六胺银染色液(改良Grocott-橙黄G法)
最新GMS-六胺银-真菌
G M S-六胺银-真菌GMS –六胺银- GROCOTT'S改良法目的：鉴别真菌。
原理：真菌细胞壁的粘多糖成分被氧化形成醛基。
醛基与硝酸银反应，再将银还原成可见的金属形式。
对照：含有真菌的组织。
由曲霉病和肺结核病的组织块是首选的。
固定：10%甲醛技术：4-5m石蜡切片。
设备：酸清洗玻璃器皿，染色缸，微波炉。
试剂：2% 铬酸：三氧化铬Chromium trioxide 10.0 gm蒸馏水Distilled water 500.0 ml混合溶解，保存期6个月。
警告：腐蚀性酸，可能致癌，避免接触和吸入。
1% 偏重亚硫酸钠Sodium Metabisulfite:偏重亚硫酸钠Sodium metabisulfite 5.0 gm蒸馏水Distilled water 500.0 ml混合溶解，保存期6个月。
5% 硼砂：四硼酸钠Sodium borate 5.0 gm蒸馏水Distilled water 100.0 ml混合溶解，保存期6个月。
六胺银备用液：3% 六亚甲基四胺Methenamine(四氮六甲圜hexamethylenetetramine)100.0 ml5% 硝酸银Silver nitrate 5.0 ml混合，盛于酸清洗过的棕色瓶中，冷藏，保存期3个月。
警告：腐蚀性，可能致癌。
工作液：六胺银备用液Stock Silver Methen. 25.0 ml蒸馏水Distilled water 25.0 ml5% 硼砂Borax 2.5 ml使用前新鲜配制，用后丢弃。
0.5%氯化金：氯化金Gold chloride 0.5 gm蒸馏水Distilled water 100.0 ml混合溶解，盛于酸清洗过的瓶中，冷藏，保存期1年。
警告：避免接触和吸入。
0.2%亮绿：亮绿Light green SF yellow. 0.2 gm蒸馏水Distilled water 100.0 ml冰醋酸Glacial acetic acid 0.2 ml混合溶解。
微波改良肾穿刺活检六胺银染色
光抗体检测外 ， 高质 量 的六胺 银染 色 （ Ａ Ｍ） 法显示 肾基底 色； ￣结构显示不够清晰， ＰＳ 方 Ｂ＿ ｆ ｔ 背景着色严重， 出现银镜现象。 膜的改变 ， 在光镜下 观察基底 膜增厚 、钉 突” “ “ 、 双轨 ” Ｈ 等 Ｅ染 色难 以观察到 的改变 ， 对诊 断具有 重要 的价值 － 。我 科在 肾活 ｌ ｊ
・
６ ・ ６
中国中西医结合肾病杂志 ２ １ 年 １ ００ 月第 １ 卷第 １ １ 期
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ｍａａ，０ ２２ （０ ：２ —６ ７ ｔｌ ０ ，９ １ ）６ １ ２ ． ２
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３． ｒＭＲ ， ｈ ｅ Ｃｌ ｉ ｌ ｈ ｒｃｅｉｔ ｓｏ ｒｍｉ ｐｕ ｔｓｉ Ｄａ Ａｋ ｔｒＡ． ｉ ｃ ａａｔｒ ｉ ｆｕｅ ｃ ｒ ｒ ｕ ｎ ａｃ ｓｃ ｉ ｎ
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讨 论
检标本制作过程结合六 胺银染 色 中组织 容易 出现过染 ， 间 、 时 六胺银染色对温度的要求是较 高的 ， 一般 在 ６ ０℃ ～６ ５℃ 温度较难控制等 问题 ， 采用微 波快 速处 理 的方 法进行 了改 进 ， 之间 ， ６ 在 ０℃以下组 织反应 的缓慢 ， 浸染 时 间长易脱 片 ， 液 染 介绍如下 。 易氧化变混浊 ； 温度过 高染液 容易 变混浊并 出现银镜 反应 ， 影
朱 国 良① 张 晓岚① 石麒麟 ①
肾穿刺活检光镜 观察 肾组 织病变 在进行 肾小 球疾病 诊断 维及 网状纤维均呈黑色 ， Ａ组结 构清 晰， 但 病变组 织基底 膜双 钉突现象显示清 晰 ， 背景无银 颗粒 沉积 ， 核蓝色 ， 胞 胞质 红 和分类 的工作 中起到很 重要 的作用 ， 实际应 用 中， 在 除免 疫荧 轨 、
改良六胺银染色在肾活检病理诊断中的应用
改良六胺银染色在肾活检病理诊断中的应用
郑洁;叶田;杜园园;陈银凤;汤绚丽
【期刊名称】《浙江临床医学》
【年(卷),期】2024(26)4
【摘要】目的探讨改良六胺银染色方法在肾组织活检病理中的应用价值。
方法随机选取2020年9月至2022年3月80例确诊的肾活检病理穿刺标本(IgA肾病20例,膜性肾病20例,糖尿病肾病20例,微小病变20例)。
采用硫代氨基脲改良六胺银染色法,并与常规六胺银染色法进行比较。
结果采用改良六胺银染色法,肾小球基底膜及肾小管基底膜的染色强度均提升;且不同疾病、不同部位染色强度差异有统计学意义(P<0.05)。
结论采用改良六胺银染色法,能提升染色的敏感性和特异性,具有方便、快捷、可靠等特点,适合临床应用。
【总页数】3页(P569-571)
【作者】郑洁;叶田;杜园园;陈银凤;汤绚丽
【作者单位】浙江中医药大学附属杭州市中医院
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.六胺银加马松三色双重染色在肾穿刺活检组织中的应用
2.改良六胺银套马松三色染色在肾穿刺活检组织染色中的应用
3.自控微波技术在肾穿刺活检六胺银染色中
的应用4.六次甲基四胺银染色法在肾穿活检中应用5.肾穿刺活检组织病理诊断中六胺银染色的改进
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病理技术卫生考试常考固定液与特殊染色总结
单纯固定液甲醛：能固定类脂和脂类，但必须冷冻切。
也可固定高尔基体、线粒。
是糖的保护剂。
体除去甲醛色素的方法：Verocay法，乙醇配氨水；Schride法。
重铬酸钾Zenker，Helly，Maximov，Regaud。
苦味酸：易燃易爆，强酸，糖类；可以软化皮肤，易于切片。
不宜用火棉胶包埋。
70%乙醇中加浓氨水去除固定产生的黄色。
三氯醋酸：SUSa液的主要成分，使蛋白沉淀，良好的脱钙剂。
升汞：针状结晶，组织收缩明显。
不能固定类脂和糖类。
可固定蛋白，固定后需用碘液脱汞乙醇：固定兼有脱水作用，糖原的固定，纤维蛋白和弹性纤维固定。
浓度80-95%。
醋酸：固定染色体，清楚的显示细胞核，但组织膨胀明显，尤其对于胶原纤维和纤维蛋白。
铬酸避光保存。
不能固定脂肪。
固定后流水冲洗大于24h。
饿酸延长固定时间，脆性增加，对染色不力。
1%高锰酸钾脱碘，固定后流水冲洗12-24h。
丙酮：酶组织化学。
丙酮对组织块的收缩作用强于乙醇，对糖原无固定作用。
异丙醇：是乙醇良好的替代品，组织收缩小，硬化作用较弱；不能再用于火棉胶的包埋。
叔丁醇：脱水后可不经透明，直接浸蜡。
电镜标本中常用作中间脱水剂。
环氧己烷：不引起组织收缩和硬化，常用于植物标本制作，价格贵。
四氢呋喃：既是脱水剂，又可以作为封片溶媒。
环己酮：代替乙醇作脱水剂和随后的浸蜡和包埋。
混合固定液B-5固定液：固定淋巴组织，配方无水醋酸钠-升汞-甲醛，染色前脱汞处理；Muller液：媒染和硬化神经组织，需常更换液体，固定作用缓慢。
Bouin液：结缔组织比较差。
不适宜长期固定（12-24h）。
固定后组织被染成黄色需用70%-80%乙醇洗涤。
Orth：胚胎，神经，脂肪均可。
需在暗处固定24h。
Carnoy液：胞质和胞核，染色体，糖原保存，尼氏体；不能保存脂类。
Helly固定液：含有氧化剂和还原剂，临时配制，久置失效。
PFG：肽类抗原固定，用于免疫电镜研究。
PLP和PLPD（含有过碘酸钠）Rossman：Zenker固定液：形态学研究常用固定液。
病理制片技1
病理制片技术——常用特殊染色一、六胺银染色1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。
2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。
3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。
4．注葸事项(1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。
(2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。
二、黏液卡红染色1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入5 0％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。
2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。
3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．4．注意事项(1)染液使用时比例为1份黏卡原液，4份蒸馏水。
(2)用酶消化对照染色特异性很大，消化时间为20 min。
(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。
三、石碳酸品红染色1．第一步准备工作(1)配制盐基性品红饱和液：盐基性品红溶于乙醇内。
提高Grocott六胺银染色质量的几点细节
・232•临床与实验病理学杂志J CCc Exp Pathnl2261Feb；37(6)网络出版时间：2061-6-2217/0网络出版地址：httyi：//dus.vski.ueW9cms/deWiU34.1073.R.40610222.1667.025.html提高Grocott六胺银染色质量的几点细节陈世梁，吴文川，胡莎莎，卢志承关键词:六胺银染色;改良;真菌中图分类号:R446；R379文献标志码：B文章编号2001-7302(2241)06-0632-06dol:10.18314/ju cud/cjcep.4061•06•026真菌感染是临床上较常见的感染性疾病,部分真菌感染病灶和炎症、结核、肿瘤病灶难以鉴别，常用G/ch t六胺银染色检测组织中的真菌来确诊。
近年来由于环境恶化和广谱抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂的广泛使用，以及临床上侵入性操作的普遍开展，使人体抵抗力下降，导致真菌感染性疾病日益增多。
因此,G/ch t六胺银染色检测真菌的应用越来越广泛，这就需要更高质量的染色效果。
为提高染色质量，本文对传统方法进行了改良,在实践工作中取得了比较满意的效果,现介绍如下。
1材料与方法H材料选取海南省人民医院送检真菌感染的活检标本29例,其中肺4例，鼻部4例,扁桃体3例,淋巴结3例，足6例，肝-例，角膜-例。
所有标本均经4%中性福尔马林固定，常规取材、脱水、透明、浸蜡、包埋。
1.4主要仪器GZX-GF-MBS电热恒温鼓风干燥箱，购自上海跃进医疗器械公司;LEICA CM2225切片机，购自德国徕卡公司;樱花VIPA脱水机，购自日本。
1.3试剂及配制(1)六胺银原液:将5%硝酸银5mL加接受日期:2020-09-22作者单位:海南省人民医院病理科，海口577311作者简介：陈世梁，男，副主任技师。
E-mail：cyebshikagl68@ 迈新二□技术交流入到3%六次甲基四胺40mL内，即形成白色沉淀,慢慢摇动至沉淀溶解变清，用棕色瓶装3t保存5]。
真菌 染色
、概述真菌是指具有真正细胞核、产生孢子、不含叶绿素，以寄生或腐生方式吸取养料，能进行有性和(或)无性繁殖，具有纤维素(或其他葡聚糖)或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。
真菌侵犯人体常继发于其他疾患，如恶性肿瘤、TB、糖尿病等慢性消耗性疾病；大剤量X线照射；免疫抑制剂等导致免疫功能和抵抗力低下；大量应用肾上腺皮质激素的病人，其炎症反应多受抑制，也容易感染真菌；另外器官移植、导管插管、放疗等应用引起局部组织损伤，为真菌的入侵提供了条件．近年来由于免疫缺陷病毒感染者的不断出现，使原来不致病的真菌转为致病真菌。
因此，真菌感染已经成为一个日益严峻的问题。
真菌分为浅部真菌和深部真菌。
浅部真菌：主要侵犯机体皮肤，寄生和腐生于表皮，毛发和甲板的角质组织中，引起浅部真菌病，简称癣病。
临床最多见的浅部真菌病有：体癣、股癣、手癣和足癣。
深部真菌：指侵犯表皮以外组织和器官的病原菌和条件致病真菌.；按生物学性状的不同又分为：酵母型、酵母样型、丝状菌型、双相型。
深部真菌常见的有：念珠菌，隐球菌，组织胞浆菌,马尔尼菲青霉菌，曲霉，毛霉菌,孢子菌丝等。
二、常见真菌的形态特征真菌的大小差异悬殊，大者如碗口，不属微生物范畴，例如灵芝；小者肉眼看不到，只能用显微镜观察。
真菌的形态分单细胞和多细胞两种类型，单细胞真菌呈圆形或卵圆性，常见于酵母菌和酵母样菌；多细胞真菌多呈丝状，分枝交织成团，也称为丝状菌，即一般通称为霉菌。
三、真菌的基本结构真菌由菌丝和孢子构成。
孢子是真菌的生殖结构，分为有性孢子和无性孢子。
在适宜条件下，菌丝是由孢子生出芽管，逐渐延长呈丝状，生物学上把真菌的每一根细丝叫做菌丝。
四.真菌的染色方法真菌用H-E染色一般着色不良，因此需用特殊的染色方法来显色，六胺银法（GMS）用铬酸氧化真菌壁的多糖而暴露出醛基，醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。
PAS法用高碘酸氧化真菌菌壁的多糖游离出醛基，后者与无色品红结合生成新的品红色复合物而被显色。
肾穿刺活检六胺银染色套染Masson染色方法的改良
号为鲜红色。
本组实验对两种不同显色方法进行对比，结果示DAB显色操作比较简单，室温下即可显色，显色时间较快；显色后切片可用二甲苯透明，切片较干净，组织透明度较好；透明后用中性树胶封固，可较长时间保留切片，一般不会掉色；AEC显色颜色比较鲜艳，背景比较淡，敏感性和表达部位显色效果较好。
相比之下，DAB显示的颜色比较暗，背景颜色比较重，敏感性和表达的部位不如AEC显色效果好；DAB有致癌性，使用时务必有防毒意识和防毒措施。
而AEC显色需在37ħ烤箱中进行，不利于对显色结果进行判断；显色后不能用二甲苯进行透明处理，影响切片的透明度和清晰度；使用水溶性封片剂或甘油等封片不利于切片的长期保存，需及时观察、采集图像并进行统计学分析。
两种显色剂和显色方法各有优缺点。
文献［1］报道DAB和AEC两种显色剂易受以下因素影响，如组织固定（固定液的温度、pH值和不同组织）、制片过程（浸蜡温度、包埋温度、烤片温度）、IHC染色过程（如抗原修复的方法、时间、温度、pH值，封闭内源性过氧化物酶的方法、步骤等）和ISH染色过程（如酶蛋白消化的时间、探针的敏感度）等，这些因素对染色结果影响很大。
Graham等［2］研究发现使用氧化物酶组织化学的显色剂，可以使显色时间持续更久。
上述两种显色方法对IHC和ISH显色结果进行有效区别，若实验中仅采用其中一种方法时，DAB显色是首选，如果同时选用两种技术进行科学研究时，建议一种技术选用DAB显色，另一种技术选用AEC显色，因为DAB显色结果为棕黄色，EAC显色结果为红色，两种不同的显色颜色有利于操作人员进行视觉鉴别，避免混淆。
在今后的工作中，我们建议实验操作人员要从习惯采用DAB显色逐步实践或过度到采用AEC显色，将更有利于环保和健康。
参考文献：［1］熊正文，李春光，丁华野，等．影响免疫组化敏感性反应的因素分析及对策［J］．中国组织化学与细胞化学杂志，1999，8（2）：236－9．［2］Graham R C，Jr Karnowsky M J．The early stage of absorption of injected horseradish peroxidase in the proximal tubules of mouse kidney：ultrastructural cytochemistry by a new technique［J］．J Histochem Cytochem，1966，14（4）：291－302．肾穿刺活检六胺银染色套染Masson染色方法的改良吕增华，张杨杨，朱玉红关键词：肾穿刺活检；六胺银染色套染Masson染色法中图分类号：R446文献标志码：B文章编号：1001－7399（2012）11－1289－02肾穿刺活检是目前诊断肾小球肾炎最可靠的手段，在肾脏穿刺活检病理诊断中，六胺银染色套染Masson染色［1］能精确显示病变肾小球内各种免疫复合物的形态与定位，对诊断肾小球疾病起着至关重要的作用。
尿酸盐染色液(Gomori六胺银法)
尿酸盐染色液(Gomori 六胺银法)
简介：
人体内嘌呤(核苷酸)代谢的分解产物是尿酸盐。大多数尿酸并非全部经由肾脏排除，有 时以尿酸钠的形式存在于血液循环中。采用 Gomori 六胺银法对尿酸盐染色，使尿酸盐结 晶呈黑色，常用于辅助 诊断尿酸盐所致的 通风结节。由于 尿酸盐易溶于水 ，而不易溶于乙 醇，故固定时，应采用乙醇而不是福尔马林等固定液。
50ml
RT 避光
试剂(E): Gomori 对照液
10ml
RT
使用说明 书
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、组织固定：固定于无水乙醇 16h 或过夜。再经无水乙醇浸泡 3 次。
2、经二甲苯浸泡 2 次，常规浸蜡包埋。
3、切片厚度 5μm，二甲苯脱蜡至无水乙醇。
4、提前配制好 Gomori 六胺银溶液，并提前预热孵育。如有尿酸盐存在，切片呈黑色。
组成：
名称
编号
DS0010 4×50ml
Storage
试剂(A): Gomori A1:Gomori 六胺银 A
15ml4℃ 避光六胺银溶液A2:Gomori 六胺银 B
15ml
RT
临用前，按 A1:A2:蒸馏水=3:3:4 的比例配制试剂(A)，不宜提前配制。
试剂(C): 海波溶液
50ml
RT
试剂(D): 伊红染色液
5、蒸馏水稍洗。
6、浸入氯化金溶液处理。
7、自来水稍洗。
8、入海波溶液处理。
9、自来水冲洗。
10、伊红染色液淡染 s。
11、自来水稍洗。
12、常规脱水透明，中性树胶封固。
染色结果：
尿酸盐结晶
黑色
背景
动物六胺银染色方法
ICS65.020.30B44中国实验动物学会团体标准T/CALAS x-201x 实验动物六胺银染色方法Laboratory animal-Methenamine silver stain method（征求意见稿）201x-xx-xx发布201x-xx-xx实施中国实验动物学会发布前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则编写。
本标准由中国实验动物学会归口。
本标准由全国实验动物标准化技术委员会（SAC/TC281）技术审查。
本标准由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草。
本标准主要起草单位：浙江大学动物科学学院、浙江省医学科学院。
本标准主要起草人：吴旧生、刘月环。
实验动物六胺银染色方法1范围本标准规定了实验动物组织切片六铵银染色方法。
本标准适用于实验动物组织中细菌、真菌和肾小球基膜等多糖成分的病理检测。
2基本原理利用氧化剂氧化细菌和真菌内的细胞壁内的粘多糖等成分而暴露出醛基，醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。
同理，肾小球基膜内含有一些多糖成分，易于被氧化露出醛基而被染色。
3主要试剂3.11%过碘酸溶液，4℃可保存一个月。
3.2六氨银工作液。
5%硝酸银水溶液 2.5ml5%四硼酸钠水溶液 2.5ml3%乌铬托品水溶液12.5ml蒸馏水12.5ml先将蒸馏水与乌铬托品水溶液混合在一起，再加入硝酸银水溶液，此时将呈现乳白色，搅拌后即可消失，加入四硼酸钠水溶液后，即可使用。
3.30.1%氯化金溶液。
3.45%硫代硫酸钠溶液。
3.50.5%亮绿溶液。
4实验步骤4.1切片经二甲苯5min*2、无水乙醇5min*2、95％乙醇5min*2、85％乙醇5min、70％乙醇5min完成脱蜡。
脱蜡后自来水洗5min。
4.2加入1%过碘酸水溶液中作用10min。
自来水洗，然后蒸馏水洗二次，每次3min。
4.3六氨银液预热至65℃，切片放入其中浸染75min，蒸馏水洗二次，每次3min。
几种常用特殊染色操作过程中的要点
＋蒸馏水，洗涤沉淀（50-100ml蒸馏水） <反复/3次，沉淀不浑浊>
留下沉淀及少许上清液（4ml）
<保留沉淀物质>
逐滴＋氢氧化铵（一次1-2滴加入）
பைடு நூலகம்<边加摇晃>
至沉淀逐渐完全溶解
<无色溶液>
逐滴＋10%硝酸银，至刚出现浑浊 加氢氧化铵一至数滴，使沉淀消失
＋蒸馏水至40ml，2-8°C冰箱
<浑浊状态>
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3.高锰酸钾氧化时间不可过长，过长容易影响组织细胞形态的观 察。 4.原法中甲醛还原后用0.2%氯化金调色、5%硫代硫酸钠固定及VG 液复染，实际工作中可省略。（不进行复染结果对比同样清晰） 5.根据诊断的需要，可进行与其他（如+Masson）染色套染。
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（七）染色结果
网状纤维—黑色 胶原纤维—黄色至棕黄色 胞核—褐色
9
（五）染液的配制及保存
①0.25%高锰酸钾：（定期更换）
②2%草酸：
③2%硫酸铁铵： ④Gomori银氨液：（使用、保存几周）
棕色瓶 2-8°C冰箱保存
（染色成败的关键）
⑤4%中性甲醛：（定期更换）
10
Gomori银氨液-1
10%硝酸银(3ml)+10%氢氧化钾(1ml)
<出现棕黑色颗粒沉淀>
（溶解度0.4%），溶于酒精（溶解度7.6%）。
24
（四）染液的配制及保存
①5%苯酚水溶液：（临时配制）
先在恒温箱中加热溶解，吸取5ml与95ml蒸馏水混合配制。
②苯酚碱性品红液：（保存期1年）
碱性品红 无水乙醇 5%苯酚水溶液
0.5-1g 溶解
经典和改良胺银染液配制方法比较
经典和改良胺银染液配制方法比较解立武常芳DOI ：10.3969/j.issn.0253⁃9926.2020.17.045作者单位：030013太原，山西省肿瘤医院病理科通信作者：常芳，Email ****************网状纤维染色在病理诊断中应用非常广泛。
网状纤维在组织内形态以及分布特征，预示着不同的病理诊断结果，尤其在鉴别间叶组织和上皮组织来源的恶性肿瘤具有重要意义［1］。
网状纤维的染色方法较多，Gomori 银氨染色法是最常用的染色方法。
其中的氨银染色液是网状纤维染色的关键染液，高质量的胺银染液是染色成败的关键。
我们对经典的配制方法进行了改良，结果是网状纤维清晰，和背景对比分明，配制方法简单有效，而且保存期大大延长。
1材料与方法1.1材料硝酸银、氢氧化钠、氢氧化钾、氨水。
1.2仪器磁力搅拌器、滴定管、烧杯。
1.3配制方法1.3.1经典的配制方法［1］：①10%的硝酸银3m L ，加入10%的氢氧化钾3m L ，立即生成棕黑色颗粒沉淀。
②加入10倍以上的蒸馏水洗涤沉淀物，倾去上清液，再加入蒸馏水，反复洗涤3次。
③然后逐滴滴入氨水，并轻轻不断摇晃，直至沉淀物恰好完全溶解。
④再加入10%硝酸银数滴至溶液稍变浑浊，再小心加入氨水使溶液恰好又变清。
⑤按照原来总量蒸馏水稀释10倍。
配制好的氨银溶液装入棕色试剂瓶中，放入4°C 冰箱保存，可以使用4~8周。
1.3.2改良的配制方法：①10%的硝酸银10m L ，加入10%的氢氧化钠10m L 的烧杯中，立即生成棕黑色颗粒沉淀。
②将烧杯置于磁力搅拌器上，磁力棒放入杯内溶液中，开启旋转。
转速调至低速转动溶液。
③将注入了氨水的滴定管加盖，滴速调为每分钟3滴，形成最小液滴自行滴入转动的溶液中，棕黑色慢慢溶解，滴加至所形成的沉淀物恰好溶解为清亮液为止，用蒸馏水补足200m L 。
配制好的氨银溶液装入棕色试剂瓶中放置4°C 冰箱保存，可以使用5~6个月。
病理学技术中级《专业实践能力》考前点题卷二
病理学技术中级《专业实践能力》考前点题卷二[单选题]1.单纯固定液广泛用于酶组织化学方法（江南博哥）中的各种酶固定的是A.冷丙酮B.乙醇C.苦味酸D.锇酸E.醋酸参考答案：A[单选题]2.用Bouin固定液固定组织的特点是A.该固定方法适用于标本的长期保存B.细胞核与细胞质均着色鲜明C.细胞核着色鲜明，但细胞质着色较差D.细胞质着色鲜明，但细胞核着色较差E.固定后组织被染成黑色参考答案：C[单选题]3.下面的固定方法渗透力强，3mm的组织1小时即可固定的是A.Rossman液B.Müller液C.Orth液D.B-5固定液E.Carnoy液参考答案：E[单选题]4.下面的固定液需要现用现配，并且需在暗处固定的是A.PLP液和PLPD液B.Muller液C.Orth液D.甲醛-钙液E.Zenker液参考答案：C[单选题]5.免疫组织化学染色间接法优于直接法的特点中，错误的是A.不用标记第一抗体B.第一抗体的工作稀释度较高C.敏感性增强D.特异性提高E.应用范围更广参考答案：D[单选题]6.在Gram染色中，使阳性菌着色的染料是A.酸性品红B.碱性品红C.中性红D.结晶紫E.亚甲蓝参考答案：D参考解析：在Gram染色中，使阳性菌着色的染料是结晶紫。
[单选题]7.10%福尔马林固定组织的原理主要是A.使蛋白质分子发生交联B.凝固蛋白质C.沉淀蛋白质D.沉淀核酸E.凝固脂肪参考答案：A参考解析：10%福尔马林固定组织的原理主要是使蛋白质分子发生交联。
[单选题]8.在阴道脱落细胞涂片中能估计雌激素水平的染色方法是A.HE染色法B.PAS染色法C.瑞氏染色法D.MCG染色法E.巴氏染色法参考答案：E参考解析：巴氏染色法在阴道脱落细胞涂片中能测定雌激素水平。
[单选题]9.免疫荧光间接法的特点是A.一种荧光抗体能检出一种抗原，敏感性较差B.操作易掌握，一种荧光抗体能检出多种抗原，敏感性较高C.特异性高，敏感性差D.不够敏感，不常用E.操作复杂，较难掌握参考答案：B参考解析：免疫荧光间接法的特点是操作易掌握，一种荧光抗体能检出多种抗原，敏感性较高。
改良六胺银染色法在活检组织真菌检测中的应用
中国乡村医药改良六胺银染色法在活检组织真菌检测中的应用付琳琳鲁萍平金良真菌除了侵犯皮肤和皮下组织外，还会累及组织和器官，六胺银染色是检测真菌感染常用的一种检测方法。
笔者观察改良六胺银染色方法在病理诊断中的意义，以期为真菌检测提供更优的检测方法，更好地服务于临床。
1 资料与方法1.1 对象与分组选取2017年1月至2018年12月我院活检组织六胺银染色阳性的患者20例，其中男10例，女10例；年龄35～68岁；病理结果提示隐球菌感染19例（95.0%），霉菌感染1例（5.0%）。
将20例组织蜡块进行常规切片，其中采用六胺银染色法的20片为对照组，采用改良后六胺银染色法的20片为观察组。
1.2染色方法对照组使用六胺银染色法，即常规组织切片脱蜡至水，1%过碘酸氧化15分钟，蒸馏水洗2次，浸入预热的六胺银硼砂染色液（六胺银原液15m l，蒸馏水15ml，5%的四硼酸钠水溶液3ml）于60℃烤箱内染色1～1.5小时，切片呈浅棕色取出，蒸馏水洗2次，用0.2%氯化金水溶液调色5～10s，浸入2%硫代硫酸钠2分钟，蒸馏水洗1次，核固红染色液染细胞核3分钟，水洗晾干，中性树胶封固。
观察组使用改良六胺银染色法，即将烤箱的温度调至80℃，六胺银硼砂染色液不预热，六胺银硼砂染色液的配置调整为六胺银原液15ml，蒸馏水10ml，5%的四硼酸钠水溶液3ml，染色时间缩短为30分钟，其他染色程序不变。
1.3 效果观察从我科病理诊断组选取2名医师，从组织整体的染色情况对组织切片的染色效果进行评分，1分表示染色可满足病理诊断的需要，真菌着色不鲜明，或背景较深，对比不清楚；2分表示能满足诊断需要，真菌结构显示清楚，对比欠佳；3分表示可满足病理诊断需要，真菌结构清晰，对比鲜明，效果最佳。
2 结果两组六胺银染色的阳性结果组织图片见图1-2，均清楚的显示了真菌的结构，观察组结果对比更加鲜明。
两组六胺银染色质量评分：对照组1分4例（20.0%），2作者单位：313000 浙江湖州市中心医院病理科通信作者：平金良，Email:pjl0173@ 分11例（55.0%），3分5例（25.0%）；观察组1分1例（5.0%），2分6例（30.0%），3分13例（65.0%）。
特殊染色法
特殊染色法一，抗酸杆菌染色1，试剂配制：（1）碱性品红乙醇液：碱性品红5g，无水乙醇100ml（2）5%苯酚水溶液：苯酚（稍加温使共溶解）5ml，蒸馏水95ml（3）苯酚碱性品红液：碱性品红乙醇液1ml，5%苯酚水溶液9ml（4）20%硫酸水溶液：浓硫酸20ml，蒸馏水80ml（5）汽油松节油液：航空汽油（也可为普通汽油）1份，松节油1份2，染色程序：（1）切片用汽油松节油脱蜡2次，每次5-10min。
（2）不经乙醇洗，只用纱布将切片周围余液擦干。
（3）流水稍洗。
（4）滴入苯酚碱性品红液，于室温下染15—30min。
（5）流水去多余液体。
（6）用20%硫酸水溶液分化至适当为止（一般需1—5min）（7）流水充分冲洗。
（8）用Mayer苏木精液浅染细胞核。
（9）洗流水冲洗10—15min。
（10）用风扇把切片吹干，随即二甲苯透明，中性树胶封固。
3，结果：抗酸杆菌（包括麻风杆菌和结核杆菌）呈鲜红色，胞核呈蓝色。
二，奥新兰过碘酸雪夫代染色简称（AB—PAS染色）（溶液配制）1，0.3%的奥辛兰醋酸液：奥新兰0.3g，蒸馏水97ml，冰醋酸3ml2，1%过碘酸水溶液，schitf代试剂及亚硫酸冲洗液配发同。
（染色方法）1，切片按常规脱蜡水洗，再入蒸馏水洗。
2，染于0.3%或1%奥新兰醋酸液中10—30分钟。
3，用蒸馏水充分洗，至少洗4次。
4，1%过碘酸水溶液氧化5—10分钟。
5，用蒸馏水从分洗，至少3—4次。
6，Schiff代试剂染10—30分钟。
7，直接用亚硫酸冲洗3次，每次2分钟。
（有固定的作用，把多余的schiff试液洗净）8，流动自来水洗5分钟后蒸馏水洗。
9，苏木素染核。
必要时盐酸究竟稍分化后充分用自来水洗。
10，95%酒精，无水酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。
（结果）酸性粘多糖呈靛兰色，中性粘旦白呈鲜紫红色或品红色，中性及酸性粘蛋白混合物呈紫兰色。
软骨紫蓝核呈蓝色。
三，改良Hale胶状铁染色液的配制和应用（溶液配制）29%氯化铁4.4ml，蒸馏水250ml将蒸馏水置于烧杯内煮沸，然后滴加氯化铁不断搅动直至溶液变成暗红色。
六胺银甲绿派洛宁复染法
六胺银甲绿派洛宁复染法
张金时;谭郁彬
【期刊名称】《天津医药》
【年(卷),期】1993(021)005
【摘要】使用两种或两种以上染色相结合的染色方法,用以辨认比较复杂的病变,已成为病理组织学一种趋势。
本文报道一种复合染色法——六胺银甲绿派洛宁复染法,用以显示桥本氏甲状腺炎浆细胞在甲状腺滤泡内及滤泡间的分布。
一、溶液的配制:1.0.5%过碘酸。
2.0.2%氯化金。
3.5%硫代硫酸钠。
4.5%硼砂液。
5.六胺银储备液:5%硝酸银5ml,3%六亚甲四胺100ml。
【总页数】2页(P287,T003)
【作者】张金时;谭郁彬
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R446.8
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真菌 染色
、概述真菌是指具有真正细胞核、产生孢子、不含叶绿素，以寄生或腐生方式吸取养料，能进行有性和(或)无性繁殖，具有纤维素(或其他葡聚糖)或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。
真菌侵犯人体常继发于其他疾患，如恶性肿瘤、TB、糖尿病等慢性消耗性疾病；大剤量X线照射；免疫抑制剂等导致免疫功能和抵抗力低下；大量应用肾上腺皮质激素的病人，其炎症反应多受抑制，也容易感染真菌；另外器官移植、导管插管、放疗等应用引起局部组织损伤，为真菌的入侵提供了条件．近年来由于免疫缺陷病毒感染者的不断出现，使原来不致病的真菌转为致病真菌。
因此，真菌感染已经成为一个日益严峻的问题。
真菌分为浅部真菌和深部真菌。
浅部真菌：主要侵犯机体皮肤，寄生和腐生于表皮，毛发和甲板的角质组织中，引起浅部真菌病，简称癣病。
临床最多见的浅部真菌病有：体癣、股癣、手癣和足癣。
深部真菌：指侵犯表皮以外组织和器官的病原菌和条件致病真菌.；按生物学性状的不同又分为：酵母型、酵母样型、丝状菌型、双相型。
深部真菌常见的有：念珠菌，隐球菌，组织胞浆菌,马尔尼菲青霉菌，曲霉，毛霉菌,孢子菌丝等。
二、常见真菌的形态特征真菌的大小差异悬殊，大者如碗口，不属微生物范畴，例如灵芝；小者肉眼看不到，只能用显微镜观察。
真菌的形态分单细胞和多细胞两种类型，单细胞真菌呈圆形或卵圆性，常见于酵母菌和酵母样菌；多细胞真菌多呈丝状，分枝交织成团，也称为丝状菌，即一般通称为霉菌。
三、真菌的基本结构真菌由菌丝和孢子构成。
孢子是真菌的生殖结构，分为有性孢子和无性孢子。
在适宜条件下，菌丝是由孢子生出芽管，逐渐延长呈丝状，生物学上把真菌的每一根细丝叫做菌丝。
四.真菌的染色方法真菌用H-E染色一般着色不良，因此需用特殊的染色方法来显色，六胺银法（GMS）用铬酸氧化真菌壁的多糖而暴露出醛基，醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。
PAS法用高碘酸氧化真菌菌壁的多糖游离出醛基，后者与无色品红结合生成新的品红色复合物而被显色。
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仅供科研版本号：180524 六胺银染色液(改良Grocott-橙黄G法)
【产品组成】
【保存条件】
4℃，避光,6个月
【产品概述】
六胺银染色液是一种经典显示基底膜的方法。
经过Grocott改良之后,组织经铬酸氧化，使真菌内的黏多糖暴露出醛基，醛基把六胺银还原为黑色的金属银。
氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金，同时使背景更清晰。
海波可以固定并洗去未还原的银离子。
本法采用橙黄G复染对各种真菌的显示效果都很好，特别是马尔尼菲青霉菌的显示特别好，但必须淡染橙黄G。
如需显示曲霉和白色念珠菌，可选用苏木素或者伊红复染，可看到真菌与周围组织的关系。
【使用方法】
1、组织固定于甲醛固定液中，常规脱水包埋。
切片4um，脱蜡至水洗。
2、切片入氧化剂氧化20min。
流水稍洗。
3、入漂白液处理1min，以除去氧化剂。
4、流水冲洗5min，蒸馏水浸洗2次，每次30s-60s。
5、切片放入配制好的预热至60℃的六胺银工作液中，加盖60℃恒温染色大约20～60min，切片呈淡黄色即取出经水洗后显微镜观察有否有菌体出现。
如有淡棕色菌体出现，应每隔5-10min观察一次以控制菌体着色深浅，直至显色理想。
6、入蒸馏水中清洗。
7、用氯化金溶液调色1～2min。
蒸馏水洗1～2min。
8、置于海波溶液2min。
流水冲洗5min。
9、滴加橙黄G一小滴复染1s即用水冲洗。
染色时间不能过长，否则将影响最终效果。
10、流水冲洗20s-60s。
11、常规脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
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【染色结果】
【注意事项】
1、实验中所用玻璃器皿，应预先用硫酸洗液浸泡并用蒸馏水冲洗干净，烤干。
2、六胺银工作液配制后应先放入温箱中预热，温度要达到60℃时，再放人切片进行染色。
如用水浴锅代替恒温箱，需将温度设定在48-50摄氏度，否则切片会很快变黑而难以掌握。
一般建议在恒温箱中孵育染色。
3、在低倍镜检时，菌体不宜着色太黑，否则在高倍镜下观察则不够清晰透亮，特别需注意菌体成堆的地方的显色。
4、配制好的六胺银工作液是一次性的，不能久放。
5、氯化金调色时，一定要在显微镜下观察。
6、橙黄G一定要淡染，时间不能过长。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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