病毒的血凝实验

病毒的血凝试验

某些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集试验(HA)，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的血凝可为相应的特异抗体所抑制，即血球凝集抑制试验(HI)，具有特异性。通过HA—HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。

一、目的要求

掌握HA和HI的基本操作技术，了解其实用价值。

二、实验材料

新城疫病毒液0.1mL，1％鸡红细胞50mL，生理盐水50mL，阳性血清0.5mL,96孔“U”形或“V”形微量反应板，50微升定量移液管，滴头。

实验内容及操作程序

1．血球凝集试验(HA)以新城疫病毒为例，操作过程如下(表 8—1)。

(1)在96孔“V”形微量反应板上进行，自左至右各孔加50uL生理盐水。

(2)于左侧第1孔加50uL病毒原液或收获液，混合均匀后，吸50uL至第2孔，混合均匀后，吸50uL至第3孔，依次倍比稀释，至第11孔，吸弃 50uL，稀释后病毒稀释度为第1孔1：2，第2孔1：4，第3孔1：8……。最后1孔为对照。

(3)自左至右依次向各孔加1％鸡红细胞50uL置微型混合器上振荡lmin或以后固定转圈振荡反应板，使血球与病毒充分混合，在37℃温箱中作用15~30min后，待对照红细胞已沉淀可观察结果。

(4)判定结果：以100％凝集(血球呈颗粒性伞状凝集沉于孔底)的病毒最大稀释孔为该病毒血凝价，即一个凝集单位，不凝集者红细胞沉于孔底呈点状。

表8-1 血细胞凝集(HA)试验表

从表7-1看出，本病毒的血凝价为1：128，则1：128的0.1mL中有1个凝集单位，1：64、1：32分别为2、4个凝集单位。或将128／4=32，即1：32为4个凝集单位，第12孔为血球对照应不凝集。