ５ ２ ／Ｎ
Ｌ ＡＢＯＲＡＴ ＯＲＹ Ｓ ＣＩ Ｅ ＮＣ Ｅ
Ｖｏ １ ． １ ６ Ｎｏ ． ２ Ａｐ ｒ ． ２ ０１ ３
可溶性糖 含量测 定 （ 蒽 酮法 ） 实验 的改进
蒽酮比色定糖法测定可溶性糖含量
蒽酮比色定糖法测定可溶性糖含量实验目的1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2.学习求标准曲线方程—最小二乘法3. 掌握分光光度计的使用实验原理蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
上述特定的糖类物质，反应较稳定。
反应式：该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。
实验步骤1．求标准曲线方程取6只试管，按下表配制（移取）葡萄糖（G）标准溶液，沸腾7分钟取出，用自来水冷至室温，用721分光光度计比色，波长620nm，1＃管作为参比(保留)，求标准曲线方程。
（G浓度为200μg／mL，蒽酮试剂：2克蒽酮／每升85%H2SO4）2. 样品含糖量的测定（1）取菜叶（包菜和白菜两个样）准确称取1.00克剪碎研细后，放入大试管，加入25mL蒸馏水，煮沸10分钟，通过漏斗滤入250mL容量瓶中（可以抽滤），并用煮沸蒸馏水提取两次，滤液并入容量瓶中，滤纸上的残渣用水冲两次，冷却定容至刻度。
（2）吸取0.5mL 滤液于编号的三只试管中，以蒸馏水补足1.00mL；另吸取1.00mL滤液于另编号的三只试管中，加蒽酮试剂5.0mL（于冷水浴中操作），摇匀后于沸水浴中煮沸7分钟，取出冷却至室温，以求标准曲线的1＃管作为参比，用721分光光度计在620nm处测吸光度或透过率。
最小二乘法求标准曲线方程的公式：X：G 的浓度（μg／mL）Y：吸光度A＝－�ST本实验要求相关系数r≥0.99。
可溶性糖的测定（蒽酮比色法）
可溶性糖的测定——蒽酮比色法原理：可溶性糖与浓硫酸反应生成羟甲基糠醛，其与蒽酮生黄绿或蓝绿的糠醛衍生物，该物质在630nm(620)处有最大吸收峰，其浓度与可溶性糖的含量成正比。
试验用品：电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、1mL，2mL，5mL 移液管各一支、容量瓶（根据需稀释倍数选择25或50mL）、10mL 刻度试管或离心管、试管架（别用胶的）、指型管（大一点的便于震荡混匀液体）、漏斗、滤纸、洗瓶试验药品：蒽酮、乙酸乙酯、分析纯蔗糖、浓硫酸（优级纯或分析纯）、蒸馏水试验样品：玉米叶（干样）标液及标曲配制：蒽酮-乙酸乙酯试剂：称取分析纯蒽酮1g溶于50mL乙酸乙酯中，贮于棕色瓶，至于黑暗中保存，如有结晶析出可加热溶解。
1%蔗糖标准液：精确称取1.000g分析纯蔗糖加少量蒸馏水溶解后转入100mL容量瓶中，加0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度线；100mg/L蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL，加入100mL容量瓶，加水至刻度线。
标曲：项目管号0 1 2 3 4 5各管中蔗糖含量（ug) 0 20 40 60 80 100 100mg/L蔗糖液（ml）0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蒽酮乙酸乙酯试剂（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸（ml） 5 5 5 5 5 5 吸光度A630样品测定：称取0.05g样品于干燥的10mL刻度试管中，加蒸馏水10mL后放入水浴锅内沸水浴30min，再过滤到50mL容量瓶内混匀。
取干燥的指型管分别加入1.5mL蒸馏水、0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂、0.5mL样品溶液和5mL浓硫酸快速震荡摇匀后冷至室温比色（摇匀后反应10min左右可放入冷水中冷却）。
结果计算：可溶性糖含量=Mx×V×D×100V1×W×103Mx：标准溶液查得的糖含量（ug）V ：样品总体积（mL）V1：测定时的取用体积（mL）D ：稀释倍数（mg）103：样品重量单位由mg换算成ug的倍数。
植物水溶性总糖的提取和含量测定蒽酮比色法
实验六植物水溶性总糖的提取和含量测定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
3.学习分光光度计的使用。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较适合。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，超声波清洗器，电热恒温水浴锅，抽滤设备，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/mL(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 mL浓H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：甜高粱，甘草四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴沸腾起计时，准确煮沸l0 min，取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品粉碎，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50mL三角瓶中，加沸水25mL，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50mL容量瓶中，定容至刻度，得可溶性糖的提取液。
3.稀释：吸取提取液2mL，置于另一50mL容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀。
4.测定：吸取1 mL已稀释的提取液于试管中，加入4.0 mL蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水替代提取液。
植物体内可溶性糖含量的测定
植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
一、目的：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
二、原理糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，反应如下：糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区620nm波长处有最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。
此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，并具有灵敏度高，简便快捷，适用于微量样品的测定等优点。
三、实验材料、仪器及试剂1．材料：植物组织叶片2．仪器：分光光度计恒温水箱20ml具塞刻度试管（3支）漏斗100ml 容量瓶刻度试管试管架剪刀研钵3．试剂：（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。
（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1．葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（O D），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。
2．样品中可溶性糖的提取称取1克叶片，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。
置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。
蒽酮比色法测定可溶性糖
实验三蒽酮比色法测定可溶性糖
一、原理：糖在浓硫酸作用下可经脱水反应生成糖醛，并能进一步与蒽酮反应生成蓝绿色的糖醛衍生物，在一定浓度范围内，其颜色深浅与浓度大小成正比。
二、材料与仪器
植物叶片、分光光度计、水浴锅、漏斗、容量瓶、烧杯
三、步骤
1、取植物叶片0.15g，放入刻度试管中，加蒸馏水10ml。
2、将试管置于沸水中加热提取30min。
3、将提取液过滤，定容于25ml容量瓶。
4、取0.5ml提取液，依次加入1.5ml蒸馏水、0.5ml蒽酮乙酸乙酯溶液和5ml硫酸。
5、沸水浴保温1min。
6、630nm波长下，测定溶液吸光度值。
四、结果计算
可溶性糖含量（mg/g）=217.37X−3.0742∗25
w∗1000∗0.5。
植物中可溶性糖含量的测定
一、原理
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。
表24-2苯酚法测可溶性糖绘制标准曲线的试剂量
试剂
100μg/L蔗糖标准液
（mL）
蒸馏水（mL）
蔗糖量（μg）管号00
2.0
01、2
0.2
1.8
203、4
0.4
1.6
405、6
0.6
1.4
607、8
0.8
1.2
809、10
1.0
1.
01002．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.1～0.3 g,共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5～10 mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30 min（提取2次），提取液过滤入25 mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
植物组织中可溶性糖含量的测定实验报告
植物组织中可溶性糖含量的测定实验报告植物组织中可溶性糖含量的测定实验报告10科四谭晓东20102501024一、实验目的掌握蒽酮比色法测定可溶性糖含量的提取和方法原理；掌握分光光度计中标准曲线制作的使用程序。
二、实验原理植物组织中的糖（包括还原糖和非还原糖）可以与浓硫酸反应生成糠醛，糠醛和蒽酮反应可以生成蓝绿色络合物，在625nm处有最大光吸收值。
三、实验材料大白菜叶片与叶柄四、实验步骤1. 可溶性糖的提取大白菜叶柄和叶片各0.5g鲜重，研磨+10ml 80%乙醇80度水浴30mi n过滤后定容至25ml葡萄糖浓度020*********（ug/ml）标准匍萄糖液吸00.10.20.30.40.5取量（ml）蒸馏水（ml）10.90.80.70.60.5蒽酮（ml）5混匀，沸水浴10min，冷却后在625nm下比色0.1ml提取液+0.9ml蒸馏水冷却后对照标准曲线比色五、实验结果1.葡萄糖标准曲线标准方程：y=184.6x-1.973 R=0.99402. 根据标准曲线测到，叶片的吸光度是0.249，葡萄糖浓度为43.96ug/ml，含糖量为13.82% ;叶柄的吸光度为0.276，葡萄糖浓度为49.01ug/ml，含糖量为15.41%六、分析与讨论植物体内的可溶性糖和淀粉均是光合作用产物。
可溶性糖以蔗糖为主，是植物糖类运输的主要形式，其次是葡萄糖、果糖、麦芽糖、戊糖和糖苷等。
可溶性糖在硫酸作用下生成糖醛或羟甲基糠醛化合物，糖醛或羟甲基糠醛可与蒽酮作用形成蓝绿色络合物（糖醛衍生物），在一定波长范围内，其颜色的深浅与糖含量有定量关系，在625 nm波长下的吸光值与可溶性糖含量成正比。
由于蒽酮与可溶性糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。
该实验方法简便，灵敏度高，可溶性糖含量在30卩g左右就能进行测定，所以可作为测定微量可溶性糖之用。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值?但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差.此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。
植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定
实验四植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定一、目的从一份植物样品中系统分离和测定可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质等多种成分，不仅对研究植物体内碳、氮代谢，了解植物的生长发育状况有重要意义，亦可以作为鉴定其品质的重要指标，而且也有助于训练基本操作技能。
二、原理（一）分离提取原理在80-85%的乙醇中，植物组织中的还原糖、蔗糖以及游离氨基酸和叶绿素等溶解，而淀粉及蛋白质沉淀，再用9.2 mol/L高氯酸溶解淀粉（蛋白质沉淀），最后用0.1 mol/L氢氧化钠溶解蛋白质，然后选用适当的方法测定各个提取液中相应物质的含量。
（二）测定原理1.蒽酮比色法——可溶性糖含量测定碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理，生成糠醛，再与蒽酮脱水缩合而生成蓝绿色化合物，在一定范围内其颜色深浅与碳水化合物含量成线性关系。
蒽酮反应的颜色深浅，随温度条件和加热时间而变化，葡萄糖显色高峰在100℃时，加热10 min后出现，而核糖在相同温度下，加热3 min后出现。
此法灵敏度高，糖含量达30 μg即可测定。
2.茚三酮比色法——氨基酸含量测定氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，在570 nm下有最大光吸收。
在一定范围内，其颜色深浅与氨基酸的含量呈正比。
3.考马斯亮蓝G-250结合法——蛋白质含量测定考马斯亮蓝在游离状态时呈红色，当与蛋白质结合后变为蓝色，后者最大光吸收在595 nm，在一定范围内（0-1000 μg /mL），其颜色深浅与蛋白质的含量呈正比。
此法快速灵敏，反应在2 min内即达到平衡，室温1h内颜色稳定，而且干扰物也少。
三、实验用品（一）实验材料：植物样品。
（二）器皿：1. 25 mL刻度试管⨯8 ，15 mL试管⨯20；2. 10 mL离心管⨯2；3. 容量瓶：50 mL⨯1 ，25 mL⨯1；4. 移液管：5 mL⨯2，2 mL⨯4，1 mL⨯2，0.1 mL⨯2；5. 恒温水浴锅；6. 离心机；7. 电子天平；8. 分光光度计。
植物中可溶性糖含量的测定
精确吸取1％蔗糖标准液l mL加入100 mL容量瓶中，加蒸馏水定容。
（三）仪器设备
分光光度计，电炉，铝锅，20 mL刻度试管，刻度吸管5 mL 1支、lmL 2支，记号笔，吸水纸适量。
三、实验步骤
1．标准曲线的制作取20 mL刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24–2加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5～20 s时间加入5 mL浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8 mL，在室温下放置30 min，显色。然后以空白为参比，在485 nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖
一、原理
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。
植物体内可溶性糖含量的测定
植物体内可溶性糖含量的测定——蒽酮法一、实验目的1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2.掌握分光光度计的使用二、实验背景糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
三、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮(C14HoO)缩合成蓝色化合物。
溶液含博量在每mL 150 pg以内，与蔥酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用,样品不必经过水解。
四、材料、仪器及试剂1.材料：苹果2.仪器：分光光度计恒温水箱试管漏斗容量瓶试管架研钵刀片3.试剂：蒽酮试剂(称取100 mg蒽酮溶于100 mL 98%硫酸溶液(A.R)中）葡萄糖标准溶液(100 μg)/mL(精确称取100 mg干燥葡萄糖,用蒸馏水定容至1000 mL）。
样品溶液（可自选待测物制成样品溶液。
eg：称取0.1g苹果剪碎置于研钵中加入少量蒸馏水研磨成匀浆然后转入20ml刻度试管中用10ml蒸馏水分次洗涤研钵洗液一并转入刻度试管中。
置沸水浴中加盖煮沸10分钟冷却后过滤滤液收集于100ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度摇匀备用。
）四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作：取七支干燥洁净的试管编号后，按下表操作。
编号123456700.100.200.300.400.600.80葡萄糖标准液(100ug/ml)H2O 1.00.900.800.700.600.400.20蒽酮试剂10101010101010每管加人葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，传各管都加人蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置冰浴中迅速冷却。
植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)
Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、目的掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。
二、原理糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。
其反应式如下：显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。
本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。
蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。
三、材料、仪器设备及试剂1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。
2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。
3.试剂及配制：蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。
该试剂不能久贮，宜用前配制。
100μg·ml－1蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入100ml容量瓶中定容至刻度。
四、实验步骤1.蔗糖标准曲线制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。
2.样品提取称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。
3.糖含量测定吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。
随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。
植物体内可溶性糖含量的测定
植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）2010-04-04 22:43:32 来源：易生物实验浏览次数：221 网友评论0 条糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
关键词：可溶性测定含量植物可溶性糖含量测定蒽酮法solublesugar新陈代谢一、目的：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
二、原理糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，反应如下：糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区620nm波长处有最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。
此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，并具有灵敏度高，简便快捷，适用于微量样品的测定等优点。
三、实验材料、仪器及试剂1．材料：白菜叶、柑桔2．仪器：分光光度计恒温水箱20ml具塞刻度试管（3支）漏斗100ml容量瓶刻度试管试管架剪刀研钵3．试剂：（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。
（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1．葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。
2．样品中可溶性糖的提取称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。
实验四___植物组织中可溶性糖含量的测定
一、实验目的：掌握蒽酮比色法测定可溶性糖含量的 提取和方法原理；掌握分光光度计中标准曲线制作的 使用程序。 二、实验原理：（P48） 三、实验材料：绿豆黄化苗四、实验步骤： 1.可溶性糖的提取：材料不需烘干（1 g鲜重）加入10 mL
纯水，80℃水浴30min，过滤后定容至50mL 。(不必脱色和离 心）
按“SET”进行设置，按“↓翻页”可在标样间切换，设置完毕后。 按“100T％”调零，出现：
请将参比杯拉入光路！ ENT确认
参比测量后按“ENT”，出现：
请置入样品比色皿标号：
输入标号后，出现：
请将样品拉入光路！ ENT确认
按“ENT”确认，拉动拉杆，进入下一比色皿的测量。测量结 束后，得到标准曲线，按“ESC”退回上一层界面。
按“1”进入样品“测量”功能。（此功能是对样品的测量，需 要有参比杯做对照。）按“ENT”，出现：
请将参比杯拉入光路！ ENT确认
测量后，按“ENT”，出现：
请置入样品比色皿标号：
依次测量。 按“3”进入“置入曲线”，（此功能主要用于标准曲线做 完后无法及时做样品测量，故记下曲线公式，在进行测量 前直接输入曲线）页面如下： 置入曲线 当前曲线：C= A+ SET修改↓翻页
723G型分光光度计“标准曲线”建立方法
浓度测量 1 测量 2 AC建 曲线 3 置入 曲线 1-4选择 4 参数 PRN打印 设置 进行此功能操作流程如下：
Байду номын сангаас
在主界面下，按“2”进入“浓度测量”功能，出现如下界面：
按“2”进入“AC建曲线”功能，出现如下界 面： 比色皿： 测建曲线 波长： 标样个数： 标样A1： SET修改↓翻页
蒽酮比色法测可溶性糖
蒽酮比色法测可溶性糖一、实验目的1.1学习分光光度法的基本原理1.2学习对水果中糖含量进行测定的方法二、实验原理2.1分光光度法基本原理物质对光吸收的定量关系很早就受到了科学家的注意并进行了研究。
皮埃尔·布格（Pierre Bouguer）和约翰·海因里希·朗伯（Johann Heinrich Lambert）分别在1729年和1760年阐明了物质对光的吸收程度和吸收介质厚度之间的关系；1852年奥古斯特·比尔（August Beer）又提出光的吸收程度和吸光物质浓度也具有类似关系，两者结合起来就得到有关光吸收的基本定律——布格－朗伯－比尔定律，简称比尔－朗伯定律。
溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光的吸收效应，不同的物质具有各自选择性的吸收光谱，因此，当某单色光通过溶液时，能量会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质浓度有一定比例关系，即符合于比色原理——比尔定律。
朗伯-比尔定律：A=lg(1/T)=KbcA：为吸光度；T：为透射比,是投射光强度比上入射光强度；K: 摩尔吸收系数。
它与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关；c：为吸光物质的浓度；b：为吸收层厚度；物理意义：是当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的西光物质时,起其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b 成正比。
2.2蒽酮比色法原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基，戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
对于特定的糖类，反应较稳定。
本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量。
三、实验试剂3.1蒽酮试剂：取0.2g蒽酮溶于100mL 80%(V/V)硫酸中，硫酸当日配制使用；3.2标准葡萄糖溶液(0.1mg/mL)：可滴加几滴甲苯作防腐剂；3.3糖样品溶液四、实验操作步骤4.1制作标准曲线：取干试管5支，依次加入标准糖溶液0mL，0.1mL，0.2mL，0.4mL，0.8mL并依次用蒸馏水补足体积到1mL，各管均加入蒽酮试剂4mL，震摇混匀。
可溶性糖含量测定(蒽酮法)实验的改进
可溶性糖含量测定(蒽酮法)实验的改进刘海英;王华华;崔长海;王曼;郭净净;文昭普;李安琪【摘要】对蒽酮比色法测定植物叶片中可溶性糖含量的几个问题进行了探索和改进.结果表明,提前1h配制80％硫酸,待其温度与室温一致时,称取蒽酮立即用于试剂配制,溶液显示正常的浅黄色；用刻度离心管提取可溶性糖并在其中定容和离心；强调多次摇匀和适度稀释.上述改进可以提高实验准确度,并简化实验操作.【期刊名称】《实验室科学》【年(卷),期】2013(016)002【总页数】2页(P19-20)【关键词】可溶性糖含量;蒽酮法;改进【作者】刘海英;王华华;崔长海;王曼;郭净净;文昭普;李安琪【作者单位】河南师范大学生命科学学院,河南新乡 453007【正文语种】中文【中图分类】S339.3糖类是奠定植物形态发生与建成的物质基础之一［1］，可溶性糖与植物的生长发育关系密切［2］。
由于可溶性糖对预防蛋白质的变性具有重要的保护作用，它的含量与植物的抗逆性正相关［3－4］。
逆境胁迫后可溶性糖含量增加，抗逆性强的农作物品种比抗逆性弱的品种在遭受逆境胁迫时，总能保持较高的可溶性糖含量，有较强的光合以及干物质合成能力，形态上表现为受害比较轻，产量相对高，可溶性糖含量常作为品种抗逆性评价指标之一［5－6］。
糖溶液可以与3，5－二硝基水杨酸共热生成棕红色化合物(3，5－二硝基水杨酸法)［7］，糖在浓硫酸作用下，经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛可与苯酚(苯酚法)或蒽酮(蒽酮法)反应［7］，分别生成橙红色和蓝绿色化合物，在一定范围内，颜色深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。
植物体内各种单糖和麦芽糖等物质为还原糖;均属于能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖，其中前者常用3，5－二硝基水杨酸法测定，后者常用苯酚法测定［7］。
但在没有必要细致划分各种糖的情况下，用蒽酮法可以一次测定出糖总量，省去许多麻烦［7－10］。
因此，蒽酮法测定可溶性糖含量，是植物生理学常规教学实验，蒽酮试剂的配制是用80%硫酸做溶剂，配制出的溶液颜色有时黄色较浓，有时发黄绿，致使测定结果异常。
植物组织中可溶性糖含量的测定
植物组织中可溶性糖含量的测定XXX,YYY,ZZZ(版权所有，仅限个人)一.实验目的1、学习植物组织中可溶性糖的测定方法。
2、了解可溶性糖在植物物质代谢中的作用。
二、实验原理：（一）提取：利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，用铅离子沉淀提取液中的蛋白质，用草酸钠除去多余的铅离子，过滤后即可获得植物的可溶性糖提取液。
（二）测定：蒽酮比色法五碳糖和六碳糖在90~100℃温度下可被浓硫酸脱水生成糠醛或羟甲基糖醛，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮比色法该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比，可以比色测定。
该法方法简便，绝大部分的碳水化合物（五碳糖、六碳糖）都能与蒽酮反应产生颜色。
三、实验材料：大白菜Brassica campestris ssp.pekinensis四.实验步骤：1．标准曲线的绘制配制浓度分别为0,50,100,150,200µg/ml的糖标准溶液各10ml。
显色：取糖标准液lml于一干洁的试管中,加蒽酮试剂5ml混合,于沸水浴中煮沸10分钟。
比色：测定A600nm的吸光度值。
浓度：ug/mL050100150200吸光度：a00.1950.3550.5150.689绘制标准曲线：．可溶性糖的提取：称取0.250g待测植物叶片，放入研钵中，加少许乙醚研磨成均浆，用70℃的热水洗涤研钵,植物材料和洗涤后的溶液全量转移到100ml烧杯中，使总体积在30~ 40ml，将烧杯放在水浴锅中70~80℃半小时,冷却后滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质，连同残渣一起全量转移到100ml容量瓶中，定容，充分摇匀，用干燥漏斗过滤于一干燥的三角瓶中,瓶中事先放入少量(约0.2-0.4g)的草酸钠粉末，除去滤液中过量的铅，使生成草酸铅沉淀再行过滤，所得透明滤液即为可溶性糖提取液。
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出，自然冷却至室温，在630nm波长下比色。以标准蔗
糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。
实验步骤
2. 植物样品中可溶性糖的提取（其他组做，数据共享） 将植物叶片剪碎混匀，准确称取0.3g3份，加入研钵中，
再加入2-3mL水和少量石英砂，研磨后转入试管中，用 水再洗涤2次，均转入试管中。将试管置于沸水浴中提取 30min，提取液过滤至25mL容量瓶，反复冲洗试管及 残渣，定容至刻度。 3. 显色测定（同上）： 吸取0.5mL提取液于试管中，加水1.5mL，蒽酮乙酸乙酯 试剂0.5mL和5mL浓硫酸，混匀，沸水浴中准确保温 1min取出，自然冷却至室温，在630nm波长下比色。
注意一切与浓硫酸操作有关的安全 ！！！不要吝啬用水和卫生纸！！ ！
作业
得出实验结果后，根据标准曲线算出的含糖量 ，写于实验报告上。（之前问题）
管号
0
1糖标准液（mL） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
水（mL）
2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0
蔗糖含量（μg）
0 20 40 60 80 100
（2）在每支试管中立即加入蒽酮乙酸乙酯试剂0.5mL和
5mL浓硫酸，用玻棒混匀，沸水浴中准确保温1min取
。
实验目的；实验材料、仪器设备与试剂
目的：掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 仪器 分光光度计、水浴锅； 天平、试管架、容量瓶、试管、滤纸、漏斗。 试剂 100mg/L葡萄糖标准液；浓硫酸；蒽酮乙酸乙酯试剂 材料：白兰叶片
实验步骤
1. 葡萄糖标准曲线的制作（1组同学做，数据共享）
（1）取6支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄 糖溶液：
实验结果计算与分析
从标准曲线查得的糖含量（μg）
植物样品含糖量（％）＝
(C× VT× N) × 100
(Vs× W× 106)
C-从标准曲线查得的糖含量（μg）
VT-提取液体积（ml） VS-吸取样品液体积（ml） N-稀释倍数（根据实际情况）
W-样品重（g）
注意事项
加浓硫酸时应缓慢，以免产生大量 热量而爆沸，灼伤皮肤，如出现上 述情况，应擦干后迅速用自来水冲 洗。
植物生理学实验
实验四 植物可溶性糖含量的测定 （蒽酮比色法）
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实验原理
强酸可使糖类脱水成糖醛或羟甲基糖醛。 糖醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生
物，呈蓝绿色。 该物质最大吸收峰在630nm处。在10－100μg/L范围
内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 该法可测定几乎所有糖类（包括单糖、寡糖和多糖）