DNA胶回收中常见问题和解答
胶回收DNA注意事项
胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
凝胶回收
AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中回收多至8μg DNA（70bp-10Kb），回收率为60-85%。
琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A 溶液)中熔化，其中的保护剂能防止线状DNA 在高温下降解，然后在DE-B 溶液的作用下使DNA 选择性结合到膜上。
纯化的DNA 纯度高，并保持片断完整性和高生物活性，可直接用于连接、体外转录、PCR 扩增、测序、微注射等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性2ml离心管1.5ml离心管说明书Buffer DE-A：凝胶熔化剂，含DNA 保护剂，防止DNA 在高温下降解。
室温密闭贮存。
Buffer DE-B：结合液（促使大于70bp 的DNA 片段选择性结合到DNA 制备膜上）。
室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液，使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（用100%乙醇或95%乙醇），混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：洗脱液，室温密闭贮存。
二、注意事项1. Buffer DE-A(含有β-巯基乙醇)、Buffer DE-B 和Buffer W1 含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
2. 在步骤1 中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间（线型DNA 长时间暴露在高温条件下易于水解），从而提高回收率。
勿将含DNA 的凝胶长时间地暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA造成的损伤。
3. 在步骤2 中凝胶必须完全熔化，否则将严重影响DNA 回收率。
4. 将Eluent 或去离子水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。
5. DNA 分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH 7.0-8.5 洗脱液中保存。
三、实验准备1. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
琼脂糖凝胶DNA片段回收中的常见问题
原因：洗脱液中含有乙醇
建议：洗脱前，确保柱子中乙醇已无残留乙醇。
琼脂糖凝胶DNA片段回收中的常见问来自 1、未回收到DNA片段或回收效率很低
A、原因：胶块未完全溶解
建议：为加快凝胶的溶解，应将凝胶置于55度水浴中溶解，期间不断上下颠倒，待确定凝胶完全溶解后再进行后续操作。每100 mg凝胶应加入100uL溶胶液，如果胶块过大，应将胶块切成小块，以便于凝胶溶解。
D、原因：洗脱缓冲液不合适
建议：洗脱液的pH值在7.0~8.5时，洗脱效率最高，洗脱液pH超出此范围，将会显著影响收获率，请使用试剂盒配套的Elution Buffer（pH 8.5，10mM Tris-HCl），或者使用使用pH值在此范围的ddH2O。
E、原因：洗脱缓冲液未加到离心柱中间
建议：因为在洗脱时使用较少的洗脱缓冲液，洗脱缓冲液应加在中间位置，并室温放置1~2分钟，然后再离心洗脱。另外，采用65度预热的洗脱Buffer将显著提高回收效率。
F、原因：起始回收量太少
建议：如果起始回收量很好的样品，应富集，最好使用不少于1ug的样品。对于PCR产物，应事先电泳检测产量，在进行回收操作。
2、电泳时，产物漂出点样孔
原因：洗脱时，柱子中残留乙醇
建议：在进行洗脱前，如果柱子上残留乙醇，将会影响洗脱效率，在洗脱前应再次离心，或者空气中放置几分钟，再进行洗脱。
B、原因：加入溶胶液过少
建议：对于PCR产物，或者酶切产物，应加入2倍体积的溶胶液。对于凝胶回收，每100 mg凝胶应加入不少于100uL溶胶液。对小于200bp的片段应加入5倍体积的溶胶液。
C、原因：DNA Wash Buffer 中未加入无水乙醇
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[转载]胶回收注意事项已有735 次阅读2010-7-7 20:37|个人分类:从零开始学技术|系统分类:科研笔记胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
DNA胶回收实验技术总结
DNA胶回收实验技术总结一。
提高胶回收量的办法：1）增加电泳时的上样量。
2）电泳缓冲液用新鲜配制的。
3）切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。
4）把切的两块或多块胶融化后,无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上.5）溶胶时所加的溶液可多一点,这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。
6）胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高,可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0,3mol/L的NaAC)；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。
7）加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟(大约需10分钟），以使乙醇充分挥发。
8）最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30—50μl洗脱液洗脱（不能太少，否则无法浸湿膜反而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充分洗脱结合在膜上的DNA。
9) 可以在加入洗脱液之后，可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱，或用封口膜密封4度过夜,第二天再离心回收，效果不错。
10）将离心后的洗脱液加回吸附柱，再次离心。
二。
几种PCR 产物回收的详方法和步骤1）普通胶回收如果要胶回收，最好还是用试剂盒，方便，回收率也略高，实在要手工回收，可以切胶后加入3倍体积TE，水浴熔化后,酚、酚／氯仿抽提干净，乙醇沉淀即可.另外好像还有冷冻法，没作过，不是很清楚.2）从低熔点凝胶回收DNA纯化DNA片段加与凝胶体积相等的TE（10mmol/l Tris—HCl pH8.0，0.1mmol/l EDTA)，置65℃水浴5分钟保温，使凝胶完全溶解。
待放至室温,加等量酚（TE饱和，TE封在上层，取下层酚），轻轻混匀（不用混匀)，12000rpm，3分钟离心.反复1—2次。
取上层液，加0。
1体积3mol/L醋酸钠（pH5.2)和2。
DNA凝胶回收方法及常见问题
DNA凝胶回收方法及常见问题琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。
聚丙烯酰胺凝胶电泳片段的回收将在以后的文章中介绍，在这里我先介绍一下琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法，方便大家学习交流。
从琼脂糖凝胶中回收DNA，是一种简单不过的常规实验操作。
但是由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验――比如酶切连接、转化筛选、测序或者PCR扩增、标记乃至显微注射等等，所以这一步的操作也显得非常重要。
胶回收的质量好否直接影响后继实验的成功与否。
现今除了手工回收方法外，许多公司都开发了方便的回收试剂盒系列，但是无论借助何种方式，最基本的评定标准均包括: 回收产物质量：主要指纯度。
常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。
对于大片断DNA回收，质量还包括产物的完整性；而对于较小片断回收，质量还包括回收产物的浓度；此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。
回收率：由于上电泳样品量通常都很少，电泳过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断，提高产物得率，对于后继实验来说是非常重要的。
回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关，比如DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；又如，DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
因此，根据情况选择不同的方法是很重要的。
其他：操作方面，操作简单，快速，应用方便的方法或产品自然比较受欢迎。
如溶胶的缓冲液中添加指示剂，可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计；离心过柱就比离心沉淀要简单方便。
还有要注意载量问题，因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质都有一定的吸附限度，过量的产物吸附不了即被损失掉。
以下是我总结的常见问题，希望对大家有所帮助。
Q1：利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段？A1: 可能有以下几个原因：1. 胶块未完全溶解，溶解凝胶时应置于55℃水浴，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数,确定胶块完全溶解后再进行下一步骤;2. 胶块体积太大,应使用枪头捣碎，还不能充分溶解，则应先将其切为小块，分多次回收或选用大量型回收试剂盒；3.紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内；4. 电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH值（pH≤7.5）时可结合DNA，在低盐及高pH 值（pH≥8）条件下洗脱。
DNA胶回收
关于DNA胶回收的一些东西(2012-08-28 21:01:59)分类：资料标签：杂谈这几次做胶回收的回收率都不高，所以很就纠结啊。
逛论坛的时候发现原来中科大IGEM实验的胶回收也跟我们情况差不多，于是去看了一下他们的论坛，就把中科大师兄师姐的经验拿过来先了，希望我们的后续实验能顺利些，前面时间有点拖得久了....1.切胶时放在不吸水的PE手套上，但是PE手套一旦滑动将导致质量的改变，因为说DNA主要在琼脂糖颗粒的缝隙中，也就是TAE缓冲液里，所以吸水过强会导致DNA损失。
2.胶回收的Eluent要预热这个已经不用多说。
我们平时加入Eluent一般静置1-2min，后来在学姐的建议下我延长了静置时间，后来浓度很高的两次都是在5分钟以上，30ng/ul的那次是5分钟，51ng/ul的那次是在65摄氏度水浴中盖盖静置10分钟。
取得了很好的效果，回收浓度比较高（以前经常是10ng/ul）。
主要就这两点，尤其是第二点，个人认为第二点确实很重要。
因为我们平时会遇到片段小了挂不上（用异丙醇），片段大了洗不下来。
我们有的时候是几kb的，一般属于第二种情况，这时就应该延长加入Eluent的静置时间，以获得更高的回收率。
3.照胶一定要快，长时间的紫外照射会引起序列的突变。
4.切胶时注意把胶块切得小些，但是要切掉所有目的片段。
胶块太大不容易溶解，而且会使得浓度低，影响回收效率。
没有切干净所有片段会更加严重影响回收效率。
关于切胶和胶回收效率的关系，文献上是这么讲的：“切胶质量比较小时，对回收效率影响不大；但是切胶质量比较大时，将明显降低胶的回收效率。
”也就是说，切胶不是越小越好，但大了肯定不好，具体到我们现在的条件下，若能控制到0.15g~0.1g左右就应该没有问题了。
当然，前提是一定要把所有的目的条带切干净。
5. 关于溶胶的问题，文献中则说太长和太短都不好，推荐时间是 10min。
他们用的试剂盒和我们的不一样，绝对时间不具有可比性，生工的试剂盒说明书上写的是5~10min。
DNA片段纯化与回收常见问题分析与解决
Q：利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段？
A：
可能有以下几个原因：
1. 胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；
2. 胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；
3. 电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；
4. 漂洗液中未加入无水乙醇。
Q：能否改用去离子水洗脱？
A：可以。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH值，以增加洗脱得率。
Q：回收DNA进行后续酶切实验？
A：洗脱产物含有残留的乙醇会影响酶切，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
Q：可否使用更小洗脱体积(小于说明书提供的最小洗脱体积)进行洗脱以提高浓度？
A：不可以。
因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
Q：电泳检测只有一条目的带，可否选用凝胶回收试剂盒？
A：可以。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
Q：琼脂糖凝胶胶块不溶？
A：1. 琼脂糖质量不好。
2. 含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃。
3. 制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
原文地址:/biotech/exp/molbio/DNA/2010/e817582666.html。
dna回收效率低的原因
dna回收效率低的原因摘要：1.DNA回收效率低的现象2.DNA回收效率低的原因2.1 样本质量问题2.2 实验操作不当2.3 试剂选择和配制问题2.4 其他因素3.提高DNA回收效率的方法3.1 优化样本处理3.2 改进实验操作3.3 合理选择试剂3.4 控制实验环境正文：DNA回收效率低是分子生物学实验中常见的问题，影响实验结果的准确性和可重复性。
为了提高DNA回收效率，我们需要了解其低的原因并采取相应的解决措施。
首先，样本质量问题是导致DNA回收效率低的主要原因之一。
样本质量受到多种因素影响，如组织切片的厚度和数量、样本的保存条件等。
因此，在进行实验前，应确保样本的质量，对组织切片进行精确的测量和计数，并妥善保存样本。
其次，实验操作不当也会导致DNA回收效率低。
操作过程中可能出现的错误包括：DNA提取液的加入顺序错误、离心速度和时间的设置不当等。
为了避免这些问题，实验人员需要熟悉实验流程，遵循操作规范，并定期检查实验设备。
再者，试剂选择和配制问题也可能导致DNA回收效率低。
不同品牌和型号的试剂盒效果可能存在差异，同时，试剂的保存和配制方法也会影响其性能。
因此，在实验过程中，应根据实验需求选择合适的试剂盒，并严格按照说明书进行试剂的保存和配制。
最后，实验环境和其他因素也可能影响DNA回收效率，如温度、湿度、磁场稳定性等。
为了确保实验结果的可靠性，应控制实验环境的稳定性，避免无关因素对实验结果的影响。
总之，提高DNA回收效率需要从多方面入手，包括优化样本处理、改进实验操作、合理选择试剂和控制实验环境。
dna胶回收实验技术总结
dna胶回收实验技术总结DNA胶回收实验技术主要用于从凝胶中分离之前所分离的DNA片段。
这种技术非常重要，因为它允许研究人员对这些DNA片段进行更多的实验，如测序、限制性酶切等。
这篇文章将总结DNA胶回收实验中使用的主要技术和注意事项。
1. DNA凝胶：DNA凝胶通常由琼脂糖和缓冲液（如TAE或TBE缓冲液）组成。
在加热和冷却之后凝胶会形成。
使用的琼脂糖的浓度和缓冲液的pH值能够影响凝胶的孔径大小。
因此，为了得到不同大小的DNA片段，可以通过改变琼脂糖浓度或缓冲液pH值来制备不同的凝胶。
2. DNA胶切：DNA片段可以通过限制性酶切生成。
这时需要先将DNA样品加入切割酶，然后在37℃的恒温下进行反应。
反应后，DNA片段的大小可以通过凝胶电泳进行检测。
3. DNA电泳：DNA电泳是一种将DNA片段按照大小分离的技术。
首先需要将DNA样品加入凝胶槽中，然后通过通电来将DNA片段转移到电极上。
电泳的时间和电流大小可以根据不同应用需要而进行调整。
4. DNA可视化：DNA片段可以通过荧光染料（如ETHIDIUM BROMIDE）进行可视化。
荧光染料在紫外线下发出荧光，在电泳之后将凝胶放入紫外线转移盒中进行照射即可看到DNA片段的分布。
5. DNA胶回收：DNA胶回收可以通过两种方法实现。
一种是通过直接将DNA片段从凝胶中切出，另一种则是通过使用杂交膜。
对于大分子量的DNA片段，使用直接切割的方法效果较好，而对于小分子量的DNA片段，则建议使用杂交膜。
6. 直接切割法：直接切割法是将琼脂糖梯度离心管放在电影胶片上，通过紫外线照射定位所需片段的位置。
然后使用刀、注射器等工具在凝胶中切开，并将DNA片段取出。
7. 杂交膜法：杂交膜法是将酸性纸或硝酸纤维素薄膜放在凝胶上方，使其与DNA片段杂交，然后将薄膜剪下。
从薄膜上可以提取出DNA片段。
DNA胶回收实验需要注意以下几个点：1. 实验过程中一定要注意消毒，以避免外界的污染对结果产生影响。
胶回收相关问题
胶回收DNA注意事项一、胶回收DNA注意事项1.用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶，以减少回收胶的体积。
2.DNA的浓度要足够大。
3.紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，刀片要清洗，防止外源DNA的污染。
4.回收效率低：a.胶未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次；b.胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；c.电泳缓冲液pH太高；d.漂洗液中未加入无水乙醇;e.改用去离子水洗脱。
5.洗脱液体积不能小于说明书提供的最小洗脱体积。
6.胶块不溶：a.琼脂糖质量不好；b.含目的片段的凝胶再空气中放置过久，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；c.制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
7.溴化乙锭（EB）为致癌剂，操作时应戴手套，尽量减少台面污染。
8.电泳指示剂：核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚蓝（bromophenol blue, Bb）呈蓝紫色；二甲苯晴（xylene cyanol, Xc）呈蓝色，它携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中的的迁移率比溴酚蓝慢。
二、提高胶回收量的办法1.增加电泳时的上样量。
2.电泳缓冲液用新鲜配制的。
3.切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积，含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。
4.同一种DNA片段的胶转移到同一个柱子上。
5.溶胶时所加溶液应与回收的胶1:1混合（或者多加一些），但不要多余750ul，否则会降低回收效率。
6.胶回收的关键：通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L）NaAC；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可在加热溶解胶后的液体里添加少量30％异丙醇。
7.加洗脱液之前，用乙醇处理柱子，放置约10分钟使乙醇充分挥发。
8.洗脱液要滴在膜中央，并静置两分钟，以充分洗脱结合在膜上的DNA。
切胶回收注意事项
切胶回收注意事项胶回收DNA注意事项胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA 污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
试剂盒常见问题解答
胶回收常见问题及对策1. 没有回收到DNA片段如在洗脱后，发现洗脱液中没有DNA 片段，请检查是否按瓶身标签，在洗涤液中加入了无水乙醇。
2. 提取率低1）融胶液为酸性缓冲液，如融胶后，其pH 值升高将影响提取得率。
请加入0.1 倍体积的3M 乙酸钾（pH5.0）。
2）长时间使用后没有更换的电泳缓冲液，其pH 值较高，将影响DNA 的吸附。
请更换新的电泳缓冲液后，再进行电泳，然后切胶。
3）回收片断大小影响回收效率（见下图）；4）在洗脱前，将洗脱液于30～60℃温浴，可提高提取效率适当延长洗脱时间可增加回收效率。
5）正确估计胶大小，确保加入足够量的Binding Buffer；使胶完全融解；6）提高Binding Buffer用量可提高小片断DNA回收效率.对于<100bp的DNA片断,可加入6倍体积的Binding Buffer；3. 吸光度测量结果问题吸光度测量的是未知样品与调零标准之间的相对吸光度，所以请用与洗脱液体相同的液体，对测量样品进行稀释和调零。
4.如何计算提取率1) 由于回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率。
2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比。
3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。
技术支持咨询电话：************,800-820-1016PCR产物回收试剂盒可能出现问题及解决方法1. 无DNADNA Wash Buffer没有用无水乙醇稀释；2. 低DNA产量样品中加入的Binding Buffer的量太少；请按照使用说明加入足够量的Binding Buffer；若DNA片段长度小于200bp，可加入6倍体积的Binding Buffer；若DNA片段长度大于4kb，则加入3倍体积Binding Buffer 后加入1倍体积的双蒸水。
胶回收相关问题
胶回收DNA注意事项一、胶回收DNA注意事项1.用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶，以减少回收胶的体积。
2.DNA的浓度要足够大。
3.紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，刀片要清洗，防止外源DNA的污染。
4.回收效率低：a.胶未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次；b.胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；c.电泳缓冲液pH太高；d.漂洗液中未加入无水乙醇;e.改用去离子水洗脱。
5.洗脱液体积不能小于说明书提供的最小洗脱体积。
6.胶块不溶：a.琼脂糖质量不好；b.含目的片段的凝胶再空气中放置过久，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；c.制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
7.溴化乙锭（EB）为致癌剂，操作时应戴手套，尽量减少台面污染。
8.电泳指示剂：核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚蓝（bromophenol blue, Bb）呈蓝紫色；二甲苯晴（xylene cyanol, Xc）呈蓝色，它携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中的的迁移率比溴酚蓝慢。
二、提高胶回收量的办法1.增加电泳时的上样量。
2.电泳缓冲液用新鲜配制的。
3.切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积，含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。
4.同一种DNA片段的胶转移到同一个柱子上。
5.溶胶时所加溶液应与回收的胶1:1混合（或者多加一些），但不要多余750ul，否则会降低回收效率。
6.胶回收的关键：通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L）NaAC；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可在加热溶解胶后的液体里添加少量30％异丙醇。
7.加洗脱液之前，用乙醇处理柱子，放置约10分钟使乙醇充分挥发。
8.洗脱液要滴在膜中央，并静置两分钟，以充分洗脱结合在膜上的DNA。
dna片段的胶回收实验思考
dna片段的胶回收实验思考DNA片段的胶回收实验是一种常用的实验方法，用于分离和提取DNA片段。
在这个实验中，胶回收是指将凝胶中的DNA片段从凝胶中分离出来，并用于后续的实验操作。
DNA是生物体遗传信息的载体，而DNA片段是DNA分子在特定条件下被限制性内切酶切割后得到的特定长度的DNA分子。
在实验室中，研究人员经常需要对DNA进行分离和提取，以便进行进一步的分析和研究。
胶回收实验通常用于凝胶电泳后，需要纯化DNA片段的情况。
凝胶电泳是一种常用的分离DNA片段的方法，通过电场作用，将DNA片段按照其大小分离在凝胶中。
然而，在电泳后，需要将目标DNA片段从凝胶中提取出来，以便进行下一步的实验操作。
胶回收实验的基本步骤如下：1. 准备凝胶：首先，需要制备含有DNA片段的琼脂糖凝胶。
通常，将琼脂糖溶解在缓冲液中，并加热至溶解完全。
然后，将DNA样品与凝胶溶液混合均匀，并倒入电泳槽中，形成凝胶。
2. 进行凝胶电泳：将电泳槽连接至电源，通过施加电场，将DNA 样品在凝胶中进行电泳分离。
根据DNA片段的大小，不同的片段会在凝胶上形成不同的迁移带。
3. 可视化DNA片段：在电泳结束后，需要使用染色剂将凝胶上的DNA片段可视化。
在实验室中常用的染色剂有乙溴化乙锭（EB）或硒化乙锭（SYBR Green）等。
4. 切割目标DNA片段：当目标DNA片段被可视化后，需要使用刮片或者切割器将目标DNA片段从凝胶中切割出来。
切割时应注意避免污染和交叉污染。
5. 胶回收：将切割下来的凝胶块放入离心管中，加入适量的溶剂，如缓冲液或蒸馏水，并将其在恒温摇床上振荡混合，使DNA片段溶解出来。
6. 离心分离：将混合液离心，以分离DNA片段溶液和凝胶残渣。
离心后，DNA片段溶液会位于离心管的上层，凝胶残渣则会位于下层。
7. 提取DNA片段：将上层的DNA片段溶液小心地转移到新的离心管中，丢弃凝胶残渣。
为了保证纯度和浓度，可以使用DNA纯化试剂盒进行进一步的提纯。
胶回收注意事项以及感受态细胞的制作
胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度，如果DNA浓度不够，想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA 完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
生物学实验之凝胶回收基础及操作
4.2 注意事项
６.切胶是, 紫外照射时间应尽量短, 以免对DNA 造成损伤。 7.回收<100bp及>10kb的DNA片段时, 应加大 溶胶液的体积, 延长吸附和洗脱的时间。 8.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关, 初始量 越少、洗脱体积越少, 回收率越低。
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目录
一 胶回收基础知识 二 方法及应用 三 试剂耗材与设备 四 操作流程 五 常见问题解答
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4.2 注意事项
3.电泳时最好使用新的电泳缓冲液, 以免影响电泳 和回收效果。 4.如下一步实验要求较高, 则应尽量使用TAE电泳 缓冲液。 ５.如果回收率较低, 可在胶充分溶解后检测pH值, 如pH值大于7.5, 可向含有DNA的胶溶液中加 10~30μL3M醋酸钠（pH5.2)将pH值调制5~7之 间。
切割 回收
Lane M:1kb DNA Marker Lane 1:胶回收前的2.7kb DNA段 Lane 2:胶回收后的2.7kb DNA段 切割Lane 1后, 经处理回收DNA, 经 电泳得到Lane 2。
4
1.2 胶回收原理
利用核酸在裂解液 下与硅胶膜吸附柱 特异性结合, 在洗脱 液条件下被洗脱, 从 而达到核酸纯化回 收的目的。
TAE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致pH值升高，降低DNA和膜的吸 附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好
回收前的样品量太少，加大点样量
洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可 以有效提高回收率30%以上
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5 常见问题解答
问题
解决方法
胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并 加入溶胶液温浴后，液体仍很粘 增加上下颠倒次数帮助溶胶 稠或后续步骤有堵柱子现象？ 胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，
切胶回收注意事项
胶回收DNA注意事项胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA 污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
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D N A胶回收中常见问题
和解答
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1、如何计算提取率？
1) 回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率；
2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比；
3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。
2、如何简易测算提取率？
取胶回收后的DNA溶液体积的1/5—1/10，与等体积的回收前的DNA溶液的5-10倍稀释液一起电泳，肉眼观察回收后的条带相对于回收前条带的亮度，粗略测算回收率（如亮度只有一半时，其回收率可粗略为50%）。
3、如何看待提取得率？
影响回收率的因素很多，如DNA片段大小、点样量、凝胶种类、电泳缓冲液的缓冲能力、切胶操作、紫外灯照射强度和时间、溶胶是否彻底等等，所以不能单凭1-2次的实验来判断其质量好坏，最好是多做几次实验或用几种不同品牌的产品做平行对照实验，结果相对真实。
4、回收率为什么与点样量和片段大小有关？
DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
5、用胶回收试剂盒从凝胶中回收DNA得率低是什么原因？
1）胶块溶解不完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数以及增加溶胶液的比例；
2）胶块体积太大，应使用枪头捣碎，还不能充分溶解则先将其切为小块，分多次回收；
3）紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内；
4）洗涤液使用后未及时盖严瓶盖，乙醇挥发，影响回收效率；
5） TAE或TBE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好；
6）回收前的样品量太少，加大点样量；
7）洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可以有效提高回收率30%以上。
6、加入溶胶液温浴后，液体仍很粘稠或后续步骤有堵柱子现象？
1）胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并增加上下颠倒次数帮助溶胶；
2）胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，分几次回收；
3）水浴温度是否达到规定温度65℃，用温度计检测。
7、琼脂糖凝胶块不溶？
1）琼脂糖质量不好；
2）含目的片断的凝胶在空气中放置过久，使胶块失水干躁，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存于4 ℃或-20℃；
3）制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
8、点样时发现DNA样品有漂出点样孔外的现象？
柱子上的乙醇未完全挥发干净，延长室温下空柱静置时间以确保乙醇完全挥发干净。
9、能否使用去离子水洗脱回收？
可以，但是实验室所用去离子水一般PH值偏低，可用NaOH适当调高PH值＞，以增加回收得率。
10、能否使用TE（）洗脱？
可以。
11、可否使用小于30μl的洗脱液进行洗脱？
不可以。
因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积。
12、关于DNA片段大小与回收率的问题？
100bp-500bp，30-60%；500bp-4kb，80-95%；4kb以上，30-50%。
13、OD值与琼脂糖凝胶中的DNA产量不相符？
从柱子上洗脱下来的痕量杂质增加了A260的值。
14、吸光度纯度测定时应注意哪些问题？
吸光度测量的是未知样品与调零标准之间的相对吸光度，所以请用与洗脱液体相同的液体，对测量样品进行稀释和调零。
15、为什么溶胶不彻底会影响回收结果的纯度？
在电泳过程中，DNA会与大分子的多糖紧密的结合在一起，凝胶的种类和质量不同，DNA与之结合力也不同，只有凝胶充分溶解DNA才能充分释放，否则，凝胶将与DNA一起沉淀下来，洗脱后将影响回收结果的纯度。