人类外周血中提取基因组DNA方法的探索

（ 责任编辑8 赛罕其其格）
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人类外周血中提取基因组DNA方法的探索
作者： 作者单位： 刊名： 英文刊名： 年，卷(期)： 被引用次数： 黄亚凤， 强欣， 张丽伟， HUANG Ya-feng， QIANG Xin， ZHANG Li-wei 内蒙古民族大学,临床医学院,内蒙古,通辽,028000 内蒙古民族大学学报（自然科学版） JOURNAL OF INNER MONGOLIA UNIVERSITY FOR NATIONALITIES(NATURAL SCIENCES) 2006，21(4) 3次
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（ A&’’464 &2 A’707P1’ 54Q7P704 ， 3004/ 5&06&’71 80794/:7;< 2&/ )1;7&01’7;74:， R&06’71&( *!,*** ， AS701）
参考文献(5条) 1.萨姆布鲁克 J;弗里奇 E F;曼尼阿蒂斯 T;金冬雁, 黎孟枫 分子克隆实验指南 1999 2.王龙武;石柯;彭爱红 一种快速微量外周血基因组DNA提取方法[期刊论文]-中国现代医学杂志 2004(02) 3.赵铁军;韩瑞;春华 三种全血基因组DNA提取方法的比较[期刊论文]-张家口医学院学报 2003(04) 4.逄洪波;陈永燕;张恒庆 从动物血液中提取基因组DNA方法的比较研究[期刊论文]-辽宁师范大学学报(自然 科学版) 2005(04) 5.史艳萍;钟晓红 两种全血基因组DNA提取方法的比较[期刊论文]-第一军医大学分校学报 2005(02)
〔 "， !〕 〔 C， $〕
( 但目前关于 >)= 提取方法很多， 不同的方法有不同的 优 缺 点， 其使用的分析技术有所不 ( 为了找一种提取方法简单、 高效的方法， 我们在传统的酚、 氯抽提法的基础上摸索出了改良方
法( 为今后的科研工作提供较好的 >)= 提取方法(
"# 材料和方法
"( "来自百度文库# 材料# 人外周血一式 ! 份， 每份 GW’ 用 Z>R= 抗凝( "( ! # 方法
参8 考8 文8 献 〔’〕 史艳萍， 钟晓红, 两种全血基因组 "#$ 提取方法的比较 〔 J〕 , 第一军医大学分校学报， 1((% ， 1F （1） ： ’2( K ’21, 〔1〕 逄洪波， 陈永燕， 张恒庆， 等, 从动物血液中提取基因组 "#$ 方法的比较研究 〔 J〕 , 辽宁师范大学学报， 1((% ， 1F （!） ： !%9 K !I(, 〔2〕 赵铁军， 韩瑞， 春华, 三种全血基因组 "#$ 提取方法的比较 〔 J〕 , 张家口医学院学报， 1((2 ， 1( （!） ： !I K !9, 〔!〕 王龙武， 石柯， 彭爱红, 一种快速微量外周血基因组 "#$ 提取方法 〔 J〕 , 中国现代医学杂志， 1((!， ’! （1） ： 9( K 91, 〔%〕 萨姆布鲁克 J， 弗里奇 / L， 曼尼阿蒂斯 ., 分子克隆实验指南 〔 M〕 , 第二版, 北京： 北京科学出版社， ’NNN, !I% K !I9,
相似文献(4条) 1.期刊论文 史艳萍.钟晓红.SHI Yan-ping.ZHONG Xiao-hong 两种全血基因组DNA提取方法的比较 -第一军 医大学分校学报2005,28(2)
目的比较两种不同的DNA提取方法提取人全血基因组DNA,对DNA提取率、纯度以及PCR扩增的效果影响.方法分别用传统的酚、氯抽提法和改 良法两种不同的方法,提取人全血基因组DNA.结果两种方法提取的DNA纯度用光吸收比值为指标检测A280/260值为:1.45和1.82,提取DNA总量分别 为187μg/ml和260 μg/ml.用0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定改良法制备的DNA效果较好,PCR扩增效果有差异.结论用改良法提取的DNA总量明显较高 ,提取效率高,PGR扩增的效果好,是全血基因组DNA提取中首选考虑的方法.
2.期刊论文 张子波.杨康鹃.金艳花.金雄吉.ZHANG Zi-bo.YANG Kang-juan.JIN Yan-hua.JIN Xiong-ji 延 边朝鲜族人群趋化因子受体5△32基因突变的检测 -延边大学医学学报2002,25(2)
[目的]了解趋化因子受体5△32基因突变遗传多态性在延边朝鲜族人群中的分布情况,初步评估我国延边朝鲜族人群对人类免疫缺陷病毒Ⅰ感染的遗传易感性.[方法]用酚/氯抽提法对120名延边地区朝鲜族人群的基因组DNA进行了提取,然后采用聚合酶链反应方法对基因组DNA中的 趋化因子受体5△32基因突变进行了检测.[结果]在所观察的群体中没有趋化因子受体5△32的存在.[结论]初步显示我国延边朝鲜族人群对人类 免疫缺陷病毒具有较高的遗传易感性,以此为朝鲜族艾滋病的流行病学研究及预防和治疗提供重要的遗传信息.
!**+ F *! F *E ! 收稿日期： 作者简介： 黄亚凤 （ "DGD F ） ， 女， 内蒙古开鲁县人， 实验师， 从事医学病学技术研究(
万方数据
第! 期
黄亚凤等： 人类外周血中提取基因组 "#$ 方法的探索
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匀， 冰浴静置 % & ’( )*+, 离心， 弃去上清液， 加入 ! )- ./0， 1%( & 2(( !- 0"0（ ’(3 ） ，’(( !- 蛋白酶 4 （ % )5 6 7-） 至终体积为 ’(( !5 6 )-， 吹打混匀, ， 将消化过夜的大离心管中各加入等体积的 .;*<=> ’, 1, ! 8 29: 消化过夜（ 或 %%: 消化 ! & % 小时） ?@- 饱和酚， 配平混匀， 冰浴 ’( )*+； 离心， 抽提上清液移至另一个离心管中， 每管中再加入等体积的 .;*<=?@- 饱和酚， 配平混匀， 冰浴 ’( )*+， 离心，抽提上清液移至另一个离心管中， 每管中各加入等体 积的氯仿： 异戊醇 （ 1!A ’ ） ， 配平混匀， 冰浴 ’( )*+； ’, 1, %8 离心 %((( ;B) ’( )*+ !: ； 抽提上清液移至小烧杯中， 加入 2 倍体积的冰无水乙醇， 混匀， 冰 浴静置 2( 分钟， 记录抽提上清的体积； 用 C*B 头小心挑出小烧杯中析出的絮状沉淀， 移至 ’, % )- DB> BD+7=;E 管中,
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28 结论
从上述结果分析， 传统的酚、 氯抽提法提取 "#$ 不仅操作过于繁琐， 费时间， 标本需要量大以外 所得 "#$ 的纯度、 "#$ 的总量，G@H 的扩增效果的影响上都存在欠缺, 所以根据需要改进是有必要 的 , 我们探索的基因组 "#$ 提取改进方法操作简单、 节时， 对于微量标本也能获得所需的 "#$， 同时 结果更为稳定， 是一种值得推广的抽提 "#$ 的好方法,
18 结果
1, ’8 琼脂糖电泳检测结果 用 (, F3 的琼脂糖凝胶电泳分别检测两种方法提取的 "#$ 模板， 在紫外灯可见用改良法制备的 "#$ 电泳带整齐， 荧光较强； 用传统的酚、 氯抽提法制备的 "#$ 电泳带欠整齐， 有拖尾现象， 荧光较 弱, 1, 18 G@H 扩增效果 在相同的模板浓度， 用相同的反应体系， 反应条件及引物， 在同一 G@H 仪上分别用两种方法提取 的 "#$ 为模板进行扩增， 结果用 I3 聚丙烯酰氨凝胶电泳检测， 用银染法显色, 结果用改良法提取的 "#$ 为模板时， G@H 的扩增效果明显较用传统的酚、 氯抽提法 "#$ 好， 而且这种差异随着扩增产物 的片段的增加而更为明显,
〔 G〕 "( !( " # 传统的提取 >)= 按照 《 分子克隆实验指南》 进行 ， 该法由 [’70 和 \;122&/Q （ "DE+ ） 根据 I/&::
F [4’’1/Q 等 （ "DEC ） 的方法改进而成( 取 Z>R= 抗凝的人外周血 G W’， 离心分离血浆和血球( 血球倒入 G* W’ 大离心管 "( !( ! # 改进方法： 中， 倒入 G ? "* 倍体积的消毒蒸馏水， 混匀， 冰浴静置 G ? "* W70( "( !( C# 离心 （ G*** /YW "* W70 $] ） ， 弃去上清液， 倒入消毒生理盐水至终体积为 !* ? C* W’， 配平混
3.期刊论文 王强.刘芳.赫崇波.木云雷.王丽梅.尚德静.WANG Qiang.LIU Fang.HE Chong-bo.MU Yun-lei. WANG Li-mei.SHANG De-jing 4种海水鱼线粒体DNA大片段的PCR-RFLP分析 -水产科学2006,25(5)
用蛋白酶k酚氯抽提法从圆斑星鲽、高眼鲽、大菱鲆和真鲷4种海水鱼的肌肉组织中提取基因组DNA, 根据金枪鱼、牙鲆及相关鱼类的线粒体 DNA(mtDNA)序列保守片断设计出扩增引物, 扩增从16SrRNA到ND4之间约9400bp的mtDNA长片段.用10种限制性内切酶(Hinf I, Hind III, EcoR V, EcoT22 I, Mun I, EcoT14 I, Apa I, Bln I, Ava II, Dra I)对扩增得到的mtDNA长片段进行限制性酶切和分析, 其中8种酶有酶切位点.利 用Nei-Li的片断法计算出单倍型的片断共享度,根据片断共享度计算出4种鱼之间的遗传距离,用Mega3.1软件构建NJ系统关系树,同时探讨利用线 粒体大片断PCR-RFLP方法进行鱼类系统发生研究的特点.
第 !" 卷# 第 $ 期 !**+ 年 , 月
内蒙古民族大学学报 （ 自然科学版） -&./01’ &2 3004/ 5&06&’71 80794/:7;< 2&/ )1;7&01’7;74:
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人类外周血中提取基因组 >)= 方法的探索
黄亚凤， 强# 欣， 张丽伟
（ 内蒙古民族大学 临床医学院， 内蒙古 通辽# *!,*** ）
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摘# 要： 目的： 传统的酚、 氯抽提法的基础上进一步改进 >)= 提取方法， 为分子遗传学研究打下基础( 方法： 人 类基因组 >)= 提取传统方法和改进方法( 结果： 改进的方法可以得到大量的较完整的基因组 >)=， 并且纯度 本改良法提取的 >)= 总量明显较高， 提取效率高， @AB 扩增的效果好， 是外周血基因组 达到 "( , ? !( *( 结论： >)= 提取中首选考虑的方法( 关键词： 基因组 >)= ； 酚、 氯抽提法 中图分类号： BCD$( !# # 文献标识码： =# # 文章编号： "+E" F *",G （ !**+ ） *$ F *$", F *!