高脂肪饮食对大鼠青春期启动影响的实验研究_矫金玲

性早熟是青春期提前的一种典型征象，是一种 生长发育异常，近年发病率明显上升已成为最常见 的小儿内分泌疾病之一[1]。研究[2]显示，儿童性成熟年 龄的提前主要是外界因素作用的结果，其中以营养 等生活条件的改善最为重要。动物实验[3]表明，青春 期启动受营养因素影响，体质量低、摄食减少的营养 不良大鼠则青春期延迟。随着生活水平的提高，中国
饲料种类
蛋白质
脂肪
碳水化合物 道口开放时（大鼠 36 日龄），标准组大鼠仍有 5 只未
标准饲料
１９．２
１６．６
高脂饲料
９．２
４５．０
６４．２
见阴道口开放，与较标准组比较，高脂组大鼠阴道口
３５．８
开放时间提前，差异有统计学意义（P<0.01），见表 3。
1．3 实验方法 实验第 1 天（大鼠 21 日龄）起至大 2．3 大鼠第一性周期时间（D1） 各组各期的阴道细
7
（P<0.05）。
表达水平的确切数值，需进一步实验验证。
3讨论
营 养 过 剩 致 性 早 熟 的 机 制 ，目 前 有“ 临 界 体 质
人类生殖系统的发育和功能维持受下丘脑-垂 量”学说，即营养过剩导致体质量增加，当体质量到
体-性腺轴（HPGA）的控制。青春期启动前 HPGA 功 达某一临界时，出现青春期启动[10]。本实验对大鼠体
鼠，每日进行阴道细胞涂片观察其性周期变化，待高 动情间期。高脂组大鼠第一个性周期建立的时间较
脂组大鼠均出现阴道口开放，则于当日 15:00 处死所 标准组大鼠显著提前，差异有统计学意义（P<0.01），
有大鼠。实验第 16 天（大鼠 36 日龄）大鼠禁食不禁 见表 3。
水 5h 称重后，水合氯醛麻醉下腹腔动脉取全血 4~ 5mL，离心 3000r/min×10min，吸取上层血清，置于20℃冰箱冻存备用。大鼠取血后，开腹，分离周围结
动情间期的 D1 记为 37 日，将处死日前仍未出现阴 为（6.275 ±0.422）mIU/mL，标 准 组 为（4.979 ±0.587）
道口开放大鼠的 D1 记为 38 日。形态学指标测量：根 mIU/mL，高脂组大鼠明显升高，差异有统计学意义
浙江中西医结合杂志 2015 年第 25 卷第 1 期 Zhejiang JITCWM（Vol.25 No.1 2015）
脂饲料成分含量（以 1000 g 计）：酪蛋白 245.41 g，玉 异均无统计学意义（P>0.05），见表 2。
米淀粉 318.19 g，蔗糖 100 g，豆油 85.9 g，猪油 147.8 g， 表 2 各组大鼠体质量增量、日均进食量的比较（g，x±s）
纤维素 61.35 g，矿物质 33.45 g，维生素 0.32 g，L－胱 组别
Effect of High Fat Diet on the Onset of Puberty of Rats JIAO Jinling1，CHEN Hua2，DONG Yixiang2，TAO Min2. 1 Department of Pediatrics，TCM Hospital of Xiaoshan District，Hangzhou，Hangzhou(311201)，China; 2 Zhe－ jiang Chinese Medical University, Hangzhou（310053）, China
只数
体质量增量
日均进食量
氨酸 3.68 g，氯化胆碱 3.83 g，TBHQ 0.05 g。各组饲料 标准组
１０
74.2±4.022
88.3±31.229
主要营养素占总热卡百分比见表 1。
高脂组
１０
74.4±6.947
90.4±32.053
表 1 各组饲料主要营养素供能比（%）
2．2 大鼠阴道口开放时间（VO） 高脂组全部大鼠阴
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每日光照 14h。按照配对设计的分配原则，根据窝别 据器官指数计算公式（器官指数=器官湿重/体质量）
及体质量，从中选取 20 只，分为高脂组 10 只，饲以 计算卵巢指数和子宫指数。血清促黄体生成素（LH）
料，按照美国 AIN93G 配方标准配制。高脂饲料在标 用多因素方差分析，方差齐同时采用 ANOVA 检验，
准饲料的基础上调整脂肪供能比为 45.0%而成[5]。标 方差不齐时采用 Friedman M 检验。P＜0.05 表示差异
准饲料成分含量（以 1000 g 计）：酪蛋白 200 g，玉米 有统计学意义。
鼠处死日（大鼠 36 日龄），每日记录各组大鼠进食量， 胞涂片表现相同，性周期的持续时间大致相同，约 4～
用电子秤测大鼠体质量，用直尺记录大鼠尾长。每天 5 天。实验第 16 天（大鼠 36 日龄），高脂组有 7 只大
9:00 观察大鼠阴道口开放情况，对阴道口开放的大 鼠出现第一个动情间期，标准组无大鼠出现第一个
组别 标准组
表 3 各组大鼠 VO、D1 时间比较（d，x±s）
只数 10
VO 36.4±0.96
D1 37.5±0.53
缔组织，取出双侧卵巢及双角子宫，子宫远端至子宫 高脂组
10
33.2±1.87**
35.7±1.16**
颈，用电子天平称重卵巢和子宫湿重。
注：与标准组比较，**P<0.01
1．4 检测指标与方法 大鼠阴道口开放时间（VO）： 2．4 脏器指数 高脂组大鼠子宫、卵巢指数较标准
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·论 著·
高脂肪饮食对大鼠青春期启动影响的实验研究
矫金玲 1 陈 华 2 董逸翔 2 陶 敏 2
摘 要 目的 观察高脂肪饮食对大鼠青春期启动的影响。方法 20 只雌性 SD 大鼠按配对设计 的分组原则，分为标准组、高脂组，各 20 只。实验第 1 天起标准组大鼠喂养标准饲料，高脂组大鼠 喂养高脂肪饲料。每天观察大鼠阴道口开放情况，当高脂组大鼠全部出现阴道口开放，即于当日下 午处死全部大鼠。观察两组大鼠阴道口开放时间（VO）及第一性周期时间（D1），计算子宫、卵巢指 数，采用放射免疫法检测血清黄体生成素（LH）的含量。结果 与标准组比较，高脂组阴道口开放时 间（VO）（33.2±1.87）天，第一动情间期时间（D1）（35.7±1.16）天，均较标准组的（36.4±0.96）天、（37.5± 0.53）天明显提前（P＜0.01），LH 含量高脂组（6.275±0.422）mIU/mL，标准组（4.979±0.587）mIU/mL，两 组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 高脂肪饮食可促使大鼠青春期启动提前。 关键词 大鼠；青春期启动；高脂肪饮食；实验研究
ABSTRACT Objective To investigate the effect of high fat diet on the onset of puberty of rats. Methods Twen－ ty female SD rats were randomized into standard group and high-fat group by paired design, 10 for each group． From the first day of the experiment, rats in standard group were fed with standard diet, rats in high-fat group were fed with high fat diet. When all 10 rats in high-fat group had vaginal opening （VO）, then they were sacri－ ficed on the afternoon of that day. The times of VO and first cycle（D1） were observed, the uterus index and ovar－ ian index were calculated, and the content of serum luteinizing hormone （LH） was detected by radioimmunoassay. Results Compared with standard group, VO and D1 was significantly earlier in high-fat group （VO：33.2±1.87d vs 36.4±0.96d；D1：35.7±1.16d vs 37.5±0.53d；all P＜0.01），and the serum LH were statistically increased in high-fat group（6.275±0.422mIU/mL vs 4.979±0.587mIU/mL，P＜0.05）． Conclusion The high fat diet can induce early puber－ ty starts in rats. KEY WORDS rats；puberty starts；high fat diet；experimental study
淀粉 397.48 g，糊精 132 g，蔗糖 100 g，豆油 70 g，纤 2 结 果
维素 50 g，矿物质 35 g，维生素 10 g，L－胱氨酸 3 g， 2．1 各组大鼠进食量、体质量比较 不同饲料组大
氯化胆碱 2.5 g，特丁基对苯二酚（TBHQ）0.014 g。高 鼠日均进食量比较，大鼠体质量、体质量增量比较差
基金项目：浙江省教育厅高校科研计划（No.20060743）；浙江省医药卫 生科技计划（No.2005A073）
作者单位：1 杭州市萧山区中医院儿科 （杭州 311201）；2 浙江中医药 大学（杭州 310053）
通信作者：陈华，Tel：18958022829
居民膳食结构发生变迁，人们更趋向于消费动物性 食物，脂肪供能比显著升高[4]。膳食结构中脂肪供能 比的增加与儿童性早熟发病率上升之间有无因果关 系，目前尚缺乏可靠的临床及实验依据。本实验通过 增加大鼠饲料中脂肪的供能比，探讨高脂肪饮食与 大鼠青春期启动之间的关系。 1 材料与方法 1．1 动物及分组 21 日龄清洁级雌性 SD 大鼠 10 窝，购买于上海西普尔-必凯实验动有限公司，合格 证号：2008001601312。饲养于浙江中医药大学实验 动物中心，饲养条件：温度 18～23℃，湿度 60％～80％，
高脂肪饲料，标准组 10 只，饲以标准饲料。各组大鼠 水平采用放射免疫法检测，操作严格按照试剂盒（北
自由摄食及饮水。
京华埠力特生物科技研究所）说明书进行。
1．2 动物饲料 动物饲料由南通特洛非饲料科技有 1．5 统计学方法 计量资料以均数±标准差（x±s）表
限公司提供，标准饲料为大鼠生长期纯化型颗粒饲 示。应用 SPSS19.0 统计软件包分析数据，统计方法采
能处于静止状态，下丘脑脉冲发生器活动处于抑制 质量的测量发现，实验期间各组大鼠体质量及体质
状态，从而使性腺处于幼年状态。正常青春期启动 量增量无显著差异。说明高脂组大鼠较标准组大鼠
时，随着下丘脑的成熟，下丘脑脉冲发生器活动增 青春期启动提前，与体质量相关性不大，提示高脂饮
只数
子宫指数（×10-3）
卵巢指数（×10-4）
10
0.975±0.072
4.428±0.784
规则的性周期出现，顺序为动情前期、动情期、动情 高脂组
10
1.183±0.134*
5.806±0.951*
后期和动情间期。实验第 16 天（大鼠 36 日龄）处死 注：与标准组比较，*P<0.05
所有大鼠时，将处死日前阴道口开放但未出现第一 2．5 各组血清 LH 水平比较 高脂组大鼠血清 LH
待高脂组全部大鼠阴道口开放时（大鼠 36 日龄），将 组高，差异有统计学意义（P<0.05），见表 4。
标准组阴道口未开放的大鼠阴道口开放时间记为 37 日）。大鼠第一性周期时间（D1）：各组大鼠阴道口开 放后，每日 9:00 做大鼠阴道脱落细胞涂片，可观察到
组别 标准组
表 4 各组大鼠子宫、卵巢指wk.baidu.com比较（x±s）