槐米的有效成分
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槐米的有效成分
槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离与鉴别
【目的】
1.掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。
2.掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。
3.熟悉和了解采收与炮制对芦丁含量的影响。
【原理】
1.槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花莆。前者习称槐花Flos Sphorae;后者习称槐米Flos Sophorae Immaturus。主产于河北、山东、河南、陕西、江苏、广东、广西、辽宁等地。以河北、山东、河南产量大。性能:苦,性微寒。功效:凉血止血、清肝泻火。应用:用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝热目赤、头痛眩晕等。
2.主要含有芦丁(芸香苷)、槲皮素,还含少量皂苷类及多糖、粘液质等。近代研究表明槐米含芦丁可高达2
3.5%,槐花开放后降至13.0%。芦丁可用于治疗毛细血管脆性引起的出血症,并用作高血压辅助治疗剂。芦丁还可以作为制备槲皮素、羟乙基槲皮素、羟乙基芦丁、二乙胺基乙基芦丁等的原料。
3.芦丁为浅黄色粉末或极细微淡黄色针状结晶,含3分子结晶水(C27H30O16•3H2O),加热至185℃以上熔融并开始分解。芦丁的溶解度,在冷水中1:10000,沸水中1:200,沸乙醇中1:60,沸甲醇中1:7,可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰醋酸、乙酸乙酯中,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。芦丁分子中具有较多酚羟基,显弱酸性,易溶于碱液中,酸化后又可析出,因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
【仪器与试剂】
1.1000、500、100、10ml烧杯,10ml试管,试管架,托盘天平,量筒,三角漏斗,洗瓶,布氏漏斗,电炉,10×20cm薄层板,10×20cm薄层色谱缸,色谱专用滤纸,聚酰胺色谱膜,点样毛细管,紫外灯(仪),玻棒,牛骨匙,纱布,脱脂棉,显色剂喷瓶,小型空压机。
2.槐花米粗粉,滤纸,pH试纸,生石灰,硼砂,2%硫酸,浓硫酸,稀盐酸,浓盐酸,10%氢氧化钠,乙醇,10%α-萘酚乙醇溶液,镁粉,1%醋酸镁甲醇溶液,1%三氯化铝乙醇溶液,2%二氯氧锆甲醇溶液,2%枸橼酸甲醇溶液,Ba(OH)2,滑石粉,甲醇,氨水,芸香苷、槲皮素、葡萄糖、鼠李糖对照品,展开剂:正丁醇-乙酸-水(4:1:5)上层溶液(纸色谱),90%乙醇或乙醇-水(7:3)(聚酰胺色谱),显色:苯胺-邻苯二甲酸盐试剂。
【步骤】
1.芸香苷的提取称取50g槐花米粗粉,于500mL烧杯中,加入0.4%硼砂沸水溶液300mL,在搅拌下小心加入石灰乳调至pH8~9,加热微沸30min,注意添加水,随时补充蒸发掉的水分保持原体积并维持pH8~9,趁热用脱脂棉过滤;药渣同样操作再提取一次,合并滤液,稍冷,用浓盐酸调至pH4~5,静置过夜使沉淀完全,抽滤,用蒸馏水洗3~4次,抽干置空气中自然干燥得淡黄色粗制芸香苷。
2.芸香苷的精制将芸香苷粗品置500mL烧杯中,加适量(约100mL)蒸馏水,再用石灰水调至pH8。加热煮沸数分钟,使充分溶解。趁热抽滤,滤液滴加3mol/LHCl调至pH7,
放置18h以上,即析出沉淀。减压过滤,用少量蒸馏水洗涤沉淀2~3次。抽干,于70~80℃干燥1h,即得精制芦丁。称重,计算产率。
3.芸香苷的水解取精制芦丁2g,研细,置于500mL圆底烧瓶中,加2%硫酸溶液150mL,于直火回流30min,放置至室温,析出黄色槲皮素结晶,抽滤,滤液保留作糖部分的鉴定。沉淀水洗后再用95%乙醇重结晶一次,得黄色针状结晶,于70~80℃以下干燥,即得精制槲皮素。
4.检识
(1)取芸香苷、槲皮素少许,分别用10mL乙醇溶解,制成试样溶液,照以下方法进行实验。
①Molish反应:取试样溶液各2mL,分置于两支试管中,加10%α-萘酚乙醇溶液1mL,振摇后倾斜试管45°,沿管壁滴加2mL浓硫酸,静置,观察两液面交界处颜色变化(棕色环)。
②盐酸-镁粉反应:取试样溶液各2mL,分别置于两支试管中,各加入镁粉少许,再加入浓盐酸数滴,观察并记录颜色变化。
③醋酸镁反应:取两张滤纸条,分别滴加试样溶液后,加1%醋酸镁甲醇溶液2滴,于紫外灯下观察荧光变化,并记录。
④三氯化铝反应:取两张滤纸条,分别滴加试样溶液后,加1%三氯化铝乙醇溶液2滴,于紫外灯下观察荧光变化,并记录。
⑤锆-枸橼酸反应:取试样溶液各2mL,分别置于两支试管中,各加2%二氯氧锆甲醇溶液3~4滴,观察颜色,然后加入2%枸橼酸甲醇溶液3~4滴,观察并记录颜色变化。
(2)糖的纸色谱鉴定取水解母液20mL,用Ba(OH)2的细粉(约2.6g)中和至pH7,滤去生成的BaSO4沉淀(可用滑石粉助滤),滤液浓缩至约1mL,供纸色谱点样用。
样品:水解浓缩液
色谱滤纸:新华滤纸
对照品:葡萄糖、鼠李糖水溶液
展开剂:正丁醇-乙酸-水(4:1:5)上层溶液。
显色:苯胺-邻苯二甲酸盐试剂,喷后105℃烘10min,显棕红色斑点。苯胺-邻苯二甲酸的配制:将1.66g苯二甲酸和0.93g的苯胺溶于100mL水饱和的正丁醇中。
(3)芦丁、槲皮素的纸色谱和聚酰胺薄层色谱鉴定
样品:自制芦丁、槲皮素的乙醇液
色谱材料:新华滤纸,聚酰胺薄膜
对照品:芦丁、槲皮素的乙醇溶液
展开剂:正丁醇-乙酸-水(4:1:5)上层溶液(纸色谱)。90%乙醇或乙醇-水(7:3)(聚酰胺色谱)。
显色:
①可见光下观察及紫外灯下观察。
②喷三氯化铝试剂后再观察。
【基本操作注意事项】
1.加入石灰乳即可达到碱溶解提取芸香苷目的,又能使槐米中含存的大量粘液质生成钙盐沉淀除去,但应严格控制在pH8~9,不得超过10。pH过高,在加热提取过程中可促使芸香苷水解破坏,造成产率明显下降。酸沉时加浓硫酸调pH3~4,不宜过低,否则会使芸香苷生成盐溶于水,也会降低收率。