检验的确认与验证

2、分析方法验证

这部分内容在ICH Q2部分有明确的阐述，但只是在概念上比较 清晰，在实践应用中却不是特别明确，在这里只是对其需要特别 注意的事项作一个补充。 有关物质检测的方法验证具有一定的特殊性，也是最容易被质疑 的方法，这里暂不提到，更多的是其他方面的常见问题。 验证的方法与检验方法不一致是最常见的问题！即使CDE和一 些药检机构可能也没有注意到这一点，而且由于国内注册中大家 都知道的原因造成没有大量数据的积累，进而不会在注册中发现 这个问题所造成的巨大影响，举个例子说明。
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方法转移

还有一个概念与确认比较相近，叫做方法转移。 在我看来，方法转移可以认为是方法确认加上 重现性，更重要的是指你实验室的检测结果与 原实验室的检测结果是一致的。
4、系统适用性试验（SST）

这一部分是国内很多实验室都不太关注的地方，其实这 一部分对于检验是非常关键的。简单的说，你的检验结 果是否可信、是否有效、是否有说服力全在这里了。 SST一般主要考察哪些方面（主要从色谱角度）： （1）重复性：检查通过则表明你的系统一直处于稳定 状态，你的仪器没有问题。如果你的检验结果有问题， 要么是你的制备有问题，要么是你的样品有问题，仪器 出现问题的机会很小。
3、分析方法确认



这里单独提出来是因为在新版GMP中提出了这个概念，而 国内官方没有给出明确的概念。 GMP第223条：对不需要进行验证的检验方法，企业应当 对检验方法进行确认，以确保检验数据准确、可靠。 分析方法确认是指一个方法对于你的产品（或物料）、实 验条件在你的实验室能否进行的一种适用性检测。即：确 认本实验室具备检验条件和能力，能确保检验数据准确可 靠。
如何计算

计算时应该采用哪个呢，A、B还是平均值？ 答案其实是都可以，只要检查通过！因为二者 都是正确的，而且你也没办法证明哪个更准确， 也就不能说明平均值会更好。
定量限考查


（3）定量限考查：在一些较先进的方法中，往往规定了配制 定量限溶液，以之进样，检测信噪比，要求不得小于10，否 则杂质无法准确定量，这往往要优于你在方法验证中所做的用 信噪比去筛浓度的作法，因为信噪比会受仪器本身、流动相、 电信号、柱子、温度等多方面的影响，甚至有不同数量级的差 别，因此后者往往没有任何实际意义。 （4）理论板数、拖尾因子等。自己看药典去，与前三个概念 一比，没有值得说的地方。 除了这些，以下的内容也可以被认为是SST的一部分，超出规 定的范围也被认为是无效数据：

括号对照品检查

重复性国内有相当的企业都在做，但另外一个概念很 多企业都不太关注：括号对照品检查。意思是什么呢， 你的样品被对照品进样包着，形成一个括号，括号没 有问题，才表明你的样品检测没有问题，否则你后面 的对照品与前面的样品不一致，你怎么保证你的样品 在检测时没有问题。在一些要求严格的企业，如果供 试品后面没有括号检查，那么可以认为这期间你所有 的样品的检测结果都是无效的。
分离度考查

（ 2 ）分离度考查：这往往是有关物质检测 SST 最常见的要求（但国内很多标准，尤其是进口注 册标准，居然将它转移至含量测定中去，估计连 自己都不知道在干什么）。由于国外对于杂质研 究的比较透彻，所以它并不会像国内那样去比较 供试品和未知杂质的分离情况，更多的是以加标 的方法来考查。
仪器设备的OQPQ举例

HPLC：泵流速（准确性和波动性）、进样器（重复性和残留 量）、紫外检测器（波长准确性、灯能量、噪音和漂移）、多元 混合器（梯度准确性和波动性）。 UV：波长准确性、吸收值准确性和重复性、基线平直度、分辨率、 噪音和漂移等。 恒温（包括恒湿）箱：不同温度（湿度）分布、准确性和波动性。 灭菌锅：除温度分布外，还有程序升温曲线以及热穿透性。
检验的确认与验证
1、仪器设备确认 2、分析方法验证 3、分析方法确认 4、系统适用性试验
为什么要检验验证



这里所说的验证不光是指方法验证，还包括一个仪器设 备确认（有些单位也叫验证，不过国外一般称之为 Qualification，一般译成确认），甚至还有一个叫做系 统适用性试验。 看似简单的检验，其实需要建立在相当的一定层面上。 检验可以理解为一个金字塔，最底层也是最关键的是仪 器设备确认，试想你的仪器都不好使，你检出的结果怎 么能够相信。 举例：尺子（刻度为英尺） 天平（最小称量50mg）
如何进行方法确认

参见下表
第1类方法
是 是 是 否 否
验证项目
准确度 精密度 专属性 检出限 定量限
第2类方法 定量分析
是 是 是 否 是
限度试验
第3类方法
第4类方法
否 否 是 否 否
＊
否 是 是 否
＊
是 是
＊ ＊
线性
范围
＊ ＊
＊ ＊
否
＊
＊ ＊
否
否



＊：表示根据特殊实验的性质决定是否需要 第1类方法：定量测定散装药品中主成分或成 品药中活性成分的分析方法。 第2类方法：测量散装药品中杂质或成品药中 降解化合物的分析方法。 第3类方法：测量药品性能特性（如溶出度、 释放度）的分析方法。 第4类方法：鉴别试验
如何进行方法确认


方法确认 = 简要的方法验证 以含量为例，一般应确认：准确度、精密度 （系统重复性、分析重现性）、专属性。操作 及限度要求同方法验证。 一是确认产品是否适用这个检验方法，尤其是 制剂处方中的辅料是否有干扰。 二是确认实验室的条件能否用这个方法获得准 确的结果，包括仪器设备、环境、人员等。
天平的日常校验


天平在所有仪器设备里是一种比较特殊的仪器，除了需要进行正常的确认外， 还要每天进行日校（更合适的应该叫做日常检查）。 这是因为天平在检验中非常关键，而且本身也容易受各种条件的影响而发生 偏移。个人觉得在进行日校时应设立警戒限和行动限，所谓警戒限就是指当 天平超出这个值时你要做重新校正（例如内校或外校），以使之不会再发生 更大的偏移；所谓行动限就是指当天平走出这个值时你需要对过去一天以来 的所有数据进行回顾和调查（可以通过偏差调查的方式），以确定哪些检验 结果是有效的，哪些数据是无效的。如果平时不进行日校，那么你根本无法 确定当发现问题的这段时间哪些数据还可用。 还有一种所谓的日校，就是日校时首先清零，再外校，再检查。就相当于你 把罪证都已经销毁了，再自己查一次，说，“没问题”，那不是自己骗自己 吗！不过相信还是比从来都没做过强。前几天去做供应商审计，结果发现人 家根本连砝码都没有，还校啥呀，问他们怎样认为天平有问题，答曰“天平 没回到零点”，然后找计量院来看看。
检验验证还包括哪些


仪器确认再往上是方法验证。方法验证中也包括了确认、交叉验证、 转移验证等内容，不外乎是你需要做什么样的试验，来确保你检测 结果是可信的，在你的实验室是可以实现和完成的。 再往上是系统适用性试验，这可能也是国内大家做得比较少的，往 往药典对它也不是太关注，顶多是有点重复性的概念。其实以下几 个方面我个人认为也可以是系统适用性试验的一部分，它包括空白 干扰、对照品检查（即双份对照品的平行性检查）、括号对照品检 查（即检查系统没有发生漂移，以及溶液稳定）、有关物质的定量 限、分离度（包括峰谷比）等。只有建立在这个系统适用性试验通 过的基础上，本次试验的结果才是可信的。
为什么要平行测定



含量测定时都采用双对照品，请问：计算时应 该采用A还是B，或者是A和B的平均值，抑或其 他，为什么？ 采用两份的平均值会不会增加准确性？ 为什么要做两份，做三份、五份行不行？
平行测定的目的


做两份的目的是用以证明你的称量和配制过程是没有问题的！ 任何操作本身就有误差，就如我们前面所说的那样，你所用的仪 器设备都要确认过的，而且像天平每天都要做校验，但仍然不能 避免误差，更何况还有可能出现人为误差，而这些误差并不见得 你在操作过程中就可以发现（发现了你就该重新配了）。在你的 仪器例如HPLC已经确认完成的基础上，进样平行样品，如果有 操作导致的误差可能被发现（当然三份时发现的机会就更大）。 简单举个例子，你在称量时出现洒的机率是1%，那么称两份时 出现洒的机率就是万分之一。
3Q

IQ：不外乎是要看一下水、电、气、环境、东西是否正确齐全、安装人员的 资质、软件等等是否符合要求，与你的合同是否一致。 OQ：主要是看你的仪器设备是否能够正常运行，包括功能键、密码等是否 能够正确通过；仪器设备的主要指标是否能够满足。 PQ：主要是看仪器设备是否能够满足用户的需求。 有很多仪器设备的OQ和PQ并不一定能够界定得很清楚，没有必要一定强行 去划分，最重要的是能够满足你的要求，而且没必要做多次重复和工作。还 有很多仪器设备并不需要进行OQ和PQ，甚至同一仪器目的不同也会有所差 别。例如一台干燥箱，如果只是烘玻璃器皿，那就不需要进行OQPQ确认； 还有一些仪器，由于每次使用都需要进行校准，那么这种仪器对于所谓的确 认要求也可以降低，例如pH计等；还有一些仪器设备，他的作用只是辅助 的，准确与否对你实验的结果影响不大，这时你也不需要进行确认，例如离 心机、磁力搅拌器等。
平行对照品

（ 5 ）平行对照品：如果两份对照品不平行， 那么说明你配制过程中可能存在问题，你无法 确定哪一个是正确的，因此两份都无效，你也 不需要再往下进样，直接重新配制再进样就 OK 了，对照品无效，那么检验的样品数据也 就无效了。
平行样品

（ 6 ）平行样品：同平行对照品，两份不平行则说明至少 你样品制备有问题，除非你能证明你的方法有问题，既然 制备有问题，检验结果当然无效了。如果这时有一个数据 为OOS结果，你也大也不必进行调查，因为这是无效数据， OOS只有是在有效数据的情况下再进行调查。例如含量要 求 98.0%-102.0% ，平行要求不得过 2.0% ，结果是 99.0% 和 102.5%，那么你不需要进行 OOS 调查；而如果结果是 101.0%和 102.5%，你就需要进行 OOS 调查。要记住，你 的平行样品的规定是你自己要求的。

比如说你的工艺与其他人家不同，你的杂质分 布也会有可能不同，因此药典的方法不一定能 够适合你的产品，所以你要进行确认。至于你 确认哪些项目，在美国药典附录1226中有所 描述，但由于各家对其理解有所不同，它被认 为是最低要求，你要根据自己的情况适当地进 行增补。
如何进行方法确认

当然并不是所有的药典方法都要做确认，已使 用多年的、通用的方法是不需要做确认的，例 如炽灼残渣、干燥失重、pH等实验室日常测试。 一般需要做确认的方法通常是指色谱法，但并 不局限于此。
研磨制备供试品


（1）很多国人在制定含量（固体制剂）测定时，都采用研磨后 称取的方法制备供试品溶液，甚至在一些口岸所都将进口标准中 的投片法给改为研磨法；而在方法验证中即没有采用研磨法，所 以看上去验证的结果很美，但你得到的结果却可能是个伪结论。 因为很多小规格的产品在研磨过程中都会存在吸附现象，这种现 象会因为不同的人、不同的研磨工具、不同的力度和时间等因素 而有所不同，最经典的结果就是经常会发现含量测定的结果要低 于均匀度测定的平均值！ 那么请注意，如果你要采用研磨法制备样品，请在验证时也要将 对照品研于空白辅料或样品（加样回收）中，而不是直接投入容 量瓶里！如果你要直接投入容量瓶中，只有你的方法是投片法， 或者全转移的方法！
1、仪器设备确认



这是个在新版GMP中引进的概念，以前只有工艺验证、生产设备和公用工程 系统等概念。其实这个概念由来已久，简单的理解可以说是3Q（对于分析仪 器基本上不需要设计确认，都是成型的东西，顶多需要个URS），再加上个 校准就差不多了。 可能国内很多单位甚至一些所谓的“砖家” 认为检定就是仪器设备的全部， 其实我个人对检定是最不感冒的：第一，仪表、标准器械类的一般没有问题； 第二，仪器设备类的可能与我们行业的要求及用户需要有很大不同；第三， 很多检测是没有标准的，就给你一个校验结果，你自己看去；第四，有相当 一部分根本就不做，有些让客户自己做，让他做还有什么意义，只是收钱而 已。在我看来，仪器设备的检定、检测那是给一些官老爷们看的，确认才是 给自己用的（很多官老爷不懂也不看）。 目的明确了，确认也就好做了。