微生物的培养与利用

微生物的培养与利用

一、微生物的类群

二、在实验室如何培养微生物

1、细菌、真菌：培养基培养；

2、单细胞动、植物：培养液培养；

3、病毒：培养

4、在实验室培养微生物，一方面需要为培养的微生物提供，另一方面需要

确保无处不在的其他微生物。

三、微生物需要的营养物质及功能

微生物需要的五大类营养要素物质是：1.碳源 2.氮源 3.水 4.无机盐 5.

1.微生物的碳源

⑴.概念：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。

⑵.来源①碳源：CO2；NaHCO3等（型微生物能利用）

②碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等（型微生物能利用）

⑶.作用：①构成和一些

②有机碳源是异养微生物的

2.微生物的氮源

⑴.概念：是能够为微生物提供N元素的营养物质。

⑵.来源①无机氮源：N2：（能利用）

NH3：( 能利用）

NO3-、NH4+：（能利用）

②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等

⑶.作用：要用于合成、及含N的代谢产物。

3.水

4.无机盐

5.生长因子(有的微生物能自身合成,有的不能需要额外添加）

⑴.概念：微生物生长不可缺少的。

⑵.作用：和的组成成分。

⑶.常见的生长因子：维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。

四、培养基

1、培养基的概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出专供微生物的营养基质

2.培养基的成分：一般都含有、、、等营养物质，另外还需要满

足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气等的要求。例如：培养乳酸菌需加入，若培养霉菌PH呈，若培养细菌PH呈，培养厌氧微生物时则需要提供。

3.培养基的类型和用途

五、无菌技术

1. 获得纯净培养物的关键是

2. 无菌技术的目的：一是防止实验室的培养物，二是避免操作者

3.消毒与灭菌的比较

六、实验操作：纯化大肠杆菌

1、制备牛肉膏蛋白胨培养基

1）计算；2）称量

3）溶化、、分装

4）灭菌: 用法

5）倒平板:待培养基冷却到50 ℃左右时，在倒平板，冷却后。

2、纯化大肠杆菌

微生物的接种的常用接种方法有：和

注意：1）在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。

2）在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线。

3）在作第二次以及其后的划线操作时，要从上一次划线的末端开始划线。

4）无菌操作是微生物实验的关键环节，为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在

进行。

3、使用后的培养基应，以免。

4、微生物的恒温培养：接种后的培养皿放入内培养。

5、菌种的保存

⑴.临时保藏：上4℃保存，菌种易被污染或产生变异

⑵.长期保存：－20℃甘油管在中保藏

6、观察菌落

（1）细菌的繁殖：。为抵抗不良环境可形成细菌的休眠体——

（2）细菌的菌落

1）定义：单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。

2）特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。

3）功能：每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为的重要依据

七、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

（一）课题背景

1、尿素的利用：尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。

2、细菌利用尿素的原因：土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成。

（二）课题目的

1、从土壤中分离出能够分解尿素的细菌

2、统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌

（三）实验思路

1、筛选菌株：利用以为唯一的培养基筛选菌株。

2、统计菌落数目：

1）：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。

缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；

个体小的细菌在显微镜下难以观察

2）（活菌计数法）

①原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一

个菌落代表原先的一个单细胞。

②计算公式：每克样品中的菌落数＝

其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。

注意事项

①为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板上进行计数。

②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。

③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。（其原因是）

3、设置对照：主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

（四）实验的具体操作

土壤取样→制备培养基→样品的稀释→取样涂布→微生物的培养与观察→计数

（五）课外延伸

1、鉴定分解尿素的细菌：在以为唯一氮源的培养基中加入指示剂。培养某种细菌后，如果PH 升高，指示剂将变，说明该细菌能够分解尿素。

2、测定饮水中大肠杆菌数量的方法：将一定体积的水用过滤后，将滤膜放到培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现，通过记数得出水样中大肠杆菌的数量。

八、土壤中分解纤维素的细菌的分离

（一）基础知识

1、纤维素酶

纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、C X酶和葡萄糖苷酶

C1酶、C X酶葡萄糖苷酶

纤维素纤维二糖

葡萄糖

2、纤维素分解菌的筛选：刚果红染色法。刚果红是一种染料，它可以与纤维素形成色复合物，但并不和

纤维二糖、葡萄糖发生这种反应，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的，我们可以通过菌落是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

（二）实验操作

挑选产生透明圈的菌落

（三）课题延伸（进一步鉴定纤维素分解菌）

1、为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行的实验.

2、纤维素酶的测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的进行的测定。