基底膜六胺银染色液使用说明书

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银染方法总汇及注意事项

ptotocol是这样的，请看哪里不妥：蛋白银染步骤步骤溶液时间固定甲醇100ml冰醋酸25ml加双蒸水至250ml 30min冲洗双蒸水3次敏化甲醇75ml戊二醛（25%w/）1.25ml硫代硫酸钠(5%w/) 10ml醋酸钠（17g）加双蒸水至250ml 30min冲洗双蒸水3次银反应硝酸银溶液(2.5%w/) 25ml甲醛(37%w/) 0.1ml加双蒸水至250ml 20min冲洗双蒸水2次显色碳酸钠(6.25g)甲醛(37%w/) 0.05ml加双蒸水至250ml2-5min终止EDTA-Na22H2O(3.65g)加双蒸水至250ml 10min冲洗双蒸水3次建议使用silia的方法！！简单，快！本人的银染方法：1. 固定：100ml MeOH, 24ml H Ac, 56ml 0.04%HCHO, 20ml ddH2O,洗三次，每次>=20分钟；2. 50％EtOH洗PAGE胶三次，每次20分钟；3. 预处理：0.02％Na2S2O3 处理一分钟；4. 水洗：ddH2O漂洗三次，每次20秒；5. 染色：0.8ml 20％AgNO3+72ml 0.04%HCHO处理PAGE胶20分钟；6. 水洗：同上；7. 显色：25ml 12％Na2CO3, 24ml 0.04%HCHO, 1ml 0.02％Na2S2O3, 漂洗10－15分钟；8. 水洗：同上；9. 终止：50％MeOH, 12％H Ac,10分钟。

以上步骤从中科院生化所学来，过程和silia 的基本一致，不知道是否有出入，请大家指正。

谢谢！！！5.2.2.3 银染色1 银染液1（1000ml）：甲醇50％乙酸12％甲醇500ml 冰醋酸120ml2 银染液2（1000ml）：甲醇30％，乙酸钠0.4M，戊二醛0.5%，硫代硫酸钠0.1%，（含乙酸1－2ml）甲醇300ml 乙酸钠54.4g 戊二醛10ml 硫代硫酸钠1g 乙酸1－2ml3 显色液(1000ml) 无水碳酸钠2.5% 甲醛0.02%无水碳酸钠25g，甲醛1.5ml4 硝酸银（100ml）：20%硝酸银（过滤后待用）染色步骤：1 银染液1 洗2次，每次5分钟2 银染液2 洗1次，每次30分钟3 超纯水洗2次，每次1分钟4 0.5%硝酸银洗30分钟5 超纯水洗5次，每次1分钟（关键步骤，共计5分钟）显色液显色6 看到各条带，则倾去显色液, 1％乙酸中止我感觉浸银后、显色前的水洗非常关键，时间不能太长，次数不能太多，否则可能会染不上颜色。

基底膜染色

基底膜染色一、基底膜的结构基底膜一般是由纤维的结缔组织，粘多糖和蛋白质所构成，电镜可分为三层，即中间层（电子密度较高的致密层）内层和外层（电子密度较低疏松层）。

基底膜内主要含有IV形胶原蛋白，蛋白多糖和层粘连蛋白，这些物质的存在，给显示基底膜提供了物质基础。

二、显色的方法(一)．六胺银法（Hexamine silver）Jones六胺银染色法的改良法I．试剂的配制：A液：3%乌铬托品（hexamine）B液：5%硝酸银C液：5%四硼酸钠（Sodium tetraborate）II．工作液的配制：取A液12.5ml，加入B液2.5ml，混合在一起，此时可出现乳白色，搅拌片剂，即可消失，再加入2.5ml 的C液，再加入12.5ml的蒸馏水，即可使用。

操作方法：①切片脱蜡至水。

②1%的过碘酸氧化切片10min。

③自来水洗，继入蒸馏水洗。

④入工作液于60℃60~90min，于50℃120~180min⑤蒸馏水洗。

⑥用0.2%的氯化金水溶液调色1min。

⑦自来水洗，蒸馏水洗。

⑧5%硫代硫酸钠固定5min。

⑨自来水流1~2min.⑩用1%淡绿复染30secd。

⑾脱水，透明，封固。

结果：基底膜呈出深黑色，背景呈现绿色。

(二)．AFOG法试剂的配制：取苯胺蓝（aniline blue）0.5克溶于100ml的蒸馏水中，煮沸后冷却，再加入桔黄G1克，酸性品红1.5克，用HCC校正pH至1.9，即可使用。

①切片脱蜡至水②AFOG液染色5min③自来水洗，95%脱水多采染色④脱水，透明，封固。

结果：基底膜，胶原纤维显示不同程度的蓝色，红白球及背景呈桔黄色，管型蛋白呈鲜红色。

主要特点：在一张切片上既可看到深黑色的基底膜和鲜红色的沉淀蛋白，又可看到蓝色的结缔组织，给予某些疾病的诊断和鉴别带来了方便。

三、临床应用：①可以观察各种疾病的进展和损害程度。

②对膜性肾病可显示增厚的基底膜。

③可以观察某些肿瘤突破基底膜的情况。

④可以对某些疾病作出预后的判断。

六胺银染色液(改良Grocott-橙黄G法)

仅供科研版本号：180524 六胺银染色液(改良Grocott-橙黄G法)【产品组成】【保存条件】4℃，避光,6个月【产品概述】六胺银染色液是一种经典显示基底膜的方法。

经过Grocott改良之后,组织经铬酸氧化，使真菌内的黏多糖暴露出醛基，醛基把六胺银还原为黑色的金属银。

氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金，同时使背景更清晰。

海波可以固定并洗去未还原的银离子。

本法采用橙黄G复染对各种真菌的显示效果都很好，特别是马尔尼菲青霉菌的显示特别好，但必须淡染橙黄G。

如需显示曲霉和白色念珠菌，可选用苏木素或者伊红复染，可看到真菌与周围组织的关系。

【使用方法】1、组织固定于甲醛固定液中，常规脱水包埋。

切片4um，脱蜡至水洗。

2、切片入氧化剂氧化20min。

流水稍洗。

3、入漂白液处理1min，以除去氧化剂。

4、流水冲洗5min，蒸馏水浸洗2次，每次30s-60s。

5、切片放入配制好的预热至60℃的六胺银工作液中，加盖60℃恒温染色大约20～60min，切片呈淡黄色即取出经水洗后显微镜观察有否有菌体出现。

如有淡棕色菌体出现，应每隔5-10min观察一次以控制菌体着色深浅，直至显色理想。

6、入蒸馏水中清洗。

7、用氯化金溶液调色1～2min。

蒸馏水洗1～2min。

8、置于海波溶液2min。

流水冲洗5min。

9、滴加橙黄G一小滴复染1s即用水冲洗。

染色时间不能过长，否则将影响最终效果。

10、流水冲洗20s-60s。

11、常规脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

南京森贝伽生物科技有限公司网址：/第1页【染色结果】【注意事项】1、实验中所用玻璃器皿，应预先用硫酸洗液浸泡并用蒸馏水冲洗干净，烤干。

2、六胺银工作液配制后应先放入温箱中预热，温度要达到60℃时，再放人切片进行染色。

如用水浴锅代替恒温箱，需将温度设定在48-50摄氏度，否则切片会很快变黑而难以掌握。

一般建议在恒温箱中孵育染色。

3、在低倍镜检时，菌体不宜着色太黑，否则在高倍镜下观察则不够清晰透亮，特别需注意菌体成堆的地方的显色。

微波改良肾穿刺活检六胺银染色

光抗体检测外，高质量的六胺银染色（ＡＭ）法显示肾基底色；￣结构显示不够清晰，ＰＳ方Ｂ＿ｆｔ背景着色严重，出现银镜现象。膜的改变，在光镜下观察基底膜增厚、钉突” “ “ 、双轨 ” Ｈ等Ｅ染色难以观察到的改变，对诊断具有重要的价值－。我科在肾活ｌｊ
・
６・６
中国中西医结合肾病杂志２１年１００月第１卷第１１期
ｃＩＷＮ，ｎａ００ＶＩ１Ｎ．ＪＴＪｕｒ２１，ｌ１，ｏ１ａｙ０．
ｍａａ，０２２（０：２ —６７ｔｌ０，９１）６１２．２
化，０７６１）６８２．２０，（１：１ —６１
３．ｒＭＲ，ｈｅＣｌｉｌｈｒｃｅｉｔｓｏｒｍｉｐｕｔｓｉＤａＡｋｔｒＡ．ｉｃａａｔｒｉｆｕｅｃｒｒｕｎａｃｓｃｉｎ
ｄａｓａｉｔ．ｉｄｅｔ２０，９１）１２ —１３．ｉｙｉｐｔｎｓＫｎｎｙＩ，０６６（０：７６７２ｌｓｅｎ
讨论
检标本制作过程结合六胺银染色中组织容易出现过染，间、时六胺银染色对温度的要求是较高的，一般在６０℃ ～６５℃ 温度较难控制等问题，采用微波快速处理的方法进行了改进，之间，６在０℃以下组织反应的缓慢，浸染时间长易脱片，液染介绍如下。易氧化变混浊；温度过高染液容易变混浊并出现银镜反应，影
朱国良① 张晓岚① 石麒麟 ①
肾穿刺活检光镜观察肾组织病变在进行肾小球疾病诊断维及网状纤维均呈黑色，Ａ组结构清晰，但病变组织基底膜双钉突现象显示清晰，背景无银颗粒沉积，核蓝色，胞胞质红和分类的工作中起到很重要的作用，实际应用中，在除免疫荧轨、

特殊染色[宝典]

AAgNOR染色法:1、试剂配制：（1）AgNOR染色液：甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。

乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。

（2）AgNOR工作液取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。

2、步骤：（1）切片脱蜡至水（2）双蒸水洗2次（3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次（5）脱水,透明,封固3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色，AgNOR呈棕黑色颗粒状。

B鞭毛染色法:１．试剂配制：甲液：丹宁酸５克氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克福尔马林（１５％）２．０毫升氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克蒸馏水１００毫升制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。

再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。

如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。

２．染色方法：（１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。

（２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。

（３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。

将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。

染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。

（４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。

３．注意事项：（１）染液最好随用随配，存放至次日效果则差。

（２）一定要充分洗净甲液后再加乙液，否则背景较脏。

（３）防止水及培养物沾有氯化物。

病理制片技1

病理制片技术——常用特殊染色一、六胺银染色1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。

2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。

3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。

4．注葸事项(1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。

(2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。

二、黏液卡红染色1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入5 0％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。

2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。

3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．4．注意事项(1)染液使用时比例为1份黏卡原液，4份蒸馏水。

(2)用酶消化对照染色特异性很大，消化时间为20 min。

(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。

三、石碳酸品红染色1．第一步准备工作(1)配制盐基性品红饱和液：盐基性品红溶于乙醇内。

肾小球基底膜改良PASM染色法

肾小球基底膜改良PASM染色法肾活检组织的PASM染色（六氨银染色法）对于观察肾小球系膜、基底膜的各种形态改变具有极重要的诊断价值，特别是对于观察膜性肾病基底膜的钉突形成、淀粉样变性肾病基底膜的双轨和多轨改变等是其他特殊染色所不可替代的。

新月体形成中的基底膜断裂、血管炎中的动脉内膜和弹力纤维的变化也应用PASM染色[1]。

目前PASM染色存在多种不同的方法，我们采用的是1%过碘酸和8%重铬酸钾双重氧化法，且在染液浓度、染色时间和染色温度上做了调整改良，取得了较好的效果，总结经验如下，供同行交流与参考。

1 材料与方法1.1 标本本院肾内科2010-2012年送检的肾穿刺活检组织标本674例，10%中性福尔马林溶液固定，全自动组织脱水机按活检小标本程序处理，石蜡包埋，切片厚3μm，70℃烤片30-40min。

1.2 试剂配制⑴贮备液：3%六次甲基四胺液500ml和2%硝酸银液100ml储存于4℃冰箱；5%四硼酸钠溶液100ml储存于室温。

⑵六胺银工作液：取3%六次甲基四胺液（乌洛托品）50ml加入2%硝酸银液6ml，此时溶液产生乳白色悬浊液，稍搅拌溶液变澄清，最后加入5%硼砂（四硼酸钠）4ml。

⑶1%过碘酸：高碘酸1ml；蒸馏水99 ml。

⑷8%重铬酸钾：重铬酸钾8g；蒸馏水100ml。

⑸0.5%偏重亚硫酸钠：偏重亚硫酸钠0.5g；蒸馏水100ml。

⑹0.2%绿化金溶液：市售氯化金1g/支，溶解于500ml蒸馏水。

⑺5%硫代硫酸钠：硫代硫酸钠5g；蒸馏水100ml。

1.3 染色方法⑴石蜡切片脱蜡至蒸馏水；⑵1%过碘酸溶液氧化20min；⑶蒸馏水洗30s；⑷8%重铬酸钾溶液氧化20 min；⑸蒸馏水洗30s；⑹0.5%偏重亚硫酸钠1min；⑺蒸馏水洗30s；⑻切片浸入六胺银工作液，置于62℃水浴箱内并逐渐升温至68℃，时间大约15-30min（光镜下控制染色强度）；⑼蒸馏水洗30s；⑽0.2%氯化金溶液调色1 min；⑾蒸馏水洗30s；⑿5%硫代硫酸钠溶液1min；⒀蒸馏水洗30s；⒁稍水洗，用Gill苏木素液淡染细胞核3-5min；⒂用自来水洗3-5min；⒃梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

实用文档之肾活检病理组织染色

实用文档之"一、常规染色技术（HE 染色）"苏木素-伊红染色简称HE 染色，是最常用的染色方法，苏木素是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，伊红是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色。

HE 染色可以显示肾小球的细胞增生、炎细胞浸润。

还能很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质水肿情况。

（一）需要试剂①苏木素染液；② 1% 盐酸乙醇液；③氨水；④ 1% 伊红液。

（二）具体染色步骤1.切片常规脱蜡入水。

2.苏木素染细胞核1 ～2 min，水洗。

3.入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。

4.氨水返蓝数秒。

5.流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色。

6.1% 伊红染数秒，水洗。

7.梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。

染色结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈橘红色，其他成分呈深浅不同红色。

（三）注意事项1.组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色，影响观察。

2.伊红染色的时间需严格控制。

过长胞浆染色红色过深。

3.染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。

二、特殊染色技术（一）过碘酸- 希夫氏染色（PAS 染色）PAS 染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等，并能很好地显示基底膜，是显示糖原和糖蛋白的基本染色。

1.需要试剂① 1% 过碘酸；② schiff 氏液染；③苏木素染液；④氨水。

2.具体染色步骤（1）切片常规脱蜡入水。

（2）入1% 过碘酸氧化10 ～15 min，水洗。

（3）入schiff 氏液染10 ～30 min，水洗。

（4）苏木素染细胞核1 ～2 min，水洗。

（5）入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。

（6）氨水返蓝数秒。

（7）流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色，基底膜染成粉红色。

（8）梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。

3.染色结果PAS 阳性物质（多糖和糖原）呈红色，核呈蓝色。

4.注意事项（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。

（2）Schiff 氏液染色的时间需严格控制。

基底膜jones六胺银

基底膜- JONE'S 六胺银目的：用于鉴别肾小球的基底膜。

是肾活检组织的常规染色。

原理：基底膜组织的粘多糖成份经高碘酸氧化后暴露醛基，醛基能把六胺银还原成可见的金属银。

对照：正常肾小球组织。

固定方法：酒精Bouin's液, 10%甲醛技术：石蜡切片1µm-2µm设备：酸洗玻璃器皿；染色缸(不能使用带有金属边)，量筒，Teflon 镊子(非金属)，微波炉，水浴箱。

试剂：1% 高碘酸：高碘酸 5.0 gm蒸馏水500.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。

保存期6个月。

警告：避免接触和吸入六胺银原液：3% 六次甲基四胺400.0 ml5% 硝酸银20.0 ml使用酸液清洗玻璃器皿。

保存于冰箱，保存期6个月。

警告：腐蚀性，可能致癌。

5% 硼砂液：四硼砂钠 5.0 gm蒸馏水100.0 ml使用酸液清洗玻璃器皿。

保存于冰箱，保存期6个月。

六胺银工作液：六胺银原液50.0 ml5% 硼砂 6.0 ml新鲜配制。

用后丢弃。

警告：腐蚀性，刺激性。

0.2% 氯化金：1% 氯化金 1.0 ml蒸馏水50.0 ml使用酸液清洗玻璃器皿。

保存于冰箱，保存期6个月。

警告：避免接触和吸入。

5% Hypo:详见备用液。

常规HE染液。

安全：穿戴手套、护目镜和白大衣。

保持所有打开盖的热溶液于通风橱中。

避免接触和吸入染料和化学品。

硝酸银：剧烈的皮肤和眼睛刺激，氧化剂。

摄入将导致严重的胃肠道不适。

可能致癌：可疑的肿瘤发生因素。

硫代硫酸钠：摄入毒性。

能引起胃刺激，接触对皮肤、眼睛和呼吸系统有刺激性。

亮绿SF Yellowish：可能致癌。

程序：1. 常规脱蜡至蒸馏水。

2. 1% 高碘酸，60°C水浴15 minutes。

3. 蒸馏水洗3次。

4. *六胺银工作液和一缸蒸馏水：微波高火60 seconds，先将玻片放入热的蒸馏水中。

搅拌银液，再放入玻片。

5. 将银液染色缸放入60°C 水浴, 每2-5 minutes检查一次。

病理学特殊染色-----细菌、霉菌和病毒

细菌、霉菌和病毒细菌Gram碱性复红结晶紫法试剂配制：(1) 苯胺油石炭酸复红液：碱性品红0.5g，苯胺油1ml，石炭酸1g，30%酒精70ml。

碱性品红溶于70ml酒精中，隔水加热至90℃，冷却后加入石炭酸和苯胺油。

（2）碘液：碘片1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml（3）结晶紫染液：结晶紫 2g，95%酒精20ml，草酸胺1g，蒸馏水80ml。

结晶紫溶于酒精，，草酸胺溶于蒸馏水。

二液混合，此液置冰箱可保存数月。

操作方法：1、组织固定于10%甲醛液，按常规脱水包埋。

2、切片脱蜡至水。

3、苯胺油石炭酸复红液5分钟。

4、自来水冲洗，蒸馏水洗。

5、 4%甲醛1分钟，蒸馏水洗2次。

6、苦味酸饱和水溶液处理2分钟。

7、经过95%酒精速洗后，放入自来水中立即变红色。

8、自来水冲洗，蒸馏水洗。

9、碘液作用2分钟，自来水洗，用滤纸直接吸干。

10、二甲苯苯胺油等份混合，进行分化苯。

11、二甲苯透明、中性树胶封固。

结果：革兰氏阳性细菌呈蓝色，阴性细菌呈红色，细胞核呈红色。

抗酸杆菌苯酚碱性品红法：碱性品红酒精液：碱性品红 5克无水酒精 100毫升5%苯酚水溶液: 苯酚 5毫升(略加温,使其溶解) 蒸馏水 95毫升苯酚碱性品红液: 碱性品红酒精液 1毫升5%苯酚水溶液 9毫升染色步骤:1. 切片二甲苯脱蜡,95%酒精速洗2. 蒸馏水洗3. 苯酚碱性品红液染15～30分钟4. 蒸馏水洗5. 2 %硫酸水溶液分化至适当为止6. 水洗7. 烘干,透明,封固结果:抗酸杆菌(结核杆菌和麻风杆菌)呈红色。

真菌（一）高碘酸法复红法亮绿液：亮绿 0.2g 蒸馏水 100 ml 冰醋酸 0.2 ml Schiff试剂配制:碱性品红 1 g ，活性炭 2 g ，当量盐酸 20 ml ，偏重亚硫酸钠 1.5 g1. 碱性品红1g，放入200毫升蒸馏水中，煮沸，搅拌，充分溶解。

2. 冷却至50℃时过滤，滤液中加入当量盐酸20毫升。

3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g，置于暗处过夜。

各个染色具体步骤终极版

Hematoxylin-Eosin stains1 脱蜡至水（30min）→流水冲洗2 苏木精染核20min左右→流水冲洗→镜观3 盐酸酒精分化10—15s→流水冲洗4 弱氨水返蓝10—15s→流水冲洗5 伊红染色20min左右→流水冲洗6 系列酒精脱水7 二甲苯I、II分别透明10min左右8 树胶封固结果：细胞核呈紫蓝色，细胞浆、基底膜、胶原纤维、肌纤维成粉红色，可观察细胞的种类和数量。

HE染色可充分显示肾小球的细胞增生，但不能区分内皮细胞、系膜细胞和上皮细胞的种类。

可显示中性多核和嗜酸性粒细胞浸润。

由于上皮细胞的被覆，肾小球基底膜呈略厚的假象。

苏木素小体呈淡紫红色。

纤维素样坏死呈深粉红色。

碎核呈深蓝色细胞核碎片。

微血栓呈粉色。

HE染色可以很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质水肿以及炎细胞浸润。

Periodic acid-Schiff reaction1 脱蜡至水→流水冲洗2 1%过碘酸溶液10min→流水冲洗→吹干3 雪夫试剂37度孵浴→镜观→流水冲洗4 苏木精染核5min→流水冲洗5 盐酸酒精分化10—15s→流水冲洗6 弱氨水返蓝10—15s→流水冲洗7 系列酒精脱水8 二甲苯I、II分别透明10min左右9 树胶封固结果：细胞核呈蓝色，肾小球和肾小管基底膜、细胞浆、肾小球系膜基质、胶原纤维和肌纤维等呈红色。

PAS与HE染色一样可显示肾小球内的细胞增生和浸润，因其可很好的显示基底膜，可依细胞的位置区分内皮细胞、系膜细胞和上皮细胞。

尚可观察基底膜是否增厚、皱缩和毛细血管塌陷。

可观察肾小囊和肾小管基底膜是否增厚。

尚可观察肾小球硬化、系膜基质增生、系膜溶解。

PAS阳性的蛋白滴可见于蛋白尿患者的肾小球和肾小管上皮细胞浆内。

可显示细动脉硬化时的玻璃样变。

细胞性排异反应的肾小管炎在PAS染色中也可很好显示。

注意：第四步染色时间过长容易，颜色过深不容易分辨，所以一定要把握时间！！！PAsM染色（六胺银套马松三色混合染色）1 脱蜡至水→流水冲洗2 1%过碘酸溶液10min→流水冲洗3 六胺银溶液65度1h→镜观（注：如果六胺银溶液染色过深就要用氯化金分化）4 3%硫代硫酸钠定影→水洗5 苏木精染核20min左右→流水冲洗6 盐酸酒精分化10—15s→流水冲洗7 弱氨水返蓝10—15s→流水冲洗8 Masson染色：①Masson溶液染色1min左右→1%冰醋酸洗→镜观②亮绿橘黄剂溶液染色10S左右→1%冰醋酸洗9 高浓度系列酒精脱水10 二甲苯I、II分别透明10min左右11 树胶封固结果：基底膜、网状纤维和IV型胶原呈黑色，细胞核呈蓝黑色，背景呈粉红色，免疫复合物呈红色，III型胶原呈蓝色或者绿色。

染色液

AB—PAS染色AB—两种不同粘液物质染色的染料分别显示不同的粘液物质于同一组织切片。

在AB—PAS染色中，酸性粘液物质被Alcian blue染色呈湖兰色；中性粘液物质被PAS1.切片脱蜡至水；2.蒸馏水洗；3.Alcian blue染色液染色10--15分钟；4.蒸馏水洗；5.过碘酸处理10分钟；6.蒸馏水洗2 X 1分钟；7.滴加Schiff液2ml染色10--15分钟；8.流水洗5分钟；9.苏木素复染细胞核；10.分化、水洗；返兰、水洗；11.脱水透明；树胶封片。

PAS染色1.切片脱蜡至水；2.蒸馏水洗；3.0.5%过碘酸处理10分钟；4.蒸馏水洗2 X 1分钟；5.滴加Schiff液2ml染色10--15分钟；6.流水洗3分钟；7.脱水透明；8.光学树脂胶封片。

Masson三色染色维结缔组织的增生和分布，纤维性肿瘤与肌源性肿瘤的鉴别。

对酒精性肝硬化/坏死后性肝硬化及各型肝炎导致的小叶汇管区纤维组织增生程度的差别具有重要价值。

Masson染色在肾穿刺活检中可以用于判别在肾小球毛细血管网的系膜氏和上皮下是否存在嗜复红蛋白的沉积，对于肾脏疾病的病理诊断有重要意义。

二．染色方法：1. 切片脱蜡至水，2. Harris’s苏木素染胞核10分钟水洗，3. 分化、水洗，返蓝、水洗，4. 入Masson复合染色液染色10-20分钟，5. 0.2%醋酸速洗1—5秒钟两次，6. 1%磷钼酸处理5—8分钟，7. 0.2%醋酸速洗1—5秒钟两次，8. 1%亮绿SF染色2—4分钟，9. 0.2%醋酸速洗1—5秒钟两次，10. 直接用新鲜95%乙醇分化20—30分钟，11. 脱水、透明、封片。

Van Gieson 染色一．Van Gieson染色试剂盒：Van辨效果一直被广泛使用。

在Van Gieson 染色中品红和苦味酸的比例关系一般为1：9，但由于每批染料的性能和被染色的组织不同以及组织处理方法的不同在实际应用时应根据染色的实际效果进行必要的调整以达到红黄两色适当的对比。

尿酸盐染色液(Gomori六胺银法)

北京雷根生物技术有限公司
尿酸盐染色液(Gomori 六胺银法)
简介：
人体内嘌呤(核苷酸)代谢的分解产物是尿酸盐。大多数尿酸并非全部经由肾脏排除，有时以尿酸钠的形式存在于血液循环中。采用 Gomori 六胺银法对尿酸盐染色，使尿酸盐结晶呈黑色，常用于辅助诊断尿酸盐所致的通风结节。由于尿酸盐易溶于水，而不易溶于乙醇，故固定时，应采用乙醇而不是福尔马林等固定液。
50ml
RT 避光
试剂(E): Gomori 对照液
10ml
RT
使用说明书
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、组织固定：固定于无水乙醇 16h 或过夜。再经无水乙醇浸泡 3 次。
2、经二甲苯浸泡 2 次，常规浸蜡包埋。
3、切片厚度 5μm，二甲苯脱蜡至无水乙醇。
4、提前配制好 Gomori 六胺银溶液，并提前预热孵育。如有尿酸盐存在，切片呈黑色。
组成：
名称
编号
DS0010 4×50ml
Storage
试剂(A): Gomori A1:Gomori 六胺银 A
15ml4℃ 避光六胺银溶液A2:Gomori 六胺银 B
15ml
RT
临用前，按 A1:A2:蒸馏水=3:3:4 的比例配制试剂(A)，不宜提前配制。
试剂(C): 海波溶液
50ml
RT
试剂(D): 伊红染色液
5、蒸馏水稍洗。
6、浸入氯化金溶液处理。
7、自来水稍洗。
8、入海波溶液处理。
9、自来水冲洗。
10、伊红染色液淡染 s。
11、自来水稍洗。
12、常规脱水透明，中性树胶封固。
染色结果：
尿酸盐结晶
黑色
背景

动物六胺银染色方法

ICS65.020.30B44中国实验动物学会团体标准T/CALAS x-201x 实验动物六胺银染色方法Laboratory animal-Methenamine silver stain method（征求意见稿）201x-xx-xx发布201x-xx-xx实施中国实验动物学会发布前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则编写。

本标准由中国实验动物学会归口。

本标准由全国实验动物标准化技术委员会（SAC/TC281）技术审查。

本标准由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草。

本标准主要起草单位：浙江大学动物科学学院、浙江省医学科学院。

本标准主要起草人：吴旧生、刘月环。

实验动物六胺银染色方法1范围本标准规定了实验动物组织切片六铵银染色方法。

本标准适用于实验动物组织中细菌、真菌和肾小球基膜等多糖成分的病理检测。

2基本原理利用氧化剂氧化细菌和真菌内的细胞壁内的粘多糖等成分而暴露出醛基，醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。

同理，肾小球基膜内含有一些多糖成分，易于被氧化露出醛基而被染色。

3主要试剂3.11%过碘酸溶液，4℃可保存一个月。

3.2六氨银工作液。

5%硝酸银水溶液 2.5ml5%四硼酸钠水溶液 2.5ml3%乌铬托品水溶液12.5ml蒸馏水12.5ml先将蒸馏水与乌铬托品水溶液混合在一起，再加入硝酸银水溶液，此时将呈现乳白色，搅拌后即可消失，加入四硼酸钠水溶液后，即可使用。

3.30.1%氯化金溶液。

3.45%硫代硫酸钠溶液。

3.50.5%亮绿溶液。

4实验步骤4.1切片经二甲苯5min*2、无水乙醇5min*2、95％乙醇5min*2、85％乙醇5min、70％乙醇5min完成脱蜡。

脱蜡后自来水洗5min。

4.2加入1%过碘酸水溶液中作用10min。

自来水洗，然后蒸馏水洗二次，每次3min。

4.3六氨银液预热至65℃，切片放入其中浸染75min，蒸馏水洗二次，每次3min。

银染操作步骤(精)

银染操作步骤1. 固定:电泳结束后,取凝胶放入约 100ml 固定液中,在摇床上室温摇动 20分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

固定 40分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。

固定液的配制:依次加入 50ml 乙醇、 10ml 乙酸和 40ml MilliQ级纯水或双蒸水,混匀后即成 100ml 固定液,可大量配制室温存放。

2. 30%乙醇洗涤:弃固定液,加入 100ml 30%乙醇,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

30%乙醇的配制:70ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 30ml 乙醇,混匀后即成 100ml 30%乙醇。

3. 水洗涤:(洗 2次弃 30%乙醇,加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

4. 增敏:(辅染现配现用弃水,加入 100ml 银染增敏液 (1X,在摇床上室温摇动 2分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

银染增敏液 (1X的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 1ml 银染增敏液 (100X,混匀后即为银染增敏液 (1X。

银染增敏液 (1X配制后需在 2小时内使用。

银染增敏液 (100X的配制:即 2.8%硫代硫酸钠溶液,需用黑袋包裹避光保存。

5. 水洗涤 (共 2次 :弃原有溶液,加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 1分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

弃水,再加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 1分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

6. 银染:弃水,加入 100ml 银溶液 (1X,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

银溶液 (1X的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 1ml 银溶液 (100X,混匀后即为银溶液 (1X。

银溶液 (1X配制后需在 2小时内使用, 最好是现配现用。

基底膜六胺银染色液使用说明书

基底膜六胺银染色液使用说明书货号：G1790规格：6×50ml/6×100ml保存：4℃避光，3个月。

试剂盒组成：名称6×50ml6×100ml Storage 试剂（A）氧化剂50ml100ml4℃避光试剂（B）铁明矾溶液50ml100ml RT试剂（C）六胺银工作液C1：六胺银原液25ml50ml4℃避光C2：硼酸钠溶液25ml50ml RT临用前，C1，C2等量混合即为六胺银工作液，现用现配。

试剂（D）氯化金溶液50ml100ml4℃避光试剂（E）海波溶液50ml100ml RT试剂（F）淡绿溶液50ml100ml RT产品说明：基底膜六胺银(methenamine silver)染色是一种经典显示基底膜的方法。

组织经过氧化，使基底膜内的黏多糖暴露出醛基，醛基把六胺银还原为黑色的金属银。

氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金，同时使背景更清晰。

六胺银染色能清晰地显示基底膜，在肾病变中应用最多，常用来观察肾小球毛细血管基底膜在炎性损伤时如断裂、增生、折叠等形态改变。

操作步骤(仅供参考)：1.切片脱蜡至水洗。

2.切片入氧化剂氧化15min。

3.自来水洗、蒸馏水洗2min。

4.入铁明矾溶液染色10min。

5.自来水洗、蒸馏水洗2min。

6.入配制好的六胺银工作液中，60℃水浴染色大约25～30min，切片呈烟草黄色或黑色为止。

7.入蒸馏水中清洗。

8.用氯化金溶液调色1～2min。

9.蒸馏水洗2min。

10.置于海波溶液1min。

11.自来水洗。

12.用淡绿溶液复染1min。

13.自来水洗。

14.95%乙醇开始脱水，二甲苯透明，中性树胶封封固。

染色结果：肾小球囊基底膜、肾毛细血管球基底膜黑色背景绿色注意事项：1.实验中所用玻璃器皿，应预先放入洗液浸泡过并冲洗干净，烤干。

2.六胺银工作液配制后可放入温箱中预热3-5min（选做）。

3.配制好的六胺银工作液是一次性的，不能久放。

六胺银法霉菌

六胺银霉菌染色法用途:切片内的细菌，HE染色着色较浅或不着色。

因此常规HE染色观察细菌比较困难，特别是细菌数量较少，菌体较小的时候更难辨认。

用无色品红－醛品红法和六胺银法能够较好的把霉菌显示出来，对曲菌的显示更好。

可以较容易的区别曲菌和毛霉菌。

曲菌的菌丝粗细均匀，呈分枝状，菌丝较细，较小，有分隔，常呈45度锐角分枝。

毛霉菌的菌丝粗细不均，菌丝较宽，没有分隔，分枝较少，常呈钝角分枝。

六胺银法能够很好的显示各种霉菌。

在显微镜下容易观察。

染色原理：铬酸氧化霉菌内多糖化合物而暴露醛基，醛基还原六胺银液成为黑色的金属银；氯化金用来调色，把金属银转变为更稳定的金属金，并可排除组织钟的黄黄色色调，硫代硫酸钠液对已经显色的银盐起固定作用并除去未反应的银离子。

组织固定：10%福尔马林。

石蜡切片：4～5微米。

染液配制：1.8％铬酸水溶液铬酸8g蒸馏水100ml2.0.5%偏重亚硫酸钠水溶液偏重亚硫酸钠液0.5g蒸馏水100ml3.5％硝酸银液硝酸银250mg蒸馏水5ml4.3％六次甲基四胺水溶液六次甲基四胺3g蒸馏水100ml5.5％四硼酸钠水溶液四硼酸钠5g蒸馏水100ml6.六胺银贮备液5％硝酸银工作液5ml3％六次甲基四胺水溶液100ml将3％六次甲基四胺水溶液加入5％硝酸银液中即形成白色沉淀，此沉淀在摇动中立即溶解。

澄清液至于4℃冰箱内保存，可使用数月。

7.六胺银工作液六胺银贮备液10ml蒸馏水25ml5％四硼酸钠液2ml将5％四硼酸钠液加入蒸馏水中混合，然后加入六胺银贮备液，搅拌混合后即可应用。

8.1％氯化金水溶液氯化金1g蒸馏水100ml先配制上述1％氯化金贮存，另加蒸馏水与原液9:1稀释即可配成0.1%氯化金液。

9.2％硫代硫酸钠水溶液硫代硫酸钠2g蒸馏水100ml10.亮绿水溶液亮绿0.2g蒸馏水100ml冰醋酸0.2ml11.橙黄G染液橙黄G 2g蒸馏水100ml磷乌酸5g染色步骤1.切片脱蜡至水。