高效液相色谱法同时测定食品中10种合成着色剂
高效液相色谱法测定食品中11种合成着色剂及其铝色淀
A理但紐验-佗字分册PTCA(PART B: CHEM. ANAL.)试验与研究DOI : 10.11973/lhjy-hx202012002高效液相色谱法测定食品中11种合成着色剂及其铝色淀黄丽娟'，李道霞；，余晓琴「，李 双2,陈树兵：（1.四川省食品药品检验检测院.成都610097； 2.宁波海关技术中心，宁波315040）摘 要：食晶样品（约2.0 g ）经20 mL 石油瞇振荡除油1.0 min,采用0.1 mol • 氢氧化钠溶 液作为11种合成着色剂及其铝色淀的溶解液，采用高效液相色谱法测定样品溶液中11种合成着色剂及其铝色淀的含量。
以Waters XBridge-C **色谱柱为分离柱，采用0.02 mol • 1乙酸鞍溶液收稿日期：2020-07-30基金项目：国家卫健委食品安全国家标准立项（spaq-2016-174）；浙江省基础公益研究计划项目（LGN18B050002）；原宁波岀入境检验检疫局科技研究项目（甬K04-2017）作者简介：黄丽娟，工程师，硕士研究生，研究方向为食品安全 分析* 通信联系人。
****************和甲醇以不同比例混合的溶液为流动相进行梯度洗脱，用二极管阵列检测器进行测定。
11种合成着色剂及其铝色淀的质量浓度均在0.2〜5.0 mg • 1一7内与其对应的仪器响应值呈线性关系，测定下限（10S/N ）均为0.5 mg • kg 1 o 以空白食品样晶为基体进行加标回收试验，所得回收率为61.0%〜115 %,测定值的相对标准偏差（”=6）为0.50%〜13%。
关键词：高效液相色谱法；合成着色剂；铝色淀；食品中图分类号：0652.63 文献标志码：A 文章编号：1001-4020（2020）12-1254-07合成着色剂及其铝色淀是一类重要的食用色 素，其色彩鲜亮、不易褪色，且价格低廉，尤其受到不法商贩的青睐山。
其中，铝色淀是合成着色剂和铝离子的络合物，有别于水溶性色素，着色力及稳定性更强，在大多数溶剂中能保持粒子状和不溶性.当 pH 为3.5-9.5时其相对稳定，在这个范围以外.色素与铝键会受到破坏，色淀才会解体分离。
高效液相色谱法同时测定食品10种合成着色剂
分析与检测高效液相色谱法同时测定食品10种合成着色剂□罗长琴重庆市万州食品药品检验所摘要：在食品工业发展过程中不可避免地要使用添加剂，其中合成着色剂因其性质稳定以及色彩明亮等具有广泛的 应用空间。
人们长期食用合成着色剂对身体具有一定的危害，因此应当对此进行控制。
本文选取了一定样本与试剂，运用 高效液相色谱法同时测定了食品中含有的10种合成着色剂，得到了比较满意的实验效果。
关键词：高效液相色谱法；食品；合成着色剂1材料选择与方法1.1仪器选择与试剂本次实验中选择的仪器是高效谱相色谱仪。
合成着色剂的标液为曰落 黄、亮蓝、柠檬黄、苋菜红以及胭脂 红，为0.5 mg/mL。
80%的诱惑红为 SIGMA-ALDRICH。
甲醛是液相色谱淋 洗液，60 m L的甲醒与40 m L的甲酸 进行混合，蒸馏水与20%的柠檬溶液 进行调节，将p H值调为6。
其他选择 的试剂是分析纯。
1.2溶液配制方法进行不同浓度的标准物质储备液的配制工作，喹啉黄为0.97 mg/mL，亮蓝为0.25mg/mL，日落黄、柠檬黄、靛蓝、胭脂红、胭脂红与苋菜红为0.5 mL,新红为0.75 mg/mL，诱惑红 为0.8mg/mL,选取2m L的储备液放置到50 m L的星瓶之中，加水混合 均匀以后将其配制成标准溶液。
基于 此绘制相应的峰面积与标准曲线。
1.3样品处理方法在样品处理方法上，首先配制样 品的溶液，根据聚酰胺吸附法进行色 素的提取工作，样品浓缩之后加水进 行溶解定容，在包括赤藓红的样品中 运用50%的甲醇进行溶解定容，之后 进行HPLC分析。
1.4液相色谱分析条件本次实验中的色谱柱为Agilent-ZORBAXSB-C 5n m, 4.6 m m X 250 mm,有机相为甲I S乙腈(3 :1), 进行梯度洗脱工作，通过多通道检测，最终达到的波长：亮蓝为625 nm，靛蓝为290 nm,新红、赤藓红与苋菜红为529 nm，柠檬黄与喹啉黄为428 nm，胭脂红与诱惑红为507 nm，日落黄为483 nm。
高效液相色谱法同时测定食品中多种食品添加剂
高效液相色谱法同时测定食品中多种食品添加剂摘要：近些年来，我国社会经济水平迅速提高，人民的生活质量得到了极大的改善，在解决温饱问题的同时对食品安全的关注程度也越来越高，特别是近几年发生的多起食品安全问题，对人们的正常生活和社会稳定造成的极大影响。
食品添加剂在食品中是不可或缺的，假如食品添加剂使用不合理就会对人们的健康产生影响。
在食品的添加剂检测工作中利用传统方法存在检测不全面的问题，因此现在就需要检测人员在食品添加剂的检验中找到更加先进、高效的检测方法。
文章针对这一点提出了利用高效液相色谱法进行检测的具体方法。
关键词：高效液相色谱法；食品添加剂；检测应用引言从根本上来看，高效液相色谱法属于分离技术的范畴，其综合了分析速度快、分离效率高以及检测结果准确等优点，在化学生产、食药分析等工作中具有非常广泛的应用。
同时有些不法商贩为了获取更多的利益，在食品中加入过量添加剂，对人们的身体健康造成了巨大威胁。
此外，高效液相色谱法是在上个世纪七十年代的时候利用到食品生产行业中去的，并且在九十年代以后，国家将其作为一种标准的食品添加剂检测方式来使用，并得到了进一步的发展。
1高效液相色谱法“高压液相色谱”是高效液相色谱的另外一种别称，是色谱法的一个重要分支。
主要原理就是利用高压输液系统，将不同比例的混合剂液体装在固定相的色谱柱内，从而在柱内对液体分离，再进入检测器中进行检测，实现对样本的分析。
80%的有机化合物都会通过这种方法进行检测分析，使用范围广阔，不仅用在食品上，医学、工业、农业、法检等都会用到这种分离分析的技术。
2高效液相色谱法分析的优势2.1范围广高效液相色谱法不仅保留了传统的液相色谱的有利因素和其应用范围性，它采用了颗粒直径很小的填充剂，使绝大部分的食物都可以通过，适用多数食物的检测需求。
2.2分离速度快在实际过程中，高效液相色谱法使用的是高效液相色谱仪。
在食物输送过程中，利用高压泵使检测器在柱中直接检测分离分组，检测时间相对较短。
高效液相色谱法同时测定食品中18种食品添加剂
高效液相色谱法同时测定食品中18种食品添加剂郭长春【期刊名称】《食品安全导刊》【年(卷),期】2016(000)015【总页数】1页(P92-92)【作者】郭长春【作者单位】吉林省公主岭市产品质量计量检测所【正文语种】中文随着科学技术的不断发展，食品添加剂被应用到了食品制作当中，由此引起了一系列食品安全问题。
而液相色谱法能高效检测食品中的食品添加剂。
高效液相色谱法拥有着准确度高、分离效果好、灵敏度高等多方面优点，是协助食安部门进行监管的重要手段。
本文将为大家介绍18种食品添加剂的测定法，并结合高科技仪器来测定分析食品中添加剂的种类和用量。
目前，各类食品中最常使用的食品添加剂就是抗氧化试剂及防腐剂，抗氧化剂的作用是减缓食物被氧化的过程，延长保质时间；防腐剂主要是为了避免食品由微生物分解造成的变质现象。
各国食品添加剂的使用标准不同但是都制定了相关标准进行控制，保证食品安全。
利用高效液相色谱法进行食品添加剂的检测对食品安全监管有重大意义。
本文的模拟实验检测将选用平日里最常见的食品作为实验材料，奶制品、油脂物及面包等，分别是一些蛋白质含量高、脂肪含量高、组成复杂的食物材料。
实验中利用高效液相色谱法来精准测定实验材料中苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲（乙、丙、丁）酯以及乙氧基喹等8种食品防腐剂，以及10种被测抗氧化剂。
实验材料实验材料有奶制品、油脂物和面包，实验用到的色谱纯有甲醇、乙氰，分析纯有正己烷、盐酸、乙酸、氯化钠等物质，另外实验过程中所用到的实验分析试剂都纯度很高，符合标准，出自正规工厂。
此外，还要进行标准品的定容，标准液的储备。
实验仪器和设备配有紫外线检测器和色谱工作仪的高效液相色谱仪；德国进口的离心机和超纯水器等大型实验仪器设备；化学检测实验的基本仪器，例如，试管等。
实验方法实验材料的样品处理：①称量少量低油脂或不含油脂如面包溶解并均匀放入50mL的离心管中，之后，多次分别将棕榈酸、氯化钠饱和溶液及盐酸溶液滴加进去，充分振荡并利用超声波技术和离心仪器分层提炼再进行高效液相色谱测定；②将油脂类食品如奶粉、油炸物等充分搅拌混合后放置在离心管中，再依次不同量的加入乙氰、盐酸、氯化钠和饱和正己烷等，然后重复上述分离提取的方法，再进行有机过滤，最后可利用高效液相色谱法进行测定。
固相萃取-高效液相色谱法对食品中9种合成着色剂的测定
固相萃取-高效液相色谱法对食品中9种合成着色剂的测定作者：唐一秋来源：《现代食品·上》2019年第04期摘要：本文建立了同时检测食品中9种合成着色剂柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红及赤藓红的高效液相色谱测定方法，通过运用固相萃取技术对样品前处理方法及仪器进行改进。
该法中，9种人工合成色素线性相关系数均为0.9999，检出限为0.016～0.19mg·kg-1，加标回收率为85.1%～103%，相对标准偏差（RSD）为0.78%～1.29%。
该法准确度好，灵敏度高，简单方便，适合于同时检测食品中的9种合成着色剂。
关键词：茶饮料;合成着色剂;高效液相色谱法;固相萃取中图分类号：O657.72民以食为天，人们为了让食物色香味俱全，常常加入一些辅料，色素就是其中一类，色素可改善食品的外观，提高人们的食欲。
随着科技的发展，现如今多用合成着色剂代替天然色素。
合成着色剂以苯、甲苯、萘等化工产品为原料，经过一系列的有机反应制成，以成本低、色泽鲜艳、性质稳定等优势被广泛使用，但过量摄入存在严重的安全隐患[1]。
GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂的使用标准》，对各类食品中着色剂的限量做了明确规定，要严格控制使用范围和最大使用量，因此对食品中的合成着色剂进行准确测定具有重要意义。
1材料与方法1.1仪器与试剂1.1.1主要仪器高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器，日本岛津LC-2040;旋转蒸发器：瑞士步琦有限公司R-210;超声波清洗器：上海科导超声仪器有限公司SK8210HP。
1.1.2主要试剂及耗材柠檬黄、苋菜红、新红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝及赤藓红，浓度均为1mg·mL-1，厂家：北京海岸鸿蒙标准物质技术有限责任公司;酸性红标准溶液（1mg·mL-1）厂家：Certificateofanalysis。
甲醇：色谱纯;甲酸、乙酸铵、柠檬酸、冰乙酸及氨水，均为分析纯;实验用样品：市售瓶装果汁。
食品中10种色素的高效液相色谱同时检测方法
食品中10种色素的高效液相色谱同时检测方法李小云;赵喜玲;李琪;宋丹萍;曾慧;张宏【摘要】To establish a method for simultaneous determination 10 kinds of yellow pigments in food with high performance liquid chromatography (HPLC).The pigments were extracted with methanol from drinks,candy and cake samples.The HPLC detection conditons were methanol (A),0.02 mol/L ammonium acetate solution (B),acetonitrile (C) as the mobile phase gradient,Macherey-Nagel C18 column (4.6 mm×250 mm,5 μm) as the stationary phase,column temperature 25 ℃,the flow rate 1.0mL/min,detection wavelength 435 nm,injection volume 20 μL.The linear range of 10 kinds of pigment were 0.25~160.0 μg/mL,and the recoveries in drinks,candy,cakes samples were88.0%~103.6%,88.0%~98.3%,81.4%~106.7%.This method showed good reproducibility,sensitivity and accuracy and it could be applied for determination of 10 kinds of yellow pigments in food.%采用高效液相色谱法建立食品中10种黄色色素的检测方法.甲醇作为溶剂对饮料、糖果、糕点3类样品进行提取,甲醇(A)-0.02 mol/L乙酸铵溶液(B)-乙腈(C)为流动相,Macherey-Nagel C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)为固定相,柱温25 ℃,流速1.0 mL/min,波长435 nm,进样量20 μL.结果显示,10种色素的线性范围为0.25~160.0 μg/mL,饮料、糖果、糕点样品中各色素的加标回收率分别在88.0%~103.6%、88.0%~98.3%、81.4%~106.7%之间.该方法重现性好,灵敏度和准确度高,适用于食品中该10种黄色色素的分析.【期刊名称】《四川师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(039)006【总页数】5页(P895-899)【关键词】食用色素;非食用色素;高效液相色谱【作者】李小云;赵喜玲;李琪;宋丹萍;曾慧;张宏【作者单位】四川师范大学化学与材料科学学院, 四川成都 610066;四川师范大学化学与材料科学学院, 四川成都 610066;四川师范大学生命科学学院, 四川成都 610101;四川师范大学植物资源开发与应用研究所, 四川成都 610101;四川省眉山市动物疾病控制中心, 四川眉山 620010;四川师范大学生命科学学院, 四川成都 610101;四川师范大学化学与材料科学学院, 四川成都 610066;四川师范大学生命科学学院, 四川成都 610101【正文语种】中文【中图分类】O657.72在食品加工业中通常加入各种色素以提高食品的色泽,增加食欲.色素按其用途可分为食用色素和非食用色素.大部分食品中使用较多的是黄色色素.色素使用过程中添加过量、违规添加等现象时有发生,某些色素过量摄入会危害健康[1].因此,食品中色素的分析测定显得尤为重要.色素的检测方法主要是液相色谱法[2-4]以及液相色谱-质谱联用(LC-MS)[5-6].N. Yoshioka等[7]报道了食品中合成色素的检测方法,其中大部分为非食用色素.目前检测食品中合成色素的国家标准,基本以聚酰胺吸附法为样品前处理方法[8-9],而非食用色素的检测尚未有较为全面的国家标准.由于国家标准方法《食品中禁用物质的检测——碱性橙染料》[10]仅规定了碱性橙Ⅱ、碱性橙21、碱性橙22的分析测定;因此,针对非食用色素的分析检测还不完善.文献报道的色素处理方法较为繁杂,而能将样品前处理简单化,并且能同时检测含有天然色素、合成色素和非食用黄色色素的液相色谱方法研究较少.本文将允许添加的合成黄色色素柠檬黄、日落黄以及喹啉黄、天然色素姜黄素和非食用色素酸性间胺黄、碱性嫩黄O、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、酸性橙Ⅱ等10种黄色色素作为研究对象,建立一种能同时检测多种色素的高效液相色谱法.1.1 试剂与仪器柠檬黄(CAS:1934-21-0)、日落黄(CAS:2783-94-0)、酸性间胺黄(CAS:587-98-4)均购于AccuStandard公司,喹啉黄(CAS:8004-92-0)、姜黄素(CAS:458-37-7)、酸性橙Ⅱ(CAS:633-96-5)、碱性嫩黄O(CAS:2465-27-2)均购于Dr.Ehrenstorfer GmbH公司,碱性橙2(CAS:532-82-1)、碱性橙21(CAS:3056-93-7)、碱性橙22(CAS:4657-00-5)购于北京振翔工贸有限公司,甲醇、乙腈(均为色谱纯)购于美国BRC公司,其余试剂(分析纯)购于科密欧试剂有限公司.PDA-100液相色谱仪(美国戴安公司),Direct-Q 5型超纯水仪(美国Millipore公司),Buchi R-3型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂),BP211D型十万分之一电子天平(德国赛多利斯公司).1.2 色谱条件色谱柱:Macherey-Nagel C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);进样量:20 μL;柱温:25 ℃;流速:1.0 mL/min;检测波长:435 nm;流动相:甲醇(A)、0.02 mol/L乙酸铵溶液(B)、乙腈(C);各流动相梯度洗脱的体积分数见表1.1.3 实验方法1.3.1 标准品溶液制备准确称取各色素标准品50.0 mg于25 mL容量瓶中,甲醇溶解并定容,作为质量浓度为2.0 mg/mL的各单色素标准储备液,待用.取各单标色素的标准储备液4 mL至50 mL容量瓶,甲醇定容,得到质量浓度160 μg/mL混合储备液,待用.1.3.2 样品溶液制备称取饮料样品20.0 g,旋至近干,加入20 mL甲醇,超声20 min,离心15 min,取上层清液旋蒸至近干,甲醇定容至10 mL,溶液过0.45 μm滤膜,待测.糖果样品称取2.5 g,超纯水加热溶解后,加入10 mL甲醇,超声30 min,离心15 min,取上层清液,剩余残渣重复上述操作1次,合并2次提取液旋蒸至近干,甲醇定容至20 mL,溶液过0.45 μm滤膜,待测.糕点、冰淇淋样品称取2.5 g,先加入10 mL石油醚,充分搅拌后倒出溶液,再向残渣加入5 mL石油醚,搅拌后除去油脂干燥.再向样品中加入30 mL甲醇,超声20 min,离心15 min,取上层清液,剩余残渣重复上述操作2次,合并3次提取液旋蒸至近干,甲醇定容至10 mL,溶液过0.45 μm滤膜,待测.1.3.3 线性范围的建立取一定体积的混标储备液分别配制成质量浓度为0.25、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、40.0、60.0、100.0、160.0 μg/mL的混合标准液,在1.2色谱条件下进行分别测定.1.3.4 精密度的考察分别取0.25、10和100 μg/mL低、中、高3个质量浓度混合标准溶液按1.2项下色谱条件连续平行测定6次.1.3.5 稳定性的考察饮料、糖果和糕点样品各取1份,分别加入低质量浓度0.25μg/mL混标液,样品按1.3.2项方法处理后,按1.2所述色谱条件分别在0、6、12、24和48 h进样分析.1.3.6 重现性的考察各取饮料、糖果和糕点样品6份,分别加入质量浓度0.25μg/mL的混合标液,按1.3.2项方法制备样品溶液,按1.2项色谱条件进行分析,测定峰面积,计算出10种色素的质量浓度及RSD值.1.3.7 回收率的测定分别称取9份饮料样品20.0 g、糖果样品2.5 g和糕点样品2.5 g,根据1.3.2项样品处理,饮料、糖果和糕点样品中添加0.25、10和40μg/mL的低、中、高3个质量浓度的混合标准工作液.按1.2项色谱条件测定,计算9次的平均回收率.1.4 样品的测定分别准确称取2.50 g的糖果和糕点样品,称取20.0 g饮料样品.按1.3.2所述的前处理方法和1.2所述色谱条件对样品进行提取和色谱分析.2.1 色谱条件的确定2.1.1 检测波长的选择分别对10种色素在波长190～800 nm范围内采集紫外光谱图,其中日落黄、酸性橙Ⅱ、碱性橙21、碱性橙22等4种色素的最大吸收波长在490 nm左右,同时在430 nm左右也都有一定的紫外吸收,其余6种色素的最大吸收波长均在430 nm左右,综合各种色素的最大吸收波长,最后选择435 nm作为检测波长,在此波长下每个色素均能被检测.2.1.2 流动相的选择试验选择比较了甲醇-水体系、甲醇-缓冲盐体系共5种溶液.结果发现:流动相仅使用甲醇-水溶液时,10种色素很难完全分离;使用甲醇-乙酸铵溶液作为流动相时,10种色素能实现基本分离;但碱性橙21、酸性橙Ⅱ和碱性橙2等3种色素保留时间较接近.当加入少量乙腈时,分离效果更好,碱性橙21和酸性橙Ⅱ能实现完全分离.故选择甲醇-乙腈-0.02 mol/L乙酸铵溶液组成流动相体系. 2.1.3 pH的选择试验分别比较了10种色素在pH=5.0、7.1、5.8时的分离情况.结果表明:在pH=5.8时,10种组分分离效果较理想;在pH=5.0时,日落黄、柠檬黄不能被很好地洗脱下来,部分色谱峰完全重叠;在pH=7.1时,喹啉黄与杂质峰完全重叠,碱性嫩黄O与碱性橙21、碱性橙21与酸性橙Ⅱ、碱性橙22与姜黄素不能达到完全分离.故选取pH=5.8的0.02 mol/L乙酸铵溶液.2.1.4 流速的选择试验分别考察流速为0.8、1.0、1.2 mL/min时10种混合标准物质的出峰情况.当流速为0.8 mL/min时,碱性橙21和酸性橙Ⅱ之间未能实现完全分离;流速为1.0 mL/min时,各组分之间均能实现完全分离,且分离度大于1.5;流速为1.2 mL/min时,碱性橙21和酸性橙Ⅱ分离度未达到1.5以上.综合考虑最终确定流速为1.0 mL/min.2.1.5 柱温的选择本试验分别考察了20、25、30 ℃对10种色素分离情况的影响.结果表明:柱温在20 ℃时酸性橙Ⅱ和碱性橙2分离度未能达到1.5以上.柱温为25 ℃时,各组分均能实现完全分离,分离度在1.6以上.柱温在30 ℃时,碱性橙21与酸性橙Ⅱ色谱峰完全重叠,碱性橙2包含杂质峰.综合考虑选择最适宜的柱温为25 ℃.2.2 方法学的验证2.2.1 线性范围的建立在选定的最佳条件下,10种色素的线性范围、线性方程、相关系数、检出限(S/N=3)、定量限(S/N=10)见表2.该10种色素在质量浓度0.25～160 μg/mL范围内线性关系良好.2.2.2 精密度 10种色素的标准溶液在1.2色谱条件下测定峰面积,计算RSD值,10种色素的RSD值均小于5%;结果表明精密度良好.2.2.3 稳定性按1.2所述色谱条件分别在0、6、12、24、48 h进样分析.结果表明:饮料、糖果和糕点样品中色素的质量浓度随时间无明显变化,表明样品在48 h内稳定性良好.2.2.4 重复性按1.2所述色谱条件进行分析,饮料、糖果和糕点样品中色素的RSD值在1.5%～4.9%范围内(n=6),结果表明本实验方法重复性良好.2.2.5 回收率的测定按1.2项色谱条件平行测定3次,计算各样品的回收率.饮料、糖果、糕点样品中各色素的加标回收率分别在88.0%～103.6%、88.0%～98.3%、81.4%～106.7%之间.结果表明本实验方法数据准确,此方法可行.2.3 样品处理方法的确定2.3.1 提取溶剂的选择试验选取了甲醇、甲醇-丙酮、乙腈-正己烷、乙醇-氨水-水(质量浓度比为：80∶1∶19,下同)4种提取溶剂作为比较.考察加入混标的饮料样品均能提取出色素.其中甲醇和乙醇-氨水-水的提取效果比甲醇-丙酮、乙腈-正己烷好,样品经测定后发现甲醇溶剂能把10种色素全部提取出来,并且杂峰少;乙醇-氨水-水溶剂提取出的色素在柠檬黄的保留时间处有干扰峰.考察含有混标的糖果样品,甲醇和乙醇-氨水-水溶剂提取效果较为理想,其中甲醇提取的10种色素能实现较好的分离.乙醇-氨水-水提取的色素,未检测到姜黄素,且酸性橙Ⅱ和碱性橙的峰重叠.考察加入混标的糕点样品时,甲醇和甲醇-丙酮溶剂提取后,溶液澄清,经检测甲醇-丙酮提取溶剂的提取效果比甲醇溶剂的提取效果稍差.综合考虑,本实验选取甲醇作为饮料、糖果、糕点样品的提取溶剂.2.3.2 提取体积的考察实验以甲醇为提取溶剂,当饮料样品提取体积为20 mL时,提取的柠檬黄质量浓度最高.提取体积逐渐增大时,其质量浓度有所降低.糖果样品中柠檬黄的提取量随提取体积的增加呈下降趋势.糕点样品在提取体积增加到30 mL时,提取效果明显增加;继续增大提取体积时,提取结果有所下降.综合考虑,饮料、糖果样品的提取体积为20 mL,糕点样品的提取体积为30 mL,结果见图1.2.3.3 提取次数的考察实验分别考察了1～4次不同提取次数对添加有柠檬黄色素的饮料、糖果和糕点3种样品提取效果的影响,结果见图2.结果表明饮料样品的提取效果随提取次数增加呈小幅下降.糖果样品分别提取2和3次,提取的柠檬黄质量浓度基本一致,当增加到提取4次后,柠檬黄质量浓度降低;糕点样品随着提取次数增加呈上升状态,当提取次数达到3次以上,柠檬黄质量浓度不再增加.故饮料样品提取1次,糖果样品提取2次,糕点样品提取3次.2.3.4 提取时间的考察实验考察了10、20、30和40 min不同提取时间对添加有柠檬黄色素的饮料、糖果和糕点样品提取效果的影响,结果见图3.当饮料和糕点样品提取时间为20 min时,柠檬黄质量浓度达到最大值,此后随时间的增加而减小.糖果样品中柠檬黄质量浓度随提取时间的增加呈先增大后减小的趋势,当提取时间为30 min时柠檬黄达到最大值.因此,确定饮料和糕点样品的提取时间为20 min,糖果样品为30 min.2.4 样品测定及结果在最佳实验条件下,对样品进行分析测定,实验结果见图4.饮料、糖果、糕点样品检测结果表明,碳酸饮料基本都含有柠檬黄和日落黄色素中的1种或2种,小部分果蔬汁饮料检测含有少量柠檬黄或日落黄.绝大多数糖果含有柠檬黄,糕点样品的馅儿料中多添加有柠檬黄或日落黄2种人工合成色素,样品中均未检测到超标或违法添加非食用色素的产品.本文在实验中选用Kromasil C18柱、Macherey-Nagel C18色谱柱进行比较.2种色谱柱初始时都能对10种色素实现良好地分离,但Kromasil C18色谱柱使用一段时间后柱效明显下降,而Macherey-Nagel C18色谱柱则表现出良好的性能,并且各色素之间的分离度良好,故选择Macherey-Nagel C18色谱柱.【相关文献】[1] 宋丹萍,张宏,李琪. 国内外食用色素标准的比较及检测方法的研究进展[J]. 食品科学,2014,35(3):295-300.[2] 范文锐,吴青,劳扬,等. 高效液相色谱法同时测定食品中7种非食用色素[J]. 分析化学,2012,40(2):292-297.[3] 张婉,王覃,杜宇,等. 超高效液相色谱法同时测定饮料中5种人工合成色素[J]. 食品科学,2011,32(4):177-180.[4] 杨琳,陈青俊,丁献荣,等. 反相高效液相色谱法测定食品中的多种黄色工业染料[J]. 食品工业科技,2011,32(2):350-352.[5] FENG F, ZHAO Y S, YONG W, et al. Highly sensitive and accu-rate screening of 40 dyesin soft drinks by liquid chromatogram-phyelectrospray tandem mass spectrometry[J]. J Chromatography,2011,B879(20):1813-1818.[6] 沈磊. 高效液相色谱-串联质谱测定食品中工业色素的研究[D]. 石家庄:河北科技大学,2013.[7] YOSHIOKA N, ICHIHASHI K. Determination of 40 synthetic food colors in drinks and candies by high-performance liquid chromatography using a short column with photodiode array detection[J]. Talanta,2008,74(5):1408-1413.[8] 食品中合成着色剂的测定:GBT 5009.35—2003[S]. 北京:中国标准出版社,2003.[9] 刘艳琴,王浩,杨红梅,等. 固定相萃取-HPLC法同时测定糕点中8种人工色素[J]. 食品研究与开发,2010,31(2):139-142.[10] 食品中禁用物质的检测-碱性橙染料高效液相色谱法:GB/T 23496—2009[S]. 北京:中国标准出版社,2009.。
食品中合成着色剂的测定方法︱食品中合成着色剂的检测分析方法
食品中合成着色剂的测定方法︱食品中合成着色剂的检测分析方法1、主题内容与适用范围本标准规定了食品中合成着色剂的测定方法。
本标准适用于食品中合成着色剂的测定。
第一篇高效液相色谱法(第一法)2、食品中合成着色剂的测定原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液－液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱别离，根据保存时间定性和与峰面积比拟进行定量。
最小检出量，新红5ng、柠檬黄4ng、苋菜6ng、胭脂红8ng、日落黄7ng、赤藓红18ng、亮蓝26ng，当进样量相当时最低检出浓度分别为；；；；；；。
3、食品中合成着色剂的测定试剂正己烷。
盐酸。
乙酸。
甲醇：经滤膜(0.5?m)过滤。
聚酰胺粉(尼龙6)：过200目筛。
乙酸铵溶液(0.02mol/L) ：称取乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0.45?m)过滤。
氨水：量取氨水2mL，加水至100mL，混匀。
氨水－乙酸铵溶液(0.02mol/L) ：量取氨水，加乙酸铵溶(0.02mol/L)至1000mL，混习。
甲醇－甲酸(6＋4)溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。
柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸(C6H8O7·H2O)，加水至100mL，溶解混匀。
无水乙醇－氨水－水(7＋2＋1)溶液：量取无水乙醇70mL、氨20mL、水10mL，混匀。
三正辛胺正丁醇溶液(5%)：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。
饱和硫酸钠溶液。
硫酸钠溶液(2g/L)。
pH6的水：水加柠檬酸溶液调pH值到6。
合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各，100mL容量瓶中，加pH6水到刻度。
配成水溶液(1.00mg/mL)。
3．17合成着色剂标准使用液：临用时上述溶液〔或将3．16〕加水稀释20倍，经滤膜〔0．45?m〕过滤。
配成每毫升相当50．0?g的合成着色剂。
4、食品中合成着色剂的测定仪器高效液相色谱仪，带紫外检测器，254nm波长。
高效液相色谱法测定食品中10种合成着色剂的含量
高效液相色谱法测定食品中10种合成着色剂的含量高云【期刊名称】《食品安全导刊》【年(卷),期】2016(000)015【总页数】2页(P95-96)【作者】高云【作者单位】广东省食品检验所【正文语种】中文本文建立了一种使用高效液相色谱仪检测10种合成着色剂的方法。
前处理使用乙醇和氨水的提取液，样品处理时间极大缩短。
利用C18色谱柱，使用高效液相色谱紫外检测器进行检测，10种合成着色剂色谱分为两个波长段480 nm和629 nm，实现10种目标物完全分离。
方法简便，具有较高的准确度和灵敏度。
着色剂又被称为食品色素，以食品着色为主要目的，是赋予和改善食品色泽的物质。
可是有些不良生产企业违禁添加着色剂，长期食用此类产品将严重危害人体健康。
尤其近几年发生的染色馒头、染色鱼的食品事故，更让消费者产生担忧。
为了保障消费者安全，维护我国食品行业健康发展，本文研究了食品中10种合成着色剂的检测方法，更加简便、快速、易操作，为相关人员快速准确检测着色剂提供了参考。
仪器本实验使用岛津高效液相色谱仪LC- 20AT。
具体配置为在线脱气机，SIL-20A自动进样器，CTO-20A柱温箱，CBM-20A系统控制器，LabSolutions Ver.5.53色谱工作站。
分析条件1 液相色谱条件色谱柱流动相：A-0.02 mol/L乙酸铵；B-甲醇流速：1.0 mL/min进样体积：10 μL柱温：40℃洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为10%，时间程序见表1。
样品制备标准溶液制备：用超纯水将标准储备液稀释成1 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL不同浓度的10种混合合成着色剂标准曲线工作液。
样品前处理方法：取5 g食品，加入提取液（乙醇+氨水）30 mL，超声30 min 后，过滤到鸡心瓶中，旋转蒸发至近干，用超纯水定容到5 mL，0.45 μm滤膜过滤后，上机待测。
标准样品色谱图10种混合着色剂色谱图分为两个波长段480 nm和629 nm，如图1和图2所示，每个标准物质的分离时间为1 min以上，分离程度较好。
食品中多种合成色素的反相高效液相色谱法测定
作者单位:山东省济南市疾病预防控制中心卫生检验科,250013作者简介:王春荣(1972-),女,济南人,主管技师,硕士,主要从事食品理化检验及液相方法开发研究。
文章编号:100120580(2005)0320359202 中图分类号:O 65717+2 文献标识码:B【检验技术】食品中多种合成色素的反相高效液相色谱法测定王春荣,张济,刘岚铮 我国批准使用的食用合成色素有21种,其中最常见的有柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝等〔1〕。
本文用反相高效液相色谱法实现了上述5种色素的同时测定,结果令人满意。
现报告如下。
1 实验部分111 主要仪器 美国Waters Aliance 2695高效液相色谱系统(带有自动进样器、四元梯度泵);Waters 2996二极管阵列检测器(DAD )和Empower 色谱信息管理系统。
112 主要试剂 甲醇;0102mol/L 乙酸铵溶液;甲酸;乙醇;氨水;聚酰胺粉(50目);5种合成色素(柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝)标准溶液由国家标准物质中心提供。
以上试剂除甲醇为色谱纯外,均为优级纯,且均需经0145μm 滤膜过滤后方可使用。
113 色谱条件 色谱柱:Waters Symmetry RP 18;150mm ×319mm (5μm );:254nm ;柱压力:1110～1214mPa ;进样量:10μl ;柱温:室温;流动相:0102mol/L 乙酸铵溶液-甲醇(梯度洗脱);流量:017ml/min 。
114 样品制备 (1)样品选取:选取5个有代表性的实际样品,1#吸的果冻,2#青苹果汁,3#柠檬味碳酸饮料,4#香橙果酱,5#苹果味碳酸饮料;(2)样品处理:参照G B/T 5009135-1996。
2 结果与讨论211 梯度洗脱条件的选择 为了利于色谱峰的分离,选用0102mol/L 乙酸铵溶液与甲醇进行梯度洗脱。
最初5min内,如甲醇浓度变化过快,柠檬黄和苋菜红不能很好的分离,采用甲醇首先缓慢上升而后快速上升,但总时间仍保持不变的方法,使5种色素得到很好的分离且灵敏度均有一定程度的提高。
液相色谱法测定食品中合成着色剂
液相色谱法测定食品中合成着色剂作者：***来源：《食品安全导刊·下》2024年第05期摘要：目的：建立一种液相色谱法测定食品中合成着色剂的方法。
方法：用乙醇氨水溶液提取食品中的合成着色剂，经固相萃取柱净化后，用液相色谱仪（配二極管阵列检测器）测定，外标法定量。
结果：11种合成着色剂在0.2～10.0 μg·mL-1线性关系良好，线性相关系数为0.999 4～1.000 0，加标回收率为94.2%～109.6%，相对标准偏差在0.55%～5.52%。
柠檬黄、喹啉黄、日落黄、胭脂红、新红和赤藓红的检出限均为0.5 mg·kg-1，定量限均为1.5 mg·kg-1；苋菜红、诱惑红、亮蓝、酸性红和靛蓝的检出限均为0.3 mg·kg-1，定量限均为1.0 mg·kg-1。
结论：该方法的重复性好、灵敏度高、实用性强，可以同时测定食品中多种合成着色剂的含量。
关键词：合成着色剂；液相色谱法；固相萃取Determination of Synthetic Colorants in Food by Liquid ChromatographyZHU Xiaolei（Guangdong Dongguan Quality Supervision & Testing Center， Dongguan 523000， China）Abstract： Objective： To establish a method for the determination of synthetic colorants in food by liquid chromatography. Method： The synthetic colorants in food were extracted with ethanol ammonia solution， purified by solid phase extraction column， determined by liquid chromatography （ with diode array detector ）， and quantified by external standard method. Result： The linear range of 11 synthetic colorants was 0.2～10.0 μg·mL-1， the linear correlation coefficient was 0.999 4～1.000 0， the recovery rate was 94.2%～109.6%， and the relative standard deviation was 0.55%～5.52%. The detection limits of tartrazine， quinoline yellow， sunset yellow， carmine， new red and erythrosine were 0.5 mg·kg-1， and the limits of quantification were 1.5 mg·kg-1. The limits of detection of amaranth， allura red， brilliant blue， acid red and indigo were 0.3 mg·kg-1， and the limits of quantitation were1.0 mg·kg-1. Conclusion： The method has good repeatability， high sensitivity and strong practicability， and can simultaneously determine the content of various synthetic colorants in food.Keywords： synthetic colorants; liquid chromatography; solid-phase extraction着色剂在食品加工过程中可以改善食品的口感和外观，但过量使用会对人们的健康造成不良影响。
高效液相色谱法同时测定榨菜中的10种食品添加剂
高效液相色谱法同时测定榨菜中的10种食品添加剂黄海龙;庄莉;崔群;孙伟强【摘要】建立了高效液相色谱法直接测定榨菜中的防腐剂、甜味剂、合成着色剂的方法.采用C18柱以甲醇-乙酸按(0.02 mot/L)为流动相,紫外检测波长为230,254 nm,可在25 min内将苯甲酸、山梨酸、脱氮乙酸、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、糖精钠、乙酰磺胺酸钾(安赛蜜)、天门冬酰苯丙胺酸甲酯(阿斯巴甜)、柠檬黄、日落黄完全分离,测定结果的相对标准偏差为1.1%-3.3%(n=3),回收率为96.6%-99.4%.%A method was developed for simultaneous determination of food additives in pickled mustard by high performance liquid chromatography (HPLC) directly. The analysis was performed on aC18 column using methanol - ammonium acetate (0.02 mol/L) as mobile phase, and ultraviolet detection wavelength was 230, 254 nm. Benzoic acid, sorbic acid, dehydroacetic acetate, ethyl p-hydroxy benzoate, propyl p-hydroxyl benzoate, saccharin sodium, acesulfame potassium (acesulfame-K) , L-aspartyl-L-phenyl-alanine methyl ester (aspartame), tartrazine and sunset yellow were separated completely in 25 minutes. The RSD of determination results were in the range of 1. 1 % -3.3%(n=3), and the recoveries were in the range of 96.6% -99.4%.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2011(020)005【总页数】3页(P20-22)【关键词】高效液相色谱;榨菜;食品添加剂【作者】黄海龙;庄莉;崔群;孙伟强【作者单位】桐乡市产品质量监督检验所,桐乡,314500;桐乡市产品质量监督检验所,桐乡,314500;桐乡市产品质量监督检验所,桐乡,314500;桐乡市计量检定测试所,桐乡,314500【正文语种】中文高效液相色谱(HPLC)是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分析分离技术,它是在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱的理论，采用高压输送流动相和高灵敏度检测器,发展而成的现代液相色谱分析方法, 具有分离效率高、选择性好、分析速度快、检测灵敏度高、操作自动化高和应用范围广等特点[1]。
高效液相色谱法同时测定肉制品中10种水溶性合成色素
分析检测
高效液相色谱法同时测定肉制品中 10 种水溶性合成色素
摘 要：建立了一种高效液相色谱法同时检测 肉制品中日落黄、柠檬黄、苋菜红、胭脂 红、诱惑红、新红、酸性红、赤藓红、靛蓝、亮蓝等 10 种水溶性合成色素的分析方法。样品经提取净化后 注入高效液相色谱仪 , 根据保留时间定性 , 外标峰面 积法定量。 关键词：水溶性合成色素；高效液相色谱法；肉制品 色素分为天然色素和合成色素，相较于前者，化 学方法合成的合成色素成本低，化学性质稳定，色彩 亮丽， 配色方便，易溶解调色 [1,2]。用于食品中， 可以改善食品的外观，提高消费者的购买欲，因此色 素被广泛用于肉制品、糖果制品、罐头等食品中。过 多地摄入色素可致畸致癌，我国对色素使用种类和含 量有严格的限制。GB 2760-2014《食品安全国家标 准食品添加剂使用标准》规定了肉制品中可允许使用 色素的含量，但由于生产环节中生产人员操作不当等 原因，色素滥用或超标使用情况时有发生，因此色素 含 量 的 测 定 也 是 食 品 安 全 监 控 不 可 缺 少 的 一 部 分， GB 5009.35-2016 食品中合成着色剂的测定方法操 作繁琐，适用范围窄，且不能使赤藓红与其他色素一 起测定，适用范围不包括肉制品及水果罐头等产品， 检验色素种类少。针对这些问题，实验室在参考 GB 5009.35-2016、 GB/T 9695.6-2008、GB/T 219162008 的基础上，优化了肉制品的检测方法，改进提取 方法和净化方法，建立的方法可同时测定肉制品中柠 檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红、新红、酸 性红、赤藓红、靛蓝、亮蓝十种合成着色剂。
加标回收：选用空白肉制品中做 1、5、20mg/ kg 三个水平的加标，按建立的实验方法测定，平行测 定 5 次，外标法定量，回收率在 83.4％～ 98.5％之
高效液相色谱法同时测定多种食品添加剂
收稿日期:2000207217基金项目:国家出入境检验检疫局科研基金资助项目(K03121999)作者简介:陈青川(19692),男,博士,工程师,电话:(010)85771629,E 2mail :qchchen @hotmail 1com 。
高效液相色谱法同时测定多种食品添加剂陈青川, 于文莲, 王 静(中国进出口商品检验技术研究所,北京100025)摘要:采用反相高效液相色谱法,一次进样、同时测定食品中的人工合成甜味剂(糖精钠、安赛蜜、甜味素)、防腐剂(苯甲酸、山梨酸)、咖啡因、可可碱和茶碱。
以Alltech Econosphere C 18柱(150mm ×416mm i.d.,3μm )为分离柱,10mmol/L NaH 2PO 4(p H 4100)2乙腈(体积比为90∶10)为流动相,采用二极管阵列检测器进行检测。
整个分离过程在23min 内完成。
样品平均加标回收率为7815%～10712%。
方法也可用于药品分析。
关键词:高效液相色谱法;食品添加剂;人工合成甜味剂;防腐剂;咖啡因;可可碱;茶碱中图分类号:O658 文献标识码:A 文章编号:100028713(2001)022*******1 前言 近年来,由于消费者对于食品的安全性日益关注,食品中各种食品添加剂,特别是人工合成甜味剂(主要是糖精钠(SA )、乙酰磺胺酸钾(安赛蜜,A K )、天门冬酰苯丙氨酸甲酯(甜味素,ASP ))和防腐剂(苯甲酸(BA )、山梨酸(SOR ))的使用情况越来越受到人们的重视。
此外,咖啡因(CA )、可可碱(TB )和茶碱(TP )也广泛地存在于各种食品当中[1]。
因此,建立一种能够同时测定食品中以上多种食品添加剂的方法十分必要。
目前,大多数分析方法只能测定上述物质中的1种或少数2～3种,能够同时测定3种以上物质的方法较少。
所用的方法主要是高效液相色谱法[2～9]、离子色谱法[10]和毛细管电泳法[11,12]。
固相萃取-高效液相色谱法同时测定蔬菜制品中11种合成着色剂
固相萃取-高效液相色谱法同时测定蔬菜制品中11种合成着色剂刘剑波;余莲芳;朱明扬;高炜【摘要】建立一种固相萃取-高效液相色谱法同时测定蔬菜制品中11种人工合成着色剂的方法.蔬菜制品中的合成着色剂经25％的氨水乙醇提取,弱阴离子固相萃取小柱Waters Oasis WAX净化,Agilent 5 TC-C18(2)为分离柱,甲醇:乙腈(4:1,体积比)-0.02 mol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,用二极管阵列检测器多波长检测,外标法定量.结果显示,11种色素在0.2μg/mL～40μg/mL范围内具有良好的线性,在1、2、10 mg/kg 3个加标水平下的平均回收率为87.5％～102.6％,相对标准偏差为1.5％～5.8％,检出限在5μg/L～45μg/L.该方法可用于蔬菜制品中人工合成着色剂的日常检测.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2018(039)023【总页数】6页(P141-146)【关键词】固相萃取;高效液相色谱;蔬菜制品;人工合成着色剂【作者】刘剑波;余莲芳;朱明扬;高炜【作者单位】岳阳市食品质量安全监督检验中心,湖南岳阳414000;岳阳市食品质量安全监督检验中心,湖南岳阳414000;岳阳市食品质量安全监督检验中心,湖南岳阳414000;岳阳市食品质量安全监督检验中心,湖南岳阳414000【正文语种】中文着色剂即使食品赋予色泽和改善食品色泽的物质。
食用着色剂分为人工合成着色剂和天然着色剂两大类。
人工合成着色剂由于着色力好，色彩鲜艳，色调多样，成本低廉等原因在食品中被广泛使用[1-2]。
中国允许在食品中添加的人工合成着色剂依据GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》有：柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红、喹啉黄、赤藓红共11种[3]。
人工合成着色剂种类繁多，人体摄入超过一定量，可引起慢性中毒，致突变性、致畸性、致癌性等风险增加。
高效液相色谱法同时测定饮料中十种着色剂
品 与 发
酵 科 技
Ｆ ｏ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ Ｆ ｅ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ
第 ４ ９卷 （ 第 ３期 ） Ｖ ｏ １ ． ４ ９ ， Ｎｏ ． ３
－ ＿＿＿
Ｉ Leabharlann 口同 效液相色谱法 同时测定饮料 中十种着色剂
易声 伟 ， 朱永红 ， 屠 大伟 ， 龚迎 昆 ， 赵 博
Ｔ ｈ ｅ ｔ ｅ ｎ ｋ ｉ ｎ ｄ ｓ ｏ ｆ ｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ｅ ｔ ｉ ｃ ｃ ｏ ｌ ｏ ｕ ｒ ｓ ｈ ａ ｄ ｇ ｏ ｏ ｄ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｉ ｔ ｙ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｏ ｆ ０ ． ８ － ４ ０ ｍｇ ／ Ｌ． ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｅ ｆ ｆ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ（ ｒ ）ｗａ ｓ
关键 词 ： 高效 液 相 色谱 法 ： 着 色剂 ： 饮 料
中图分类号： Ｔ Ｓ ２ ０ ７ ． ３ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ４ — ５ ０ ６ Ｘ（ ２ ０ １ ３ ） ０ ３ — ０ ０ ６ ８ — ０ ０ ０ ４
Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｔｅ ｎ Ｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ｅ ｔ ｉ ｃ Ｃｏ ｌ ｏ ｕ ｒ ｓ ｉ ｎ Ｄｒ ｉ ｎ ｋ ｓ ｂ ｙ ＨＰ ＬＣ
ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｔ ｈ ａ ｎ ０ ． ９ ９ ９． ａ ｎ ｄ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｙ ｗ ａ ｓ ９ ２ ． ０— １ ０ ８ ． ０ ％ ．Ｔ ｈ ｉ ｓ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗ ａ ｓ ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｅ ，ｅ ａ ｓ ｙ ｔ ｏ ｏ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｅ ，ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｈ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ａ ｌ ｓ ｏ ｇ ｏ ｏ ｄ， ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ａ ｔ ｅ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｌ ｉ ａ ｂ ｌ ｅ ．Ｔ ｈ ｉ ｓ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｈ ａ ｓ ｍｅ ｔ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｑ ｕ ｉ ｒ ｅ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｆ １ ０ ｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ｅ ｔ ｉ ｃ
高效液相色谱法同时测定化妆品中的10种合成着色剂
（ Ｃ ． Ｉ ． ６ １ ５ ５ ４ ） 、 苏 丹红 Ⅱ （ Ｃ． Ｉ ． １ ２ １ ４ ０ ） 、 苏 丹 红 Ⅳ （ Ｃ ． Ｉ ． ２ ６ １ ０ ５ ） 和 分 散 黄 ３（ Ｃ ． Ｉ ． １ １ ８ ５ ５ ） 等； 美国 Ｆ Ｄ Ａ
规定禁 止 颜 料 红 ５ ７ （ Ｃ ． Ｉ ． １ ５ ８ ５ ０，Ｄ ＆ Ｃ Ｒ ｅ ｄ Ｎ ｏ ． ７）
移取 适量 的标 准 储 备 液 ， 用 甲 醇 稀 释 成 所 需 浓
１ ０ ０ ｍｇ ／ Ｌ的标准 储备 溶 液 ； 苏丹 红 Ⅱ、 苏 丹 红 Ⅳ用 Ｔ Ｈ Ｆ溶解 并 配 制 成 ５ ０ ０ ｍｇ ／ Ｌ的标 准储 备 溶 液 ； 罗
丹 明 Ｂ、 酸性 黄 ３ ６ 、 酸性紫 ４ ９用 甲 醇 溶 解 并 配 制 成 １ ｇ ／ Ｌ的 标 准 储 备 溶 液 ； 分 散 黄 ３和 溶 剂 蓝 ３ ５用 甲
谱 法 因其 高灵 敏度 以及 分析 速度 快等 特点 而被 广泛
应 用 于 化 妆 品 中 有 害 物 质 的 分 析 测 定 。 目前 已 有 的 研 究 主 要 针 对 一 些 水 溶 性 色 素 ’ 、 苏 丹
醇溶 解 并 配 制 成 ５ ０ ０ ｍｇ ／ Ｌ的标 准 储 备 溶 液 ， 密 封 避光 于 ４℃下保存 。
用于 眼部 化妆 品。 近几 年 ， 我 国 出 口到 美 国 和 欧 盟
９ ０ ． ５ ％） ， 溶剂 蓝 ３ ５ （ Ｓ ｏ ｌ ｖ ｅ ｎ ｔ Ｂ ｌ ｕ ｅ ３ ５ ， 纯度 ９ ９ ． ０ ％）
均 购 自德 国 Ｄｒ ．Ｅ ｈ ｒ ｅ ｎ ｓ ｔ ｏ ｒ ｆ ｅ ｒ公 司 。 颜 料 红 ５ ３ ： １ （ Ｃ ． Ｉ ． １ ５ ５ ８ ５ ： １ ） 与颜料 红 ５ ３（ Ｃ ． Ｉ ． １ ５ ５ ８ ５ ） 的 阴 离 子
食品中10 种色素的高效液相色谱同时检测方法
Analysis and Testing 分析检测
食品中 10 种色素的高效液相色谱同时检测方法
Simultaneous Determination of 10 Pigments in Food by High Performance Liquid Chromatography
2 食品色素的概述
色素主要是以为食品上色为目的添加的食品添加 剂，食品添加剂也被称作着色剂，色素可以分为不同 类型，按照性质与来源可以分为天然色素与人工合成 色素。天然色素是运用技术手段从植物或动物身上所 提取的色素，其主要优势是色彩自然、安全无毒，相 叶黄素，部分黄酮类色素也是有生理活 性功能的。食用含有叶黄素的食品，可以有效降低患 白内障的概率，减少老年性视网膜黄斑变性，叶绿素 铜钠盐作为食品添加剂，属于叶绿素衍生物，主要功 能是抗菌消炎、补血、造血，叶绿素在一定范围内也 可以抑制癌细胞的生成。而黄酮类色素也可以起到抗 过氧化与抗氧化的作用，其对于心血管疾病的预防有 一定的作用。天然色素由于提取成本比较高，产量比 较低，着色不均匀等，厂家很少使用，而是使用人工 合成色素代替，人工合成色素成本低、性质稳定，已 经被很多商家运用。人工合成色素按照其化学结构可 以分为三苯甲烷、非偶氮类、偶氮类，而目前市场上 使用的合成色素大部分是偶氮类，在其加工过程中， 经常会使用重金属，会对人体健康产生危害，因此， 需要对食品色素加强检测 [2]。
Key words：Food; 10 kinds of pigments; High performance liquid chromatography
中图分类号：TS207.3；O657.7+2
食品中10种色素的高效液相色谱同时检测方法
Ｂ Ｒ Ｃ限公 司．
Ｐ Ｄ Ａ一１ ０ ０液 相 色谱仪 （ 美 国戴安 公 司 ） ， Ｄ ｉ ｒ ｅ ｃ ｔ
—
Ｑ ５型超 纯水 仪 （ 美 国 Ｍｉ ｌ ｌ ｉ ｐ ｏ ｒ ｅ公 司） ， Ｂ ｕ ｅ ｈ ｉ Ｒ一
（ ４ ． ６ Ｉ Ｂ ｍ× ２ ５ ０ １ Ｔ Ｉ ｍ， ５ ） 为 固定 相 ， 柱温 ２ ５℃ ， 流速 １ ． ０ ｍ Ｌ ／ ｍ ｉ ｎ ， 波长 ４ ３ ５ ｎ ｍ， 进样 量 ２ Ｏ Ｌ结果显示 ， １ ０
种 色素的线 性范 围为 ０ ． ２ ５—１ ６ ０ ． ０ ｇ ／ ｍＬ ， 饮料、 糖果、 糕点 样 品中各 色素 的加 标 回收率分 别在 ８ ８ ． ０ ％一 １ ０ ３ ． ６ ％、 ８ ８ ． ０ ％ 一 ９ ８ ． ３ ％、 ８ １ ． ４ ％ ～１ ０ ６ ． ７ ％之 间． 该方法重现性好 ， 灵敏度和准确度高 ， 适 用于食 品中该 ｌ Ｏ
８ ０ ０ ４— ９ ２— ０ ） 、 姜黄素（ Ｃ Ａ Ｓ ： ４ ５ ８—３ ７—７ ） 、 酸性 橙 Ⅱ（ Ｃ Ａ Ｓ ： ６ ３ ３—９ ６— ５ ） 、 碱性嫩 黄 ０（ Ｃ Ａ Ｓ ： ２ ４ ６ ５—２ ７ ２ ） 均购于 Ｄ ｒ ． Ｅ ｈ ｒ ｅ ｎ ｓ ｔ ｏ ｒ ｆ ｅ ｒ Ｇ ｍｂ Ｈ公司 ， 碱性橙 ２
家 标准 ． 由于 国家 标 准 方 法 《 食 品 中禁 用 物 质 的 检 测——碱性橙染料》 ¨ 刨 仅规定 了碱性橙 Ⅱ、 碱性橙 ２ １ 、 碱性橙 ２ ２的分 析 测 定 ； 因此 ， 针 对 非 食 用 色 素 的分析 检测 还不 完善 ． 文 献报 道 的色 素处 理 方 法较
Ｎｏ ｖ．， ２ ０１ ６ Ｖｏ １ ． ３ ９． Ｎｏ ． ６
高效液相法同时测定粉条中10合成着色剂
高效液相法同时测定粉条中10合成着色剂摘要】建立快速的高效液相法同时测定粉条中10种合成着色剂的方法。
AgelaC18柱分离，甲醇：乙酸铵（0.02mol/L）为流动相。
在0.50～105.00ug/L范围内10种着色剂的质量浓度均与色谱峰面积呈良好的线性。
方法检出限为0.01～0.3μg/kg，加标回收率为91.89～102.80%，测定结果的相对标准偏差为2.0%～8%（n=5）。
该方法简单、准确、快速，适用于粉条中合成着色剂的定量分析。
【关键词】高效液相色谱；合成着色剂；粉条【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）34-0394-02Simultaneous determination of 10 synthetic colorants in vermicelli with high performance liquid chromatographyYufeng Ma,Yunhui Zhao, Huang Wen, Ren Jie,Liu Bin,Din Wei.Han zhong institute for food and drug control, Han zhong 723000, PR China【Abstract】To establish a simple method for the determination of ten kinds of synthetic colorant invermicelli at the same time. samples were extracted by ultrasonic processing with water. Sample were separated by liquid chromatography with carbinol and acetic ammonium solution (0. 02 mol / L) mixture as mobile phase.The calibration curves showed a good linearity with correlation coefficients from 0. 9990 to 1. 000 0. The detection limit was from 0. 01 to 0. 3 μg / kg. The recovery of the method wasfrom91.89～102.80%,and the relative standard deviation (RSD) was from 2.0%～8%（n=5）.The method is simple, and accurate,fast,and can be used to accurate detection of synthetic colorants in vermicelli .【Key words】 High performance liquid chromatography( HPLC);Synthetical colour;Vermicelli人工合成着色剂主要以苯、甲苯、萘等化工产品为原料合成，其成本低、色泽鲜艳、着色力强、易溶解，易调色，故常用于食品着色，过多食用会危害人体健康。
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高效液相色谱法同时测定食品中10种合成着色剂合成着色剂因其色彩亮丽、性质稳定、价格低廉，成为食品工业常用的添加剂之一。
它们通常是以苯、甲苯、萘等化工原料合成，长期食用对人体健康具有一定的毒性，尤其是对少年儿童。
世界各国对合成着色剂的使用范围和限量都有严格的规定。
我国《食品添加剂使用卫生标准》[1]中规定准许使用的人工合成色素有11种。
GB/T 5009.35[2]规定高效液相色谱法同时测定胭脂红、苋菜红，柠檬黄、日落黄和亮蓝等8种合成着色剂。
GB/T 5009.141[3]则规定采用纸层析-分光光度法测定诱惑红。
喹啉黄尚未有法定的检测方法。
为了对食品中常用的合成着色剂进行更为全面的检测，对食品安全状态进行更有效地监督，本文借鉴国标中合成着色剂的前处理方法，对食品中的10种合成着色剂进行分离检测。
此法简便、灵敏、准确，结果满意。
1 材料和方法1.1 仪器与试剂仪器高效液相色谱仪Aglient LC 1100 DAD检测器：安捷伦公司。
标准品与试剂合成着色剂标液(柠檬黄，苋菜红，胭脂红，日落黄，亮蓝)：0.5mg/mL，购自国家标准物质中心；诱惑红(80％)：SIGMA-ALDRICH，Inc生产；新红、赤藓红、喹啉黄、靛蓝：Laboratories of Dr.Ehrenstorfer(Germany)生产；聚酰胺：过200目筛；pH6的水，蒸馏水加柠檬酸溶液(20％)调节pH=6；甲醇-甲酸(6+4)液；甲醇60mL，甲酸40mL，混匀；无水乙醇-氨水-水(7+2+1)：无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL，混匀；甲醇为液相色谱淋洗剂；水为MilliQ水；其余所用试剂均为分析纯。
1.2 标准溶液的配制及定量方法配制不同浓度的标准物质储备液，分别为：亮蓝0.25mg/mL,柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、靛蓝为0.5mg/mL, 诱惑红0.8mg/mL,赤藓红0.61mg/mL, 新红0.75mg/mL, 喹啉黄0.97mg/mL。
准确移取上述储备液2mL于50mL量瓶中，加水定容，混匀，配成标准溶液。
等量稀释，配成标准系列溶液，定容，过滤。
以标准溶液浓度对相应的峰面积绘制标准曲线，外标法定量。
1.3 样品处理方法参照国标方法GB/T 5009.35-2003中试样处理方法制备样品溶液，参照聚酰胺吸附法提取色素，进行HPLC分析。
1.4 液相色谱分析条件色谱柱：Agilent-ZORBAXSB-C l85μm 4.6×250mm；以甲醇:乙睛（3：1）为有机相、0.02mol／L乙酸铵溶液为水相，梯度洗脱，洗脱程序如表1所示；进样量：10μL；柱温:30℃。
采用多通道检测，检测波长分别为：靛蓝：290nm；柠檬黄、喹啉黄：428nm；日落黄:483nm；胭脂红、诱惑红:507nm；新红、苋菜红、赤藓红529nm；亮蓝:625nm。
表1 流动相梯度洗脱参考条件时间（min）水相（%）有机相(%)0 94 611 68 3213 55 4520 55 4522 20 8025 20 8026 94 630 94 62 结果2.1 方法的线性范围和定量限在设定的色谱条件下，10种合成着色剂的出峰情况如图1所示，各着色剂标准系列溶液的浓度与色谱峰面积线性相关，线性范围、线性方程及相关系数r如表2所示。
注：1：柠檬黄；2：新红；3：苋菜红；4：靛蓝；5：胭脂红；6：日落黄；7：诱惑红；8：亮蓝；9、10：喹啉黄；11. 赤藓红图1 10种合成着色剂标准试样色谱图表2 10种合成着色剂标准曲线回归方程及相关系数着色剂名称保留时间min 线性范围μg/mL 标准曲线相关系数r 柠檬黄 6.076 0.62~20.00 y=31.483x-0.25 1新红 6.632 0.94~30.00 y=19.128x-0.26 1苋菜红7.458 0.62~20.00 y=23.588x-0.20 1靛蓝8.503 0.62~20.00 y=22.954x-1.33 0.9998 胭脂红9.958 0.62~20.00 y=24.558x-0.54 1日落黄11.933 0.62~20.00 y=31.431x-1.12 0.9999 诱惑红14.336 1.00~32.10 y=32.519x+0.11 1亮蓝17.657 0.31~10.00 y=85.121x+1.11 0.9998 喹啉黄18.175，18.784 1.21~9.68 y=35.201x-5.09 0.9990 赤藓红24.150 0.76~24.4 y=52.681x+4.86 12.2 最低检测限精密称取5g不含上述着色剂的空白样品，加入适量标准溶液，加水定容至25mL。
以聚酰胺吸附法提取色素，HPLC法测定。
采用3倍信噪比时所对应的浓度为最低检出浓度，由此计算出最低检出限为：亮蓝为0.03mg/kg,柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄为0.06mg/kg，赤藓红为0.08mg/kg，诱惑红为0.1mg/kg，新红为0.9mg/kg，喹啉黄为0.1mg/kg。
2.3 回收率实验以碳酸饮料为例，精密称取5g样品，分别加入适量的标准贮备液，加水定容至25mL，制成低、中、高3个浓度的加标样品，每个浓度取3个平行样品，经前处理后，用HPLC分析测得其回收率分别为柠檬黄：87.5％～101.3％、新红：89.3%～96.8％、苋菜红：87.5％～101.3％、靛蓝：92.2％～97.4％、胭脂红：97.0％～97.5％、日落黄：91.3％～98.5％、诱惑红：97.6％～98.5％、亮蓝：96.0％～98.5％、喹啉黄：87.5％～97.5％、赤藓红：92.8％～99.0％ (见表3)，符合方法学要求。
表3 回收率实验（n=3）着色剂名称本底值（mg/kg）加标量（μg/mL）平均测定值（μg/mL）回收率（%）柠檬黄0 4 3.5 87.53.2 10 13 98.53.2 20 23.5 101.3 新红04.65 4.25 91.40 11.65 10.4 89.30 23.3 22.55 96.8苋菜红0 4 3.85 96.37.7 10 17.5 98.97.7 20 28.4 102.5 靛蓝0 3.85 3.55 92.20 9.6 8.9 92.70 19.2 18.7 97.4胭脂红0 4 3.9 97.50 10 9.7 97.00 20 19.4 97.0日落黄32.3 4 36.5 100.60 10 9.85 98.50 20 19.65 98.3诱惑红0 3.3 3.25 98.50 8.25 8.1 98.20 16.5 16.1 97.6亮蓝0 4 3.85 96.30 10 9.6 96.00 20 19.7 98.5喹啉黄0 4 3.9 97.50 10 8.75 87.50 20 18.6 93.0赤藓红0 5 4.95 99.00 12.5 11.6 92.80 25 23.5 94.02.4 精密度实验精密量取碳酸饮料样品，加入一定量的混合标准溶液混合制成模拟样品，平行测定8次，计算精密度，其相对标准偏差(RSD)分别为：柠檬黄2.2%、新红2.6%、苋菜红RSD(％)1.6%、靛蓝3.9%、胭脂红1.4%、日落黄1.3%、诱惑红1.9%、亮蓝1.8%、喹啉黄3.5%、赤藓红5.7%(见表4)，表明本法精密度良好。
表4 方法的精密度(n=8)着色剂名称平均浓度（μg/mL）相对标准偏差RSD(%) 柠檬黄 2.55 2.2新红 2.19 2.6苋菜红 3.58 1.6靛蓝 1.70 3.9胭脂红 1.90 1.4日落黄 1.94 1.3诱惑红 1.57 1.9亮蓝 2.00 1.8喹啉黄 1.74 3.5赤藓红 2.46 5.72.5 实际样品分析采用本法对超市中6种有色食品进行检测，结果见表5。
2种碳酸饮料、2种果冻和葡萄酒中测定的色素品种与产品标示相同，含量没超过食品有关规定。
一种黄色果汁中未检测到色素。
表5 食品样品中合成着色剂的含量样品着色剂名称含量（mg/kg）最大使用（g/kg）碳酸饮料A 日落黄32.3 0.1碳酸饮料B 柠檬黄 3.2 0.1苋菜红7.7 0.05 果冻A 胭脂红 2.54 0.05果冻B 柠檬黄 2.61 0.05日落黄 3.54 0.025 葡萄酒苋菜红14.02 0.05果汁ND ND注：“ND”为未检出。
3 讨论3.1 流动相的选择本项实验目标是分离十种合成着色剂，必须采用梯度洗脱。
以甲醇+0.02mol/L乙酸铵为流动相时，前7种着色剂能较好分离，后3种着色剂不能完全分离。
以甲醇:乙睛（3:1）为+0.02mol/L乙酸铵为流动相时，能将10种着色剂进行有效分离，且峰形良好，保留时间稳定。
3.2 测定波长的选择国标GB/T 5009.35-2003方法采用254nm测定不同种类着色剂，其灵敏度不高，特异性不强，且食品中杂质成份会干扰着色剂的测定。
为了使每种着色剂均获得较好的灵敏度，本法在确定最佳梯度后，对检测波长进行了优化。
参照GB/T 21916-2008中着色剂的波长设定，利用二级管阵列检测器多通道检测功能对不同着色剂采用不同的检测波长，大大地提高了各种着色剂的灵敏度和特异性，特别是亮蓝。
此法不但可以提高检测灵敏度，还能克服梯度洗脱时的基线漂移，减少共存物的干扰。
3.3 喹啉黄的测定我国《食品添加剂使用卫生标准》规定，喹啉黄着色剂只允许在配制酒（仅限预调酒）中适量使用，最大使用量0.1g/L, 在巧克力等其他食品中禁止使用。
2009年质检局检出进口食品M&M’S牛奶巧克力豆[5]和哈瑞宝水果软糖中喹啉黄超标[6]，哈密瓜味冰淇淋粉、饼干味汁和英国蛋糕汁等标签上标有超范围使用的喹啉黄冰淇淋[7]。
目前没有法定方法对其进行检测，亦少有文献报道，建立喹啉黄的检测方法有现实意义。
喹啉黄分子式为2-(2-喹啉基)-2，3-二氢-1，3-茚二酮，难溶于水，目前用作食品添加剂的为喹啉黄磺酸钠盐，由于一分子喹啉黄可以结合1~2分子磺酸盐，因此可能为不同磺酸盐的混合物。
于本色谱条件下，其色谱峰有2个，HPLC-MS表明2个色谱峰对应的质谱图相似，均以m/z为352的离子[M+SO3]-离子流强度最高。
因此以2个峰的面积和为定量指标，结果表明亦有较好的线性关系。
3.4 赤藓红的测定国标GB/T 5009.35-2003中，着色剂提取方法规定色素洗脱后浓缩、水定容，0.45μm滤膜过滤，HPLC测定。
在进行回收率和精密度实验时，发现水定容后的样品溶液中有红色沉淀析出。
分离沉淀，用甲醇溶解，HPLC分析，发现其为赤藓红。