饱和硫酸铵溶液(SAS)
透析袋使用前如何处理
透析袋在使用前如何处理透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一.在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。
通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。
保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的.透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正比于膜的面积和温度，通常是4℃透析，升高温度可加快透析速度。
透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素（再生纤维素RC、纤维素酯CE、PVDF等）制成的透析膜，目前常用的是美国美国光谱医学公司（spectrum，上海欧韦达仪器科技有限公司是中华区特约总经销）和美国Union Carbide （联合碳化物公司，上海欧韦达仪器科技有限公司是华东区特约经销商）生产的各种尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量，缩写为MwCO）大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类,单位为道尔顿（D)。
商品透析袋制成管状，其扁平宽度为8 mm~77 mm不等.为防干裂，出厂时都用10%的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。
透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜，目前常用的是美国Union Carbide （联合碳化物公司）和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量）通常为1万左右。
硫酸铵分级沉淀原理及实验方案
一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。
用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。
高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。
各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。
这种方法称之为盐析。
盐浓度通常用饱和度来表示。
硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白变性而应用最为广范。
二，试剂及仪器1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 43. 饱和硫酸铵溶液（SAS ）4. 蒸馏水5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠)6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。
各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。
通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。
（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ）1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。
用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。
此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 °C ）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20 000 ′g 离心30 min ，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 （4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 °C ），使蛋白质充分沉淀。
（三）透析1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min （4 °C ）。
弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。
沉淀溶解后放入透析袋对PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 °C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。
[经验]饱和硫酸铵溶液的配制
![[经验]饱和硫酸铵溶液的配制](https://img.taocdn.com/s3/m/552d00a9f021dd36a32d7375a417866fb84ac071.png)
饱和硫酸铵溶液的配制00000①在25℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。
000001． 2．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）0000①在0℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。
000025℃下100%硫酸铵是1L水中约加780g硫酸铵。
可以在加进去之后，用微波炉加热到溶解为止，然后放置在过夜，第二天就会有晶体析出，这就可以了。
0000双蒸水中加入过量硫酸铵，热至50－60度保温数分钟，趁热滤出沉淀，在0度或25度平衡1－2天，有固体析出时即达100％饱和度，以氨水调节PH值至7.0。
0000硫酸铵在水中的溶解度，100度时为1.034g/ml，0度时为0.706g/ml。
因此，每100ml 蒸馏水加90gAR级结晶硫酸铵，80度溶解，趁热过滤，降至室温后即有结晶析出，应任其留存瓶中，使用前吸出所需的量，用28%的氨水调PH至7.2即可。
结晶（要留着，随着温度变化，溶解度也会变化，你总要保证溶液中是饱和的，所以结晶留在瓶底，不需要再过滤，使用时取上面的溶液即可。
pH7.0或7.2影响不大，也有调到7.4的，因为最后沉淀的蛋白一般都是用PBS稀释的。
）0000最方便的就是500ml水加半瓶250g硫酸铵剧烈搅拌，上层澄清的就是饱和的了。
00000另外较快达到饱和状态的方法是，将过量的硫酸铵（参考不同温度下的溶解大多数，或干脆多加点）放在水浴箱内高温溶解，取出致室温放置至其平衡（会有硫酸铵重新析出），上清即为室温下的饱和硫酸铵0000先将硫酸氨80克溶解到100水中，加热到80左右，溶解部分过滤，其余的再溶，仍有一部分结晶，过滤的溶液当降到室温的时候就会有结晶，平衡一两天，取上清用同时氨水调节PH值用。
00000。
透析袋使用前如何处理
透析袋在使用前如何处理透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。
在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。
通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。
保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。
透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正比于膜的面积和温度，通常是4℃透析，升高温度可加快透析速度。
透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的最多的还是用纤维素（再生纤维素RC、纤维素酯CE、PVDF等）制成的透析膜，目前常用的是美国美国光谱医学公司（spectrum，上海欧韦达仪器科技有限公司是中华区特约总经销）和美国Union Carbide （联合碳化物公司，上海欧韦达仪器科技有限公司是华东区特约经销商）生产的各种尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量，缩写为MwCO）大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类，单位为道尔顿（D）。
商品透析袋制成管状，其扁平宽度为8 mm～77 mm不等。
为防干裂，出厂时都用10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。
透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜，目前常用的是美国Union Carbide （联合碳化物公司）和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量）通常为1万左右。
硫酸铵分级沉淀原理及实验方案
一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。
用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。
高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。
各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。
这种方法称之为盐析。
盐浓度通常用饱和度来表示。
硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白变性而应用最为广范。
二，试剂及仪器1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 43. 饱和硫酸铵溶液（SAS ）4. 蒸馏水5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠)6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。
各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。
通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% — 50% 。
（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ）1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。
用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。
此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 ° C ）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20 000 ′ g 离心30 min ，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 （4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 ° C ），使蛋白质充分沉淀。
（三）透析1.蛋白质溶液10 000 ′ g 离心30 min （4 ° C ）。
弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。
沉淀溶解后放入透析袋对PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 ° C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。
(完整版)硫酸铵分级沉淀原理及实验方案
一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。
用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。
高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。
各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。
这种方法称之为盐析。
盐浓度通常用饱和度来表示。
硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白变性而应用最为广范。
二，试剂及仪器1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 43. 饱和硫酸铵溶液（SAS ）4. 蒸馏水5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠)6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。
各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。
通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。
（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ）1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。
用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。
此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 °C ）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20 000 ′g 离心30 min ，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 （4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 °C ），使蛋白质充分沉淀。
（三）透析1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min （4 °C ）。
弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。
沉淀溶解后放入透析袋对PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 °C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。
硫酸铵沉淀法
抗体的纯化( 硫酸铵沉淀法）一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。
用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。
高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。
各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。
这种方法称之为盐析。
盐浓度通常用饱和度来表示。
硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。
二，试剂及仪器1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 43. 饱和硫酸铵溶液（SAS ）4. 蒸馏水5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠)6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。
各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。
通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。
（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ）1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。
用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。
此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 °C ）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20 000 ′g 离心30 min ，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 （4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 °C ），使蛋白质充分沉淀。
（三）透析1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min （4 °C ）。
弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。
沉淀溶解后放入透析袋对PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 °C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。
透析袋使用前如何处理
透析袋在使用前如何处理透析已成为生物化学实验室最简便最常用的别离纯化技术之一。
在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。
通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度到达平衡为止。
保存在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保存液〞，袋〔膜〕外的溶液称为“渗出液〞或“透析液〞。
透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。
透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正比于膜的面积和温度，通常是4℃透析，升高温度可加快透析速度。
透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的最多的还是用纤维素〔再生纤维素RC、纤维素酯CE、PVDF等〕制成的透析膜，目前常用的是美国美国光谱医学公司〔spectrum，XX欧韦达仪器科技XX是中华区特约总经销〕和美国Union Carbide 〔联合碳化物公司，XX欧韦达仪器科技XX 是华东区特约经销商〕生产的各种尺寸的透析管，截留分子量MwCO 〔即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量，缩写为MwCO〕大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类，单位为道尔顿〔D〕。
商品透析袋制成管状，其扁平宽度为8 mm～77 mm不等。
为防干裂，出厂时都用10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。
透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜，目前常用的是美国Union Carbide 〔联合碳化物公司〕和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管，截留分子量MwCO〔即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量〕通常为1万左右。
透析袋使用前如何处理
透析袋在使用前如何处理透析已成为生物化学实验室最简便最常用得分离纯化技术之一。
在生物大分子得制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质与浓缩样品等都要用到透析得技术。
透析只需要使用专用得半透膜即可完成。
通常就是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中得大分子量得生物大分子被截留在袋内,而盐与小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边得浓度达到平衡为止。
保留在透析袋内未透析出得样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外得溶液称为“渗出液"或“透析液”。
ﻫ透析得动力就是扩散压,扩散压就是由横跨膜两边得浓度梯度形成得。
透析得速度反比于膜得厚度,正比于欲透析得小分子溶质在膜内外两边得浓度梯度,还正比于膜得面积与温度,通常就是4℃透析,升高温度可加快透析速度。
ﻫ透析膜可用动物膜与玻璃纸等,但用得最多得还就是用纤维素(再生纤维素RC、纤维素酯CＥ、PＶDＦ等)制成得透析膜,目前常用得就是美国美国光谱医学公司(spectｒｕm,上海欧韦达仪器科技有限公司就是中华区特约总经销)与美国Ｕｎion Cａrｂidｅ(联合碳化物公司,上海欧韦达仪器科技有限公司就是华东区特约经销商)生产得各种尺寸得透析管,截留分子量MｗCO(即留在透析袋内得生物大分子得最小分子量,缩写为ＭwＣO)大概有100、500、1000、2000、3500、8０0０、1０0０0、１5000、200００、25000、5００00、１0000０、25000０、500000、100000０等种类,单位为道尔顿(D)。
商品透析袋制成管状,其扁平宽度为8 mm～７7 ｍm不等。
为防干裂,出厂时都用１0％得甘油处理过,并含有极微量得硫化物、重金属与一些具有紫外吸收得杂质,它们对蛋白质与其它生物活性物质有害,用前必须除去。
ﻫ透析膜可用动物膜与玻璃纸等,但用得最多得还就是用纤维素制成得透析膜,目前常用得就是美国Ｕniｏn Cａrｂide (联合碳化物公司)与美国光谱医学公司生产得各种尺寸得透析管,截留分子量ＭｗCO(即留在透析袋内得生物大分子得最小分子量)通常为1万左右。
透析袋使用前如何处理
透析袋在使用前如何处理透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。
在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。
通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。
保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。
透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正比于膜的面积和温度，通常是4℃透析，升高温度可加快透析速度。
透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的最多的还是用纤维素（再生纤维素RC、纤维素酯CE、PVDF等）制成的透析膜，目前常用的是美国美国光谱医学公司（spectrum，上海欧韦达仪器科技有限公司是中华区特约总经销）和美国Union Carbide （联合碳化物公司，上海欧韦达仪器科技有限公司是华东区特约经销商）生产的各种尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量，缩写为MwCO）大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类，单位为道尔顿（D）。
商品透析袋制成管状，其扁平宽度为8 mm～77 mm不等。
为防干裂，出厂时都用10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。
透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜，目前常用的是美国Union Carbide （联合碳化物公司）和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量）通常为1万左右。
抗体制备-自己整理
制备单克隆抗体是复杂而费时的工作，整个技术流程如图：单克隆抗体制备（免疫2-3月，总周期4-6月）准备抗原动物免疫选择免疫动物Elisa测抗血清分离脾细胞细胞融合（融合剂:PEJ）HAT培养基筛选杂交瘤细胞筛选阳性细胞（三天内做完流式）阳性克隆并扩大培养细胞冻存扩大培养收集上清动物接种收集腹水单克隆抗体纯化保存抗原提纯与动物免疫对抗原的要求是纯度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。
如为细胞抗原，可取1×107个细胞作腹腔免疫。
可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化，如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原，可将抗原所在的电泳条带切下，研磨后直接用以动物免疫。
选择与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠，鼠龄在8～12周，雌雄不限。
为避免小鼠反应而不佳或免疫过程中死亡，可同时免疫3～4只小鼠。
免疫过程和方法与多克隆抗血清制备基本相同，因动物、抗原形式、免疫途径不同而异，以获得高效价抗体为最终目的。
免疫间隔一般2～3周。
一般被免疫动物的血清抗体效价越高，融合后细胞产生高效价特异抗体的可能性越大，而且单克隆抗体的质量（如抗体的浓度和亲和力）也与免疫过程中小鼠血清抗体的效价和亲和力密切相关。
末次免疫后3～4天，分离脾细胞融合。
骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备选择瘤细胞株的最重要的一点是与待融合的B细胞同源。
如待融合的是脾细胞，各种骨髓瘤细胞株均可应用，但应用最多的是Sp2/0细胞株。
该细胞株生长及融合效率均佳，此外，该细胞株本身不分泌任何免疫球蛋白重链或轻链。
细胞的最高生长刻度为9×105/ml，倍增时间通常为10～15h。
融合细胞应选择处于对数生长期、细胞形态和活性佳的细胞（活性应大于95％）。
骨髓瘤细胞株在融合前应先用含8-氮鸟嘌呤的培养基作适应培养，在细胞融合的前一天用新鲜培养基调细胞浓度为2105/ml，次日一般即为对数生长期细胞。
在体外培养条件下，细胞的生长依赖适当的细胞密度，因而，在培养融合细胞或细胞克隆化培养时，还需加入其他饲养细胞（feedercell）。
饱和硫酸铵溶液的配制
饱和硫酸铵溶液的配制
1. 配制硫酸铵溶液的需要准备的材料
(1)铵氯化钠：硫酸铵含有可溶性氯化钠，可以吸收和储存15％水分，不易氧化；
(2)硫酸：化学纯度高，无腐蚀性，无毒性，提高硫酸铵的溶解度；
(3)冷开水：用来调节溶液的浓度和酸碱性，溶液可以按照规定的比例
来调节。
2. 配制硫酸铵溶液的步骤
(1)将铵氯化钠放入容器中，用一定的量的冷开水混合，同时在攝氏30℃的温度下搅拌均匀；
(2)在攪拌的同时慢慢投入硫酸，投入量按照要求来控制；
(3)持续搅拌铵氯化钠和硫酸，直到完全溶解；
(4)注入更多的冷开水，把更多的硫酸溶解入溶液中，调节溶液的酸碱
和浓度。
3. 注意事项
(1)铵氯化钠和硫酸的投入量需要准确，不能有损余质；
(2)在搅拌溶液的过程中，必须保持温度在攝氏30-50℃之间，否则会引起氯化铵团聚，影响溶液质量；
(3)溶液攪拌完成后，需要看是否符合溶液的要求，如比重和PH等，
确保溶液质量。
饱和硫酸铵溶液盐析蛋白质原理
饱和硫酸铵溶液盐析蛋白质原理饱和硫酸铵溶液盐析蛋白质原理向鸡蛋清中加入饱和硫酸铵溶液，可以观察到的现象为析出沉淀，说明饱和硫酸铵溶液可使蛋白质的溶解性变小（填“变大”或“变小”），此过程叫做蛋白质的“盐析”为物理变化．蛋白质受热或遇到浓硝酸、重金属盐、甲醛等化学物质，会发生化学变化，失去原有的生理功能，此过程叫做蛋白质的“变性”．因此，重金属盐、甲醛能使人中毒，若少量的重金属盐中毒，可以吞服蛋白质来解毒．蛋白质烧焦后有烧焦羽毛的气味，这个性质可以用来鉴别蛋白质，例如，如何区分蚕丝和棉纱线？将蚕丝和棉纱线分别点燃，有烧焦羽毛气味的是蚕丝，另一种是棉纱线．考点：鉴别淀粉、葡萄糖的方法与蛋白质的性质；亚硝酸钠、甲醛等化学品的性质与人体健康．专题：课本知识同类信息．分析：只有熟悉蛋白质的性质、影响蛋白质活性的因素、重金属盐中毒的解救和蛋白质的鉴别方法，才能正确解答本题．解答：解：根据课本知识可知：向鸡蛋清中加入饱和硫酸铵溶液，可以观察到的现象为析出沉淀，说明饱和硫酸铵溶液可使蛋白质的溶解性变小，此过程叫做蛋白质的“盐析”为物理变化．蛋白质受热或遇到浓硝酸、重金属盐、甲醛等化学物质，会发生化学变化，失去原有的生理功能，此过程叫做蛋白质的“变性”．因此，重金属盐、甲醛能使人中毒，若少量的重金属盐中毒，可以吞服蛋白质来解毒．蛋白质烧焦后有烧焦羽毛的气味，这个性质可以用来鉴别蛋白质，区分蚕丝和棉纱线的方法如下：将蚕丝和棉纱线分别点燃，有烧焦羽毛气味的是蚕丝，另一种是棉纱线．故答案为：析出沉淀；变小；物理；热；浓硝酸；重金属盐；甲烷；化学；蛋白质；烧焦羽毛；将蚕丝和棉纱线分别点燃，有烧焦羽毛气味的是蚕丝，另一种是棉纱线．点评：本题主要考查蛋白质的性质、影响蛋白质活性的因素、重金属盐中毒的解救和蛋白质的鉴别方法，难度较小．。
硫酸铵饱和度
硫酸铵饱和度
硫酸铵饱和度是指含中硫酸铵物质的溶液在加入或吸收硫酸铵的容量达到最大后，所
饱和物质的量与溶液总体积的比例，即被称作硫酸铵溶液的饱和度。
硫酸铵饱和度是衡量硫酸铵溶液丰度程度的重要标准。
一般来说，硫酸铵的溶液是按
国家标准要求的饱和度来按照NCS 8011-28号标准进行测定的。
硫酸铵饱和度的测定以硫酸铵溶液的标准濁度为基准，测定时将制备的硫酸铵溶液放
入玻璃体积瓶中，将其搅拌均匀后放置在室温下，十分钟后以双面直尺检测溶液濁度变化，然后计算出饱和度值。
在含硫酸铵溶液中，硫酸铵饱和度的测定一般分两种情况：一种是传统的测试方法，
即将溶液放入玻璃体积瓶中，将溶液搅拌均匀，然后采用双面直尺测量溶液濁度，根据所
测得的濁度值计算出硫酸铵溶液饱和度；另一种是高灵敏的仪器测定，该测定方法取用晶
体生长仪实验室技术测定法，即利用晶体生长仪的测试功能，在溶液的湿度、比重测定仪
及热力学仪中显示出来。
以上两种测试方法能够满足不同种类的硫酸铵溶液饱和度的测定
需要。
除了上述的传统方法和现代仪器方法，还有其他计算机软件供应商提供的自动化计算
工具，能够计算不同情况下硫酸铵溶液的饱和度数值，可以很大程度地提高测试的精确性
与准确率。
从理论上讲，在硫酸铵溶液中，饱和度的高低对于溶液中硫酸铵的活性有一定的影响。
一般情况下，饱和度越高，溶液中硫酸铵的活性就越高。
此外，在工业生产中，也需要注
意溶液的饱和度，其饱和度过低或过高都会影响溶液质量，甚至不能够达到质量标准要求，因此，在配制硫酸铵溶液时，要注意硫酸铵饱和度及秤量比例，以保证产品质量。
最新饱和硫酸铵溶液的配制
饱和硫酸铵溶液的配制------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxx饱和硫酸铵溶液的配制①在25℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。
1． 2．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）①在0℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。
25℃下100%硫酸铵是1L水中约加780g硫酸铵。
可以在加进去之后，用微波炉加热到溶解为止，然后放置在过夜，第二天就会有晶体析出，这就可以了。
双蒸水中加入过量硫酸铵，热至50－60度保温数分钟，趁热滤出沉淀，在0度或25度平衡1－2天，有固体析出时即达100％饱和度，以氨水调节PH值至7.0。
硫酸铵在水中的溶解度，100度时为1.034g/ml，0度时为0.706g/ml 。
因此，每100ml蒸馏水加90gAR级结晶硫酸铵，80度溶解，趁热过滤，降至室温后即有结晶析出，应任其留存瓶中，使用前吸出所需的量，用28%的氨水调PH至7.2即可。
结晶（）最方便的就是500ml水加半瓶250g硫酸铵剧烈搅拌，上层澄清的就是饱和的了。
另外较快达到饱和状态的方法是，将过量的硫酸铵（参考不同温度下的溶解大多数，或干脆多加点）放在水浴箱内高温溶解，取出致室温放置至其平衡（会有硫酸铵重新析出），上清即为室温下的饱和硫酸铵先将硫酸氨80克溶解到100水中，加热到80左右，溶解部分过滤，其余的再溶，仍有一部分结晶，过滤的溶液当降到室温的时候就会有结晶，平衡一两天，取上清用同时氨水调节PH值用。
硫酸铵沉淀主要分为两种形式：1.将事先配好的饱和硫酸铵溶液加入目标溶液中，这种方法精确度高，硫酸铵是弱酸性的，事先调好pH后，再补入溶液中pH变化小，适合于对pH敏感的蛋白（酶类）或要求比较高的实验。
2.直接将固体硫酸铵补入目标溶液中，这种方法比较快速，但是加入后溶液pH值会有一定程度的降低，适合于对pH不敏感的蛋白，这种操作应该能满足一般实验的要求。
饱和硫酸铵检测方法
饱和硫酸铵检测方法一、饱和硫酸铵溶液配制:1、按630mL水加入500g硫酸铵的比例；2、加热溶解，使其达到饱和；3、冷却到室温（不同温度的溶解度不同，温度降低后有结晶析出）；4、单层滤纸过滤，备用。
注意：不同的室温溶液的溶解度也会有差异，所以试剂存于温度较恒定的仪器室。
二、操作步骤:1、500mL三角瓶粗量250~300mL样酒；2、超声波除气5min以上；3、用量筒量取200mL除气后的酒样，倒入浊度杯；4、放20℃水浴静置10min~15min；5、放入浊度计，读取初始浊度值；6、加入转子，放磁力搅拌器上，准备滴定；三、滴定过程：1、30mL饱和硫酸铵溶液一次性滴入，搅拌30sec；2、测浊度，浊度小于等于初始浊度时，继续以5mL/次，搅拌20sec；3、测浊度，浊度大于初始浊度0.05EBC时，继续以2mL/次，搅拌20sec；4、测浊度，浊度到达1.5EBC时，继续以0.5mL/次，搅拌20sec；5、滴定终点，浊度值为2EBC；6、读数，并记录整个过程消耗的饱和硫酸铵溶液的量即为饱和硫酸铵值。
标准混浊液一、仪器容量瓶，100、50ml具塞三角瓶，100ml移液管，5、25ml二、试剂1、1%硫酸肼溶液称取1.000g分析纯硫酸肼，溶于无混浊的蒸馏水，移入100ml 容量瓶中定容，放置4小时，使其充分溶解。
2、10%六次甲基四胺溶液称取10.000g分析纯六次甲基四胺，溶于无混浊的蒸馏水，移入100ml容量瓶中定容。
三、配制1、制备浓富尔马进混浊液吸取25ml1%硫酸肼溶液，缓慢加到盛有25ml10%六次甲基四胺溶液的三角瓶中，边加边摇动，然后盖塞。
放置24小时后备用，该溶液在两个月内有效。
2、制备100EBC富尔马进单位混浊液摇匀浓富尔马进混浊液混浊液，立刻吸取1体积，在容量瓶中用蒸馏水稀释成10体积（简称100EBC 单位混浊液）。
该溶液一周内有效。
3.制备工作标准浑浊液：吸取摇匀后的100EBC 单位混浊液0.00；0.25，0.50，0.75，1.00，1.25，1.50ml分别于7支50ml 比色管中，用添加0.2%硅藻土新过滤的透明啤酒稀释到刻度，摇匀后，即制得0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 EBC 单位混浊液。
硫酸铵饱和度的常用表,聚丙烯酰胺凝胶的配制表
硫酸铵饱和度的常用表1．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）2．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃）3．不同温度下饱和硫酸铵溶液的数据聚丙烯酰胺凝胶的配制表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液溶液成分不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）5 10 15 20 25 30 40 506%水 2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30%丙烯酰胺溶液 1 2 3 4 5 6 8 101.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.32.53.8 5 6.3 7.5 10 12.510% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.02 0.024 0.032 0.04 8%水 2.3 4.6 6.9 9.3 11.5 13.9 18.5 23.2 30%丙烯酰胺溶液 1.3 2.7 4 5.3 6.7 8 10.7 13.31.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.32.53.8 5 6.3 7.5 10 12.510% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 0.015 0.018 0.024 0.03 10%水 1.9 4 5.9 7.9 9.9 11.9 15.9 19.8 30%丙烯酰胺溶液 1.7 3.3 5 6.7 8.3 10 13.3 16.71.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.32.53.8 5 6.3 7.5 10 12.510% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02 12%水 1.6 3.3 4.9 6.6 8.2 9.9 13.2 16.5 30%丙烯酰胺溶液 2 4 6 8 10 12 16 201.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.32.53.8 5 6.3 7.5 10 12.510% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.0215%水 1.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.9 9.2 11.5 30%丙烯酰胺溶液 2.5 5 7.5 10 12.5 15 20 251.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.32.53.8 5 6.3 7.5 10 12.510% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02 表2 配制6% Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳5%积层胶所用溶液溶液成分不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）123456810水0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 30%丙烯酰胺溶液0.170.330.50.670.831 1.3 1.7 1.5 mol/L Tris (pH8.8)0.130.250.380.50.630.750 1.25 10% SDS0.010.020.030.040.050.060.080.1 10%过硫酸氨0.010.020.030.040.050.060.080.1 TEMED0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0080.01。
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北京雷根生物技术有限公司
饱和硫酸铵溶液(SAS)
简介：
硫酸铵(Ammonium sulfate)分子量为132.14，化学式为(NH 4)2·SO 4，CAS 号为7783-20-2，饱和硫酸铵溶液多用于硫酸铵盐析法沉淀蛋白质。
硫酸铵盐析法是分离蛋白质常用的方法之一，其原理是当高浓度的盐加入到蛋白溶液中，铵离子和硫酸根离子同蛋白质竞争与水结合，使蛋白质的溶解性降低而从水溶液中沉淀析出。
饱和硫酸铵溶液(SAS)pH 为7.0～7.2，操作简单，不易引起蛋白质变性失活，其缺点是所得抗体纯度不高，易受其他蛋白质污染。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作。
注意事项：
1、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
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