病理检验技术(1)

荧光原位杂交 FISH

用DNA探针与组织切片上互补的DNA杂交，通过观察荧光信号在染色体上的位置和颜色来反映相应基因的情况。

第一章病理检验技术概述

病理学的作用：

1、研究疾病的病因、发病机制，认识

疾病的发生发展规律

2、为临床诊断疾病、治疗疾病、分析预

后提供依据等。

病理检验的定义：

------在临床医疗实践中，通过对患者病变组织或细胞进行检查，以协助临床诊断疾病的方法称为病理检验。

一、病理检验的主要任务

（一）确定疾病的诊断

（二）为临床选择治疗方案提供依据

（三）提供有关预后因素的信息。（最正确、最可靠、最后的诊断）

（四）了解疾病的发展及分析疗效

（五）为科学研究积累资料

（六）为提高临床诊断水平服务

二、病理检验分类

（一）细胞学检验（脱落细胞、细针穿刺吸取）

（二）组织学检验---最后的诊断

活体组织检验、手术标本检验、手术中病理检验

（三）尸体剖验

病理学技术：

在病理学临床及科学研究工作中使用的各种技术方法统称为病理学技术。病理检验技术的质量和水平是临床病理诊断工作中至关重要的因素。“技术是病理学之母。”

第二节、病理检验技术常规工作

收发工作

协助取材和尸体剖检工作

制作制作切片及细胞学涂片

病理资料管理及检索

药品、物资的管理及仪器维护

大体标本的收集和制作

第六章组织制片技术 P39

常规石蜡切片制作程序

组织固定→取材→固定→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→染色→封片→观察

第一节组织块的处理

（一）组织切片制作过程中的各种操作：

1、取材与固定：合理取材、及时固定；

2、洗涤、脱水、透明；

4、浸蜡、包埋；

5、切片、贴片（展片、捞片）和染色：

6、封片：长期保存。

一、取材：

-------按照病理检查的目的和要求，切取适当大小和数量的组织块，用于制作组织切片的过程。

注意事项：

部位、大小、形状、方向

二、固定和固定液

固定：将组织浸入某些化学试剂，使组织细胞内的物质尽量保持在生活状态时的形态结构和位置过程。

（一）固定目的：

（1）防止组织、细胞的自溶与腐败；（2）凝固或沉淀细胞内物质；

（3）增加组织硬度，便于制片；

（4）产生不同的折光率，有利于染色后观察辨认。

（二）固定方法：

1、浸泡固定法：病理外检一般均用此法；

2、注射、灌注法：体积过大或整个脏器或尸体的固定；

3、微波固定法：应用于临床病理快速诊断，微波固定组织温度至关重要。微波固定介质可用

生理盐水或10%甲醛。

4、蒸汽固定法：为了固定组织中可溶性物质、

血液、细胞涂片等；

（三）固定液的特性：

1、渗透力强，迅速渗入组织内部

2、不会使组织过度收缩或膨胀

3、能硬化组织，保持细胞形态和位置

4、使组织对染料产生亲和力，产生折光率（四）组织固定注意事项：

1、及时固定

2、固定容器宜大

3、固定液应足量：固定组织体积的10-20倍

4、防止组织变形

5、确定恰当的固定时间

（五）组织固定液

常用固定液：

1、4%甲醛（福尔马林）：配置为市售的40%甲醛1份加水9份混合即成；

2、酒精（乙醇）：高浓度组织硬化显著，先用80%固定数小时，再用95%固定；

3、中性缓冲甲醛液：可提高免疫组化阳性率。

4、酒精-甲醛液（A-F固定液）：

5、Zenker固定液：

1、4%甲醛（福尔马林）：

久置能产生白色沉淀（三聚甲醛），容易氧化变成甲酸，严重影响细胞核着色。

固定陈旧多血脏器如肝脾，易产生黑色色素，叫甲醛色素。

2、酒精（乙醇）：

高浓度组织硬化显著，先用80%固定数小时，再用95%固定；

50%以上浓度的乙醇可溶解脂肪和类脂质，也可以溶解血色素和损害其他色素。

中性甲醛液

配置：40%甲醛150-200ml，蒸馏水800-850ml，磷酸二氢钠4g，磷酸氢二钠13g。

常用的固定液或标本保存液，是免疫组化最常用的固定液。

选择性固定液：

1、丙酮：广泛用于组织化学中酶的固定；

2、戊二醛固定液：广泛用于电镜标本的固定，应采用缓冲液配制固定液

3、醋酸：不能保存糖，也不能固定脂肪及类脂，5%醋酸pH2～3可抑制细菌和酶的活性；

4、苦味酸：强酸，易燃易爆，酒精溶液可固定糖类；

5、氯化汞：只宜固定薄片组织，2mm～3mm厚的组织需固定6～18小时；

6、重铬酸钾：固定高尔基体、线粒体，对酸性染料着色良好；

7、锇酸：浓度为1%～2%水溶液用于电镜制片；

骨组织脱钙液：

在脱钙前，先将骨或钙化组织锯成4mm～5mm厚的簿片，按常规充分固定，然后进行脱钙。

组织脱钙的方法及应用：

（一）酸性溶液脱钙：

1、脱钙液配制：

（1）5%～10%硝酸水溶液：浓硝酸5ml～10ml，蒸馏水加至100ml；

（2）硝酸甲醛液：浓硝酸10ml，10%福尔马林90ml；

（3）Schridde液：浓硝酸20ml，10%福尔马林100ml。对组织无明显损害，迅速、安全；（4）5%～10%甲酸水溶液：甲酸5ml～10ml，蒸馏水加至100ml

（5）甲酸酒精液：脱钙速度较硝酸慢，但破坏组织也轻。

（6）Plank-Rychlo液：脱钙比5%硝酸液快3倍。

Jenkins混合酸脱钙液、盐酸氯化钠液、枸橼酸钠、甲酸脱钙液等

2、脱钙方法：骨片悬于脱钙液中，敞开瓶口，每日更换一次新液，最好早晚各一次。

（二）螯合剂脱钙：速度很慢，但对组织成分几乎没有损害。用于免疫组化染色较理想。

1、脱钙液配制：取乙二胺四乙酸二钠（EDTA）25g，溶解于200ml蒸馏水中，氢氧化钠（NaOH）调整pH至7.0（大约加2.5g NaOH）。EDTA与钙可形成一种可溶性非离子化的复合物。

2、脱钙法：将骨片浸入脱钙液中，每周更换一次新液。一般致密骨脱钙需要6～8周，含有少量骨渣的组织约需一周。

（三）电解脱钙法：此法即在脱钙液中通过电流，电解加速脱钙。

1、电解脱钙液配制：

25%盐酸50ml，25%甲酸200ml，蒸馏水750ml；

2、脱钙方法：直径30cm电解槽内盛大量电解液，将骨组织放在一个四周多孔的塑料小容器