实验六、 植物组织DNA的提取资料讲解
《植物DNA的提取》课件
CTAB法
优点: 适用于多种植物样品，提取的DNA纯度高。 缺点: 步骤繁琐，耗时较长。
琼脂糖法
优点: 简单快捷，适用于大批量样品。缺点: DNA 纯度较低，可能受到琼脂糖的干扰。
质量检测与保存方法
质量检测方法
通过电泳、比色法等进行DNA纯度和浓度的检测。
DNA保存方法
选择合适的冷冻保存方式，如-20°C或液氮保存， 以保证DNA的稳定性。
提取步骤
样品采集和预处理
选择适当的植物组织进行采集，并进行适当 的处理以保证DNA的完整性和纯度。
DNA裂解
利用酶或高温等方法，将DNA分解成更小的 片段。
细胞破碎
通过机械或化学手段破坏细胞壁，释放细胞 内的DNA。
DNA纯化
通过柱子层析、溶液沉淀等方法，去除杂质， 提取纯净的DNA。
Байду номын сангаас
提取方法的优缺点
应用前景
种质资源保护与利用
通过植物DNA的提取和分析，能够帮助我们更好地保护和利用植物的遗传资源。
基因组研究
植物DNA的提取是进行基因组研究的前提，有助于揭示植物的基因组结构和功能。
总结
DNA提取的意义和重要性
植物DNA的提取是深入研究植物遗传特性和进化历程的重要途径。
提取方法的优缺点
不同的提取方法各有优劣，选择合适的方法可以提高DNA提取效果。
应用前景和发展趋势
植物DNA的提取在农业、生物学等领域有着广阔的应用前景，并随着研究的深入不断发展。
参考文献
1. 张三, 李四. 植物DNA提取方法的优化与比较[J]. 生物工程学报, 2020, 36(4): 503-510.
2. Wang J, et al. Optimized DNA extraction methodology for PCR analysis of medicinal plant species[J]. Plant Molecular Biology Reporter, 2019, 37: 361-369.
植物DNA提取实验方案
植物DNA提取实验方案一、实验目的本实验旨在通过提取植物组织中的DNA，了解DNA的结构和功能，学习DNA提取技术。
二、实验原理DNA提取实验基于DNA的特性进行，主要包括以下几个步骤：1.组织破碎：通过物理或化学方法将植物组织破碎，使DNA暴露出来。
2.细胞溶解：使用细胞溶解液使细胞膜破裂，释放DNA。
3.蛋白质消化：加入蛋白酶等物质，将DNA周围的蛋白质降解。
4.DNA沉淀：通过加入乙醇等溶剂，使DNA沉淀。
5.洗涤和纯化：通过洗涤和纯化步骤去除杂质。
6.分析和测定：利用凝胶电泳等技术对提取得到的DNA进行分析和测定。
三、实验材料1.植物材料（如香蕉、草莓等）2.液氮或冰块3.细胞溶解液（如PBS缓冲液、CTAB溶液等）4.蛋白酶K溶液5.乙醇6.盐溶液7. DNase-free水8.1.5mL离心管9.离心机10.电磁振荡器11.热水浴12.紫外分光光度计四、实验步骤1.将所需植物材料切碎，放入离心管中。
2.将离心管放入液氮或冰块中，立即研磨材料，直至完全破碎。
3.加入适量的细胞溶解液，如PBS缓冲液，将混合物混合均匀。
4.将混合物置于电磁振荡器中，振荡5分钟。
5.加入适量的蛋白酶K溶液，混合均匀。
6.将离心管置于热水浴中，温度为55℃，孵育1小时。
7.加入相同体积的酒精，轻轻摇匀离心管，将DNA沉淀。
9.倒出上清液，加入适量的盐溶液，轻轻摇匀离心管，使DNA残留在离心管底部。
10.使用离心机将离心管离心，离心条件同上，离心10分钟。
11.倒出上清液，加入适量的乙醇，轻轻摇匀离心管，使DNA沉淀。
12.使用离心机将离心管离心，离心条件同上，离心10分钟。
13.倒出上清液，加入适量的盐溶液，轻轻摇匀离心管，使DNA残留在离心管底部。
14.使用离心机将离心管离心，离心条件同上，离心10分钟。
15. 倒出上清液，用DNase-free水洗涤DNA三次，每次离心5分钟。
16. 将离心管中的DNA溶解于适量的DNase-free水中。
植物组织DNA的提取、分离
5、用大开口滴管取出上层水相于另一洁净的离心管中，
加入2/3体积预冷的异丙醇，轻轻混匀，使DNA沉淀，
并与CTAB分离。（注意现象）
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6、收集DNA：（1）如呈可见的丝状DNA，可用玻璃棒 （或小勺）轻轻搅起。
（2）如呈云雾状，再2000r/min离心4min，小心倒去 上清液。
7、洗涤：（1）将丝状DNA直接转移到15ml的洗涤缓冲 液中洗30分钟（如不能搅起，可2000r/min离心10分 钟，转速不宜太高，否则形成坚实的沉淀）；
1、取10mlCTAB分离缓冲液加入离心试管中，于60℃水 浴预热。
2、称取1.5g新鲜叶片于预冷的研钵中，加入液氮，迅速 将叶片研磨成很细的粉末。
3、将叶片粉末直接加入预热的CTAB分离液中，轻轻转 动混匀，60℃水浴保温30分钟。
4、将液体转入小烧杯中，加入等体积的氯仿－异戊醇，
轻轻摇匀后，分装到两个离心管中，等重， 4000r/min，离心8分钟。
（2）洗涤缓冲液：75%乙醇，100mM 乙酸铵共100ml （3）氯仿：异戊醇＝24：1（V/V） （4）异丙醇 （5）TE液 （6）液氮 （7）EB液 （8）电泳缓冲液TBE （9）凝胶加样缓冲液
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1.什么是传统机械按键设计？
传统的机械按键设计是需要手动按压按键触动PCBA上的开关按键来实现功能 的一种设计方式。
柠檬酸钠； （4）整个操作步骤应尽量简化，缩短实验过程，降
低，减少核酸变性、降解、机械切割的机会。
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终于下课了！！
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C、完全凝固后撕去胶带，于电泳槽中加入 电泳缓冲溶液，高于胶面1mm，从一端斜 拉出梳子，除去产生的气泡。
3、加样：将样品DNA溶液与加样缓冲溶液 以 5：1体积混合，加样量每孔5-10 ul。
植物基因组dna的提取实验报告
植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告。
植物基因组DNA的提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，对于研究植物的遗传特性和基因表达具有重要意义。
本实验旨在通过提取植物细胞中的DNA，为后续分子生物学实验提供基础支持。
在本次实验中，我们选择了小麦叶片作为实验材料，采用CTAB法提取植物基因组DNA，并对提取的DNA进行质量评估。
首先，我们收集了新鲜的小麦叶片样品，并将其置于液氮中迅速冷冻保存，以保持DNA的完整性。
接着，将叶片样品磨成细末状，并加入预冷的CTAB提取液中，进行细胞破裂和DNA的溶解。
随后，通过酚/氯仿提取法分离DNA与蛋白质，最终得到DNA的沉淀物。
在实验过程中，我们注意到了一些关键的操作细节。
首先，样品的冷冻保存和研磨过程需要迅速进行，以防止DNA的降解。
其次，在加入CTAB提取液后，充分混合样品并保持恒温，有助于细胞破裂和DNA的溶解。
最后，在进行DNA的沉淀时，需要注意避免将上清液一同转移，以保证提取得到的DNA纯度。
提取得到的DNA样品经过紫外分光光度计检测，结果显示其纯度较高，吸光比值（A260/A280）约为1.8，符合DNA的纯度要求。
随后，我们进行了琼脂糖凝胶电泳实验，观察到明显的DNA条带，并通过对照DNA分子量标准品的迁移情况，初步评估了提取得到的DNA片段大小。
通过本次实验，我们成功地提取到了小麦叶片样品中的基因组DNA，并对其质量进行了评估。
下一步，我们将利用提取得到的DNA样品，开展进一步的分子生物学实验，包括PCR扩增、基因克隆等，以深入研究小麦的遗传特性和基因表达。
本次实验为我们提供了可靠的DNA样品，为后续实验奠定了坚实的基础。
总之，植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤，本次实验通过CTAB法成功提取了小麦叶片样品中的DNA，并对其进行了质量评估。
提取得到的DNA样品具有较高的纯度和完整性，为后续实验提供了可靠的基础支持。
实验6植物基因组DNA的提取
实验6 转基因植物PCR检测一、植物DNA的提取技术(CT AB法)一、实验目的1.掌握用CTAB法提取植物总DNA的方法和基本原理。
2.学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。
二、原理CTAB法[十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB)]是一种快速简便的提取植物总DNA的方法。
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，然后加入CTAB，CTAB是离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使核酸(DNA、RNA)得以游离出来。
再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。
上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。
三、实验材料大豆幼苗[材料的采集与保存对提取DNA的产量和质量有很大影响。
通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料，采集过程中应尽可能保持组织材料所含的水分。
通常的做法是取样时立即用浸湿的纱布包裹采集到的组织材料，放置在带有冷藏功能的采集箱中，这样通常使组织材料在3-5d内仍然保持新鲜。
野外远距离采集样本时，在可能的条件下应冷冻保存（如放置于液氮中）；当不具备冷冻条件时，最好用盛有无水CaSO4的瓶子分别保存，使其迅速干燥，这种方法可将材料保存数月，返回后应尽快进行DNA的提取工作。
那些具有大量次生代谢产物（如单宁、酚类、醌类等）的植物材料，应尽可能采集幼嫩组织。
]四、试剂4.1 CTAB提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl （pH8.0），20 mmol/L EDTA-Na2，1.4mol/L NaCl（如表1），2% CTAB，使用前加入0.1%（V/V）的β-巯基乙醇。
表1 CTAB提取缓冲液配制试剂*名称M.W. 配制1 000mL 配制100mLTris 121.14 12.114g 1.2114gEDTA-Na2372.24 7.4448g 0.74448gNaCl 58.44 81.816g 8.1816g* 用HCl调pH值。
植物基因组DNA的提取
10、紫外检测仪。
五、实验操作方法和步骤 （一） 植物基因组DNA的提取
称取植物幼嫩叶子0.5g 65℃水浴保温1hr， 其间经常轻柔摇动 离心5,000g×5min 置于预热到65℃的研体中， 加少许石英砂；加入预热到 65℃的核酸提取缓冲液3ml 迅速研成匀浆 转移到7ml带盖离心管中
在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题： （1）DNA的二级结构和双链易受多种因素（如强酸、强碱、加热、低盐浓度、 有机溶剂、酰胺类、尿素等）的影响引起双链解开，即“变性”，因此抽提时 避免使用变性的条件。 （2）抑制内外源DNase的活力。DNase就象一把刀，它能把大分子的DNA切成碎 片，所以要加以杜绝，现可以通过多种途径来做到这一点：a、低温操作；b、 调节pH，使偏碱（pH8.0）；c、抽提液中加表面活性剂；d、加螯合剂（EDTA） 除去酶的铺助因子（Mg2+），使酶活性丧失。 （3）防止化学降解。如过酸或过碱以及其它化学因素，会使DNA降解，一般综 合考虑，取pH8.0左右为宜。 （4）防止物理因素降解。如温度太高或机械张力剪切等，DNA分子特别大，极 易被机械张力拉断，甚至在细管中稍急一些的流动也会使DNA断裂，所以在抽 提过程中要特别注意这一点，操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数，也 不要剧烈摇动。 （5）植物的次生代谢物（主要是胞质内的多酚类或色素类化合物）对核酸提 取有干扰作用。因此，一般尽可能选幼嫩的、代谢旺盛的新生组织作为提取 DNA的材料，这是因幼嫩的新生组织次生代谢物较少，DNA含量高，且易于破碎， 植物材料最好是新鲜的。
三、实验材料与试剂
1、实验材料 植物基因组DNA样品
2、实验试剂
⑴ ddH2O； ⑵ TE缓冲液（pH 8.0）。 四、实验器材与仪器 1、离心机、离心管（5ml）及离心管架； 2、微量移液器10ul、200ul、1000ul及枪头； 3、紫外分光光度计； 4、石英比色皿（0.5cm光径）或1cm光径的微量石英比色皿（50ul、100ul）。
实验植物DNA提取及检测
结果解读
实验结果：成功提取出植物DNA 数据分析：DNA质量、浓度和纯度分析 结果解释：DNA提取效率、影响因素及实验结论 实验结论：成功实现植物DNA的提取与检测
实验结论
结论总结
实验过程中需要注意实验条 件和操作细节，避免DNA降 解或污染
实验植物DNA提取及检测成 功，得到较为完整的DNA片 段
将更加简便高效
THANK YOU
汇报人：XX
实验植物DNA提取通 常采用研磨法或酶解 法，其中研磨法是通 过机械研磨将植物细 胞破碎，释放出细胞 核中的DNA；酶解法 则是利用酶制剂将植 物细胞壁和细胞膜分 解，使DNA得以释放。
在提取过程中，需要 使用多种化学试剂， 如洗涤剂、盐离子、 有机溶剂等，以去除 杂质、分离出较纯的
DNA。
提取出来的DNA需 要进行质量检测，确 保其质量和纯度满足
后续实验的要求。
实验材料
实验植物：选取适当的植物样本 仪器：离心机、PCR仪等 试剂：植物基因组DNA提取试剂盒、缓冲液、乙醇等 实验器具：移液器、吸头、离心管等
实验步骤
准备实验材料：植物样本、离心管、移液 器、DNA提取试剂等
DNA沉淀：在上清液中加入适量的乙醇， 使其中的DNA沉淀下来
植物样本处理：将植物样本剪碎，加入 适量的缓冲液，用研磨棒研磨成匀浆
清洗DNA：将沉淀的DNA用70%的乙 醇清洗，去除杂质
离心分离：将研磨后的匀浆进行离心分离， 干燥：将清洗后的DNA晾干，溶解于适
收集上清液
量的水中
注意事项
实验前确保植物材 料无菌，避免污染
使用新鲜、健康的 植物材料，以提高 DNA提取质量
实验操作过程中保 持低温，防止 DNA降解
植物基因组dna的提取实验报告
植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告引言：DNA提取是生物学研究中的基础实验之一，它可以帮助我们了解植物的遗传信息和基因组结构。
本实验旨在通过提取植物基因组DNA，探索DNA的提取方法以及其在植物基因研究中的应用。
材料与方法：1. 实验材料：新鲜植物叶片、细碎器、提取液（含有细胞裂解酶、蛋白酶K和盐酸）、离心管、离心机、冰浴装置、乙醇、磷酸盐缓冲液等。
2. 实验步骤：- 步骤一：取一片新鲜植物叶片，用细碎器将其细碎成细小颗粒。
- 步骤二：将细碎的植物组织转移到离心管中，并加入适量的提取液。
- 步骤三：将离心管放入冰浴装置中，在4℃下反应30分钟。
- 步骤四：离心管中的混合液离心10分钟，将上清液转移到新的离心管中。
- 步骤五：加入等体积的冷乙醇，轻轻摇晃离心管，使DNA沉淀。
- 步骤六：用微量移液器将DNA沉淀转移到新的离心管中。
- 步骤七：加入适量的磷酸盐缓冲液溶解DNA。
结果与讨论：通过上述实验步骤，我们成功地从新鲜植物叶片中提取到了DNA。
下面将对实验结果进行讨论。
首先，实验中使用的提取液含有细胞裂解酶和蛋白酶K。
细胞裂解酶可以破坏细胞膜，使细胞内容物释放出来，而蛋白酶K则能降解蛋白质，避免其对DNA的影响。
这两种酶的作用协同进行，为DNA的提取提供了基础。
其次，实验中的冰浴装置和离心机的使用是为了维持低温和分离混合液中的固体和液体。
低温可以减缓酶的活性，防止DNA的降解。
离心则可以将细胞碎片和其他杂质沉淀下来，使上清液中富含DNA。
最后，实验中的乙醇是用来沉淀DNA的。
加入乙醇后，DNA会与乙醇结合形成白色沉淀物。
通过轻轻摇晃离心管，可以帮助DNA更好地沉淀。
而且，乙醇的加入还能帮助去除杂质，使得提取到的DNA更纯净。
DNA的提取是植物基因研究的重要步骤之一。
通过提取到的DNA，我们可以进行一系列的遗传学研究，如PCR扩增、DNA测序等。
此外，DNA的提取还可以用于植物种质资源的鉴定和保护，以及基因工程的应用等领域。
植物组织DNA的提取和鉴定
拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定实验目的1.通过实验学习并掌握用CTAB来提取DNA的方法。
2.了解CTAB的成分及作用。
3.学习PCR的原理并掌握其方法。
4.学习琼脂糖凝胶电泳的原理与方法。
实验原理植物组织中绝大部分是核DNA，它和组蛋白、非组蛋白结合在一起，以核蛋白（即染色质或染色体）的形式存在于细胞核内。
CTAB(十六烷基三甲基溴化铵，简称CTAB)：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中(0.7mol/L NaCl)是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度(0.3mol/L NaCl)时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。
DNA是遗传信息的载体和基本遗传物质，它在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作用，是分子生物学和基因工程研究的对象，但无论是研究植物DNA的结构和功能，还是开展外源DNA的转化、转导的研究，首先要做的就是从植物组织中提取天然状态的高分子量的纯化DNA。
T-DNA，转移DNA（transferred DNA ），是根瘤农杆菌Ti质粒中的一段DNA 序列,可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物基因组。
人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，获得转基因植株。
除用于转基因以外，T-DNA插入到植物的基因中可引起基因的失活，从而产生基因敲除突变体；T-DNA大多为单拷贝插入，使其利于进行遗传分析。
PCR基本原理：聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于在体外快速扩增DNA，具有类似细胞内DNA的复制过程:由一对引物介导，通过温度的调节，使双链DNA变性为单链DNA、单链DNA能与引物复性（退火）成为引物-DNA单链复合物、以及在dNTPs存在下DNA聚合酶能使引物沿单链模板延伸成为双链DNA（引物的延伸）；这种热变性-复性-延伸的过程，就是一个PCR循环；一般通过20-30个循环之后，就可获得大量的要扩增的DNA 片段。
植物DNA提取测定
六、操作步骤
1.5ml离心管中加入500μl提取缓冲液 离心管中加入500μl 1. 在1.5ml离心管中加入500μl提取缓冲液 60℃水浴预热 水浴预热。 Ⅰ, 60℃水浴预热。 植物组织0.1g, 剪碎, 2. 植物组织0.1g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨 成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟 时间长,DNA产量高), 水浴保温30 分钟( ,DNA产量高 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不 时摇动。 时摇动。 加入500μl氯仿/戊醇/乙醇溶液, 500μl氯仿 3. 加入500μl氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混 需带手套, 防止损伤皮肤) 室温下静置5 10分 匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀) 钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
5000rpm离心 分钟, 去乙醇上清液， 离心5 11. 5000rpm离心5分钟, 去乙醇上清液，沉淀 70%乙醇漂洗 乙醇漂洗； 5000rpm离心 分钟， 离心5 用70%乙醇漂洗；再5000rpm离心5分钟，沉淀干燥 去干净乙醇。 去干净乙醇。 DNA重溶解于 重溶解于50μl 20℃贮存 贮存。 12. 将DNA重溶解于50μ Agarose胶上电泳 胶上电泳, 13. 取2μl DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。同时取20μl稀释20 DNA的分子大小 20μl稀释20倍 检测DNA的分子大小。同时取20μl稀释20倍, 测定 检测DNA含量及质量。 DNA含量及质量 OD260/OD280, 检测DNA含量及质量。
七、DNA的紫外分光光度计检测 的紫外分光光度计检测
植物dna提取实验报告
植物dna提取实验报告植物DNA提取实验报告引言DNA（脱氧核糖核酸）是生物体内的遗传物质，植物DNA提取实验是一种常见的实验方法，旨在从植物细胞中提取纯净的DNA样本。
本文将介绍植物DNA提取实验的步骤、原理和结果分析。
实验步骤1. 样本准备：选择一种植物作为实验对象，如洋葱。
将洋葱切成小块，放入离心管中备用。
2. 细胞破碎：将洋葱块加入研钵中，加入适量的提取缓冲液（含有盐和洗涤剂），用研钵和研杵将洋葱块研磨成细胞浆。
3. 过滤：将细胞浆倒入筛网中，用玻璃棒轻轻压榨，使细胞浆通过筛网，滤掉固体残渣。
4. 沉淀DNA：将过滤后的细胞浆转移到离心管中，加入冷乙醇，轻轻摇晃离心管，使DNA沉淀出来。
5. 分离DNA：使用微量移液器将DNA沉淀物转移到干燥的离心管中，加入去离子水溶解DNA。
6. 纯化DNA：使用DNA纯化试剂盒，按照说明书进行纯化步骤，去除杂质。
实验原理植物DNA提取实验的原理基于细胞破碎、DNA沉淀和纯化的过程。
首先，细胞破碎步骤使用提取缓冲液中的洗涤剂和盐的作用，破坏细胞膜和核膜，释放出细胞内的DNA。
接着，通过过滤和离心的方式，将细胞浆中的固体残渣和蛋白质去除，使DNA沉淀出来。
最后，通过纯化试剂盒中的化学试剂，去除杂质，得到纯净的DNA样本。
结果分析实验结束后，可以通过多种方式对提取的DNA进行分析。
常用的方法包括凝胶电泳、PCR扩增和测序等。
通过凝胶电泳，可以观察到DNA的带状图谱，判断DNA的大小和纯度。
PCR扩增可以使用特定引物对DNA进行扩增，进一步验证提取的DNA是否可用于后续实验。
测序则可以获得DNA的序列信息，对植物基因组进行研究。
实验注意事项1. 实验器材的消毒和无菌操作十分重要，以避免外源性DNA污染。
2. 实验过程中，尽量避免DNA的降解，注意保存条件和时间。
3. 实验中使用的试剂和溶液要严格按照说明书操作，避免误操作导致实验失败。
4. 实验室操作时要注意安全，佩戴实验手套和护目镜，避免实验物品对身体造成伤害。
实验六植物基因组DNA提取(与“提取”相关文档)共7张PPT
Note:
1）提取植物基因组DNA的常用方法：CTAB法、SDS法、尿素法等
2）CTAB与核酸形成复合物，此复合物在高盐（＞）浓度下可溶，并稳定 存在，但在低盐浓度（）下因溶解度降低而沉淀，而此时大部分蛋白质及多 糖等仍溶解于溶液中。经离心沉淀后得到的CTAB-复合物用70%~75%的酒精 浸泡可洗脱掉CTAB。氯仿/异戊醇（24：1）抽提可去除蛋白质、多糖、色素 等，异戊醇或乙醇可用来沉淀DNA。
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7）加200~500μL TE溶ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱDNA，溶解后在4℃保存备用。
8）在0.8%的琼脂糖凝胶（含溴化乙锭）上稳压电泳 (电压<5V/cm)检测基因组DNA。
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作
业
1 将你提取DNA的电泳图片附在实验结果里，并根据电泳图片分 析你所提的DNA质量如何。
2 DNA提取液中去污剂和螯合剂（如EDTA）的作用？
机械剪切 加经氯2）7离仿06心 /%5异〈℃沉乙戊水2淀醇〉浴后洗（3尽得0涤2m4到量2：i次n的，1减（）C其T每抽少A间次B提温对-8复可m和溶合去i摇n物除）液荡用蛋,去离中7白7心00质D%管%~、N乙27-多A5醇3%次糖的，的，、鼓酒水色风精浴素或浸后等室泡取，温可出异下洗室戊干脱温醇破燥掉冷或DC坏却乙NTAA5醇。；mB可。in用；来沉淀DNA。
实验 六
▪ 植物基因组DNA提取
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▪ 一、实验目的
1、掌握提取DNA的方法，该方法提取的DNA可用作PCR模板、限制性酶切反 应和Southern印迹分析。
2、提取银杏叶片总DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳分析检测所提取DNA的纯 度和完整性。
▪ 二、材料、试剂和仪器
王刚--实验六--真核生物基因组DNA提取及琼脂糖凝胶电泳
●核酸染色剂：溴化乙锭（EB） 一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对 之间，在紫外线激发下，发出红色荧光。其荧光 强度与DNA含量成正比。 作用： ① 可显示核酸条带的位臵 ② 根据荧光强度可粗略估计样品DNA浓度。 注意：EB是致癌物质，操作时务必戴手套
● DNA分子量标准参照物
☺ 实验方法步骤
不同的DNA，分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同， 从而分出不同的区带。
☺ 实验材料
高等植物的DNA
☺ 实验仪器和试剂
♣ 仪器：
灌胶模具、电泳仪、电泳槽。
♣ 试剂：
电泳缓冲液、上样缓冲液、核酸染色剂、 DNA分子量标准参照物。
电泳系统
● 电泳缓冲液：Tris-乙酸（TAE） ●上样缓冲液： 组成：溴酚兰（在碱性液体中呈紫兰色，作指示剂） 蔗糖 甘油 作用： ① 增加样品比重，以确保DNA均匀沉入加样孔内。 ② 形成肉眼可见的指示带，预测DNA电泳的速度 和 位臵。 ③ 使样品呈色，使加样操作更方便。
也不能低于45 ℃ 。
♣ 胶一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要竖直向上，
不要弄坏点样孔。 ♣ 点样时枪头下伸，点样孔内不能有气泡，缓冲液不 要太多。 ♣ EB有毒，切勿用手接触，更不要乱扔，以免污染环
境。
♣ 紫外线照射不要太久。
实验报告
紫外仪上观察电泳带及其位置。 绘制核酸电泳示意图。 完成实验报告（实验目的、步骤、绘图 表示电泳结果）
量移液器小心加入样品槽。
3. 电泳： 接通电源，切记靠近加样孔的一端为负，电压为
1~5V/cm（长度以两个电极之间的距离计算）, 待溴酚兰移动 到一定位臵，停止电泳。
4. 观察拍照
1 总DNA
2
3
分子实验-植物DNA提取
0 1 实验原理
1、破壁：在液氮中对植物组织进行研磨，破碎细胞。并减少 研磨过程中各种酶类的作用。
2、溶解：CTAB离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜， 使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来。
3、分离：苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提 液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去 细胞碎片和大部分蛋白质。
三、主要仪器及耗材： 研钵及研钵棒、水浴锅、移液枪及配套枪头、2.0ml离心管、 离心机、 电子天平、通风橱、冰箱、电泳仪、 凝胶成像系统、超微量核酸蛋白测 定仪系统。
04
PART FORE
操作步骤
0 4 操作步骤
1.配置试剂： （1）10 ml 4% CTAB提取缓冲液
CTAB NaCl 1 M Tris- HCl(pH 8.0) 0.5 mol/L EDTA(pH 8. 0) ddH2O
(二)琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA:
1、将溶液加入样品槽时，勿划破或戳破加样孔，勿带入气泡; 2、使用干净的电泳溶液。
THANKS
心管，使之充分作用15 min。
0 4 操作步骤
10.重复第7步骤。 11.在上清液中，加入2倍体积预冷的无水乙醇，轻柔颠倒，充分混匀，
室温放置 10min。 12.12 000 r/min 离心 5 min，弃上清，用70%的乙醇洗涤沉淀2次。 13.室温挥发乙醇5-10min，加入适量的ddH2O溶解。 14.电泳检测。取3 μL提取的植物总DNA，加入 1μL 6x Loading buffer，
0.4g 1.64g 20ml 0.8ml 7.2ml
（2）10ml 70%乙醇
无水乙醇
7ml
水
3ml
0 4 操作步骤
最新实验 植物DNA提取及检测
植物基因组 DNA的提取
琼脂糖凝胶电泳检测
一 、实验目的
学习提取和纯化高等植物总 DNA的方法，理解其原理。
二、实验原理
• •
脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA) 与蛋白质结合在一起以核蛋白（DNP）的形式存在。 在制备核酸时通常破坏细胞壁及细胞膜来使核蛋 白释放出来。 植物总DNA包括细胞核DNA和细胞核外DNA,前者存 在于细胞核内，后者存在于细胞质中有半自主性 复制活性的细胞器内，例如线粒体DNA(mtDNA)和 叶绿体DNA(ctDNA)。
琼脂糖是一种线性多糖聚合物。 浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。
琼脂糖浓度(%)
0.3
线型DNA分子的分离范围 (Kb)
5～60
0.6
0.7 0.9
1～20
0.8～10 0.5～7
1.2
1.5 12.0
0.9～6
0.2～3 0.1～2
三、实验仪器和试剂
仪器
– 电泳仪 – 电泳槽 – 灌胶模具等
•
基本过程 细胞破碎 抽提去蛋白质 沉淀核酸
细胞破碎
①机械方法： 超声波处理法、研磨法、匀浆法；
②化学试剂法：用SDS处理细胞；
③酶解法： 加入溶菌酶或蜗牛酶，破坏细胞壁。
DNA提取
• SDS法 SDS 是有效的阴离子去垢剂 , 细胞中 DNA 与蛋 白质之间 常借静电引力或配位键结合 , SDS 能够 破坏这种价键。 • CTAB法 CTAB是一种阳离子去垢剂，它可以溶解膜 与脂膜，使细胞中的DNA-蛋白质复合物释放出来， 并使蛋白质变性，使DNA与蛋白质分离。
核酸染色剂
溴化乙锭（EB）
《植物总DNA的提取》课件
植物总DNA的提取也是植物生物技术应用的基础，如基因克隆、基因编辑、基因 转化和基因表达分析等。通过对植物总DNA的提取和操作，可以实现植物遗传改 良和新品种的培育，推动农业生产的可持续发展。
植物总DNA提取的应用
遗传资源保护
通过对不同植物种类的基因组分析，可以了解植物的遗传多 样性和进化关系，为植物种质资源的保护和利用提供科学依 据。同时，通过基因组学的研究，可以实现濒危植物的保护 和复壮。
废弃物处理
实验结束后，应将使用过的废弃物按照规定分类 处理，避免对环境造成污染。
防火防爆
远离火源和易燃物品，避免使用明火，存放和使 用易燃易爆试剂时需特别小心。
实验操作注意事项
试剂配制
严格按照试剂盒说明书或指导手册配制试剂，避免浓度和比例错误 导致实验失败。
样品处理
植物样品需新鲜且无菌，避免样品中存在杂质和微生物污染，影响 DNA提取质量。
使用酸性或碱性溶液使细胞膜破裂，释放出细胞内 的DNA。
离心分离
将破碎后的细胞悬浮液进行离心，使细胞碎 片和DNA沉降，上清液中的其他成分如蛋 白质和RNA得以去除。
DNA的沉淀与洗涤
盐析法
向离心后的上清液中加入高盐溶液，使 DNA沉淀析出。
VS
乙醇沉淀法
在上清液中加入无水乙醇，使DNA沉淀 析出。洗涤沉淀以去除残留的盐分和其他 杂质。
植物总DNA提取的步骤
植物材料的准备
选择适当的植物组织
根据实验需求选择适合的植物组织， 如叶片、根、茎等。确保植物材料新 鲜且无污染。
清洗与剪切
将植物材料清洗干净，剪切成适当大 小的组织块，以便后续操作。
细胞破碎与分离
物理破碎法
使用研磨棒、玻璃珠或匀浆器等工具破碎细 胞，释放出细胞内的DNA。
实验六、 植物组织DNA的提取
2×CTAB法
100 mM Tris·Cl (pH 8.0) 20 mM EDTA 1.4 M NaCl 2% (w/v) CTAB * 1% (w/v) PVP * 使用前加0. 2 % 巯基乙醇
PVP：聚乙烯吡咯烷酮。防止褐化 巯基乙醇：在DNA提取过程中防止细胞内物质发生褐变对实验结果产生影响。 其主要作用是降低氧对细胞产生的氧化损伤。
核DNA分子呈极不对称的线状结构，对任何机械力的作用都十分敏感， 在分离纯化过程中，DNA分子的降解很难避免，因而，我们分离得到的 只不过是植物核DAN分子的片段。 总DNA提取不必分离细胞核及细胞器，用温和的方法使细胞破碎后，核 蛋白体自然白
解析
使蛋白质 变性沉淀
期间轻柔混匀几次
取出水浴样品凉至室温，加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1） （通风橱中操作），混匀，12,000 rpm离心10 min
有必要可以重复一次
取上清转移到新的离心管中，加入等体积的预冷无水乙醇，混匀， -20℃静置30 min后12,000 rpm离心10 min
70%乙醇洗沉淀两次，室温晾干
实验六、 植物组织DNA的提取
王欢欢 二零一二.十
转基因作为一个外源DNA序列，在植物基因组中的整合方式如何？整合 后的转基因结构和拷贝数是否变化？
转基因导入植物细胞后，通过 细胞分裂时遗传物质的复制过 程整合到核基因组中。转基因 在寄主染色体内的整合位点是 随机的，外源DNA可以插入植 物基因组的任何一条染色体， 也可以插入一条染色体上的任 何位点，但在转录活跃区具有 优先插入特性。
植物总DNA提取时如何使植物细胞壁有效破碎的同时尽量保持DNA的完整？
冷冻干燥的材料容易粉碎 冷冻干燥下DNase活力极低，研磨不会引起DNA降解。冷冻干燥的材料在脱 水状态下储存几年DNA不会有明显变化。
实验六植物DNA提取和分析
（P162）
一、目的
掌握植物组织中DNA提取的原理和方
法。
掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳检测方法。
二、原理
DNA是遗传的物质基础，分离纯化DNA是研究基因结构与 功能的首要前提。 细胞内DNA是与蛋白质结合存在的。
在提取DNA的过程中必须将其中的蛋白质降解除去
二、原理
尽量减少DNA的断裂
即使溶液的振荡也会使DNA断裂
除去多糖
高等植物材料往往含有多糖，而多糖常常是某些限
制酶或连接酶的抑制剂
氯化铯密度梯度离心法 CTAB 的核酸提取法也可得到纯的高相对分子质量的
DNA ，它利用核酸和多糖在 CTAB 存在时溶解度不同 而分离。
二、原理
保持在冰冻状态研磨以避免DNA的降解
细胞膜的破坏 常用去污剂(如SDS或CTAB)。 保护DNA免受内源核酸酶的破坏 去污剂的加入及EDTA的存在都能破坏或抑制酶的活性， EDTA 是种螫合剂，它能结合大多数核酸酶的辅因子 Mg2+。 用氯仿和苯酚乳化 DNA 提取液，使蛋白质变性，分离 蛋白质和DNA。
提纯的DNA为白色纤维状固体
利用DNA易溶于盐溶液，微溶于水，不溶于一般
有机溶剂（异丙醇、乙醇）的性质对其进行纯 化。
DNA分子在一定pH值缓冲液中带有电荷
利用电泳可对其进行分离和研究。
从植物幼苗、嫩叶中制备DNA产率高
三、材料、仪器设备及试剂
材料
小麦幼苗 高速冷冻离心机、电泳仪、电泳槽、紫外灯、低温冰箱、微波炉、 凝胶成像系统；三角瓶、烧杯、量筒、微量移液器、研钵、离心管
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期间轻柔混匀几次
取出水浴样品凉至室温，加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1） （通风橱中操作），混匀，12,000 rpm离心10 min
有必要可以重复一次
取上清转移到新的离心管中，加入等体积的预冷无水乙醇，混匀， -20℃静置30 min后12,000 rpm离心10 min
70%乙醇洗沉淀两次，室温晾干
DNA被抽 提
酒精沉淀 DNA
RNA的去 除
2×CTAB法提取植物组织DNA
DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取出脱 氧核糖核蛋白复合物后，必须将其中蛋白质去除。
CTAB(Cetyltrimethyl ammonium-bromide,十六烷基三甲基溴化铵)， 是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物，该复合物 在高盐溶液是可溶的（>0.7mol/L NaCl ）。通过有机溶剂抽提，去除 蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
CTAB法最大优点是通过高盐缓冲液的选择性沉淀能很好去除糖类杂质。 二价离子螯合剂EDTA可消除外源及内源的DNase活性。 SDS法：利用高浓度SDS，较高温度裂解细胞，是染色体离析，蛋白变
性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的作法使蛋白质及 多糖杂质沉淀。操作温和简单，但所得产物糖类杂质较多。
用30 μL含RNase A(终浓度50 ng/mL)的无菌ddH2O溶解沉淀
37 ℃消化30 min，1%琼脂糖凝胶电泳检测，－20 ℃保存
DNA琼脂糖电泳(1%)
DNA提取注意事项
植物材料表面如有杂质要擦拭干净，水分要用滤纸吸干，否则液氮速 冻会形成冰晶而妨碍研磨。 研钵加液氮前必须干燥，并先用液氮预冷 研磨要充分，至叶片粉末接近白色 研磨样品尚未解冻时添加提取Buffer，尽量减少暴露空气的时间，如 果融化，内源DNase会引起DNA降解。 除研磨之外所有的抽提操作要温柔，DNA容易断裂 65℃水浴结束后，转移DNA溶液枪头剪去尖部 最后溶水禁止用反复吸打的方法助溶 取材尽量取幼嫩的叶片和组织 部分植物组织样品要去除多酚、多糖
植物总DNA提取时如何使植物细胞壁有效破碎的同时尽量保持DNA的完整？
冷冻干燥的材料容易粉碎 冷冻干燥下DNase活力极低，研磨不会引起DNA降解。冷冻干燥的材料在脱 水状态下储存几年DNA不会有明显变化。
2× CTAB法提取烟草叶片DNA
取幼嫩烟草或拟南芥叶片50-100 mg在研钵中加液氮研成粉状，转 到1 mL离心管中，加2 倍体积的 2×CTAB，混匀，65℃，温浴1 h
实验六、 植物组织DNA的提取
王欢欢 二零一二.十
转基因作为一个外源DNA序列，在植物基因组中的整合方式如何？整合 后的转基因结构和拷贝数是否变化？
转基因导入植物细胞后，通过 细胞分裂时遗传物质的复制过 程整合到核基因组中。转基因 在寄主染色体内的整合位点是 随机的，外源DNA可以插入植 物基因组的任何一条染色体， 也可以插入一条染色体上的任 何位点，但在转录活跃区具有，对任何机械力的作用都十分敏感， 在分离纯化过程中，DNA分子的降解很难避免，因而，我们分离得到的 只不过是植物核DAN分子的片段。 总DNA提取不必分离细胞核及细胞器，用温和的方法使细胞破碎后，核 蛋白体自然释放出来。
破碎细胞
加去污剂 使核蛋白
解析
使蛋白质 变性沉淀