Protein G层析填料说明书

Protein G Sepharose Fast Flow

原理

蛋白质G ，来自G 链球菌组的细胞表面蛋白，是III Fc-受体型蛋白。蛋白质G 通过非免疫机制结合抗体的Fc 区域。蛋白质G 特异性的结合IgG 的Fc 区域，但是对于一些多克隆抗体IgGs 对人源的IgG 抗体能够有更强的结合。在标准缓冲液条件下，蛋白质G 能够结合所有的人源性的亚类抗体和所有鼠源性的IgG 亚类抗体，包括鼠的IgG ，或者兔的IgGa 和IgGb 。

进行一个分离操作

结合缓冲液：20mM 磷酸纳，pH7.0

洗脱缓冲液：100mM 甘氨酸，pH2.7

中和缓冲液：1M Tris-HCl ，pH9.0

1， 用5倍柱体积的蒸馏水冲洗柱子。

2， 用5倍柱体积的结合缓冲液平衡柱子。

3， 上样，流速为1-4ml/min （1ml 的柱子），或者5ml/min （5ml 的柱子）。收集流穿片段。 4， 用5-10倍柱体积的结合缓冲液平衡分离柱，直到基线，即所有未结合物质都被冲洗出柱

子（紫外检测器在280nm 波长检测）。

5， 用5倍柱体积的洗脱缓冲液进行洗脱。洗脱液立即用中和缓冲液（0.06ml~0.2ml 1M

Tris-HCl ，pH9.0每毫升馏分）中和至中性。

6， 立即用5-10倍体积的结合缓冲液重新平衡柱子 。

使用注意

1， 样品需要离心（10000g/20min ）去除细胞和细胞碎片。离心下来的上清经过一个0.45μm

的滤膜过滤。

2， 来自多数物种的IgGs 和亚类，在接近生理pH 值和离子强度的条件下，可以结合到蛋白

质G 上。对于特别物种IgG 的最佳结合条件，应该查阅近期的文献。

3， 当pH 值为2.7或者低于2.7时，大多数种类的免疫球蛋白能从蛋白质

G 上被洗脱下来。 4， 洗脱完成后，立即用5-10倍体积的结合缓冲液重新平衡柱子非常重要。

在通常使用的水溶性缓冲液中都是稳定的。

储存

用20%的乙醇在中性pH值的条件下冲洗介质和柱子，在4°~8°条件下储存。