waters T 操作手册

日常操作步骤：

准备

UPLC 设置样品表 运行样品 定量 打印报告 注：如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。 建立新方法和project 的操作步骤：

准备UPLC 建立新的project 用标准品调谐 编辑质谱方法 编辑UPLC 方法 设置样品表 运行样品 定量 打印报告 1. 开机

1.1. 打开电脑，打开质谱电源和UPLC 各电源，各部件通过自检后，点击

进入工作站。

1.2. 选择Instrument > MS Tune 进入调谐页面。

1.3. 从调谐页面选择Vacuum> pump ，打开真空泵，开始抽真空。机械泵和分子涡轮泵开始

工作。

1.4. 质谱上的真空灯开始闪烁，当系统达到真空状态，灯变为绿色，不再闪烁。如果达到

实验状态大约要抽真空12小时 1.5. 气源压力设置

氮气：90 – 120 psi 氩气：7 psi

2. 准备UPLC 系统

2.1. 准备流动相 用0.22um 的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水

和缓冲液使用不得超过二天。

2.2. 所有样品都要用流动相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用0.22um 的膜过滤。 2.

3. 初始化UPLC 泵 在Masslynx 主页面上选择 将 出现下面的画面。

MassLynx V4.0.lnk

2.4.点击 进入UPLC控制台，见下图。

2.5.湿灌注UPLC泵 选择CONTROL>Prime A/B solvent

2.6.选择A1/B1或A2/B2 输入时间1min，如果更换了流动相则输入3min,按star.

2.7.初始化UPLC自动进样器 在UPLC控制台上选择Sample Manager

2.8.选择Control >> Prime syringes

2.9.灌注进样器和洗针系统。选择Sample syringe and wash syringes

2.10.参数 Number of cycles 平时选1，但在更换洗针溶液时选5。

2.11.点击OK 开始。

2.12.完成后，UPLC可以正常的工作。

3.建立一个新的Project

如果在已有的Project下进行试验，此步可以不做。

3.1.从Masslynx主窗口选择File>Project Wizard

3.2.当出现以下窗口时，点击Yes

3.3.输入Project Name

3.4.选择Create using existing project as template,点击Browse选择新建project

的模版

4.ESI调谐 调出目标化合物的最佳质谱参数

4.1.母离子调谐

4.1.1.从Masslynx的主画面选择，打开调谐页面。选择离子模式。

4.1.2.按以下画面在ES+ source页面，输入Desolvation Gas Flow, Desolvation

Temp ，Source Temp。

4.1.3.等去溶剂气和源温度稳定。在ES+ source页面下输入参数。

4.1.4.在调谐页面下，设置去溶剂气流量为650L/hr,按“Gas”按扭，打开氮气。

4.1.

5.在质量分析器（Analyser）中选择MS。如下图：并按图中输入其它的参数。

4.1.6.打开高压，使质谱进入Operate状态。

4.1.7.在Masslynx主画面点击MS Console 进入MS控制台，点击Interactive Display.

出现以下画面：

MS控制台

4.1.8.在A瓶中放入需要调谐用的标准溶液(0.2--1ppm 不少于1ml)，在Flow State 中选

择“Combined”：

4.1.9.在Reservoir中选择A，下图中点击 冲洗和置换 A流路。

4.1.10.设置UPLC的流速（通常为0.3ml/min）和流动相的比例（通常有机相：水相=50：

50）。

4.1.11.设置Infusion Flow Rate 为5--20ul/min，点击开始注入调谐液到质谱里。

4.1.12.在ES+ source页面Function下拉菜单中选择MS scan，输入化合物M+H（正离子）

的质量数。输入合适的Cone等参数，把图中质谱峰的信号调到最强。

典型的离子源参数设置

调谐时质量分析器的设置：

z 在Analyser 页面可以调节高、低质量端的分辨率。

注：降低分辨率可以增加信号强度。

z 调节离子能量Ion Energy 使信号强度增加并得到一个好的峰型。 z 记录M/Z 峰的峰顶值，此例中为苏丹红I 的M+H 值248.7。 z 注：峰顶的M/Z 值从调谐页面中得到，而不要从MS Scan 中得到。这种方式得到的

值更加准确，可以提高的灵敏度。

4.2. 子离子调谐

母离子的参数调节好后，源的参数不要改动。在Analyser 中进行其它的参数调节：

Capillary (kV) 0.50 – 3.75ES + Capillary (kV)

0.50 – 3.0

ES -

Cone (V) 10 – 100

Extractor (V) 1 - 5 RF Lens (V) 0 - 5

Source Temperature

(°C)

110

Desolvation Temp (°C) 350 HPLC (100 to 300uL/min)

Desolvation Gas Flow

(L/hr)

300 - 1000

Cone Gas Flow (L/hr) 50 to 150

0.8 – 1.0Da FWHM

Peak Apex = 248.7