生物膜实验方法
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生物膜抑制：
（1）挑取新活化的Candida单菌落接种到新鲜RPMI-1640培养基中，培养至对数生长期。将菌液稀释到OD=0.1。然后接种到含有载玻片的6孔板中，每孔2ml。
（2）在37℃的湿度培养箱中培养3h,弃除上清，用1ml PBS轻轻洗两次。（3）用RPMI-1640培养基将2mg/ml的药物稀释到特定的浓度（一般在MIC 浓度之下）。
（4）将稀释好的药物加入到上述含载玻片的6孔板中。37℃，湿度静置培养36h。
（对照组加入两性霉素B。）
（5）弃上清液，用1ml PBS洗涤2次，每孔加入1000μl新鲜培养基和500XTT 到6孔板内，37℃，培养1-4 h。
（6）吸出100ul上清液加到96孔板中，在490nm下测吸光值，空白对照组只加XTT。（XTT法）阳性对照：（amphotericin B）要做浓度梯度。
破坏已经形成的生物膜：
（1）挑取新活化的Candida单菌落接种到新鲜RPMI-1640培养基中，培养至对数生长期。将菌液稀释到OD=0.1。然后接种到含有载玻片的6孔板中，每孔2ml。
（2）在37℃的湿度培养箱中培养3h,弃除上清，用1ml PBS轻轻洗两次。(3) 向上述6孔板中加入2ml新鲜培养基继续培养72h。
（4）用RPMI-1640培养基将2mg/ml的药物稀释到10,25,50,75,100ug/ml（一般大于MIC值）。
（5）去除原6孔板的培养基，将稀释好药物的培养基加入到上述6孔板中，每孔2ml。37℃，湿度静置培养36 h。（对照组加入两性霉素B。）阳性对照：（amphotericin B）要做浓度梯度。
（6）弃上清液，用1ml PBS洗涤2次，每孔加入1000μl新鲜培养基和500XTT 到6孔板内，37℃，培养1-4 h。
（7）吸出100ul上清液加到96孔板中，在490nm下测吸光值，空白对照组只加XTT。（XTT法）阳性对照：（amphotericin B）要做浓度梯度。
荧光染色检测cathelicidin破坏已经形成的生物膜：
（1）挑取新活化的Candida单菌落接种到新鲜RPMI-1640培养基中，培养至对数生长期。将菌液稀释到OD=0.1。然后接种到含有载玻片的6孔板中，每孔2ml。
（2）在37℃的湿度培养箱中培养3h,弃除上清，用1ml PBS轻轻洗两次。(3) 向上述6孔板中加入2ml新鲜培养基继续培养72h。
（4）用RPMI-1640培养基将2mg/ml的药物稀释到10,25,50,75,100ug/ml（一般大于MIC值）。
（5）去除原6孔板的培养基，将稀释好药物的培养基加入到上述6孔板中，每孔2ml。37℃，湿度静置培养36 h。（对照组加入两性霉素B。）阳性对照：（amphotericin B）要做浓度梯度。
（6）去除培养基，加入1000ul含有1ul SYBR Green I 和1ul PI 染料的RPMI-1640培养基避光30℃培养20min。荧光显微镜检测。