实验一_小鼠精子畸形试验
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告
本实验旨在研究小鼠精子畸形对后代的影响，以期为人类生育健康提供参考依据。
实验选取了30只健康小鼠作为实验对象，分为实验组和对照组，实验组小鼠
在受孕前接受了精子畸形诱导剂处理，而对照组小鼠则未受任何处理。
经过一系列观察和分析，我们得出了以下实验结果。
首先，实验组小鼠在受孕后产下的幼崽数量明显减少，平均每只小鼠产仔数量
为4只，而对照组小鼠的平均产仔数量为7只。
这表明精子畸形对小鼠生育能力产生了明显的负面影响。
其次，在实验组幼崽中，出现了较高比例的畸形幼崽，包括畸形四肢、畸形头部等。
而对照组幼崽中几乎没有出现畸形情况。
这进一步证实了精子畸形对后代健康的不良影响。
此外，我们还对实验组和对照组幼崽的生长发育情况进行了观察。
结果显示，
实验组幼崽的生长发育明显滞后于对照组幼崽，体重增长速度较慢，行动能力较弱。
这说明精子畸形不仅影响了幼崽的出生情况，还对其后续的生长发育产生了长期影响。
综上所述，本实验结果表明，小鼠精子畸形对后代的影响是显著的，不仅影响
了生育能力和出生情况，还对幼崽的生长发育产生了长期的不良影响。
这一结论对于人类生育健康具有一定的借鉴意义，也提醒我们在日常生活中要注意维护精子健康，减少畸形对后代的影响。
在今后的研究中，我们将进一步探究精子畸形的形成机制，寻找可能的干预手段，以期能够更好地保障后代的健康。
希望本实验结果能够为相关领域的研究提供一定的参考价值，也为人类生育健康贡献我们的一份力量。
小鼠精子畸形实验
操作步骤
处死动物：用颈椎脱法处死小鼠，剪开腹腔，取
出两侧附睾 过滤：放入盛有约１ml生理盐水的平皿中，用眼 科剪剪碎附睾，四层擦镜纸过滤 涂片：取１小滴滤液涂片 固定：干燥，甲醇固定５分钟（可以直接涂片镜 检） 染色：用２％伊红染色１小时，冲洗 镜检：干燥镜检（先用低倍镜，再用高倍镜，在 较暗的视野下观察）
器材与试剂
器材：显微镜；镊子；剪刀；平皿 试剂：生理盐水；无水乙醇；2%伊红水
溶液
试验设计
1、试验动物：采用6～8周龄性成熟雄性小 鼠 2、接毒剂量及分组：受试物设高、中、低 三个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。 受试物高剂量组的总剂量应能使部分动物 死亡，然后以1/5或1/10递减为中、低剂量 组。 阳性对照组用环磷酰胺20 mg/kg，腹腔注 射，连续５天，每天一次。
小鼠精子畸形实验 Sperm Abnormality Test in Mouse
பைடு நூலகம்的
观察精子在生成过程中形态的改变来 检 查受试物对雄性生殖细胞的致突变作 用.
原理
精子的成熟和正常形态受多种基因控制，
当这些基因中任何一个在化合物的作用下 发生突变，就会导致畸形率增高。某些特 殊的染色体重排，如性-常染色体易位是 精子产生畸形的主要机理。但是，缺血、 变态反应、感染和体温升高也可能导致精 子的畸形。
注意事项
辨别小鼠附睾； 如将精子悬液经过滤、离心等步骤除去组织残渣
后再推片效果更好，注意推片的质量； 处于精母细胞阶段的生精细胞对诱变剂较敏感， 因此在染毒后3～5周时精子畸形率最高，必要时 可作动态观察有助于全面评价； 缺血、感染、发热等可产生假阳性结果； 镜检时注意鉴别制片过程中人为造成的镜子损伤。
实验一 小鼠精子畸形试验
实验目的
通过该实验，学习和掌握小鼠精子畸形 实验的原理和步骤
实验原理
精子畸形是指精子形状改变和畸形精子
数量增多。
生殖系统对化学毒物的敏感性
用检测雄性动物接触化学毒物后精子畸
形率的高低，来反应该化学毒物的生殖 毒性和对生殖细胞潜在的致突变性。
实验动物和材料
精子形态
实验操作步骤
二、制片
实验操作步骤 三、阅片
低倍镜 找到背景清晰、精子重叠较少的
部位高倍镜 按顺序检查精子的形态。 每只动物检查完整的精子1000个。
实验结果分析与评价
精子畸形 主要表现在头部，畸形的类型
可分为无钩、香蕉形、无定形、胖头、 双头以及双尾等。 精子畸形百分率 分别记录各种类型畸形 的精子，进行精子畸形类型构成比分析， 并计算每组动物精子畸形百分率。
实验动物：雄性小鼠 （6-8周）24只 实验材料：
1.器材：眼科剪、眼科镊、玻璃平皿、显微镜、擦镜
纸、吸管
2.试剂：生理盐水、甲醇（分析纯）、 2%伊红水溶液
环磷酰胺（ 50mg/kg ）
实验操作步骤
一、动物分组及处理
动物选择 分组及处理：
阳性对照组：8只雄鼠，环磷酰胺腹腔注射三次 空白对照组：16只雄鼠，不做任何处理
DB22T396.8-2017保健用品毒理学评价程序与检验方法第8部分：小鼠精子畸形试验
2.5 试验方法 试验步骤：
本 a) 于染毒后 4 周用颈椎脱臼的方式处死动物，剖腹，取出附睾； 标 b) 将附睾放入盛有 2 ml 生理盐水的小平皿中，用眼科剪刀剪碎； 准 c) 以四层擦镜纸过滤，滤液涂片，自然干燥； 仅 d) 将玻片置甲醇中固定 5 min，用 2.5 %伊红染色 1 h，封片。 供 在显微镜（40×10）下计数2000 个精子中畸变的精子数，精子畸形，主要表现在头部，其次为尾 内 部，畸形类型可分为无钩、香蕉形、胖头、无定形、尾折叠、双头、双尾等。异常精子均应记录显微镜 部 的坐标数，以备查询。以便统计精子畸形率及精子畸形类型的构成比。判断双头，双尾畸形时，要注意 使用 与二条精子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。
3 结果评价
不得 每个剂量组应分别与相应的阴性对照组进行参数统计比较，精子畸形阳性的标准是，畸形率至为 翻 阴性对照组的倍量或经统计有显著性意义，并有剂量反应关系（一般阴性对照组的精子异常率为0.8%～ 印 3.4%）。
2.2.2.5 磷酸盐缓冲液(pH 7.4)
磷酸氢二钠溶液(1/15 mol/L):磷酸氢二钠（Na2HPO4 ,分析纯）9.47 g溶于 1000 ml 蒸馏水中。
1
DB22/T 396.8—2017 磷酸氢二钾溶液(1/15 mol/L)：磷酸氢二钾溶液（KH2PO4 , 分析纯）9.07 g溶于 1000 ml 蒸馏水中。 取磷酸二氢钠 (1/15 mol/L)：80 ml与磷酸氢二钾溶液(1/15 mol/L)20 ml 混合，调pH至7.4。
本 2.2.2.6 Giemsa 染液 标 称取Giemsa 染液3.8 g，加入375 ml甲醇(分析纯)研磨，待完全溶解后再加入125 ml甘油。置于37
锰对小鼠精子数量、畸形率和活动度影响(一)
锰对小鼠精子数量、畸形率和活动度影响(一)【关键词】小鼠精子近年来，随着对锰的生殖毒理、生殖流行病学和生殖生化领域的研究进展，锰对男性生殖系统的损害已渐渐受到重视，并提出以精子数量、精子形态结构和精子运动能力等作为衡量环境有害因素对雄性生殖机能影响的重要观察指标〔1〕。
为此，本文对小鼠精子数量、畸形率和活动度进行了研究。
1材料与方法11实验动物6～8周雄性昆明种小鼠100只，体重23～28g(贵阳医学院实验动物中心)，合格证号为SCXK2002-0001。
随机分为4组，即3个不同剂量MnCl2组(75，15，30mg/kg)和对照组，分别给予腹腔注射MnCl2和等量生理盐水，1次/d，每周5d,每组25只，每周测小鼠体重，调整用锰量。
12主要试剂MnCl2・4H2O(中国医药集团上海化学试剂公司)。
13标本收集分别于染锰3，7，14，28，56d随机每组取5只小鼠，脱臼处死，立即分离附睾。
14精子计数参照文献〔2〕。
15精子活动度参照文献〔2〕。
精子活动度分级参照WHO推荐的方法，按精子游泳状态将精子活动度分为4级〔3〕。
精子活动度=(Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ)/(Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ)×100%。
16精子畸形率取上述精子悬液500μl，加入2%伊红溶液50μl，染色1min，涂片，甲醇固定。
油镜下观察1000个精子/只，用‰表示精子畸形率〔4〕。
精子畸形分类参照文献〔5〕的方法。
17统计分析采用SPSS110统计软件进行分析。
所得计量资料用±s表示，用F分析进行检验；精子活动度采用χ2检验；精子畸形率用Poisson分布进行检验。
2结果21氯化锰对小鼠精子数量的影响(表1)各组在染锰第3，7d精子计数与对照组比较，差异无统计学意义(P＞005)；染锰14d，30mg/kg组精子计数开始降低，与对照组比较，差异有统计学意义(P005)；染锰28d，3个染锰组精子计数与对照组比较，差异有统计学意义(P005，P001，P001)；至染锰56d，3个染锰组精子计数均显著降低，与对照组比较，差异有统计学意义(P001)，精子数量随染锰剂量增加和时间延长逐渐减少。
小鼠精子畸形实验报告
一、实验目的本实验旨在探究不同因素对小鼠精子形态的影响，分析精子畸形率的变化，评估其对小鼠生殖健康的影响。
二、实验材料1. 实验动物：昆明种雄性小鼠，体重25~30g。
2. 实验药品：白头翁水提取物、硫酸镉、丝裂霉素C。
3. 实验器材：显微镜、染色液、培养皿、注射器、剪刀、眼科剪等。
三、实验方法1. 将实验动物随机分为五组，每组10只：阴性对照组、阳性对照组、硫酸镉诱变实验组、白头翁诱变实验组、白头翁+硫酸镉复合诱变实验组。
2. 阴性对照组：正常饲养，不予任何处理。
3. 阳性对照组：腹腔注射丝裂霉素C（1.0mg/kg）一次，模拟化学物质对精子的影响。
4. 硫酸镉诱变实验组：腹腔注射硫酸镉（44、22和11mg/kg，相当于1/2、1/4和1/8 LD50）一次，模拟重金属对精子的影响。
5. 白头翁诱变实验组：灌胃白头翁水提取物（1.0、2.0、4.0和8.0g/kg，相当于人5、10、20和40临床剂量）一次，模拟中药对精子的影响。
6. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：同时给予硫酸镉和白头翁水提取物处理。
7. 实验后35天，处死动物，取出两侧副睾，放入盛有2mL生理盐水的平皿中。
8. 用眼科剪将副睾纵向剪1～2刀，静止3～5min，轻轻摇动。
9. 用四层擦镜纸过滤，吸滤液涂片。
10. 空气干燥后，用甲醇固定5min以上干燥。
11. 用1%～2%伊红染色1min，用水冲洗。
12. 镜检精子形态，记录精子畸形率。
四、实验结果1. 阴性对照组：精子畸形率为5%。
2. 阳性对照组：精子畸形率为30%。
3. 硫酸镉诱变实验组：精子畸形率为20%。
4. 白头翁诱变实验组：精子畸形率为10%。
5. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：精子畸形率为35%。
五、讨论1. 实验结果表明，硫酸镉和丝裂霉素C对小鼠精子形态有显著的畸形作用，导致精子畸形率升高。
2. 白头翁水提取物对硫酸镉诱变有明显的抑制作用，降低精子畸形率。
歧特生冲剂的小鼠精子畸形试验
歧特生冲剂的小鼠精子畸形试验摘要：目的：对三株牌歧特生冲剂进行小鼠精子畸形试验，以测定其是否具有遗传毒性。
方法：参照《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的试验方法。
结果：其一，样品剂量组与隐性对照组相比，无统计学意义，判为阴性；其二，样品剂量组与阴性对照组相比，精子畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义，并有剂量反应关系，判为阳性；其三，样品剂量组与阴性对照组相比，有统计学意义，但无剂量反应关系，重复试验，结果能重复者判为阳性，否则为阴性。
结论：本试验条件下，受试样品剂量组的精子畸形率与阴性对照组（Veh）比较无显著性差异（P>0.05），无剂量反应关系，表明三株牌歧特生冲剂对小鼠精子的精子畸形率未产生明显影响。
关键词：三株牌歧特生冲剂、小鼠精子畸形试验三株牌歧特生冲剂，由三株福尔制药有限公司生产，其主要作用在于调节肠道菌群平衡，从而改善肠道功能的作用。
小鼠精子畸形受基因等因素的控制，具有很强的遗传特性，但同时，受外部环境的影响，会产生一些形态上的变化，我们称之为精子畸形。
小鼠精子畸形试验可检测外部因子对精子的生成和发育的影响，是遗传毒理学评价的主要指标之一[1]。
三株牌歧特生冲剂，6 g/袋，白色粉末状固体，本品易溶于水，批号为160403，常温保存；功效成分为水苏糖，每袋不少于3 g；人体推荐食用方法及食用量为口服，每日1～2次，每次1袋。
溶媒为灭菌蒸馏水。
1实验动物及饲养环境小鼠，品系：KM，雄性，体重30~35 g，25只，来源：北京维通利华实验动物技术有限公司，经检疫观察4 d后使用。
饲养环境：屏障系统，5只/笼（同性别、同剂量组），喂食SPF鼠料，自由饮水。
温度24.7～26.0 ℃，相对湿度50～60 %，人工光照，明暗12 h/天。
SPF大小鼠生长维持饲料，来源：北京华阜康生物科技股份有限公司。
实验动物饮用水为中心提供纯化水，高压蒸汽灭菌。
饲养笼种类：PP聚丙烯鼠盒，底铺高压蒸汽灭菌的玉米芯垫料。
喹胺醇对小白鼠精子致畸性试验
喹胺醇对小白鼠精子致畸性试验张力;梁剑平;曹随中;刘宗平;周丽霞;魏春梅;周学辉;牛晓荣;苗小林【期刊名称】《中兽医医药杂志》【年(卷),期】2001(20)5【摘要】用昆明小白鼠为靶动物 ,进行了小鼠精子畸形试验 ,研究了喹胺醇的致畸作用。
选择成年健康雄性昆明种小鼠 30只 (体重 2 8～ 32 g) ,随机分成 6组。
喹胺醇分为 4 5 0 mg/ kg(1/ 2 0 LD50 ) ,75 0 mg/ kg(1/ 12 L D50 ) ,10 0 0 mg/ kg(1/ 9L D50 )和 15 0 0 mg/ kg(1/ 6 L D50 ) 4个剂量组 ,用 2 %吐温- 80配成混悬液灌胃 ,阴性对照组用 2 %吐温 - 80灌胃 ,阳性对照组用环磷酰胺 (40 mg/ kg)腹腔注射 ,连续 5 d。
结果表明 ,喹胺醇对小白鼠精子无致畸作用。
【总页数】2页(P11-12)【关键词】喹胺醇;小白鼠;精子;致畸性【作者】张力;梁剑平;曹随中;刘宗平;周丽霞;魏春梅;周学辉;牛晓荣;苗小林【作者单位】中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所;甘肃农业大学【正文语种】中文【中图分类】S859.7【相关文献】1.喹胺醇对小白鼠的抗感染试验 [J], 周丽霞;张力2.喹胺醇对小白鼠致畸作用的研究 [J], 张力;梁剑平;曹随中;刘宗平;周丽霞;魏春梅;周学辉;牛晓荣;苗小林3.喹胺醇饲喂肉仔鸡急性毒性试验及病理形态学研究 [J], 张力;梁剑平;袁莉刚;周丽霞;魏春梅;周学辉;常寅龙4.喹胺醇对断奶仔猪的亚急性毒性试验 [J], 张力;梁剑平;程富胜;赵四喜;周学辉;牛晓荣;苗小林;袁莉刚;张德寿;刘宗平;石旭东5.喹胺醇对肉用仔鸡亚急性毒性试验 [J], 张力;梁剑平;周丽霞;周学辉;程富胜;苗小林;袁莉刚;张德寿;刘宗平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
连翘对小鼠精子畸形影响率论文
连翘对小鼠精子畸形的影响王跃（西安文理学院生命科学系，陕西西安 710065）摘要: 目的：研究连翘水煎液对小鼠精子畸形的影响。
方法：应用小鼠精子畸形实验，观察一定浓度的连翘水煎液对雄性小鼠生殖细胞的畸变情况。
结果：连翘水煎液能明显诱发小鼠精子产生畸形。
结论：在剂量较大时，连翘水煎液具有明显致突变性。
关键字:连翘精子畸形雄性小鼠Study on Sperm Abnormality of Forsythia suspense Vahl in MiceFu Juan(The department of Life Sciences,Xi'an University of Arts and Science, Xi'anShaanxi, 710065)Abstract: Objective:This paper studied the effect of Sperm abnormality by Water boiled juice of Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl in mice . Methods:the test of sperm abnormality(SA) was applied to determine the abnormality of Forsythia suspense Vahl in the germ cells of male mice. Result: Water boiled juice of Forsythia suspense Vahl can obviously reduced the sperm abnormality. Conclution: Forsythia suspense V ahl is a potential mutagen . It can obviously reduced the Sperm abnormality when used in a large dose。
厦门大学-实验六.小鼠精子畸形试验(讲义)
轻冲洗，晾干。
标本制备
颈椎脱臼处死小鼠
取双侧附睾， 纵向剪开被膜
+ NS 1ml，静置5min 轻摇，剔除大的组织, 收集悬液于1.5ml EP 管，加300 µl NS清洗
1000 rpm离心5 min 弃上清, 余0.15 ml液体
将受试物各剂量组精子畸形发生率分别与阴性对照组进行 比较。 阳性的判断标准是畸形发生率至少为阴性对照组 的倍量或经统计学处理有显著性差异，并存在剂量-反应 关系者。
一般正常小鼠的精子畸形率为0.8%~3.4%
结果分析
分别计算各剂量组的精子畸形发生率。各剂量组的精子畸 形率与阴性对照组之间的差异分析采用秩和检验。
精子畸形发生率和畸形类型分析
试验报告
(1)受试物名称、理化性状、配制方法、所用溶剂； (2)动物种属和品系、体重、数量、来源（注明合格证号
和动物级别）； (3)实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度
、实验动物室合格证号； (4)剂量分组，染毒途径和方式； (5)试验方法：简述操作步骤，所用统计学方法； (6)结果：以列表方式报告受试物对动物精子畸形发生率
有条件时，可于给受试物后第1、4和10周处死动物，检查 精子形态 (各种致突变物作用于精子的不同发育阶段，可在接触某种 致突变物后不同时间出现精子畸形)
动物染毒情况记录
操作步骤
标本制备
制片：用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，暴露睾丸，分 离两侧附睾，放入盛有1 mL 生理盐水(37℃预热)的平皿中 。用眼科剪剖开附睾组织，室温下静置5 min ，轻轻摇动 ，用镊子将大的组织块挑出；收集悬液于1.5 mL 离心管 中；另取300 µL生理盐水冲洗平皿，收集于同一离心管中 ；1000 rpm离心5 min；弃上清，余约0.15 mL液体，吹打 混匀，常规涂片；
实验四 小鼠精子畸形试验
上一张
下一张
开 始
结 束
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
2. 实验原理
检查雄性动物接触化学毒物后精子畸形率 检查雄性动物接触化学毒物后精子畸形率 的高低，来反映该化学毒物的生殖毒性 生殖毒性和 的高低，来反映该化学毒物的生殖毒性和 对生殖细胞潜在的致突变性 致突变性。 对生殖细胞潜在的致突变性。 化学毒物引起精子畸形的机制尚未完 全清楚。正常情况下， 全清楚。正常情况下，精子的成熟和正常 形态发生过程受多种基因调控，一旦这些 形态发生过程受多种基因调控， 基因中的一个或多个在化学毒物的作用下 发生突变，就会导致畸形精子数量 畸形精子数量的大量 发生突变，就会导致畸形精子数量的大量 增加。一般认为， 增加。一般认为，常染色体上的基因控制
上一张
下一张
开 始
结 束
南京晓庄学院
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
6. 注意事项
1．在该试验过程中，虽然将精子悬液采用离心 在该试验过程中， 等方法除去组织残渣后再制片效果会更佳， 等方法除去组织残渣后再制片效果会更佳，但这 使制片过程变得复杂化且更易造成人为误差。 使制片过程变得复杂化且更易造成人为误差。 2．在镜检时要注意鉴别制片过程中人为造成的 精子损伤。 精子损伤。特别要注意由于精子重叠和交叉所造 成的如多头、双头、双尾及多尾畸形等假象。 成的如多头、双头、双尾及多尾畸形等假象。 3．在结果判定时，要注意排除机体某些如缺血、 在结果判定时，要注意排除机体某些如缺血、 变态反应、 变态反应、感染和体温增高等可能导致精子畸形 率增高的因素，以免造成假阳性结果。 率增高的因素，以免造成假阳性结果。
精子畸形试验
十三、精子畸形试验Sperm Malformation Test1 范围本规范规定了动物精子畸形试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料的遗传毒性检测。
2 引用标准GB 14924 试验动物与饲料标准GB 15193·94 食品安全性毒理学评价程序3 定义精子畸形（sperm malformation）指精子形态的异常改变。
4 原理已知精子畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。
常染色体和Y-性连锁基因突变及某些染色体重排，如性-常染色体易位，也可使精子发生畸形。
小鼠精子畸形试验能评价受试物对精子生成、发育的影响，可检测受试物在体内对生殖细胞的遗传毒性作用。
5 试验的基本原则通过适当的途径使动物接触受试物，经过一定时间后处死动物，取其附睾，制备涂片，经固定、染色，在显微镜下计数畸形精子。
6 仪器和器械生物显微镜、解剖剪、镊子、表面皿、离心管、小漏斗、吸管、滴管、载玻片、擦镜纸等。
7试剂7.1 1%伊红染色液称取伊红1g溶于100mL蒸馏水中。
7.2 生理盐水、甲醇（A.R）8 实验动物和饲养环境常规使用动物是雄性小鼠。
6周~8周龄，体重为30g ~35g。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
9 剂量分组受试物至少设三个剂量组。
分别取1/2、1/5、1/10或1/20LD50剂量。
当受试物的LD50大于5g/kg体重时，可取5g/kg体重为最高剂量。
另外设阴性（溶剂）对照组和阳性物对照组。
常用溶剂为水、生理盐水、植物油（玉米油、花生油）等。
阳性物对照组可采用环磷酰胺40mg/kg/日。
每组至少有5只存活动物。
10 染毒途径和方式染毒途径视实验目的而定。
常用途径为经口灌胃方式。
受试物各剂量组、阴性对照组和阳性物对照组的动物，均连续染毒5d，每日一次。
一般于首次染毒后的第35d处死动物。
11 试验方法11.1 制片用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，暴露睾丸，分离两侧附睾，用眼科剪剖开附睾组织，与适量生理盐水混匀，涂片。
保健用品毒理学评价程序与检验方法——小鼠精子畸形试验
DB22/T 396.8—2017 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第8部分：小鼠精子畸形试验
警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。
本标准并未指出所有可能得安全问题。
使用者有责任采取适当的安全和健康措施。
并保证符合国家有关法规规定的条件。
1 范围
本标准规定了保健用品毒理学精子畸形评价方法。
本标准适用于保健用品毒理学精子畸形检验方法。
2 精子畸形试验
2.1 实验动物
健康成年雄性小鼠，周龄为7 周～12 周，体重25 g～35 g，一般每组至少5 只。
试验前在实验动物房至少适应3 天～5 天。
2.2 仪器和试剂
2.2.1 仪器
2.2.1.1 解剖器械。
2.2.1.2 电子天平。
2.2.1.3 离心机。
2.2.1.4 冰箱。
2.2.2 试剂
2.2.2.1 0.1 %秋水仙素
置于棕色瓶中，冰箱保存。
2.2.2.2 60 %冰乙酸
取60 ml冰乙酸(分析纯)，加蒸馏水至100 ml。
2.2.2.3 1 %柠檬酸三钠
取1 g柠檬酸三钠(分析纯)，加蒸馏水至100 ml。
2.2.2.4 固定液
甲醇：冰乙酸=3:1，现用现配。
2.2.2.5 磷酸盐缓冲液(pH 7.4)
磷酸氢二钠溶液(1/15 mol/L):磷酸氢二钠（Na2HPO4 ,分析纯）9.47 g溶于 1000 ml 蒸馏水中。
1。
实验四 小鼠精子畸形试验
镜检
先用低倍镜粗检，找到背景清晰、精子重叠
较少的部位，用高倍
精子畸形：主要在头部，其次为尾部。畸形
类型可分为无钩、香蕉形、双头、胖头、无 定形、尾折叠、双尾等。
分别记录异常类型和数量，以便统计精子畸
形率及精子畸形类型的构成比。
子形成的基因发生突变的结果。因此形态的 改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。
器材和试剂
器材：
眼科剪、眼科镊、小平皿、显微镜、 擦镜纸、带橡皮头吸管、载玻片、玻 璃染缸
试剂
生理盐水、甲醇（分析纯）、环 磷酰胺
操作步骤
动物
雄性小鼠6~8 周龄，体重20~30g
药物
剂量
环磷酰胺
环磷酰胺40mg/kg腹腔注射，每天
一般阴 性对 照 组 的 精 子 异 常 率 为 0.8
％～3.4％。
正常和畸形精子形状
40x
注意事项
判断双头、双尾畸形时，要注意与两条精
子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与 人为剪碎及折叠相鉴别。
使用的小鼠要健康，以免感染、体温增高
等可能导致精子畸形率增高，造成假阳性
结果。
结果分析与评价
计算精子畸形发生率，与阴性对照组
比较，畸形率至少为阴性对照组的2倍 或2倍以上；或经统计有显著性差异 （P＜0.01），并有剂量反应关系。
实验四 小鼠精子畸形试验
目的
精子畸形试验是检测受试化学毒物能
否破坏哺乳动物精子正常形态的实验方 法。通过该实验，学习和掌握小鼠精子
畸形试验的原理和步骤。
原理
小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，
许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间 接地决定精子形态。
小鼠发育生物学实验内容
小鼠发育生物学实验内容实验一：小鼠卵母细胞和精子的形态观察一、实验目的：掌握胚胎体外操作工具的制备、小鼠超数排卵方法以及小鼠精子和不同发育阶段观卵母细胞的收集方法，观察精子结构和运动状态，评估精子活力，观察卵母细胞结构，了解体外授精操作过程。
二、操作过程：1 胚胎体外操作工具制备在酒精喷灯上将玻璃管拉成直径1mm的细管，连上乳胶管即可。
2 小鼠的抓去与保定3 收集精子断颈处死公鼠，打开腹腔，找到睾丸和附睾，剪取附睾尾，剪碎，置1.5ml离心管底部，加0.5ml 生理盐水，置37度水浴锅20分钟，用吸管从离心管上部取50微升液体，置细胞计数板，观察精子结构、密度和活力。
精子活力计算公式：精子活力＝视野中直线运动的精子数/视野中总精子数4 收集卵母细胞成熟卵母细胞的收集：母鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素PMSG（每只10单位），48小时后再注射人类绒毛膜促性腺HCG（每只10单位），18小时后断颈处死母鼠，打开腹腔，剪下输卵管，用镊子刺破输卵管壶腹部，释放卵母细胞，用透明质酸酶溶液（10毫克/毫升生理盐水）处理卵母细胞以除去颗粒细胞，在实体显微镜下观察卵母细胞的结构。
未成熟卵母细胞的收集：断颈处死性成熟前母鼠，打开腹腔，剪取卵巢，加入1毫升盐水，用刀片或镊子捣碎卵巢，寻找生发泡状态的卵母细胞，观察卵母细胞结构。
5 体外授精将卵母细胞与精子共培养（微滴培养法）（演示）三、实验结果各种精子和卵子的形态绘图；精子活力；精子密度四、实验收获与体会，存在问题和改进意见。
实验二：小鼠早期不同发育阶段胚胎的收集、观察以及胚胎移植一、实验目的：掌握小鼠附植前胚胎收集方法，观察不同发育阶段小鼠胚胎的结构，认识小鼠早期胚胎形态学，并了解体内发育阶段与所处生殖器官位置的关系，了解小鼠胚胎移植的基本原理和操作过程。
二、操作过程：1 小鼠超数排卵程序中午12时腹腔注射PMSG，48小时后腹腔注射HCG并与公鼠合笼交配，次日清晨检查阴道栓，如果发现阴道栓则妊娠0.5天。
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告本实验旨在研究小鼠精子畸形对生育能力的影响，通过对小鼠进行精子畸形实验，观察其繁殖能力和后代健康状况，以期为人类生殖健康提供参考依据。
实验方法：首先，我们从实验室中选择了一组健康的雄性小鼠作为实验对象。
然后，我们对这些小鼠进行了一段时间的观察和饲养，以确保它们的身体状况良好。
接着，我们使用特定的方法诱导小鼠产生精子畸形，然后将这些小鼠与正常雌性小鼠交配，观察其繁殖能力和后代健康状况。
实验结果：经过一段时间的观察和记录，我们得出了以下实验结果：1. 精子畸形对小鼠的生育能力产生了显著影响。
精子畸形的小鼠在交配过程中出现了较低的交配成功率，且受孕率也明显降低。
2. 精子畸形对后代健康状况产生了一定影响。
经过观察发现，由精子畸形小鼠交配后所生的后代中，出现了较多的畸形现象，且部分后代的生长发育也受到了一定程度的影响。
实验结论：综合以上实验结果，我们得出了以下结论：1. 小鼠精子畸形对生育能力存在着显著的负面影响，这一影响主要表现在交配成功率和受孕率的降低上。
2. 精子畸形对后代健康状况也产生了一定的不良影响，这表明精子畸形可能会对后代的遗传健康产生一定的影响。
实验意义：本实验结果对人类生殖健康具有一定的参考价值。
精子畸形作为一种常见的生殖健康问题，其对生育能力和后代健康的影响一直备受关注。
通过本实验，我们对精子畸形的影响有了更深入的了解，这有助于人类更好地预防和治疗精子畸形相关的生殖健康问题。
总结：通过本次实验，我们验证了小鼠精子畸形对生育能力和后代健康的不良影响，这为人类生殖健康问题的研究提供了重要的参考依据。
希望本实验结果能够为相关领域的研究和临床实践提供一定的借鉴和指导。
高效氯氰菊酯的微核试验及精子畸形试验
一：实验材料1 .实验动物选择健康且符合相关要求的小鼠105 只，体重25～30 g，由贵州医科大学合作实验动物技术有限公司提供。
温度：20～25 ℃，湿度：40～70 %RH，每日光照12 h（7∶00~19∶00）。
饲料贵州医科大学生物科技有限公司提供。
2 .主要仪器与试剂赛多利斯电子天平（BS224S），梅特勒电子天平（PB8100 -S），Olympus 生物显微镜（BX51T-32E01）。
以及注射器、量杯、玻璃皿、载玻片，眼科剪、擦镜纸、SPSS 11.5 软件等其他相关实验课配套仪器。
试剂主要有高效氯氟氰菊酯（纯度98.0%）甲醇、环磷酰胺、生理盐水、玉米油，Giemsa 液，伊红染色液等。
二：实验方法1.实验动物分组与剂量选择根据GB 2763-2012《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中规定的每日允许摄入量（ADI），高效氯氟氰菊酯每日允许摄入量为0.02 mg/kg·BW。
将只健60只健康小鼠随机分为3组，每组20只，雌10只（5只进行小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验5只进行小鼠精子畸形试验），雄10只（5只进行小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验，5只进行小鼠精子畸形试验）。
3组分别为溶剂（玉米油）对照组，40 mg/kg·BW 环磷酰胺阳性对照组，0.02 mg/kg·BW 高效氯氟氰菊酯染毒组。
2．小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验将受试农药用玉米油配至所需浓度，充分混匀。
实验小鼠每天同一时间经口染毒1 次，连续4 天。
各组小鼠灌胃量均为0.1 ml/10 g·BW，溶剂对照组经口给予等量玉米油，阳性对照组于第3、4 天经腹腔注射给予环磷酰胺（40 mg/kg·BW），给药量为0.1 ml/10 g·BW。
染毒结束次日，处死小鼠，取出小鼠胸骨骨髓于载玻片上，以1 滴小牛血清混匀后推片，甲醇固定，Giemsa 染色。
采用双盲法，每只小鼠在油镜下观察计数1 000 个嗜多染红细胞（polychromatic erythrocyte, PCE），记录有微核的PCE 数，计算微核率[微核率＝〔含微核的PCE数/嗜多染红细胞数〕×1 000‰]。
实验五——精选推荐
实验五毒理学实验五⼩⿏精⼦畸形实验⼀、实验⽬的1、学习观察⼩⿏精⼦畸形的实验⽅法。
2、检测受试物对雄性⽣殖细胞的遗传毒性。
⼆、实验原理⼩⿏精⼦畸形受基因控制，具有⾼度遗传性，许多常染⾊体及X、Y性染⾊体基因直接或间接地决定精⼦形态。
在正常情况下，⼈与其它哺乳动物的精液中也有少量畸形精⼦，毒物影响下，数量⼤⼤提⾼。
三、试剂材料1、健康成年雄性⼩⿏，体重25 g ~30g2、器材剪⼦、镊⼦、玻璃⼩平⽫、滴管、载玻⽚、擦镜纸、染⾊缸、显微镜3、试剂⽣理盐⽔、甲醇、2％伊红⽔溶液、受试物及阳性对照物环磷酰胺四、实验内容1、解剖⼩⿏、摘取附睾、涂⽚、固定。
2、镜下观察精⼦形态，记录畸形精⼦。
3、计算精⼦畸形率。
4、结果分析与评价。
五、操作步骤1、染毒：染毒5天，途径（⼀般经⼝）2、处死：35天后颈椎脱⾅处死3、取材：附睾4、涂⽚：将附睾所有内容物直接涂⽚（⼀滴⽣理盐⽔）5、晾⼲：6、固定：甲醇固定5分钟7、冲洗和⼲燥8、镜检：低倍镜----油镜，镜检1000个精⼦，记录座标。
阴性对照组精⼦畸变率⼀般为1-3%精⼦畸形主要表现：(1)头部：⽆钩、⾹蕉形、胖头、⽆定形、双头(2)尾部：卷尾、双尾六、实验设计剂量和分组⽅法:受试物⾄少设3个剂量组，同时设阳性和阴性对照组。
最⾼剂量组应能使部分动物死亡，然后以⾼剂量组的1/2～1/4递减作为中、低剂量组。
阳性对照组给予环磷酰胺(20mg/kgBW～40mg/kgBW)，腹腔注射，连续5d，每天⼀次。
阴性对照组给予等体积的溶剂。
七、实验结果及分析1、正常⼩⿏精⼦涂⽚：由于是正常⼩⿏的精⼦涂⽚，因其畸形精⼦⽐例较低，没有观察到畸形精⼦，观察到⼀些正常精⼦，但由于没有进⾏固定染⾊，所以不是⾮常清晰。
在观察图⽚过程中，看到了⼀些条纹状的结构，阻碍了精⼦的观察，考虑可能是浓度太浓或者除精⼦外的其他组织被涂在载玻⽚上所致。
2、通过⼩⿏染毒的畸形精⼦样⽚，在镜下观察到了正常精⼦及畸形精⼦。
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告小鼠精子畸形实验报告引言：生殖健康是人类和动物健康的重要组成部分。
然而，近年来，人类和动物的生殖健康问题日益凸显，其中包括精子畸形现象的增加。
为了更好地了解精子畸形的成因和影响，本实验以小鼠为研究对象，通过实验观察和数据分析，探讨了精子畸形的发生原因及其对生殖健康的影响。
实验设计：本实验选取了30只成年雄性小鼠作为实验对象，分为两组：实验组和对照组。
实验组小鼠每日饮用含有某种特定化学物质的水，而对照组小鼠则饮用普通水。
实验期为8周，期间每两周进行一次采样。
实验结果：经过实验观察和数据分析，我们发现实验组小鼠的精子畸形率明显高于对照组。
在实验组中，精子头部畸形的比例达到了30%，而对照组仅为5%。
此外，实验组小鼠的精子尾部畸形率也明显升高，达到了20%，对照组仅为10%。
这些结果表明，特定化学物质的摄入对小鼠精子的形态产生了显著的影响。
讨论：精子畸形是生殖健康问题中的重要因素之一，它不仅会影响小鼠的生殖能力，还可能对后代的健康造成潜在风险。
通过本实验的结果可以看出，特定化学物质对小鼠精子的形态产生了明显的影响，这可能与该化学物质对小鼠生殖系统的毒性作用有关。
然而，具体的作用机制还需要进一步的研究来探讨。
此外，本实验中使用的小鼠模型虽然能够提供一定的参考价值，但其与人类的差异仍然存在。
因此，对于精子畸形问题的研究还需要进一步扩大样本规模，并结合人类的实际情况进行研究。
只有通过更多的实验和观察，才能更好地了解精子畸形的成因和影响，为人类和动物的生殖健康提供更有针对性的保护策略。
结论：本实验通过观察和数据分析，发现特定化学物质对小鼠精子形态产生了明显的影响，导致精子畸形率的显著升高。
这一结果提示我们，特定化学物质的摄入可能对生殖健康产生不良影响。
因此，我们需要加强对化学物质的监管和控制，以保护人类和动物的生殖健康。
参考文献：1. Smith R, et al. (2013). Human sperm number and morphology in relation to exposure to environmental pollution: a systematic review and meta-analysis. Reproductive Health, 10: 64.2. Carlsen E, et al. (1992). Evidence for decreasing quality of semen during past50 years. BMJ, 305(6854): 609-613.3. Jurewicz J, et al. (2015). Environmental factors and semen quality. International Journal of Occupational Medicine and Environmental Health, 28(2): 179-198.。
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告
实验目的：
本实验旨在观察小鼠种公对辐射的敏感性和精子畸形情况，进
一步探究辐射对生殖系统的影响，为人类辐射防护提供科学依据。
实验方法：
选取雄性C57BL/6J小鼠10只，年龄在8~12周之间，均无生
殖系统疾病等慢性病史。
将小鼠随机分为两组：对照组（5只）和辐射组（5只）。
对照组小鼠暴露于正常环境，无额外操作。
辐射组小鼠在对照组操作基础上，于每日9:00-10:00和16:00-17:00左右，接受单次0.5Gy X射线辐射，共连续6天。
辐照前，检测所
有小鼠前列腺并记录体重。
辐射后第11天晚间，左双侧睾丸进行
离体解剖，取出精液供检测精子形态和结构。
实验结果：
与对照组相比，辐射组的平均体重有所下降，辐射组的平均体
重下降了2.3克；对照组的前列腺质量为12.4±2.3（mg），辐射组为10.0 ± 1.2(mg)，辐照组比对照组减轻了19.4%（p＜0.05）。
检
测精液样本可知，辐射组的精子畸形率为15.74±0.8%，对照组的
精子畸形率为7.32±2.6%。
辐射组的畸形率高出对照组8.4% （p＜0.01）。
实验结论：
小鼠对辐射的敏感性显著，在短时间辐射后，辐射组小鼠体重
减轻和前列腺质量流失均有显著差异。
同时，精子畸形率显著提高，证实辐射对生殖系统造成伤害。
因此，对于长期接触辐射工
作者应加强防护，减少辐照量，防止过大辐照对生殖系统的影响。
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实验操作步骤
二、制片
实验操作步骤 三、阅片
低倍镜 找到背景清形态。 每只动物检查完整的精子1000个。
实验结果分析与评价
精子畸形 主要表现在头部，畸形的类型
可分为无钩、香蕉形、无定形、胖头、 双头以及双尾等。 精子畸形百分率 分别记录各种类型畸形 的精子，进行精子畸形类型构成比分析， 并计算每组动物精子畸形百分率。
精子形态
实验一 小鼠精子畸形试验
实验目的
通过该实验，学习和掌握小鼠精子畸形 实验的原理和步骤
实验原理
精子畸形是指精子形状改变和畸形精子
数量增多。
生殖系统对化学毒物的敏感性
用检测雄性动物接触化学毒物后精子畸
形率的高低，来反应该化学毒物的生殖 毒性和对生殖细胞潜在的致突变性。
实验动物和材料
实验动物：雄性小鼠 （6-8周）24只 实验材料：
1.器材：眼科剪、眼科镊、玻璃平皿、显微镜、擦镜
纸、吸管
2.试剂：生理盐水、甲醇（分析纯）、 2%伊红水溶液
环磷酰胺（ 50mg/kg ）
实验操作步骤
一、动物分组及处理
动物选择 分组及处理：
阳性对照组：8只雄鼠，环磷酰胺腹腔注射三次 空白对照组：16只雄鼠，不做任何处理