前列腺癌方面免疫组化基础知识PPT课件
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免疫组化ppt课件
来自胶体金 与胶体金结合的蛋白
蛋白-抗体结合体
抗原
标本：组织标本和细胞标本
(1).组织标本：石蜡切片、冰冻切片、振动 切片、塑料切片、超薄切片、碳蜡切片等；
(2).细胞标本：组织印片、细胞爬片和细胞 涂片等。
石蜡切片应用：其优点是组织结构保存良好， 在病理和回顾性研究中有较大的实用价值， 能切连续薄片，组织结构清晰，抗原定位准 确。缺点在于制作时间过长，步骤繁多，易 出错。
(6).加Ⅰ抗：弃去血清，加Ⅰ抗，4℃过夜或室温下5分钟— 1小时；
(7).复温：室温复温1小时，回收Ⅰ抗，PBS液洗涤3次X5分 钟；
(5).透明化：纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒 浸液，替换出组织内的酒精，这种媒浸液称为透明剂。组织先经纯酒精 和透明剂各半的混合液浸渍1～2小时，再转入纯透明剂中浸渍。目的： 石蜡易于浸入组织； (6).浸蜡与包埋：用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。 通常先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1～2小 时，再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍3小时左右，浸蜡应在高于石蜡 熔点3℃左右的温箱中进行，以利石蜡浸入组织内。通常石蜡采用熔点为 56～58℃或60～62℃两种。 (7).切片:包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，切片机切片，切片厚 度为4～7um。 (8).贴片与烤片:用粘附剂-蛋白甘油将展平的蜡片牢附于载玻片。首先 在洁净的载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，再将一定长度蜡带（连续切片） 或用刀片断开成单个蜡片于温水（45℃左右）中展平后，捞至玻片上铺 正，或直接滴两滴蒸馏水于载玻片上，再把蜡片放于水滴上，略加温使 蜡片铺展，最后用滤纸吸除多余水分，将载玻片放入45℃温箱中干燥， 也可在37℃温箱中干燥，但需适当延长时间。
蛋白-抗体结合体
抗原
标本：组织标本和细胞标本
(1).组织标本：石蜡切片、冰冻切片、振动 切片、塑料切片、超薄切片、碳蜡切片等；
(2).细胞标本：组织印片、细胞爬片和细胞 涂片等。
石蜡切片应用：其优点是组织结构保存良好， 在病理和回顾性研究中有较大的实用价值， 能切连续薄片，组织结构清晰，抗原定位准 确。缺点在于制作时间过长，步骤繁多，易 出错。
(6).加Ⅰ抗：弃去血清，加Ⅰ抗，4℃过夜或室温下5分钟— 1小时；
(7).复温：室温复温1小时，回收Ⅰ抗，PBS液洗涤3次X5分 钟；
(5).透明化：纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒 浸液，替换出组织内的酒精，这种媒浸液称为透明剂。组织先经纯酒精 和透明剂各半的混合液浸渍1～2小时，再转入纯透明剂中浸渍。目的： 石蜡易于浸入组织； (6).浸蜡与包埋：用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。 通常先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1～2小 时，再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍3小时左右，浸蜡应在高于石蜡 熔点3℃左右的温箱中进行，以利石蜡浸入组织内。通常石蜡采用熔点为 56～58℃或60～62℃两种。 (7).切片:包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，切片机切片，切片厚 度为4～7um。 (8).贴片与烤片:用粘附剂-蛋白甘油将展平的蜡片牢附于载玻片。首先 在洁净的载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，再将一定长度蜡带（连续切片） 或用刀片断开成单个蜡片于温水（45℃左右）中展平后，捞至玻片上铺 正，或直接滴两滴蒸馏水于载玻片上，再把蜡片放于水滴上，略加温使 蜡片铺展，最后用滤纸吸除多余水分，将载玻片放入45℃温箱中干燥， 也可在37℃温箱中干燥，但需适当延长时间。
前列腺癌讲课PPT课件
汇报人：
目录
CONTENTS
前列腺癌是一种发 生在前列腺上皮组 织的恶性肿瘤
病因可能与遗传、 环境、生活习惯等 多种因素有关
早期前列腺癌通常 无明显症状，随着 病情发展可出现尿 频、尿急、尿痛、 血尿等症状
前列腺癌的诊断主 要依靠直肠指检、 前列腺特异性抗原 检测和前列腺穿刺 活检等手段
根据临床分期：局限期、局 部进展期、晚期
前列腺特异性抗原（PSA）检 测
影像学检查（如超声、CT或 MRI）
病理学诊断方法：通过组织学检查，观察前列腺组织结构的变化，确定是否存在癌细胞。
病理学诊断标准：根据癌细胞的分化程度、生长方式、浸润深度等指标，对前列腺癌进行 病理学分级。
病理学诊断的临床意义：为治疗方案的制定提供依据，有助于预测患者的预后。
营养指导：保持 均衡饮食，增加 蔬菜、水果和全 谷物的摄入，减 少红肉和加工肉
类的摄入。
运动指导：定期 进行中等强度的 身体活动，如快 走、游泳、骑车 等，有助于改善 前列腺癌患者的
生存质量。
注意事项：避免 过度饮酒和吸烟， 这些行为可能会 增加前列腺癌的
风险。
康复期营养与运 动：在前列腺癌 治疗后的康复期， 患者需要更多的 营养和运动指导， 以促进身体的恢 复和预防复发。
药物治疗的种类：激素治疗、化疗药物、免疫治疗等
药物治疗的适用人群：激素治疗适用于晚期前列腺癌患者，化疗适用于有转移的前列腺癌患者，免疫治疗 适用于对激素治疗无效的患者。
药物治疗的优缺点：激素治疗可以延长患者的生存期，但长期使用会产生副作用；化疗药物可以杀 死癌细胞，但也会对正常细胞造成伤害；免疫治疗可以提高患者的免疫力，但对某些患者可能无效。
避免长时间久坐：长时间久坐会增加 前列腺癌的风险，应适时起身活动。
目录
CONTENTS
前列腺癌是一种发 生在前列腺上皮组 织的恶性肿瘤
病因可能与遗传、 环境、生活习惯等 多种因素有关
早期前列腺癌通常 无明显症状，随着 病情发展可出现尿 频、尿急、尿痛、 血尿等症状
前列腺癌的诊断主 要依靠直肠指检、 前列腺特异性抗原 检测和前列腺穿刺 活检等手段
根据临床分期：局限期、局 部进展期、晚期
前列腺特异性抗原（PSA）检 测
影像学检查（如超声、CT或 MRI）
病理学诊断方法：通过组织学检查，观察前列腺组织结构的变化，确定是否存在癌细胞。
病理学诊断标准：根据癌细胞的分化程度、生长方式、浸润深度等指标，对前列腺癌进行 病理学分级。
病理学诊断的临床意义：为治疗方案的制定提供依据，有助于预测患者的预后。
营养指导：保持 均衡饮食，增加 蔬菜、水果和全 谷物的摄入，减 少红肉和加工肉
类的摄入。
运动指导：定期 进行中等强度的 身体活动，如快 走、游泳、骑车 等，有助于改善 前列腺癌患者的
生存质量。
注意事项：避免 过度饮酒和吸烟， 这些行为可能会 增加前列腺癌的
风险。
康复期营养与运 动：在前列腺癌 治疗后的康复期， 患者需要更多的 营养和运动指导， 以促进身体的恢 复和预防复发。
药物治疗的种类：激素治疗、化疗药物、免疫治疗等
药物治疗的适用人群：激素治疗适用于晚期前列腺癌患者，化疗适用于有转移的前列腺癌患者，免疫治疗 适用于对激素治疗无效的患者。
药物治疗的优缺点：激素治疗可以延长患者的生存期，但长期使用会产生副作用；化疗药物可以杀 死癌细胞，但也会对正常细胞造成伤害；免疫治疗可以提高患者的免疫力，但对某些患者可能无效。
避免长时间久坐：长时间久坐会增加 前列腺癌的风险，应适时起身活动。
免疫组化理论课 ppt课件
医学资源 9
多抗和单抗的比较
均一性，单抗的均一性很强 稳定性，单抗的稳定性较差 特异性，单抗的特异性强 重复性，单抗的重复性好
医学资源
10
主要有两大类： 1、多克隆抗体：为针对多个抗原决定簇的抗 体，为产生抗体的动物血清或免疫球蛋白。 2、单克隆抗体：为一个B淋巴细胞分化增殖产 生的抗体，可识别有限的抗原决定簇，特异
24
加热处理后免疫组化的染色敏感度大幅 度地提高，其机理推测可能是加热打开 了组织抗原因福尔马林固定所引起的抗 原决定簇的交联，但机理目前仍然还不 是十分清楚。
医学资源
25
医学资源
26
医学资源
27
4.抗原修复液的选择
加热抗原修复缓冲液有多种，如柠檬酸盐缓冲液 （pH6.0）, Tris (pH7-8) , EDTA(pH8.0)等, 目前 首选柠檬酸盐缓冲液（pH6.0），优点是染色背 景清晰，适合于大多数抗体,Tris和 EDTA两种修 复液对部分抗原修复效果较强，但其染色背景同 时加深，如使用不当易造成假阳性结果的判断。
医学资源
16
1、微波修复
本实验室微波修复应用最多，特点是简单、有效， 主要根据微波发射高频能量，组织经微波幅射后， 会加速组织内部分子高速运动，抗原可完全被暴 露出来，用于浆或部分核抗原，膜抗原不用或短 时间应用。在 0.01M PH6.0 柠檬酸缓冲液 微波 修复时，温度控制在95-100℃之间维持10分钟， 不足或超过100℃达不到抗原修复最佳效果。
医学资源 20
胰蛋白酶，用于胞浆抗原，此酶较温和，浓
度 及 消 化 时 间 易 控 制 ， 常 用 0.05%~0.1%, PH7.8, 37℃消化20~30′ 或更长，微波37℃ 可短时消化。 胃蛋白酶，用于间质抗原，常用0.2% PH2.5 左右，消化 20~30′ 或更长，消化后切片应充 分洗涤，否则对组织中抗原会进行缓慢消化， 破坏组织结构
多抗和单抗的比较
均一性，单抗的均一性很强 稳定性，单抗的稳定性较差 特异性，单抗的特异性强 重复性，单抗的重复性好
医学资源
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主要有两大类： 1、多克隆抗体：为针对多个抗原决定簇的抗 体，为产生抗体的动物血清或免疫球蛋白。 2、单克隆抗体：为一个B淋巴细胞分化增殖产 生的抗体，可识别有限的抗原决定簇，特异
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加热处理后免疫组化的染色敏感度大幅 度地提高，其机理推测可能是加热打开 了组织抗原因福尔马林固定所引起的抗 原决定簇的交联，但机理目前仍然还不 是十分清楚。
医学资源
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医学资源
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医学资源
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4.抗原修复液的选择
加热抗原修复缓冲液有多种，如柠檬酸盐缓冲液 （pH6.0）, Tris (pH7-8) , EDTA(pH8.0)等, 目前 首选柠檬酸盐缓冲液（pH6.0），优点是染色背 景清晰，适合于大多数抗体,Tris和 EDTA两种修 复液对部分抗原修复效果较强，但其染色背景同 时加深，如使用不当易造成假阳性结果的判断。
医学资源
16
1、微波修复
本实验室微波修复应用最多，特点是简单、有效， 主要根据微波发射高频能量，组织经微波幅射后， 会加速组织内部分子高速运动，抗原可完全被暴 露出来，用于浆或部分核抗原，膜抗原不用或短 时间应用。在 0.01M PH6.0 柠檬酸缓冲液 微波 修复时，温度控制在95-100℃之间维持10分钟， 不足或超过100℃达不到抗原修复最佳效果。
医学资源 20
胰蛋白酶，用于胞浆抗原，此酶较温和，浓
度 及 消 化 时 间 易 控 制 ， 常 用 0.05%~0.1%, PH7.8, 37℃消化20~30′ 或更长，微波37℃ 可短时消化。 胃蛋白酶，用于间质抗原，常用0.2% PH2.5 左右，消化 20~30′ 或更长，消化后切片应充 分洗涤，否则对组织中抗原会进行缓慢消化， 破坏组织结构
前列腺癌ppt课件ppt
内分泌治疗效果
内分泌治疗能够缓解症状、延长 生存期和提高生活质量，但长期 应用可能导致副作用，如骨质疏
松、潮热等。
04
前列腺癌的预后和预防
前列腺癌的预后评估
评估指标
前列腺癌的预后评估通常 包括肿瘤分期、 Gleason 评分、PSA水平等指标。
预后分层
根据评估指标的不同，可 将前列腺癌患者分为低风 险、中风险和高风险三个 预后层级。
血尿
随着肿瘤的生长，尿道受压加重，患者可 能出现排尿困难、尿线变细、射程缩短等 症状。
骨痛
当前列腺癌侵犯膀胱或尿道时，可能导致 血尿。
晚期前列腺癌易发生骨转移，表现为骨痛 、病理性骨折等。
前列腺癌的检查方法
01 02
前列腺特异性抗原（PSA）检测
PSA是一种前列腺组织特异性蛋白，其水平升高可能提示前列腺癌。但 需注意，PSA水平升高并非前列腺癌的特异性表现，前列腺炎、前列腺 增生等疾病也可能导致PSA水平升高。
手术方法
包括根治性前列腺切除术和盆腔淋巴结清扫术。根治性前列腺切除术是通过手术切除整个 前列腺和周围组织，盆腔淋巴结清扫术则是切除盆腔淋巴结，以评估癌症是否已扩散。
手术效果
外科手术是治疗前列腺癌的有效手段，早期患者的5年生存率较高。
前列腺癌的放射治疗
放疗适应症
适用于各期前列腺癌患者，特 别是中低风险患者。
经直肠超声（TRUS）
通过超声波检查前列腺形态、大小及内部结构，有助于发现前列腺内的 异常结节。
03
前列腺穿刺活检
在超声引导下，对前列腺可疑结节进行穿刺活检，获取组织进行病理学
检查，是确诊前列腺癌的金标准。
前列腺癌的病理学诊断
1 2 3
前列腺癌-课件(PPT演示)
癌引起排尿困难和血尿常属晚期，局限 性病变引起梗阻常急性发生并不断加重。
局部表现
尿路梗阻病症刚出现时不管患者本人还 是医生都易无视，尿流率轻度下降，PSA 轻度升高，常在18-20月内出现急性尿潴 留。
约40%的患者以急性尿潴留为首发病症。
局部表现
病变范围广泛侵犯尿道膜部时可产生尿失禁。 侵犯包膜及附近神经周围淋巴结时，可局部疼
TNM分期系统
T4：肿瘤侵犯除精囊外其它临近组织。 T4a：肿瘤侵犯膀胱颈和/或外括约肌和/ 或直肠。 T4b：肿瘤侵犯肛提肌和/或与盆壁固定。
TNM分期系统
Nx 2：目前检查结果无法估测区域淋巴 结转移情况。 N0：无区域淋巴结转移。 N1：有单个淋巴结转移，其最大直径小 于或等于2cm。 N2：有单个淋巴结转移，其最大直径介 于2cm~5cm，或有多个淋巴结转移，最 大径小于5cm。 N3：有单个或多个淋巴结转移，其最大 径大于5cm。
诊断：
多数学者认为，总PSA水平4~10ng/ml之 间时，F/T对鉴别前列腺病变的良恶性、 减少不必要活检具重要意义。
F/T比值在 0.1~0.25之间，应穿刺活检。 F/T比值>0.25时，前列腺癌可能性极小，
小于10%； F/T比值<0.1时，前列腺癌可能性极大，
大于80%，应穿刺活检。
诊断
正常情况下，富含PSA的前列腺腺泡内容 物与淋巴系统之间存在由内皮层、基内 幕胞层和基底膜构成的屏障相隔。当肿 瘤或其他病变破坏了这道屏障时，腺管 内容物即可漏入淋巴系统，并入血循环， 导致血PSA水平升高。
诊断
临床常用0~4ng/ml的PSA正常范围为标 准筛选前列腺癌，其敏感性为78.7%， 特异性为59.2%，假阳性率为25%，假 阴性率为38~48%，结果不能令人满意。 究其原因是PSA只是前列腺上皮细胞标记 物，而不是前列腺癌细胞的标记物。
局部表现
尿路梗阻病症刚出现时不管患者本人还 是医生都易无视，尿流率轻度下降，PSA 轻度升高，常在18-20月内出现急性尿潴 留。
约40%的患者以急性尿潴留为首发病症。
局部表现
病变范围广泛侵犯尿道膜部时可产生尿失禁。 侵犯包膜及附近神经周围淋巴结时，可局部疼
TNM分期系统
T4：肿瘤侵犯除精囊外其它临近组织。 T4a：肿瘤侵犯膀胱颈和/或外括约肌和/ 或直肠。 T4b：肿瘤侵犯肛提肌和/或与盆壁固定。
TNM分期系统
Nx 2：目前检查结果无法估测区域淋巴 结转移情况。 N0：无区域淋巴结转移。 N1：有单个淋巴结转移，其最大直径小 于或等于2cm。 N2：有单个淋巴结转移，其最大直径介 于2cm~5cm，或有多个淋巴结转移，最 大径小于5cm。 N3：有单个或多个淋巴结转移，其最大 径大于5cm。
诊断：
多数学者认为，总PSA水平4~10ng/ml之 间时，F/T对鉴别前列腺病变的良恶性、 减少不必要活检具重要意义。
F/T比值在 0.1~0.25之间，应穿刺活检。 F/T比值>0.25时，前列腺癌可能性极小，
小于10%； F/T比值<0.1时，前列腺癌可能性极大，
大于80%，应穿刺活检。
诊断
正常情况下，富含PSA的前列腺腺泡内容 物与淋巴系统之间存在由内皮层、基内 幕胞层和基底膜构成的屏障相隔。当肿 瘤或其他病变破坏了这道屏障时，腺管 内容物即可漏入淋巴系统，并入血循环， 导致血PSA水平升高。
诊断
临床常用0~4ng/ml的PSA正常范围为标 准筛选前列腺癌，其敏感性为78.7%， 特异性为59.2%，假阳性率为25%，假 阴性率为38~48%，结果不能令人满意。 究其原因是PSA只是前列腺上皮细胞标记 物，而不是前列腺癌细胞的标记物。
前列腺癌-课件(PPT演示)
A1期：组织学检查肿瘤在显微镜下少于 或等于3个高倍视野，且为高分化。
A2期：组织学检查肿瘤在显微镜下少于 或等于3个高倍视野，但为中低分化；或 多于3个高倍视野。
精选文本
21
A-D分期系统
B期：肿瘤结节局限于前列腺包膜内。 B1期：单发结节，局限于前列腺一叶内，
结节直径小于或等于1.5cm。 B2期：多个结节，侵犯范围大于一叶，
精选文本
19
前列腺癌分期体系
前列腺癌分期体系： 使用最为广泛的是A-D分期系统，北美地
区比较常用。 国际抗癌协会( UICC)推荐使用的 TNM分
期系统，欧洲使用广泛。 两种分期方法大致对应。
精选文本
20
A-D分期系统
A 期：指前列腺潜伏癌或偶发癌，多在 前列腺增生行手术切除标本、或尸解行 前列腺病理学检查时发现而确诊。
或结节直径大于1.5cm。
精选文本
22
A-D分期系统
C期：肿瘤侵犯前列腺被膜或邻近器官。 C1期：侵犯前列腺被膜，但未侵犯精囊。 C2期：侵犯膀胱颈、三角区或精囊。
精选文本
23
A-D分期系统
D期：肿瘤有区域淋巴结、远处淋巴结或 远处脏器转移。 D1期：侵犯主动脉分叉以下盆腔淋巴结。 D2期：侵犯主动脉分叉以上淋巴结或有 远处脏器转移。
精选文本
11
病理表现
术前病理学检查：手指引导经会阴或经直肠穿 刺活检已应用多年，但准确性较差，对较早期 的癌结节确诊率较低。
经直肠针吸细胞学检查具有一定的优点，其操 作损伤小，具有一定的诊断准确率，但病理学 界对其评价不一，有认为无显著价值。
临床多依据患者血PSA筛查结果，结合肛诊及B 超等影象学检查，前列腺系统穿刺活检，多采 用6-13针穿刺法，可获较高检出率。
A2期：组织学检查肿瘤在显微镜下少于 或等于3个高倍视野，但为中低分化；或 多于3个高倍视野。
精选文本
21
A-D分期系统
B期：肿瘤结节局限于前列腺包膜内。 B1期：单发结节，局限于前列腺一叶内，
结节直径小于或等于1.5cm。 B2期：多个结节，侵犯范围大于一叶，
精选文本
19
前列腺癌分期体系
前列腺癌分期体系： 使用最为广泛的是A-D分期系统，北美地
区比较常用。 国际抗癌协会( UICC)推荐使用的 TNM分
期系统，欧洲使用广泛。 两种分期方法大致对应。
精选文本
20
A-D分期系统
A 期：指前列腺潜伏癌或偶发癌，多在 前列腺增生行手术切除标本、或尸解行 前列腺病理学检查时发现而确诊。
或结节直径大于1.5cm。
精选文本
22
A-D分期系统
C期：肿瘤侵犯前列腺被膜或邻近器官。 C1期：侵犯前列腺被膜，但未侵犯精囊。 C2期：侵犯膀胱颈、三角区或精囊。
精选文本
23
A-D分期系统
D期：肿瘤有区域淋巴结、远处淋巴结或 远处脏器转移。 D1期：侵犯主动脉分叉以下盆腔淋巴结。 D2期：侵犯主动脉分叉以上淋巴结或有 远处脏器转移。
精选文本
11
病理表现
术前病理学检查：手指引导经会阴或经直肠穿 刺活检已应用多年，但准确性较差，对较早期 的癌结节确诊率较低。
经直肠针吸细胞学检查具有一定的优点，其操 作损伤小，具有一定的诊断准确率，但病理学 界对其评价不一，有认为无显著价值。
临床多依据患者血PSA筛查结果，结合肛诊及B 超等影象学检查，前列腺系统穿刺活检，多采 用6-13针穿刺法，可获较高检出率。
前列腺癌疾病基础ppt课件
2
发病率
美国癌症协会公布2014 年发病情况预估数据
2014年欧洲癌症死亡率数据
2010年中国肿瘤发病统计数据
Siegel R, Ma J, Zou Z, Jemal A. Cancer statistics, 2014. CA Cancer J Clin. 2014,64(1):9-29. Malvezzi M, et al. European cancer mortality predictions for the year 2014. Ann Oncol. 2014 Apr 23. 中国肿瘤登记中心2013年年报。2014年4月14日
●
● ●
移行区约占前列腺的5-10%，是 良性前列腺增生的主要部位
中央区约占25%，围绕射精管， 尖部位精阜 外周区占前列腺的70%，构成前 列腺的后侧部分，是前列腺癌的 好发部位
前列腺解剖(2)
●
前列腺位于膀胱下方，尿生殖膈的上方。前列腺底与膀胱颈、精囊腺 和输精管壶腹部相邻。前列腺的前方为耻骨联合，两者之间有前列腺 静脉丛和疏松的结缔组织。前列腺后方为直肠壶腹。直肠指诊时可触 及前列腺的后面，向上可触及输精管壶腹和精囊 前列腺的血液供应主要通过膀胱下动脉、阴部内动脉和直肠下动脉。 膀胱下动脉是前列腺的主要供血动脉；膀胱下动脉在进入前列腺前又 分为前列腺被摸动脉和尿道前列腺动脉
1997年肿瘤 谱 肺 胃 肝 结肠 直肠 膀胱 胰腺 口鼻咽 白血病 NHL 中枢神经系统 喉 前列腺
2009年肿瘤 谱 肺 胃 肝 结肠 前列腺 直肠 膀胱 胰腺 肾
0.0%
《中国肿瘤登记年报》(2004, 2012)
上海市恶性肿瘤报告, 2000-2012
3
中国前列腺癌患者诊断时分期
前列腺癌方面免疫组化基础知识ppt课件
19
二、切片
光镜ICC染色，常用的有冰冻切片和石蜡切 片两种，二者各有其优缺点，应根据抗原 的性质、实验室条件，合理选择之。对未 知抗原显示时，最好同时应用。冰冻切片 为ICC研究所首选。
20
Shi（1991）等报告：微波炉照射的切片， 能够激活部分核内抗原活性。其机制不清， 可能与高温、高热的作用，使核内DNA双 链解开，DNA、RNA解离，抗原暴露有关。 其步骤为：将切片脱蜡水洗后，置染色瓶 中，加入去离子水或缓冲液至瓶颈处，反 复多次照射，每次1min，照射5～10次， 每次照射后，补充瓶中蒸发掉的液体，照 射温度不超过90～95℃为宜。此处理后， 细胞核染色以苏木精为佳
8
基底细胞消失是前列腺癌的重要诊断依据， 但局部的基底细胞缺失却不能作为诊断前 列腺癌的唯一标准。由于前列腺癌可有残 留的基底细胞，而且浸润性癌在管腔内扩 散及良性腺体陷入癌组织中[11],因此个别 前列腺癌中CK34βEl2与P63亦有阳性表达。 少数前列腺增生病变基底细胞标记亦呈阴 性表达，说明少数前列腺良性腺体基底细 胞可以不连续或不能被证实存在，这也提 示基底细胞免疫标志物阴性不能单独作为 确诊恶性的指标。
17
1．AMEX（Acetone Meth Enzoate Xylene ） 法 是改良的冰冻置换法（freeze substitution）的 简称，主要用于石蜡包埋标本。Sato(1986)报 告，该法具有同新鲜（未固定）组织冰冻切片同 样的抗原保持性和石蜡切片的良好组织结构保存。 其机制为：组织在丙酮中固定（脱水），组织细 胞内水份逐渐被丙酮取代，继之，用苯甲酸酯取 代组织内丙酮，经二甲苯置换后，石蜡包埋。组 织在-20℃丙酮内过夜亦形成冰晶，所以原方法 将组织先置4℃丙酮20～30min，再移入-20℃ 丙酮过夜。实际上组织在4℃丙酮内过夜亦可得 到同样效果。如在该固定液内加入少量蛋白酶活 性阻断剂，并采用低溶点石蜡包埋等，可获得更 佳染色结果。
二、切片
光镜ICC染色，常用的有冰冻切片和石蜡切 片两种，二者各有其优缺点，应根据抗原 的性质、实验室条件，合理选择之。对未 知抗原显示时，最好同时应用。冰冻切片 为ICC研究所首选。
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Shi（1991）等报告：微波炉照射的切片， 能够激活部分核内抗原活性。其机制不清， 可能与高温、高热的作用，使核内DNA双 链解开，DNA、RNA解离，抗原暴露有关。 其步骤为：将切片脱蜡水洗后，置染色瓶 中，加入去离子水或缓冲液至瓶颈处，反 复多次照射，每次1min，照射5～10次， 每次照射后，补充瓶中蒸发掉的液体，照 射温度不超过90～95℃为宜。此处理后， 细胞核染色以苏木精为佳
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基底细胞消失是前列腺癌的重要诊断依据， 但局部的基底细胞缺失却不能作为诊断前 列腺癌的唯一标准。由于前列腺癌可有残 留的基底细胞，而且浸润性癌在管腔内扩 散及良性腺体陷入癌组织中[11],因此个别 前列腺癌中CK34βEl2与P63亦有阳性表达。 少数前列腺增生病变基底细胞标记亦呈阴 性表达，说明少数前列腺良性腺体基底细 胞可以不连续或不能被证实存在，这也提 示基底细胞免疫标志物阴性不能单独作为 确诊恶性的指标。
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1．AMEX（Acetone Meth Enzoate Xylene ） 法 是改良的冰冻置换法（freeze substitution）的 简称，主要用于石蜡包埋标本。Sato(1986)报 告，该法具有同新鲜（未固定）组织冰冻切片同 样的抗原保持性和石蜡切片的良好组织结构保存。 其机制为：组织在丙酮中固定（脱水），组织细 胞内水份逐渐被丙酮取代，继之，用苯甲酸酯取 代组织内丙酮，经二甲苯置换后，石蜡包埋。组 织在-20℃丙酮内过夜亦形成冰晶，所以原方法 将组织先置4℃丙酮20～30min，再移入-20℃ 丙酮过夜。实际上组织在4℃丙酮内过夜亦可得 到同样效果。如在该固定液内加入少量蛋白酶活 性阻断剂，并采用低溶点石蜡包埋等，可获得更 佳染色结果。
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• PSA在正常前列腺、前列腺增生、前列腺癌、前 列腺上皮内瘤，均呈阳性表达，定位于上皮细胞 的胞质中，而在前列腺转移癌则呈阴性表达，因 此PAS阳性提示肿瘤来自前列腺上皮，可用于区 分前列腺癌与前列腺转移癌[5]。PSA在前列腺良、 恶性病变中均呈阳性表达，故PSA不能用于鉴别 良恶性病变。几乎所有的前列腺癌（除了分化最 差的癌和少数激素治疗后复发的进展期癌以外） PSA标记都阳性，而高分化前列腺癌的PSA表达 强于低分化前列腺癌, 表明PSA表达与分化程度 有关。而对于分化很差的癌，即使PSA阴性也不 能完全排除前列腺癌，还要结合其他检查综合考 虑。偶尔PAS阳性可出现在前列腺以外的组织和 肿瘤，但一般为局灶性弱阳性 [6]。
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• [5]Harvey AM, Grice B, Hamilton C, et a1. Diagnostic utility of p504s/p63 cocktail, prostate-specific antigen, and prostatic acid phosphatase in Verifying prostatic carcinoma involvement in seminal Vesicles: a study of 57 cases of radical prostatectomy, speciments of pathologic stage pT3b[J]. Arch Pathol Lab Med,2010,134(7):983-988.
• [6]Bostwick D G, Qian J, Ramnani D M. Immunohistochemistry of the prostate and bladder, testis and renal tumors. In: Dabbs D J, ed. Diagnostic Immunohistochemistry. Philadelphia: Churchill Livingstone, 2002.407-33
7
α-甲基-辅酶A-消旋酶 (P504s)
• 2001年Jiang等[12]首次将P504s抗体应用 于前列腺癌的诊断。P504s即α-甲基-辅酶 A-消旋酶((alpha-methylacyl-CoA racemase)，其基因定位于染色体5P13， 它所编码的蛋白由382个氨基酸组成，在支 链脂肪酸的β-氧化和衍生过程中起作用。 P504s在前列腺癌中高表达，而在正常中前 列腺组织中则呈阴性或灶性弱阳性。Jiang 等在所检测的137例前列腺癌中阳性率高达 100%，并提出P504s是前列腺癌高度敏感 性和特异性的标记物。
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• P504s阳性，CK34βEl2和p63阴性，能从正反两 面支持前列腺癌诊断，从而大大提高前列腺癌的 诊断正确率[13]。然而，临床上并非所有的前列 腺癌都是P504s阳性，CK34βEl2及p63阴性，也 并非所有的前列腺良性病变都是P504s阴性， CK34βEl2及p63完整阳性。杨京哲[14]等人的试 验中，P504s不仅在前列腺癌中有高表达，而且 在前列腺上皮内瘤中也高表达，这表明P504s不 但对前列腺癌敏感，并且对PIN也非常敏感，故 用P504s只能区别前列腺良性增生，而不能把前 列腺癌和PIN鉴别开来。
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• 在正常和良性增生以及上皮内瘤的前列腺腺体， 导管周围形成连续或断续的CK34βE12分布。而 前列腺癌的腺体的基底细胞层完全消失，所以最 终表现为CK34βE12不表达。但CK34βE12标记 基底细胞可部分阴性，对经尿道电切的标本，常 因标本经人为烧灼而受影响，因此可靠性和稳定 性欠佳。有20%～30%的前列腺癌导管腺癌和筛 状癌周围有连续或间断的基底细胞，而部分良性 前列腺病变,如腺病和不完全性萎缩的腺泡周围基 底细胞可部分甚至完全消失。说明基底细胞消失 并非诊断前列腺癌的绝对指标。而免疫组化操作 不当，则有可能出现假阴性结果而误诊。故免疫 组化结果应结合HE切片中的其他形态学特征综合 判断。
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CK34βEl2
• 1984年，Gown等[7]首先报道了CK34βEl2，它 是一种高分子量57000～66000的细胞角蛋白。 CK34βEl2标记良性前列腺组织，仅在前列腺基 底细胞的细胞膜以及细胞质中表达，而不在列 腺分泌上皮细胞表达，故CK34βEl2可作为对前 列腺的基底细胞层进行选择性的标记[8]。由于基 底细胞消失是诊断前列腺癌的重要形态学依据， 而苏木素-伊红染色切片判断基底细胞是否存在常 十分困难，因此用CK34βEl2标记基底细胞就成 为前列腺良恶性鉴别诊断的重要手段之一。
5
• CK34βE12、P63均可用于标记基底细胞， 而作为诊断前列腺癌的有力手段。P63与 CK34βEl2相比，具有以下优点：①部分 CK34βE12标记阴性的基底细胞，P63标记 可呈阳性；②对有烧灼的经尿道电切的前 列腺标本，P63标记结果比较稳定。③P63 标记基底细胞呈核阳性，结果容易判断， 背景比较清晰。缺点则是其阳性表达是间 断的，当可疑腺泡少时，判断其基底细胞 是否消失有时比较困难。在实际应用中， 两者具有互补作用。
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P63
• 1998年，Okada等[9]分离出新基因P63，P63是 P53抑癌基因家族的成员，位于人类染色体3q2729。P63能特异性地标记前列腺基底细胞，呈胞 核阳性，棕黄色颗粒状，故而可以显示基底细胞 的存在，而前列腺的分泌上皮细胞则呈阴性[10]。 绝大多数的前列腺良性增生及低级别上皮内瘤的 腺体的周围呈现连续性的P63分布；而高级别上 皮内瘤可见P63不同程度的间断消失，而前列腺 癌中腺体周围P63为阴性，显示基底细胞已经完 全的消失。因此，P63也可用于前列腺癌的鉴别 诊断。
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• 基底细胞消失是前列腺癌的重要诊断依据， 但局部的基底细胞缺失却不能作为诊断前 列腺癌的唯一标准。由于前列腺癌可有残 留的基底细胞，而且浸润性癌在管腔内扩 散及良性腺体陷入癌组织中[11],因此个别 前列腺癌中CK34βEl2与P63亦有阳性表达。 少数前列腺增生病变基底细胞标记亦呈阴 性表达，说明少数前列腺良性腺体基底细 胞可以不连续或不能被证实存在，这也提 示基底细胞免疫标志物阴性不能单独作为 确诊恶性的指标。
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• [5]Harvey AM, Grice B, Hamilton C, et a1. Diagnostic utility of p504s/p63 cocktail, prostate-specific antigen, and prostatic acid phosphatase in Verifying prostatic carcinoma involvement in seminal Vesicles: a study of 57 cases of radical prostatectomy, speciments of pathologic stage pT3b[J]. Arch Pathol Lab Med,2010,134(7):983-988.
• [6]Bostwick D G, Qian J, Ramnani D M. Immunohistochemistry of the prostate and bladder, testis and renal tumors. In: Dabbs D J, ed. Diagnostic Immunohistochemistry. Philadelphia: Churchill Livingstone, 2002.407-33
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α-甲基-辅酶A-消旋酶 (P504s)
• 2001年Jiang等[12]首次将P504s抗体应用 于前列腺癌的诊断。P504s即α-甲基-辅酶 A-消旋酶((alpha-methylacyl-CoA racemase)，其基因定位于染色体5P13， 它所编码的蛋白由382个氨基酸组成，在支 链脂肪酸的β-氧化和衍生过程中起作用。 P504s在前列腺癌中高表达，而在正常中前 列腺组织中则呈阴性或灶性弱阳性。Jiang 等在所检测的137例前列腺癌中阳性率高达 100%，并提出P504s是前列腺癌高度敏感 性和特异性的标记物。
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• P504s阳性，CK34βEl2和p63阴性，能从正反两 面支持前列腺癌诊断，从而大大提高前列腺癌的 诊断正确率[13]。然而，临床上并非所有的前列 腺癌都是P504s阳性，CK34βEl2及p63阴性，也 并非所有的前列腺良性病变都是P504s阴性， CK34βEl2及p63完整阳性。杨京哲[14]等人的试 验中，P504s不仅在前列腺癌中有高表达，而且 在前列腺上皮内瘤中也高表达，这表明P504s不 但对前列腺癌敏感，并且对PIN也非常敏感，故 用P504s只能区别前列腺良性增生，而不能把前 列腺癌和PIN鉴别开来。
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• 在正常和良性增生以及上皮内瘤的前列腺腺体， 导管周围形成连续或断续的CK34βE12分布。而 前列腺癌的腺体的基底细胞层完全消失，所以最 终表现为CK34βE12不表达。但CK34βE12标记 基底细胞可部分阴性，对经尿道电切的标本，常 因标本经人为烧灼而受影响，因此可靠性和稳定 性欠佳。有20%～30%的前列腺癌导管腺癌和筛 状癌周围有连续或间断的基底细胞，而部分良性 前列腺病变,如腺病和不完全性萎缩的腺泡周围基 底细胞可部分甚至完全消失。说明基底细胞消失 并非诊断前列腺癌的绝对指标。而免疫组化操作 不当，则有可能出现假阴性结果而误诊。故免疫 组化结果应结合HE切片中的其他形态学特征综合 判断。
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CK34βEl2
• 1984年，Gown等[7]首先报道了CK34βEl2，它 是一种高分子量57000～66000的细胞角蛋白。 CK34βEl2标记良性前列腺组织，仅在前列腺基 底细胞的细胞膜以及细胞质中表达，而不在列 腺分泌上皮细胞表达，故CK34βEl2可作为对前 列腺的基底细胞层进行选择性的标记[8]。由于基 底细胞消失是诊断前列腺癌的重要形态学依据， 而苏木素-伊红染色切片判断基底细胞是否存在常 十分困难，因此用CK34βEl2标记基底细胞就成 为前列腺良恶性鉴别诊断的重要手段之一。
5
• CK34βE12、P63均可用于标记基底细胞， 而作为诊断前列腺癌的有力手段。P63与 CK34βEl2相比，具有以下优点：①部分 CK34βE12标记阴性的基底细胞，P63标记 可呈阳性；②对有烧灼的经尿道电切的前 列腺标本，P63标记结果比较稳定。③P63 标记基底细胞呈核阳性，结果容易判断， 背景比较清晰。缺点则是其阳性表达是间 断的，当可疑腺泡少时，判断其基底细胞 是否消失有时比较困难。在实际应用中， 两者具有互补作用。
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P63
• 1998年，Okada等[9]分离出新基因P63，P63是 P53抑癌基因家族的成员，位于人类染色体3q2729。P63能特异性地标记前列腺基底细胞，呈胞 核阳性，棕黄色颗粒状，故而可以显示基底细胞 的存在，而前列腺的分泌上皮细胞则呈阴性[10]。 绝大多数的前列腺良性增生及低级别上皮内瘤的 腺体的周围呈现连续性的P63分布；而高级别上 皮内瘤可见P63不同程度的间断消失，而前列腺 癌中腺体周围P63为阴性，显示基底细胞已经完 全的消失。因此，P63也可用于前列腺癌的鉴别 诊断。
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• 基底细胞消失是前列腺癌的重要诊断依据， 但局部的基底细胞缺失却不能作为诊断前 列腺癌的唯一标准。由于前列腺癌可有残 留的基底细胞，而且浸润性癌在管腔内扩 散及良性腺体陷入癌组织中[11],因此个别 前列腺癌中CK34βEl2与P63亦有阳性表达。 少数前列腺增生病变基底细胞标记亦呈阴 性表达，说明少数前列腺良性腺体基底细 胞可以不连续或不能被证实存在，这也提 示基底细胞免疫标志物阴性不能单独作为 确诊恶性的指标。