猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测
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1 材料与方法
1 .1 材料 1 .1 .1 试验用动物 湖南省益阳市南县广田猪场 4 周龄仔猪 , 共 90 头 。 1 .1 .2 试剂 猪口蹄 疫病毒 VP1 结构蛋 白抗体 ELISA(VP 1 EL ISA)试验诊断试剂盒为优耐特公司 产品 ;O 型 口 蹄 疫 抗 体 液 相 阻 断 E LISA (LP BELISA)检测试剂盒为兰州兽医研究所产品 ;猪口蹄 疫 O 型合成肽疫苗为申联生物医药(上海)有限公 司产品(批号 20080907);猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗 为中牧实业股份有限公司产品(批号 0807007)。 1 .2 方法 1 .2 .1 试验猪的选取 从 17 栏 4 周龄健康仔猪
动DO物I :医10学.16进 437展/j .,c2n0ki0.910,0370-(5803)8: .1201069-.1081.8029 P rogress in Vet eri nary Medicine
猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗抗体水平检测＊
陈方志1 ,2 , 邱伯根3 , 刘道新2 , 谈志详2 , 范仲鑫2 , 邱立新2 , 鲁杏华2 , 何世成2 , 唐小明2 , 黄建龙2 , 汪洪冰2
[ 2] Frenkel H S .Cu lti vat ion of t he f oot-and-m ou t h disease vi rus in explant ed epi th eliu m of t he bovine t ongu e.IX .G row t h charact eri sti cs of t he viru s in large s cal e ti ssue cult ures[ J] .A m J V et Res , 1956, 17(62):40-44 .
2 .0 , 并持续保持在一个较高的水平 。 申联一免组 , 免疫后抗体上升平稳上升 , 第 3 周
达到 100 %阳性率 , 第 9 周虽有所回落 , 但抗体水平 仍然很高 。申联二免组 , 抗体首免后即开始快速上 升 , 第 3 周阳性率达到 100 %, 此后抗体水平上升放 缓 , 直至二免后 , 再度加速上升 , 第 11 周平均 OD 值 达到 3 .25 。
阳性率/ % Posi ti ve rat e
60 100 100 100 100 100 100
OD 值 OD
V alue
1 .01 1 .85 2 .28 2 .42 2 .80 3 .25 2 .62
阳性率/ % Posit ive r a te
80 100 100 83 .3 100 100 100
作用 。 本次试验是在规模化养殖生产 线上进行的 , 较
为切合生产实际 , 对生产实践中疫苗接种具有指导 价值 。但本次试验仅从免疫抗体水平方面进行检测 和探讨 , 对于疫苗的免疫机理 、实际保护效力等方面 还有待进一步研究 。 参考文献 :
[ 1] 殷 震 , 刘景华 .动物病毒学[ M] .北京 :科学出版社 , 1997 :479499 .
60 83 .3 100 100 100 100 100
OD 值 OD
V al ue
0 .35 1 .29 1 .27 2 .29 2 .76 2 .69 2 .13
阳性率/ % Posit ive r a te
80 83 .3 100 100 100 100 100
OD 值 OD
V alue
0 .46 1 .01 1 .81 2 .26 2 .16 2 .75 1 .80
0 .156 。 中牧一免组 , 免疫后第 4 周 , 抗体阳性 率达到
100 %;第 5 周达到高峰和开始缓慢回落 , 但阳性率 始终保持在 100 %, 并且抗 体水平较高 。 中牧二免 组 , 首免后抗体上升平缓 , 第 4 周阳性率达到 100 %; 二免后抗体水平上升迅速 , 1 周后 OD 值 普遍超过
3 讨论
两种猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫过的 4 组共 计 80 头试验猪 , 首免后 4 周内即 100 %达到抗体阳 性 , 且抗体一直维持在一个较高的水平 。 这说明两 种合成肽疫苗的免疫原性都很好 , 进入动物体内后 迅速诱导免疫应答 , 产生了大量抗体 。 申联组的抗 体水平较中牧组略高 , 且抗体水平均一性好 , 波动不 大 ;抗体持续期也略好于中牧组 , 首免后 9 周仍呈上 升趋势 , 而中牧两个试验组抗体水平分别在第 5 周 和第 7 周开始呈现缓慢下降趋势 。 但无论哪个组 , 抗体水平均能令人满意 , 即使一次免疫 , 也足以维持 阳性水平以上的抗体直至生猪出栏 。
OD 值 OD
V alue
0 .24 0 .14 0 .09 0 .08 0 .10 0 .09 0 .05
阳性率/ % Positi ve rat e
60 33 .3 0 .0 0 .0 0 .0 0 .0 0 .0
2 .2 VP1 结构蛋白抗体检测结果对比 申联组抗体水平略好于中牧组 , 二免组抗体水平均高于一免组 , 结果见图 1 。
对照组 , 无免疫应答 , 抗体水平随母源抗体的逐 步消失而下降至阳性阈值以下 。详见表 1 。
采样周龄 S ampli ng w eek age
6 7 8 9 11 13 20
表 1 V P1 ELIS A 检测 结果 Table 1 Result s of V P1 E LIS A det ection
中图分类号 :S852.659.6;S858 .28
文献标识码 :B
文章编号 :1007-5038(2009)08-0116-03
口蹄疫(F oo t-and-mo ut h disease , F MD)是偶蹄 动物的一种急性 、烈性 、高度接触性传染病 , 严重威 胁畜牧业的发展和人类的健康 , 被世界动物卫生组 织列为 A 类传染病之首[ 1] 。防控 FM D , 传统灭活疫 苗起到 了 重 要 作 用 , 但 其 安 全 性 和 免 疫 效 果 不 佳[ 2-3] 。 新型的猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗相对于传 统疫苗具有生物安全性好 , 免疫副作用小 , 可有效区 分猪口蹄疫 O 型合 成 肽疫 苗 免疫 的 动物 和感 染 FM DV 的动 物 , 对 多种 O 型 FM DV 毒 株 适应 性 好[ 4-7] 的优点 。但是猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗的免 疫抗体水平 、免疫持续期等相关数据尚显不足 , 影响 了推广应用 。本试研对这些问题进行了研究 , 以期 为猪口蹄疫 O 型合成肽 疫苗防控猪口蹄疫提供理 论支持 。
只免疫动物抗体滴度低于 1 ∶4 , 即无保护效果 。 使用 Pearson 函数 对液相阻断 E LISA 与 VP1
结构蛋白抗体 EL ISA 试验结果进行相关性比对 , 结 果显示相关指数 R =0 .873 , 属于显著正相关 。
11 8
动物医学进展 2009 年 第 30 卷 第 8 期(总第 193 期)
免疫抑制性疾病除直接造成与其他传染病相同 的危害外 , 更严重的是受感染畜禽的免疫功能受到 损害 , 结果导致机体抵抗力下降而易受其他病原的 继发感染 , 引起多种综合征[ 8-10] 。同时 , 还造成对疫 苗接种的副反应增强 , 甚至使免疫失败 。 之前有过 数次试验均受免疫抑制性疾病影响未能取得满意的 试验结果 , 本试验对于试验猪免疫抑制性疾病的细 致排查筛选 , 对最终良好的免疫结果起到了重要的
(1 .湖南农业大学动物医 学院 , 湖南长沙 410128;2.湖南省动物疫病预防控制中心 , 湖南长沙 410007 ; 3.湖南省兽医局 , 湖 南长沙 410006)
摘 要 :为了解猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗的免疫效果 , 选用了两个厂家生产的猪口蹄疫 O 型合成肽疫 苗 , 对 80 头试验仔猪进行了免疫注射 , 并在 6 、7 、8 、9 、11 、13 、20 周龄采血 , 通过 ELISA 检测抗体水平的变 化 。 结果显示 , 猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗能快速诱导产生高水平的抗体 ;疫苗的免疫副作用小 ;使用 VP1 ELISA 和 L PB-EL ISA 检测猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫抗体试验相关性较好 。 关键词 :猪 ;口蹄疫 O 型合成肽疫苗 ;抗体 ;酶联免疫吸附试验
＊ 收稿日期 :2009-04-08 作者简介 :陈方志(1984 -), 男 , 湖南长沙 人 , 硕士研究生 , 主要从事动物流行病学研究 。
陈方志等 :猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗抗体水平检 测
117
2 结果
2 .1 VP1 结构蛋白抗体 ELISA 检测 参照 试 剂 盒 说 明 书 进 行 计 算 , 阳 性 阈 值 为
[ 3] W aldm ann O , Petermann H G .V ariation s of t he virus of t he f oot and mout h di sease[ J] .Bakt eri ol Parasi tenkd Infekt ionsk r H yg , 1952 , 157(8):551-555 .
在整个试验阶段 , 全部试验猪在两次注射疫苗 前后均未观察到应激反应 , 说明了该疫苗免疫副反 应小 , 是推广该疫苗的有利条件 。
试验证明 , 对于猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫 的生猪 , 用 VP 1 EL ISA 和 LP B-EL ISA 均能较为准 确的检测其抗体水平 , 试验相关性较好 。
图 1 各免疫组抗体水平对比 Fi g .1 C om pari son of ant ibody levels among dif eren t groups
wenku.baidu.com
2 .3 液相阻断 LP B-ELISA 检测结果 参照试剂盒说明书进行计算 , 60 %的免疫动物
抗体滴度大于 1 ∶64 , 能完全保护 ;37 .5 %的免疫动 物抗体滴度大于 1 ∶4 , 具有 50 %保护效力 ;仅有一
中牧一免组 CAH IC 1I
中牧二免组 CA H IC 2I
申联一免组 S HS L 1I
申联二免组 SH SL 2I
对照组 C on t rol
OD 值 OD
V alue
0 .33 0 .82 2 .06 2 .49 2 .05 2 .20 1 .88
阳性率/ % Posi ti ve rate
中 , 每栏随机选取 6 头 , 前腔静脉真空管采血 。 分离 血清 , 使用 EL ISA 试剂盒检测 P RV 、CSF V 、F MDV 抗体 ;应用 PC R 方法检测 P RRS 、P CV-2 抗原 。 在 无 P RV 、P RRSV 、PCV-2 、CSFV 病原 , 且 FM DV 母 源抗体水平低于阳性阈值的栏舍中选取共 90 头仔 猪进行试验 。 1 .2 .2 试验猪的分组及免疫 试验猪分为 5 组 :中 牧一免组 ;中牧二免组 ;申联一免组 ;申联二免组 ;对 照组 。其中对照组 10 头 , 其余每组 20 头 。参考疫 苗说明书 , 4 周龄进行首免 , 二免组于 8 周龄进行加 强免疫 , 每次每头份 1 m L 。 1 .2 .3 样品采集 试验猪 6 、7 、8 、9 、11 、13 、20 周 龄 , 每组随机选取 6 头 ～ 8 头试验猪采血 , 将采集的 血样编号分离血清 。 1 .2 .4 抗体检测 使用上海优耐特公司生产的猪 口蹄疫病毒 VP1 结构蛋白抗体 EL ISA 试验诊断试 剂盒对血清进行口蹄疫抗体检测 , 操作按试剂盒说 明书进行 。
每批次血清随机抽取一部分 , 使用兰州兽医研 究所生产的 O 型口蹄疫抗体液相阻断 EL ISA 检测 试剂盒 , 对血清进行口蹄疫抗体检测 , 操作按试剂盒 说明书进行 。 1 .2 .5 试验结果相 关性效验 利用 SPSS 软件调 用 Pearso n 函 数对 VP1 EL ISA 试 验结 果与 LP BELISA 试验结 果进 行分 析 , 了解两 个试 验的 相关 性。
1 .1 材料 1 .1 .1 试验用动物 湖南省益阳市南县广田猪场 4 周龄仔猪 , 共 90 头 。 1 .1 .2 试剂 猪口蹄 疫病毒 VP1 结构蛋 白抗体 ELISA(VP 1 EL ISA)试验诊断试剂盒为优耐特公司 产品 ;O 型 口 蹄 疫 抗 体 液 相 阻 断 E LISA (LP BELISA)检测试剂盒为兰州兽医研究所产品 ;猪口蹄 疫 O 型合成肽疫苗为申联生物医药(上海)有限公 司产品(批号 20080907);猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗 为中牧实业股份有限公司产品(批号 0807007)。 1 .2 方法 1 .2 .1 试验猪的选取 从 17 栏 4 周龄健康仔猪
动DO物I :医10学.16进 437展/j .,c2n0ki0.910,0370-(5803)8: .1201069-.1081.8029 P rogress in Vet eri nary Medicine
猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗抗体水平检测＊
陈方志1 ,2 , 邱伯根3 , 刘道新2 , 谈志详2 , 范仲鑫2 , 邱立新2 , 鲁杏华2 , 何世成2 , 唐小明2 , 黄建龙2 , 汪洪冰2
[ 2] Frenkel H S .Cu lti vat ion of t he f oot-and-m ou t h disease vi rus in explant ed epi th eliu m of t he bovine t ongu e.IX .G row t h charact eri sti cs of t he viru s in large s cal e ti ssue cult ures[ J] .A m J V et Res , 1956, 17(62):40-44 .
2 .0 , 并持续保持在一个较高的水平 。 申联一免组 , 免疫后抗体上升平稳上升 , 第 3 周
达到 100 %阳性率 , 第 9 周虽有所回落 , 但抗体水平 仍然很高 。申联二免组 , 抗体首免后即开始快速上 升 , 第 3 周阳性率达到 100 %, 此后抗体水平上升放 缓 , 直至二免后 , 再度加速上升 , 第 11 周平均 OD 值 达到 3 .25 。
阳性率/ % Posi ti ve rat e
60 100 100 100 100 100 100
OD 值 OD
V alue
1 .01 1 .85 2 .28 2 .42 2 .80 3 .25 2 .62
阳性率/ % Posit ive r a te
80 100 100 83 .3 100 100 100
作用 。 本次试验是在规模化养殖生产 线上进行的 , 较
为切合生产实际 , 对生产实践中疫苗接种具有指导 价值 。但本次试验仅从免疫抗体水平方面进行检测 和探讨 , 对于疫苗的免疫机理 、实际保护效力等方面 还有待进一步研究 。 参考文献 :
[ 1] 殷 震 , 刘景华 .动物病毒学[ M] .北京 :科学出版社 , 1997 :479499 .
60 83 .3 100 100 100 100 100
OD 值 OD
V al ue
0 .35 1 .29 1 .27 2 .29 2 .76 2 .69 2 .13
阳性率/ % Posit ive r a te
80 83 .3 100 100 100 100 100
OD 值 OD
V alue
0 .46 1 .01 1 .81 2 .26 2 .16 2 .75 1 .80
0 .156 。 中牧一免组 , 免疫后第 4 周 , 抗体阳性 率达到
100 %;第 5 周达到高峰和开始缓慢回落 , 但阳性率 始终保持在 100 %, 并且抗 体水平较高 。 中牧二免 组 , 首免后抗体上升平缓 , 第 4 周阳性率达到 100 %; 二免后抗体水平上升迅速 , 1 周后 OD 值 普遍超过
3 讨论
两种猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫过的 4 组共 计 80 头试验猪 , 首免后 4 周内即 100 %达到抗体阳 性 , 且抗体一直维持在一个较高的水平 。 这说明两 种合成肽疫苗的免疫原性都很好 , 进入动物体内后 迅速诱导免疫应答 , 产生了大量抗体 。 申联组的抗 体水平较中牧组略高 , 且抗体水平均一性好 , 波动不 大 ;抗体持续期也略好于中牧组 , 首免后 9 周仍呈上 升趋势 , 而中牧两个试验组抗体水平分别在第 5 周 和第 7 周开始呈现缓慢下降趋势 。 但无论哪个组 , 抗体水平均能令人满意 , 即使一次免疫 , 也足以维持 阳性水平以上的抗体直至生猪出栏 。
OD 值 OD
V alue
0 .24 0 .14 0 .09 0 .08 0 .10 0 .09 0 .05
阳性率/ % Positi ve rat e
60 33 .3 0 .0 0 .0 0 .0 0 .0 0 .0
2 .2 VP1 结构蛋白抗体检测结果对比 申联组抗体水平略好于中牧组 , 二免组抗体水平均高于一免组 , 结果见图 1 。
对照组 , 无免疫应答 , 抗体水平随母源抗体的逐 步消失而下降至阳性阈值以下 。详见表 1 。
采样周龄 S ampli ng w eek age
6 7 8 9 11 13 20
表 1 V P1 ELIS A 检测 结果 Table 1 Result s of V P1 E LIS A det ection
中图分类号 :S852.659.6;S858 .28
文献标识码 :B
文章编号 :1007-5038(2009)08-0116-03
口蹄疫(F oo t-and-mo ut h disease , F MD)是偶蹄 动物的一种急性 、烈性 、高度接触性传染病 , 严重威 胁畜牧业的发展和人类的健康 , 被世界动物卫生组 织列为 A 类传染病之首[ 1] 。防控 FM D , 传统灭活疫 苗起到 了 重 要 作 用 , 但 其 安 全 性 和 免 疫 效 果 不 佳[ 2-3] 。 新型的猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗相对于传 统疫苗具有生物安全性好 , 免疫副作用小 , 可有效区 分猪口蹄疫 O 型合 成 肽疫 苗 免疫 的 动物 和感 染 FM DV 的动 物 , 对 多种 O 型 FM DV 毒 株 适应 性 好[ 4-7] 的优点 。但是猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗的免 疫抗体水平 、免疫持续期等相关数据尚显不足 , 影响 了推广应用 。本试研对这些问题进行了研究 , 以期 为猪口蹄疫 O 型合成肽 疫苗防控猪口蹄疫提供理 论支持 。
只免疫动物抗体滴度低于 1 ∶4 , 即无保护效果 。 使用 Pearson 函数 对液相阻断 E LISA 与 VP1
结构蛋白抗体 EL ISA 试验结果进行相关性比对 , 结 果显示相关指数 R =0 .873 , 属于显著正相关 。
11 8
动物医学进展 2009 年 第 30 卷 第 8 期(总第 193 期)
免疫抑制性疾病除直接造成与其他传染病相同 的危害外 , 更严重的是受感染畜禽的免疫功能受到 损害 , 结果导致机体抵抗力下降而易受其他病原的 继发感染 , 引起多种综合征[ 8-10] 。同时 , 还造成对疫 苗接种的副反应增强 , 甚至使免疫失败 。 之前有过 数次试验均受免疫抑制性疾病影响未能取得满意的 试验结果 , 本试验对于试验猪免疫抑制性疾病的细 致排查筛选 , 对最终良好的免疫结果起到了重要的
(1 .湖南农业大学动物医 学院 , 湖南长沙 410128;2.湖南省动物疫病预防控制中心 , 湖南长沙 410007 ; 3.湖南省兽医局 , 湖 南长沙 410006)
摘 要 :为了解猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗的免疫效果 , 选用了两个厂家生产的猪口蹄疫 O 型合成肽疫 苗 , 对 80 头试验仔猪进行了免疫注射 , 并在 6 、7 、8 、9 、11 、13 、20 周龄采血 , 通过 ELISA 检测抗体水平的变 化 。 结果显示 , 猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗能快速诱导产生高水平的抗体 ;疫苗的免疫副作用小 ;使用 VP1 ELISA 和 L PB-EL ISA 检测猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫抗体试验相关性较好 。 关键词 :猪 ;口蹄疫 O 型合成肽疫苗 ;抗体 ;酶联免疫吸附试验
＊ 收稿日期 :2009-04-08 作者简介 :陈方志(1984 -), 男 , 湖南长沙 人 , 硕士研究生 , 主要从事动物流行病学研究 。
陈方志等 :猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗抗体水平检 测
117
2 结果
2 .1 VP1 结构蛋白抗体 ELISA 检测 参照 试 剂 盒 说 明 书 进 行 计 算 , 阳 性 阈 值 为
[ 3] W aldm ann O , Petermann H G .V ariation s of t he virus of t he f oot and mout h di sease[ J] .Bakt eri ol Parasi tenkd Infekt ionsk r H yg , 1952 , 157(8):551-555 .
在整个试验阶段 , 全部试验猪在两次注射疫苗 前后均未观察到应激反应 , 说明了该疫苗免疫副反 应小 , 是推广该疫苗的有利条件 。
试验证明 , 对于猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫 的生猪 , 用 VP 1 EL ISA 和 LP B-EL ISA 均能较为准 确的检测其抗体水平 , 试验相关性较好 。
图 1 各免疫组抗体水平对比 Fi g .1 C om pari son of ant ibody levels among dif eren t groups
wenku.baidu.com
2 .3 液相阻断 LP B-ELISA 检测结果 参照试剂盒说明书进行计算 , 60 %的免疫动物
抗体滴度大于 1 ∶64 , 能完全保护 ;37 .5 %的免疫动 物抗体滴度大于 1 ∶4 , 具有 50 %保护效力 ;仅有一
中牧一免组 CAH IC 1I
中牧二免组 CA H IC 2I
申联一免组 S HS L 1I
申联二免组 SH SL 2I
对照组 C on t rol
OD 值 OD
V alue
0 .33 0 .82 2 .06 2 .49 2 .05 2 .20 1 .88
阳性率/ % Posi ti ve rate
中 , 每栏随机选取 6 头 , 前腔静脉真空管采血 。 分离 血清 , 使用 EL ISA 试剂盒检测 P RV 、CSF V 、F MDV 抗体 ;应用 PC R 方法检测 P RRS 、P CV-2 抗原 。 在 无 P RV 、P RRSV 、PCV-2 、CSFV 病原 , 且 FM DV 母 源抗体水平低于阳性阈值的栏舍中选取共 90 头仔 猪进行试验 。 1 .2 .2 试验猪的分组及免疫 试验猪分为 5 组 :中 牧一免组 ;中牧二免组 ;申联一免组 ;申联二免组 ;对 照组 。其中对照组 10 头 , 其余每组 20 头 。参考疫 苗说明书 , 4 周龄进行首免 , 二免组于 8 周龄进行加 强免疫 , 每次每头份 1 m L 。 1 .2 .3 样品采集 试验猪 6 、7 、8 、9 、11 、13 、20 周 龄 , 每组随机选取 6 头 ～ 8 头试验猪采血 , 将采集的 血样编号分离血清 。 1 .2 .4 抗体检测 使用上海优耐特公司生产的猪 口蹄疫病毒 VP1 结构蛋白抗体 EL ISA 试验诊断试 剂盒对血清进行口蹄疫抗体检测 , 操作按试剂盒说 明书进行 。
每批次血清随机抽取一部分 , 使用兰州兽医研 究所生产的 O 型口蹄疫抗体液相阻断 EL ISA 检测 试剂盒 , 对血清进行口蹄疫抗体检测 , 操作按试剂盒 说明书进行 。 1 .2 .5 试验结果相 关性效验 利用 SPSS 软件调 用 Pearso n 函 数对 VP1 EL ISA 试 验结 果与 LP BELISA 试验结 果进 行分 析 , 了解两 个试 验的 相关 性。