病毒的血凝实验
病毒血凝和血凝抑制试验--(以新城疫为例)
实践三病毒血凝和血凝抑制试验--（以新城疫为例）实践目的：1．掌握血凝（HA）和血凝抑制(HI)试验的原理2．掌握鸡新城疫病毒血凝和血凝抑制试验的操作方法实践原理：某些病毒(如鸡新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与人或动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象。
这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异性抗体（免疫血清）所抑制，即为红细胞凝集抑制试验。
实践内容：1．红细胞凝集试验(HA试验) 主要是测定病毒的红细胞凝集价，以确定红细胞凝集抑制试验所用病毒稀释倍数(抗原单位)。
有试管法和微量法两种，现以常用的微量法进行说明。
鸡新城疫病毒的HA试验现采用微量法，在V形微量反应板上进行。
(1)首先用微量移液器向每个孔加入稀释液即灭菌生理盐水一滴(25µl)。
(2)用微量移液器取病毒抗原液25µl加入第1孔内，吸头浸于液体中缓慢吸吹几次使病毒与稀释液混合均匀，再吸取25µl液体小心地移至第2孔，如此连续稀释至第11孔，第11孔吸取25µl液体弃掉；病毒稀释倍数依为1:2～1:2048，第12孔为红细胞对照。
(3)再以微量移液器每孔加1.0％红细胞悬浮液1滴(25µl)。
(4)在振荡器上振荡混匀约l～2分钟，再置37℃作用15分钟后观察结果。
(5)每次测定样品都应同时做红细胞对照。
表1 鸡新城疫血凝效价(HA)的测定术式(微量法)孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12病毒稀释倍数1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 对照生理盐水病毒液1％红细胞悬液25µl25µl25µl25µl25µl25µl25µl25µl25µl25µl25µl25µl表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。
病毒血凝实验实验报告
病毒血凝实验实验报告病毒血凝实验实验报告病毒血凝实验是一种常见的实验方法，用于检测体内是否存在病毒感染。
本次实验旨在通过病毒血凝实验，观察病毒对血液凝固功能的影响，并进一步了解病毒感染的机制。
实验材料和方法：1. 实验材料：病毒样本、新鲜血液、试剂盒、显微镜等。
2. 实验方法：a. 取一定量的新鲜血液放入试管中。
b. 将病毒样本加入血液中，与血液充分混合。
c. 观察血液的凝固情况，并记录下时间。
d. 利用显微镜观察血液中的凝块形态和数量。
实验结果与讨论：在本次实验中，我们选取了不同种类的病毒样本，包括流感病毒、登革热病毒和艾滋病病毒。
通过观察实验结果，我们可以得出以下结论：1. 流感病毒：在血液中加入流感病毒样本后，我们观察到血液凝固时间明显延长。
凝块的形态也发生了变化，呈现出较为不规则的形状。
这表明流感病毒感染会影响血液的凝固功能，可能与病毒对凝血因子的影响有关。
2. 登革热病毒：与流感病毒不同，登革热病毒对血液的凝固功能影响较小。
虽然凝固时间略有延长，但凝块形态并未发生明显变化。
这可能意味着登革热病毒感染对凝血因子的影响较为有限，与其他机制有关。
3. 艾滋病病毒：在实验中，我们发现艾滋病病毒对血液凝固功能没有直接影响。
血液凝固时间和凝块形态与未感染样本相似。
这可能是因为艾滋病病毒主要攻击免疫系统，而不是直接影响凝血功能。
通过这次实验，我们对不同病毒感染对血液凝固功能的影响有了初步了解。
然而，我们仍然需要进一步的研究来探究病毒感染与凝血因子之间的关系，以及不同病毒感染对凝血功能的具体机制。
此外，病毒血凝实验还可以应用于临床诊断和疫情监测中。
通过观察血液凝固情况，可以帮助医生判断病人是否感染了特定的病毒，并及时采取相应的治疗措施。
同时，通过对不同病毒样本的血凝实验结果进行比较，可以为疫情监测提供重要参考。
总结：病毒血凝实验是一种有效的实验方法，可以用于研究病毒感染对血液凝固功能的影响。
本次实验结果表明，不同病毒感染对血液凝固功能的影响程度各异。
病毒的血凝实验
病毒的血凝试验某些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集试验(HA)，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的血凝可为相应的特异抗体所抑制，即血球凝集抑制试验(HI)，具有特异性。
通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。
一、目的要求掌握HA和HI的基本操作技术，了解其实用价值。
二、实验材料新城疫病毒液O.ImL, 1%鸡红细胞50mL生理盐水50mL阳性血清0.5mL,96 孔“U'形或“V”形微量反应板，50微升定量移液管，滴头。
实验内容及操作程序1 •血球凝集试验(HA) 以新城疫病毒为例，操作过程如下(表8 —1)。
(1)在96孔“V”形微量反应板上进行，自左至右各孔加50uL生理盐水。
⑵ 于左侧第1孔加50uL病毒原液或收获液，混合均匀后，吸50uL至第2 孔，混合均匀后，吸50uL至第3孔，依次倍比稀释，至第11孔，吸弃50uL，稀释后病毒稀释度为第1孔1: 2,第2孔1: 4,第3孔1: 8……。
最后1孔为对照。
(3)自左至右依次向各孔加1 %鸡红细胞50uL置微型混合器上振荡lmin或以后固定转圈振荡反应板，使血球与病毒充分混合，在37 C温箱中作用15~30min后，待对照红细胞已沉淀可观察结果。
(4)判定结果：以100%凝集(血球呈颗粒性伞状凝集沉于孔底)的病毒最大稀释孔为该病毒血凝价，即一个凝集单位，不凝集者红细胞沉于孔底呈点状。
表8-1 血细胞凝集(HA)试验表从表7-1看出，本病毒的血凝价为1: 128,则1: 128的O.ImL中有1个凝集单位，1：64、1：32分别为2、4个凝集单位。
或将128／4=32，即1：32为4 个凝集单位，第12 孔为血球对照应不凝集。
血凝试验(HA)及血凝抑制试验(HI)
一、目的要求 掌握HA和HI试验的基本操作技术，了解其实用价值。 二、实验材料 1、禽流感毒 2、1%鸡红细胞 3、生理盐水 4、禽流感阳性血清 5、96孔“V”型微量反应板 三、实验内容 1、HA试验术式表： 2、HI试验术式表： 四、作业 1、病毒凝集红细胞是不是一种特异的抗原抗体反应？为什么？ 2、HI试验是不是特异的抗原抗体反应？为什么
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1： 2 1： 4 1： 8 ﹟ 以100%凝集病毒最大稀释孔为该病毒的凝集价
血凝抑制试验(HI)
一、概念： 1 、 HI 试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特异性免疫血清所抑制， 称HI试验。 2、抗体效价：出现红细胞凝集抑制现象的血清的最大稀释倍数叫抗体 效价。
病毒的红细胞凝集试验（HA）
一、 概念 病毒的红细胞凝集现象：许多病毒表面有血凝素，能与各种动物的红细胞 表面受体结合，而出现红细胞凝集现象，简称为病毒的血凝现象。 二、应用 1 、当以被检动物的某一器官为病料，进行HA试验，结果为阳性者，证明 该被检材料中有能凝集红细胞的某种病毒。 2 、凝集价的测定：将被检病毒材料，稀释成不同的稀释倍数，进行 HA试 验，出现血凝现象的各稀释孔中，以100%能出现病毒的红细胞凝集现象的 病毒的最大稀释倍数者即定为凝集价(血凝价)
二、动物体内抗体存在情况 1、当动物感染某病毒而发病时，可在机体的相应器官查出病毒。
2、病毒相当于免疫效应物质中的抗原，病毒进入动物机体，将发生特异
性免疫反应，即产生免疫物质——抗体（ 90%抗体都存在于动物的血清 中），抗原和抗体发生特异性结合反应 3、病畜体内，因受病毒抗原刺激，产生大量相应抗体，故体内抗体效价 较高 4、健康动物，免疫接种后，因受疫苗（抗原）刺激，而发生免疫应答反 应，体内抗体效价较高
病毒的血凝试验名词解释
病毒的血凝试验名词解释病毒的血凝试验是一种常见的检测方法，用于确定病毒感染的存在以及病毒类型的鉴定。
该试验利用了人体免疫系统对病毒的免疫反应，通过检测血浆中的凝集反应来判断病毒感染的有无。
本文将对与病毒的血凝试验相关的一些术语进行解释。
1. 血凝试验（Hemagglutination）：血凝试验是一种常用的免疫学方法，通过观察红细胞的凝集反应来判断病毒的存在。
在病毒感染的情况下，病毒可以使得红细胞发生凝集现象，从而形成一种网状结构。
这种凝集反应可以帮助医生确定病毒感染的类型和程度。
2. 血凝抑制试验（Hemagglutination Inhibition Assay）：血凝抑制试验是一种用于确定病毒感染的抗体的存在与否以及抗体的效力的方法。
在这个试验中，医生将不同浓度的病毒抗原加入患者血浆样本中，观察其中是否出现了病毒凝集反应。
如果患者的血浆中存在与病毒抗原相结合的特异性抗体，那么这些抗体会与病毒抗原结合，并阻止病毒与红细胞产生凝集反应。
通过检测凝集反应的程度，可以评估患者血浆中的抗体效力及抗体的浓度。
3. 血凝试验凝集效价（Hemagglutination Titer）：血凝试验凝集效价是用来表示血浆中抗体浓度的方法。
凝集效价通常以最高稀释度的倒数来表示，也就是需要将血浆稀释到什么程度才能抑制病毒凝集。
凝集效价越高，表示血浆中的抗体浓度越高，对病毒的抵抗能力也就越强。
4. 血凝图谱（Hemagglutination Curve）：血凝图谱是在血凝试验中绘制的一种图形，用于表示血浆稀释度与血凝反应之间的关系。
血凝图谱的横轴通常表示血浆的稀释度，纵轴表示血浆与病毒的凝集反应的程度。
通过绘制血凝图谱，可以评估不同血浆样本的抗体效力以及浓度的分布情况。
这样的图形有助于医生判断病毒感染的程度，病程的演变以及抗体的持续时间等信息。
血凝试验作为病毒感染的常用检测方法，在临床医学中扮演着重要的角色。
通过观察红细胞的凝集反应，医生可以准确判断患者是否感染了病毒，并进一步确定病毒的类型。
病毒的血凝及血凝抑制试验
病毒的血凝及血凝抑制试验有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。
通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。
[目的要求]掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。
[材料与试剂]1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板，50μL定量移液器，滴头，微型振荡器。
2. 生理盐水，0.5% 鸡红细胞悬液。
3. 新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。
[实验内容及操作方法]（一）血球凝集(HA)试验1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50μL生理盐水。
2. 于左侧第1孔加50μL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50μL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50μL；第12孔为红细胞对照。
3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 鸡红细胞悬液50μL，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1）。
表 4-1 病毒血凝试验的操作方法（单位：μL）弃504. 结果判定：从静置后10 min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。
红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。
从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。
(二) 血球凝集抑制(HI)试验1. 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。
实训九 病毒的血凝及血凝抑制试
实训九病毒的血凝及血凝抑制试验（微量法）目的要求熟练掌握病毒的血凝及血凝抑制试验（微量法）的操作方法及结果判定，明确其应用价值。
仪器及材料pH7.2、0.01mol/L PBS或生理盐水、1％鸡红细胞悬液、新城疫病毒液、新城疫病毒待检血清、微量血凝板（V型96孔）、微量移液器（带吸头）、微型振荡器、温箱、离心机、天平、注射器。
方法与步骤（一）病毒的血凝（HA）试验（实验视频六）（实图9-1）1．1％鸡红细胞悬液的制备采成年健康鸡血，加入有抗凝剂（3.8％枸橼酸钠液）的离心管中，用20倍量pH7.2、0.01mol/L PBS磷酸缓冲盐水洗涤3～4次，每次以2000r/min离心3～4min，最后一次5min。
每次离心后弃去上清液，并彻底去除白细胞，最后用PBS稀释成1％红细胞悬液。
2．操作术式（实表2）（1）用微量移液器向反应板每孔分别加PBS 50μl。
（2）换一吸头吸取50μl病毒液，加于第1孔的PBS中，并用移液器挤压3～5次使液体混和均匀，然后取50μl移入第2孔,混匀后取50μl移入第3孔,依次倍比稀释到第11孔，第11孔中液体混匀后从中吸出50μl弃去。
第12孔不加病毒抗原，作对照。
（3）换一吸头吸取1％红细胞悬液依次加入1～12个孔中，每孔加50μl。
（4）加样完毕，将反应板置于微型振荡器上振荡1min，并放室温（18～20℃）下作用30～40min，或置37℃恒温培养箱中作用15～30min取出，观察并判定结果。
3．结果判定及记录“＋”表示红细胞完全凝集。
红细胞凝集后完全沉于反应孔底层，呈颗粒状，边缘不整或锯齿状，而上层液体中无悬浮的红细胞。
“－”表示红细胞未凝集。
反应孔底部的红细胞没有凝集成一层，而是全部沉淀成小圆点，位于小孔最底端，边缘水平。
“±”表示部分凝集。
红细胞下沉情况介于“＋”与“－”之间。
新城疫病毒液能凝集鸡的红细胞，但随着病毒液被稀释，其凝集红细胞的作用逐渐变弱。
病毒血凝实验原理
病毒血凝实验原理
病毒血凝实验是一种用于检测病毒抗体的常规实验方法。
其原理是利用病毒抗
原与抗体结合后形成凝集物沉淀的现象，通过观察凝集的形态和程度来判断血清中是否含有病毒抗体。
该实验方法在临床诊断、流行病学调查以及疫苗研发等领域具有重要的应用价值。
首先，进行病毒血凝实验需要准备好病毒抗原和血清标本。
病毒抗原通常是从
感染病毒的细胞中提取得到，经过纯化和浓缩后得到纯净的抗原溶液。
而血清标本则是从患者或实验动物采集得到，经离心等处理得到血清液。
接下来，将病毒抗原和血清标本按照一定比例混合，然后在适当的条件下进行孵育，使得抗原与抗体发生特异性结合。
其次，病毒血凝实验的原理是基于抗原与抗体相互作用形成凝集物。
当血清中
含有特定的病毒抗体时，与之相应的病毒抗原会与抗体结合形成凝集物，从而在显微镜下观察到凝集的形态和程度。
而如果血清中不含有相应的病毒抗体，抗原与抗体之间则不会发生结合，也就不会出现凝集物的沉淀。
最后，通过观察凝集物的形态和程度，可以初步判断血清中是否含有特定病毒
抗体。
通常来说，凝集物的形态越清晰，沉淀越明显，说明血清中的抗体浓度越高，对应的抗体滴度也就越大。
而如果凝集物模糊不清，沉淀不明显，说明血清中的抗体浓度较低，对应的抗体滴度也就较小。
通过对凝集物的观察和分析，可以对血清中的病毒抗体进行初步的定性和定量判断。
总之，病毒血凝实验是一种简单、快速、可靠的病毒抗体检测方法，具有广泛
的应用前景。
通过深入理解病毒血凝实验的原理和操作流程，可以更好地开展相关的临床诊断和科研工作，为疾病的预防和控制提供有力的支持。
病毒的血凝实验报告
病毒的血凝实验报告病毒的血凝实验报告在医学领域中，血液检测是一项非常重要的诊断手段。
而其中的血凝实验更是在病毒感染的检测中扮演着至关重要的角色。
血凝实验通过观察血液在凝集过程中的变化，可以帮助医生判断患者体内是否存在病毒感染的风险。
血凝实验是一种基于血液凝集反应原理的检测方法。
当机体受到病毒感染时，免疫系统会释放一种叫做凝血酶的物质，以抵御病毒的侵袭。
在血凝实验中，我们可以通过观察血液在凝集过程中形成的凝块来判断患者体内是否存在病毒感染。
在进行血凝实验之前，医生通常会先收集患者的血液样本。
血液样本可以通过静脉采集或者指尖采血的方式获得。
获得血液样本后，医生会将其注入到一种特殊的试管中，然后加入一种叫做凝血酶的试剂。
接着，医生会观察血液在试管中的变化。
正常情况下，血液在凝集过程中会形成一个坚实的凝块。
然而，当体内存在病毒感染时，凝血酶的释放会受到抑制，导致血液凝集的过程变得缓慢或者无法形成凝块。
这种现象在血凝实验中通常被称为凝血时间延长。
凝血时间延长可以提示患者体内可能存在病毒感染的风险。
除了凝血时间延长之外，血凝实验还可以通过观察凝块的形状和质地来判断病毒感染的程度。
一般来说，病毒感染越严重，凝块就越小且质地较松散。
这是因为病毒感染会导致机体免疫系统的异常反应，从而影响血液凝集的过程。
然而，需要注意的是，血凝实验并不能确定具体的病毒类型。
它只能提示患者体内可能存在病毒感染的风险，而具体的病毒类型需要通过其他检测手段来确定。
因此，在进行血凝实验时，医生通常会结合患者的病史、临床表现以及其他检测结果来进行综合判断。
此外，血凝实验还可以用于监测病毒感染的治疗效果。
在治疗过程中，医生可以通过连续进行血凝实验来观察凝血时间是否逐渐恢复正常。
如果凝血时间逐渐缩短，说明治疗有效；反之，如果凝血时间没有明显改善，可能需要调整治疗方案。
总之，血凝实验是一种重要的病毒感染检测手段。
通过观察血液在凝集过程中的变化，可以帮助医生判断患者体内是否存在病毒感染的风险，并监测治疗效果。
血凝和血凝抑制试验
3. 4.
பைடு நூலகம்
0.85%生理盐水。 生理盐水。 生理盐水 被检血清，采自被检鸡的健康血清。 被检血清，采自被检鸡的健康血清。
四、操作步骤
（一）血凝试验（HA） 血凝试验（ ）
1. 在血凝板第一排的 在血凝板第一排的1~12孔加入 孔加入50µl生理盐水。 生理盐水。 孔加入 生理盐水 2. 在第1孔中加入 病毒抗原， 在第 孔中加入50µl病毒抗原，反复吸取混匀 孔中加入 病毒抗原 后吸50µl到第 孔，如此倍比稀释直到第 孔， 到第2孔 如此倍比稀释直到第10孔 倍比稀释直到第 后吸 到第 混匀后弃50µl； 最后两孔 （ 11、 12） 为红细 ； 最后两孔（ 、 ） 混匀后弃 胞对照。 胞对照。
25 25 25 50
25 25 25 50
25 25 25 50
25 25 25 50
25
弃 50µl /
50 / / 50
25 50
注： 11孔为病毒对照 应该完全凝集， 12孔为细胞对照 孔为病毒对照， 孔为细胞对照， 1) 第 11 孔为病毒对照 ， 应该完全凝集 ， 第 12 孔为细胞对照 ， 应该完全沉积到孔底，只有当对照成立时试验结果方有效。 应该完全沉积到孔底 ， 只有当对照成立时试验结果方有效。 以红细胞100 凝集的稀释度为判定终点。 100% 2) 以红细胞 100% 凝集的稀释度为判定终点 。 血凝抑制滴度大 于等于1 为阳性，小于1 为阴性，等于2 为可疑。 于等于1：24为阳性，小于1：22为阴性，等于23为可疑。
病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分开， 2 ） 病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分开 ， 血凝素呈游离状态，例如天花 牛痘、 天花、 血凝素呈游离状态，例如天花、牛痘、鼠痘等 病毒，它们的凝集现象是可逆的。 病毒，它们的凝集现象是可逆的。 3 ） 脑炎病毒 、 口蹄疫病毒等 ， 凝集红细胞的条 脑炎病毒、 口蹄疫病毒等， 件很严格，对红细胞的种类有很严格的选择， 件很严格，对红细胞的种类有很严格的选择， 同时还要掌握反应的pH和温度等。 同时还要掌握反应的pH和温度等。 pH和温度等
实训五病毒的血凝与血凝抑制试验.
实训五 病毒的血凝与血凝抑制试验
主要内容
• 目的要求 • 仪器及材料 • 方法与步骤 • 结果判定 • 注意事项
实训五 病毒的血凝与血凝抑制试验
一、目的要求
熟练掌握病毒的血凝与血凝抑制试验 （微量法）的操作方法及结果判定，明确其 应用价值。
实训五 病毒的血凝与血凝抑制试验
二、仪器及材料
pH7.2、0.01mol/L PBS或生理盐水、3.8%枸橼酸钠、新城 疫病毒液、离心机、天平、1％鸡红细胞悬液、新城疫病毒 液、新城疫病毒待检血清、新城疫标准阳性血清、新城疫 标准阴性血清、微量血凝板（V型96孔）、微量移液器（带 吸头）、微型振荡器、温箱、注射器。
实训五 病毒的血凝与血凝抑制试验
实训五 病毒的血凝与血凝抑制试验
结果举例
上图:血凝价为7log2或1：128
实训五 病毒的血凝与血凝抑制试验
（二）4V配制： HA价除以4即为4HAU抗原的稀释倍数。假设HA
价为256，则4HAU抗原的稀释倍数为64，吸取1mL 抗原加入63mL生理盐水即为4HAU抗原。
实训五 病毒的血凝与血凝抑制试验
实训五 病毒的血凝与血凝抑制试验
血凝抑制试验结果规律
完全不凝集：红细胞呈明显纽扣状沉于孔底 不完全凝集：介于两者之间
完全凝集：红ห้องสมุดไป่ตู้胞呈伞状均匀分布于孔底
实训五 病毒的血凝与血凝抑制试验
结果举例
上图：第三排血凝抑制滴度为7Log2
实训五 病毒的血凝与血凝抑制试验
四、注意事项
• 微量移液器的正确使用，保证量取液体量准确。 • 使用1%红细胞之前首先混匀。 • 勿忘试验中抗原对照孔和生理盐水对照孔的设立。 • 反应的温度和时间控制好。
血凝实验实验报告
一、实验目的1. 理解血凝现象的原理。
2. 掌握血凝实验的操作步骤。
3. 学习通过血凝实验判断血凝素和血凝抑制抗体的存在。
二、实验原理血凝现象是指某些病毒能够凝集动物红细胞的能力。
利用这一特性，可以通过血凝实验检测病毒的存在以及血清中抗体的水平。
血凝抑制试验（HI试验）是一种常用的血清学检测方法，通过检测血清中的血凝抑制抗体，可以判断感染状态、疫苗接种效果等。
三、实验材料1. 红细胞：鸡红细胞、兔红细胞等。
2. 病毒：流感病毒、副流感病毒等。
3. 血凝素（HA）：用于血凝实验。
4. 血凝抑制抗体（HI）：用于血凝抑制实验。
5. 实验器材：微量移液器、酶标板、振荡器、离心机等。
四、实验方法1. 血凝实验（1）将红细胞用生理盐水洗涤三次，制成1%的红细胞悬液。
（2）取96孔酶标板，每孔加入25μl PBS液。
（3）在第一孔中加入25μl病毒悬液，混匀后吸取25μl加到第二孔，依次倍比稀释至第二排最后一孔，弃去25μl。
（4）在每孔中加入25μl 1%红细胞悬液。
（5）将酶标板置于振荡器上振荡10秒，室温静置30min。
（6）观察结果，记录出现血凝现象的孔数。
2. 血凝抑制实验（1）取96孔酶标板，每孔加入25μl PBS液。
（2）在第一孔中加入25μl病毒悬液，混匀后吸取25μl加到第二孔，依次倍比稀释至第二排最后一孔，弃去25μl。
（3）在第三至第六排孔中加入不同浓度的血清。
（4）在每孔中加入25μl 1%红细胞悬液。
（5）将酶标板置于振荡器上振荡10秒，室温静置30min。
（6）观察结果，记录出现血凝抑制现象的孔数。
五、实验结果与分析1. 血凝实验通过观察实验结果，发现病毒悬液孔数越多，红细胞凝集现象越明显。
说明病毒具有血凝活性。
2. 血凝抑制实验通过观察实验结果，发现不同浓度的血清孔数出现血凝抑制现象的孔数不同。
说明血清中含有能够抑制血凝的抗体。
六、实验结论1. 血凝实验结果表明，病毒具有血凝活性。
HA-HI试验
8、判定结果
（1）血清抗体效价的判断：
能够使4单位病毒凝集鸡红细 胞的作用完全被抑制的血清最 高稀释倍数，称为该血清的抗 体效价，以2的指数表示。
孔号： 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11ห้องสมุดไป่ตู้
12
上图，血清抗体效价依次为28、 27、28、29、28、27、27、26
2、判定标准：
（1）一般认为鸡的免疫临界水平 为25（成鸡）或26（雏鸡）。 （2）鸡血清的凝集抑制价，全部 高于26可适当推迟新城疫免疫时间， 全部低于24以下，应马上进行新城 疫疫苗接种。
血清稀释倍数
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
血清 稀释 倍数
21
22
23
24
25
26
27
28
29
210
211 对 照
3、加4单位抗原
1~12孔各加25微
升。 4、置于振荡器上，振荡1分钟，室 温静置 20分钟。 5、加1%的鸡红细胞悬液 用微量 移液器向1~12孔各加1%红细胞悬 液25微升。 6、置于振荡器上，振荡1分钟。室 温静置20~25分钟后观察结果。
1%红细胞悬液制备
1、抗凝血的制备 采集3只非免疫成年健康鸡血液， 由翅静脉或心脏采血，按3.8%柠檬酸钠与血液1：4 混合制成。 2、1%红细胞悬液制备 将抗凝血加入离心管内， 用生理盐水洗涤5次，每次2000r/min离心5min ， 将血浆、白细胞充分弃去，最后一次离心时间为 10min，离心结束后，弃去上清液，根据剩下的红 细胞体积，用生理盐水配制成1%红细胞悬液。
病毒的血凝抑制试验
结果：以出现“-”的待检血清最高稀释倍数为血凝抑制效价。 第12孔为红细胞对照，红细胞沉于孔底成一小圆点。 第11孔为抗原对照，抗原与红细胞结合，在孔中可见均匀的凝集小颗粒。 然后观察1-10孔： - 红细胞完全沉于孔底成一个小圆点，倾斜45度，红细胞呈线状流下，则为阳性，即 抗体完全抑制了抗原与红细胞的结合。
4.在第1~11孔各加入25uL含4HAU抗原，轻叩反应板，使反应物混匀，室温下（20-25℃ ） 静置不少于30min，4℃ 不少于60min； 5.每孔加入25uL1%的红细胞悬液，轻晃混匀后，室温下（20-25℃ ）静置约40min，若环境 温度太高，放4℃静置60min。当第12孔中红细胞呈明显纽扣状沉到孔底时判定结果。
结果判定
病毒血凝试验
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（3）在第1孔至第12孔中，加1.2%鸡红细 胞悬液25ul。
（4）在桌面上轻轻滑动震荡，使红细胞充 分混匀，置于25℃-37℃，45分钟-60分钟， 观察结果。
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5．结果判定
以完全凝集的最高稀释度为该病毒液样 品的凝集价。
完全凝集是指孔中央没有自然沉淀的小 红点，孔底面是一层薄的凝集物，上清 液较透明。
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3．实验器材和材料的准备 （1）病毒抗原的制备 （2）1.2%鸡红细胞悬液的制备 （3）微量反应板和加样枪
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4．操作方法
（1）在干净的微量反应板上选好一排孔， 第1孔至第12孔，每个孔中加25ul生理盐水。
（2）在第1孔中加25ul新城疫病毒抗原液， 混匀，吸25ul到第2孔，按倍比稀释法，稀 释到第11孔。第1孔至第12孔，每个孔中再 补25ul生理盐水。
病毒血凝试验
1．目的和要求 通过本次实验，学生可理解和掌握病毒血凝
试验的原理和方法。
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2．试验原理
某些病毒（如新城疫病毒、流感病毒）表面 分子可以与一些动物红细胞表面分子发生结 合反应，在两者比例适当及适宜的液体环境 中，这种结合反应会引起该红细胞发生凝集， 以此建立的实验方法称为血凝试验。该试验 可以鉴定某些病毒的血凝性。
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病毒的血凝试验
某些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集试验(HA)，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的血凝可为相应的特异抗体所抑制，即血球凝集抑制试验(HI)，具有特异性。
通过HA—HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。
一、目的要求
掌握HA和HI的基本操作技术，了解其实用价值。
二、实验材料
新城疫病毒液0.1mL，1％鸡红细胞50mL，生理盐水50mL，阳性血清0.5mL,96孔“U”形或“V”形微量反应板，50微升定量移液管，滴头。
实验内容及操作程序
1．血球凝集试验(HA)以新城疫病毒为例，操作过程如下(表 8—1)。
(1)在96孔“V”形微量反应板上进行，自左至右各孔加50uL生理盐水。
(2)于左侧第1孔加50uL病毒原液或收获液，混合均匀后，吸50uL至第2孔，混合均匀后，吸50uL至第3孔，依次倍比稀释，至第11孔，吸弃 50uL，稀释后病毒稀释度为第1孔1：2，第2孔1：4，第3孔1：8……。
最后1孔为对照。
(3)自左至右依次向各孔加1％鸡红细胞50uL置微型混合器上振荡lmin或以后固定转圈振荡反应板，使血球与病毒充分混合，在37℃温箱中作用15~30min后，待对照红细胞已沉淀可观察结果。
(4)判定结果：以100％凝集(血球呈颗粒性伞状凝集沉于孔底)的病毒最大稀释孔为该病毒血凝价，即一个凝集单位，不凝集者红细胞沉于孔底呈点状。
表8-1 血细胞凝集(HA)试验表
从表7-1看出，本病毒的血凝价为1：128，则1：128的0.1mL中有1个凝集单位，1：64、1：32分别为2、4个凝集单位。
或将128／4=32，即1：32为4个凝集单位，第12孔为血球对照应不凝集。