环境微生物菌种鉴定精品PPT课件
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《环境微生物检测》课件
利用DNA或RNA等分子标记进行微生物的 检测和鉴定。
3 免疫学方法
4 快速测定方法
利用抗体和抗原的特异性反应，检测微生 物的存在和浓度。
结合了分子生物学和酶学等技术，可快速 检测和鉴定微生物。
常见环境微生物
空气中的微 生物
包括细菌、真菌和 病毒等，对空气质 量和室内环境有重 要影响。
土壤中的微 生物
《环境微生物检测》PPT 课件
探索环境微生物检测的奥秘，深入了解环境微生物的重要性和检测方法。
概述
环境微生物检测是指对环境中微生物的检测和分析。它旨在了解和评估微生 物对环境生态系统的影响，支持环境保护和食品安全等领域的决策。
检测方法
1 基于培养的方法
2 分子生物学方法
通过培养微生物在不同培养基上生长，然 后进行鉴定和计数。
包括细菌、放线菌 和真菌等，对土壤 肥力和植物生长起 关键作用。
水中的微生物
包括细菌、藻类和 病毒等，对水质和 生态系统稳定性具 有重要影响。
食品中的微 生物
包括细菌、霉菌和 酵母等，对食品质 量和安全性具有重 要影响。
环境微生物检测的意义
环境保护中的应用
帮助监测和评估环境中微生物的污染和生态风险，制定有效的环境保护策略。
医学中的应用
用于检测和鉴定病原微生物，指导疾病的预防和治疗。
食品安全中的应用
用于检测和鉴定食品中的微生物污染，保障公众的健康和食品安全。
小结
1
环境微生物检测的重要性
微生物在环境中扮演着重要的角在和影响是必要的。
不同的检测方法在准确性、灵敏度和
速度等方面各有优劣。
3
环境微生物检测的前景展望
随着技术的发展和应用的推广，环境 微生物检测将广泛应用于各个领域。
《微生物的鉴定》课件
学习成果回顾
通过本课程，您已了解了微生物鉴定的方法和 实验操作，掌握了相关的鉴定技巧。
《微生物的鉴定》PPT课 件
微生物的鉴定是一项重要的实验技术。本课件将介绍微生物鉴定的意义、方 法以及实验操作等内容，帮助您深入了解微生物鉴定的过程。
பைடு நூலகம்
概述
微生物鉴定的意义
了解和鉴定微生物有助于诊断疾病、控制传染病的传播，并促进食品安全和环境保护。
微生物鉴定的方法
通过形态学、生理生化和分子生物学方法对微生物进行鉴定。
通过检测微生物的基因序列 或特定基因的存在与否，进 行高精确度的鉴定。
鉴定流程：DNA提取 - PCR 扩增 - 凝胶电泳 - 鉴定结果
实验操作
1
1. 样品采集与处理
选择合适的样品采集方法，并对样品进行预处理，如培养基选择和平板涂布。
2
2. 培养与观察
提供适当的培养条件，如温度和pH值，并使用显微镜观察微生物的生长和形态。
3
3. 鉴定流程实例
根据鉴定方法步骤，进行实际的鉴定操作，通过案例分析掌握鉴定技巧。
注意事项
实验安全
在进行微生物实验时，需遵循实验室的安全 规范，如佩戴手套、防护眼镜和操作台面的 清洁。
操作规范
实验操作需遵守相应的操作规程和程序，确 保实验结果的准确性和可靠性。
总结
微生物鉴定的重要性
微生物鉴定在医学、农业和环境领域起着重要 作用，有助于疾病诊断、食品安全和环境保护。
鉴定方法
1. 形态学鉴定
通过观察微生物的形态学特 征，如细胞形状、颜色和结 构，进行初步的鉴定。
鉴定流程：样品采集 - 培养 形态观察 - 鉴定结果
2. 生理生化鉴定
实验四、环境中微生物的检测PPT课件
谢谢观看
03
实验步骤
样品采集
采集环境中的水样、 土壤样、空气样等， 确保采集的样品具有 代表性。
记录采集时间、地点、 环境条件等信息，以 便后续分析。
使用无菌容器或薄膜 采集样品，避免交叉 污染。
样品处理
将采集的样品进行稀释，使微生物分 散。
对样品进行富集培养，提高微生物的 数量。
对样品进行过滤或离心，使微生物与 杂质分离。
结果应用
环境监测
实验结果可以为环境监测提供依 据，了解环境中微生物的分布和
数量，评估环境质量。
公共卫生
实验结果可以为公共卫生领域提 供参考，了解环境中微生物的种 类和数量，评估其对人类健康的
风险。
科学研究
实验结果可以为科学研究提供数 据支持，深入探究环境中微生物
的生态学和生物学特性。
05
实验总结
实验不足与改进
实验不足
在实验过程中，我发现自己在操作显微镜时还不够熟练，有 时会出现观察不准确的情况。此外，我在实验数据处理方面 也存在一些问题，如数据记录不准确、分析不全面等。
改进方法
为了提高实验的准确性和可靠性，我计划在课后多加练习使 用显微镜，提高自己的操作技能。同时，我也要加强学习数 据处理和分析方面的知识，掌握更多的统计方法和软件应用 技巧。
实验四、环境中微生物的检测ppt 课件
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验总结
01
实验目的
掌握微生物检测的基本原理
01
微生物检测是利用特定的方法和 技术对环境中的微生物进行检测 和计数，以评估环境卫生状况和 潜在的健康风险。
02
基本原理包括微生物培养法、免 疫学方法、分子生物学方法等， 这些方法基于不同原理，能够对 不同类型的微生物进行检测。
《环境中的微生物》PPT课件
6
（一）两个生物分类系统
1、生物的五界系统： 惠特克，1969年；
动物界 植物界 原生生物界 真菌界 原核生物界
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7
2、三原界（三域）系统：沃斯，1978 根据生物的16SrRNA碱基序列，对生 物进行划分。
真细菌 古细菌 真核生物
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8
生物
无细胞结构生物—病毒 原核生物
• 二界系统：植物界、动物界 • 三界系统：植物界、动物界、原生生物界 • 四界系统：植物界、动物界、原始生物界（原生动物、真菌、部
分藻类）、菌界（细菌、蓝细菌） • 五界系统：动物界、植物界、原生生物界、真菌界、原核生物界 • 三原界系统：古细菌原界、真细菌原界、真核生物原界
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5
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13
• aA r.r球a n g菌e m e n t o f S p h e r ic a l B a c te r ia l C e lls
• 球形的细d菌ip lo co cci
• 球菌大小为0.5~2.0 μm
l． 单球菌（脲微球菌） 2. 双球菌（肺str炎e p链to球c o c菌c i） 3．链球菌（乳链球菌） 4．四联球菌 5．八叠球菌（甲烷八叠球菌） 6．葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）
第二章 环境中的微生物
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1
第一节 微生物类群与生物三域
一、微生物及其类群 二、生物三域特征
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2
病毒
细菌
菌
“微型植物
真菌
生
”
藻
物
微型动物 虫
动物
植物
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菌种鉴定 ppt课件
根据同源性分析结果和系统发生树来判定该菌株为Cellulophaga属细菌, 命名Cellulophaga sp.QY201。
总结
筛选得到一株高产酶菌株QY201，该菌株具有酶活高、降解 速率快、并且能同时分泌出κ-、ι-、λ-卡拉胶酶等特点。 通过采用形态观察和16S rDNA技术，菌株QY201可以鉴定为 Cellulophaga属，命名为Cellulophaga sp.QY201。
菌种鉴定
内容
简述 16sRNA鉴定菌种 总结
简述
传统的细菌学检验与鉴定的主要依据是形态特征和生理性状,需要进行 细菌培养及一系列生化反应或免疫学检测.方法复杂费时,对有些细菌 也往往不能给出理想的鉴定结果。
诸如引起肺结核的分支杆菌，其生长缓慢，经常要培养几才能得到供 生物化学分析，鉴定和株系/亚种分型(subtyping)的纯净培养物。通 过传统的培养和生物化学分析方法对其检测和鉴定费时且费用大，影 响医生给予患者最合适的治疗。因为如果不能对细菌进行快速精确的 鉴定，医生只能给患者开广谱抗生素，因而引发无效治疗和细菌耐药 性。
加拿大Labatt公司的研究人员在啤酒腐败菌的乳酸菌的检测中使 用5S和16SRNA基因进行PCR扩增，用于菌种的特性鉴定。已成 功地对乳杆菌、片球菌、明膜串珠菌属中的菌株做出鉴定。
系统发育树
100 61
99 72
100
85
96 100
Zobellia galactanovora.AF208293 A*.AF468422 Psychroserpens mesophilus.DQ001321 Mucus bacterium.AY654753 Cytophaga baltica.AJ005972 Cytophaga fucicola.AJ005973 QY201 Cellulophaga lytica.AB032513 Cellulophaga sp.AB180390 F*.AJ936938 Cytophaga marinoflava.D12668
环境微生物ppt课件
环境微生物在可持续发展中的作用
生物降解与转化
生物修复
利用微生物的代谢活动， 实现有机污染物的生物 降解和转化，降低环境
污染程度。
通过微生物的作用，促 进土壤和水体的自净能 力，修复受污染的环境。
资源循环利用
利用微生物的发酵、转 化等功能，实现废弃物 的资源化利用，提高资
源利用效率。
新能源开发
发掘产氢、产甲烷等具 有新能源开发潜力的微 生物资源，推动清洁能
污染物对微生物酶活性的影响
与酶活性中心结合，降低酶活性，影响微生物的代 谢过程。
污染物对微生物遗传物质的影响
造成DNA损伤、基因突变等，影响微生物的遗传稳 定性和进化。
微生物在污染治理中的应用
生物修复技术
利用特定微生物或微生物 群落的降解能力，去除或 降低环境中污染物的浓度。
生物处理技术
通过微生物的代谢活动， 将污染物转化为无害或低 毒物质，如废水处理中的 活性污泥法。
环境微生物ppt课件
contents
目录
• 环境微生物概述 • 环境微生物的生理功能 • 环境微生物与污染物的相互作用 • 环境微生物的监测与评价 • 环境微生物资源与利用 • 环境微生物的未来展望
01
环境微生物概述
定义与分类
定义
环境微生物是指存在于自然环境中， 对环境产生直接或间接影响的微生 物群体。
适应性多样性
环境微生物能够适应各种极端环 境，如高温、低温、高盐、高酸
等，展现出强大的生命力。
02
环境微生物的生理功能
物质循环与能量流动
微生物在生态系统中的物质循环
01
通过分解有机物和无机物，将营养物质释放到环境中，供其他
生物利用。
《环境微生物检测》课件
挑战
环境微生物种类繁多
环境中存在的微生物种类繁多，包括细菌、 病毒、真菌等，检测难度大。
检测技术的局限性
目前的环境微生物检测技术尚不完善，存在 一定的误差和局限性。
微生物的变异和进化
微生物具有快速变异和进化的特点，可能导 致检测结果的不准确。
样本污染和交叉感染
在采集和运输样本过程中，可能发生污染和 交叉感染，影响检测结果的准确性。
垃圾填埋场微生物检测案例
总结词
垃圾填埋场微生物检测案例分析
详细描述
介绍垃圾填埋场微生物检测的案例，包括垃圾填埋场的环境特点、微生物种类、检测方 法以及垃圾填埋对环境的影响等方面的内容。
THANK YOU
感谢各位观看
土壤检测
总结词
土壤检测是环境微生物检测的另一重要应用，通过检测土壤中的微生物种主要包括细菌、放线菌、真菌等指标的检测，以评估土壤的肥力和健 康状况。此外，针对特定污染场地，如重金属污染、农药污染等，还需进行特 定的微生物检测，以确定污染物的分布和影响。
目的
环境微生物检测的目的是了解和评估 环境中微生物的种类、数量和分布情 况，为环境保护、公共卫生和生态平 衡等方面提供科学依据。
微生物的种类与特性
种类
环境中的微生物包括细菌、病毒 、真菌、藻类等，不同种类的微 生物具有不同的生态特性和适应 环境。
特性
微生物的特性包括耐受性、繁殖 速度、代谢方式等，这些特性决 定了微生物在环境中的生存和繁 殖能力。
环境微生物检测的重要性
环境保护
生态平衡
通过环境微生物检测，可以了解环境 中微生物的分布和数量，为环境保护 提供科学依据，有助于制定有效的环 境保护措施。
环境微生物检测可以了解环境中微生 物的生态平衡情况，有助于维护生态 平衡，促进自然环境的可持续发展。
环境微生物学(共94张PPT)
草履虫
1 细菌
1.1 细菌的形态与大小
球状
球菌细胞个体呈球形或椭圆形，不同种的 球菌在细胞分裂时会形成不同的空间排 列方式，常被作为分类依据。分有：单 球菌、双球菌（肺炎球菌）、四联球菌、 八叠球菌（甲烷球菌）、链球菌、葡萄 球菌。
四联球菌 八叠球菌
双球菌 链球菌
葡萄球菌
葡萄球菌
杆状
细胞呈杆状或圆柱形，一般其粗细 （直径）比较稳定，而长度则常因培 养时间、培养条件不同而有较大变化。 分有：单杆菌、双杆菌、球杆菌和链 杆菌。
常用的染色法有：
A 简单染色：常用来观察细菌的形态、大小和排列方式。
用一种染液染色菌体。一般菌体被染上染料的颜色。
B 复合染色法：两种染料染色，以区别细菌的革兰氏染色反应或
抗酸性反应，或将菌体和某一结构染成不同颜色。
革兰氏染色
程序：（1）初染（结晶紫30S） （2）媒染剂（碘液30S）
（3）脱色（95%乙醇10~20S）
偏端单胞
如：红色螺菌
两端丛生
偏端丛生
周生鞭毛 如：大肠杆菌
鞭毛生理功能
运动方式：旋转
运动
请说出下面细菌菌体从内到外的结构
菌毛
鞭毛
拟核
细胞质
cytoplasm
荚膜
细胞质膜 细胞壁
……
思考
1）细菌有哪几种形态？举例说明？ 2）细菌的一般结构和特殊结构是什么？ 各具有哪些生理功能？ 3）革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞 壁结构有什么异同？各有哪些化学组成？
A
A A
（1）初染（结晶紫30S）
（2）媒染剂（碘液30S） （3）脱色（95%乙醇10~20S）
（4）复染（蕃红30 ~ 60S）
1 细菌
1.1 细菌的形态与大小
球状
球菌细胞个体呈球形或椭圆形，不同种的 球菌在细胞分裂时会形成不同的空间排 列方式，常被作为分类依据。分有：单 球菌、双球菌（肺炎球菌）、四联球菌、 八叠球菌（甲烷球菌）、链球菌、葡萄 球菌。
四联球菌 八叠球菌
双球菌 链球菌
葡萄球菌
葡萄球菌
杆状
细胞呈杆状或圆柱形，一般其粗细 （直径）比较稳定，而长度则常因培 养时间、培养条件不同而有较大变化。 分有：单杆菌、双杆菌、球杆菌和链 杆菌。
常用的染色法有：
A 简单染色：常用来观察细菌的形态、大小和排列方式。
用一种染液染色菌体。一般菌体被染上染料的颜色。
B 复合染色法：两种染料染色，以区别细菌的革兰氏染色反应或
抗酸性反应，或将菌体和某一结构染成不同颜色。
革兰氏染色
程序：（1）初染（结晶紫30S） （2）媒染剂（碘液30S）
（3）脱色（95%乙醇10~20S）
偏端单胞
如：红色螺菌
两端丛生
偏端丛生
周生鞭毛 如：大肠杆菌
鞭毛生理功能
运动方式：旋转
运动
请说出下面细菌菌体从内到外的结构
菌毛
鞭毛
拟核
细胞质
cytoplasm
荚膜
细胞质膜 细胞壁
……
思考
1）细菌有哪几种形态？举例说明？ 2）细菌的一般结构和特殊结构是什么？ 各具有哪些生理功能？ 3）革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞 壁结构有什么异同？各有哪些化学组成？
A
A A
（1）初染（结晶紫30S）
（2）媒染剂（碘液30S） （3）脱色（95%乙醇10~20S）
（4）复染（蕃红30 ~ 60S）
环境微生物菌种鉴定PPT课件
编辑版pppt
29
五、鉴定结果
（三）不同季节鉴定结果
第三季度：
在本季度，阳性球菌的检出率为38.3%，阴性杆菌检出率为31.7%，阳 性芽孢杆菌检出率为16.7%， 阳性无芽孢杆菌检出率为6.7%。
编辑版pppt
30
五、鉴定结果
（三）不同季节鉴定结果
第四季度：
本季度阳性球菌的检出率为35.7%，阴性杆菌的检出率为 21.4%，阳性芽孢杆菌的检出率为26.8%，阳性无芽孢杆菌
2．培养基
胰酪胨大豆琼脂培养基（TSA），批号： 1221965，BD公司； 麦康凯琼脂（Mac），批号：1108423, BD公司； MRS琼脂，批号：100915，北京陆桥技术有限 责任公司
编辑版pppt
11
三、试验材料及仪器设备
3．仪器设备
全自动微生物生化鉴定仪（Viteck 2 Compact）：法国生物梅里埃公司； 麦氏浊度比浊仪：法国生物梅里埃公司； BX 41 光学成像显微镜：日本奥林巴斯公司； 卡玛薄层色谱成像仪:瑞士CAMAG卡玛公司。 API RP
编辑版pppt
34
六、结果分析
2.不同季节微生物污染趋势变化 一车间：
从2010年第3季度到2011年第2季度，一车间革兰氏阳性球菌检出率始终
维持在40%~50%的区间范围内；革兰氏阳性无芽孢杆菌检出率在10%
上下徘徊；放线菌、霉菌、酵母菌仅在2010年第3季度零星检出；革兰
氏阳性芽孢杆菌呈现逐步上升的趋势；革兰氏阴性杆菌呈现逐步下降的
编辑版pppt
40
七、讨论
4.对微生物溯源分析的认识 建立菌库的目的是发现微生物污染规律，更好地进 行生产过程的控制。但要达到溯源分析的目的需要 在现有环境微生物数据库基础上建立基于基因分型 的数据库，方能真正实现生产环境微生物与药品中 污染微生物的比较和溯源之目的。
环境微生物菌种鉴定
土壤微生物菌种鉴定主要采用分离培养、生理生化实验和 分子生物学技术等方法进行。通过对土壤中可培养微生物 的分离培养，可以获得微生物的纯培养物，再通过形态观 察、生理生化实验和分子生物学技术等方法对微生物进行 鉴定。这些方法可以确定微生物的种类、数量和分布情况 ，从而评估土壤质量、预测土壤污染风险和指导农业生产 。
通过鉴定水体中的细菌、藻类、原生动物等菌种，了解水体的营养状态、污染物含 量及生物多样性，为水环境治理和水资源保护提供依据。
水体微生物菌种鉴定有助于发现新的水处理微生物，如硝化细菌、反硝化细菌等， 以提高水处理效果，保障饮用水安全。
空气微生物菌种鉴定
空气微生物菌种鉴定是研究空气污染、呼吸道传播疾病及气候变化对微 生物分布影响的重要手段。
生理生化鉴定技术
总结词
通过微生物对营养物质利用、代谢产 物、酶活等生化反应进行鉴定。
详细描述
对微生物进行一系列生化试验，观察 其代谢产物、酶活等生化反应，与已 知菌种的生化特征进行比对，从而确 定微生物的种类。
分子生物学鉴定技术
总结词
基于微生物基因组序列差异进行鉴定。
详细描述
通过分析微生物的基因组序列或特定基因序列，与数据库中的已知菌种基因序 列进行比对，从而确定微生物的种类。
04
分子标记方法则利用特异性探针或引物进行PCR扩增，通过凝胶电泳 或荧光检测等技术进行鉴定。
02Βιβλιοθήκη 环境微生物菌种鉴定技术形态学鉴定技术
总结词
基于微生物的形态、大小、颜色 等表型特征进行鉴定。
详细描述
通过观察微生物的形状、大小、 排列、染色反应等表型特征，与 已知菌种特征进行比对，从而确 定微生物的种类。
THANKS
感谢观看
环境中的微生物细菌1 ppt课件
菌落描述
a.隆起 特征描 述 b.边缘 特征描 述 c.外表 特征描 述
• 细菌菌落具有一些共同的特征：小、湿润、粘稠、与 基质结合松散，易被剥离，质地均匀，各部位颜色一 致。但不同的细菌菌落也具有自己特有的特征。
霉啤菌酒（红真酵菌母）菌菌落 （真菌）菌落
〔四〕环境中常见的细菌
1、革兰氏阴性菌 2、革兰氏阳性菌 3、放线菌
8.芽孢
某些细菌当环境恶劣时，细胞质浓缩凝集，逐步形成 一个圆形、椭圆形或圆柱形的休眠体，称为芽孢。
类似于“• 蚕1结．茧多变层蛹结”构功能 • 由内至外，依次为 • ①芽孢外壁
由蛋白质、脂类和糖组成
②一层或几层芽孢衣
主要成分是角蛋白， 非常致密，通透性差， 能够阻止各类化学物质 包括杀菌剂的进入；
负染后墨汁背景衬托法观察
不产夹膜细菌形成R型菌落
b.荚膜的主要功能： Ⅰ.
Ⅱ.病原菌的荚膜与致病能力有关 III．荚膜多糖——信号物质
c.活性污泥中的菌胶团
双球菌的荚膜
菌胶团
大型指状菌胶团
丝状、球状、蘑菇状菌胶团
不同细胞的荚膜连在一起，形成一个内含多个菌体的胶团，称菌胶团
6.鞭毛
• 往往长度超过菌体假 设干倍，但直径很细。 功能 细菌藉鞭毛趋避运动 鞭毛的着生方式和
质膜含有固醇 多数情况在线粒体中发生 藻类和植物细胞中存在叶绿体 蛋白质合成和寻靶作用与内膜、粗糙内质网膜和高尔 基体相连系 有膜的泡囊如溶酶体和过氧化物酶体有微管骨架存在 鞭毛有9+2微管排列的复杂结构 核糖体——80S(线粒体和叶绿体的核糖体是70S) 多糖的细胞壁，一般或者是纤维素或者是几丁质
（1.细菌繁殖
• 细菌的繁殖方式很多， 主要是以无性的二分 裂繁殖
a.隆起 特征描 述 b.边缘 特征描 述 c.外表 特征描 述
• 细菌菌落具有一些共同的特征：小、湿润、粘稠、与 基质结合松散，易被剥离，质地均匀，各部位颜色一 致。但不同的细菌菌落也具有自己特有的特征。
霉啤菌酒（红真酵菌母）菌菌落 （真菌）菌落
〔四〕环境中常见的细菌
1、革兰氏阴性菌 2、革兰氏阳性菌 3、放线菌
8.芽孢
某些细菌当环境恶劣时，细胞质浓缩凝集，逐步形成 一个圆形、椭圆形或圆柱形的休眠体，称为芽孢。
类似于“• 蚕1结．茧多变层蛹结”构功能 • 由内至外，依次为 • ①芽孢外壁
由蛋白质、脂类和糖组成
②一层或几层芽孢衣
主要成分是角蛋白， 非常致密，通透性差， 能够阻止各类化学物质 包括杀菌剂的进入；
负染后墨汁背景衬托法观察
不产夹膜细菌形成R型菌落
b.荚膜的主要功能： Ⅰ.
Ⅱ.病原菌的荚膜与致病能力有关 III．荚膜多糖——信号物质
c.活性污泥中的菌胶团
双球菌的荚膜
菌胶团
大型指状菌胶团
丝状、球状、蘑菇状菌胶团
不同细胞的荚膜连在一起，形成一个内含多个菌体的胶团，称菌胶团
6.鞭毛
• 往往长度超过菌体假 设干倍，但直径很细。 功能 细菌藉鞭毛趋避运动 鞭毛的着生方式和
质膜含有固醇 多数情况在线粒体中发生 藻类和植物细胞中存在叶绿体 蛋白质合成和寻靶作用与内膜、粗糙内质网膜和高尔 基体相连系 有膜的泡囊如溶酶体和过氧化物酶体有微管骨架存在 鞭毛有9+2微管排列的复杂结构 核糖体——80S(线粒体和叶绿体的核糖体是70S) 多糖的细胞壁，一般或者是纤维素或者是几丁质
（1.细菌繁殖
• 细菌的繁殖方式很多， 主要是以无性的二分 裂繁殖
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少动鞘芽寡养单胞菌
缓慢芽孢杆菌
巨大芽孢杆菌等
解淀粉类芽孢杆菌
变异库克菌等
五、鉴定结果
人员
环境
人葡萄球菌/腐生葡萄球菌
短小芽孢杆菌
溶血葡萄球菌 表皮葡萄球菌
耳炎差异球菌/玫瑰色库克菌
科氏葡萄球菌科氏亚种
苛养颗粒链菌/藤黄微球菌/里拉微球菌 （采样少）
调剂区 （C级）
2010-12-1
五、鉴定结果
人员
环境
金黄色葡萄球菌
溶血葡萄球菌
溶血葡萄球菌
腐生葡萄球菌
分装 头状葡萄球菌
木糖葡萄球菌
灌装区 蜡样/蕈状/苏云金芽孢杆菌 表皮葡萄球菌
（B级） 泛菌属
人葡萄球菌
(二)不同少动区鞘域氨结醇单果胞—菌, 一车间主藤要黄微区球域菌/里拉微球菌
短小芽孢杆菌
苏云金芽孢杆菌
花域芽孢杆菌
藤黄微球菌/里拉微球菌 施氏假单胞菌 缺陷短波单胞菌/泡囊短波单胞菌
泛菌属
(二)不同浅区黄假域单胞结菌 果— 一车间主要区域 马耳他布鲁菌
非脱羧勒菌
少动鞘氨醇单胞菌/杀鲑气单胞菌
巨大芽孢杆菌
鲍曼不动杆菌
蜡样/蕈状/苏云金芽孢杆菌
解脲棒杆菌
克氏库克菌
铫子短小芽孢杆菌
短小芽孢杆菌等
五、鉴定结果
人员
环境
三、试验材料及仪器设备
3．仪器设备
全自动微生物生化鉴定仪（Viteck 2 Compact）：法国生物梅里埃公司； 麦氏浊度比浊仪：法国生物梅里埃公司； BX 41 光学成像显微镜：日本奥林巴斯公司； 卡玛薄层色谱成像仪:瑞士CAMAG卡玛公司。 API RP
三、试验材料及仪器设备
4．试剂试药
革兰氏染色液：青岛高科园海博生物科 技有限公司；
四、鉴定方法
短小芽孢杆菌
四、鉴定方法
溶血葡萄球菌
四、鉴定方法
施氏假单胞菌
四、鉴定方法
2.革兰氏染色及镜检
表皮葡萄球菌
四、鉴定方法
2.革兰氏染色及镜检
缓慢芽孢杆菌
四、鉴定方法
2.革兰氏染色及镜检
施氏假单胞菌
四、鉴定方法
3.生化鉴定 （1）采用全自动微生物生化鉴定仪（Viteck 2
Compact），根据革兰染色结果选择鉴定卡。 （2）将24小时培养物，用0.45%无菌氯化钠
企业生产过程微生物 污染控制实例分析
--无菌制剂生产过程微生物菌库的建立和种属鉴定
辽宁省食品药品检验所抗生素室 张亚杰 2012.5
一、立项目的 二、采样方案 三、试验材料及仪器设备 四、鉴定方法 五、鉴定结果 六、结果分析 七、讨论
一、立项目的
（1）为了了解无菌制剂生产过程中微生物污 染情况，即微生物种类及分布情况，实现生产 环境微生物、操作过程微生物与药品中污染微 生物的比较和溯源分析，以便达到生产过程微 生物实时有效动态控制目的。从而满足药品 GMP对无菌制剂生产过程中微生物污染的监测 和控制要求。 （2）生产企业也可以利用这些数据，对无菌 制剂生产过程进行微生物风险评估。
企业根据生产情况和制剂车间的使用频次 按季度制定采样频次 ，共收集4个季度的 样本。
三、试验材料及仪器设备
1．样本来源 2．培养基 3．仪器设备 4．试剂试药
三、试验材料及仪器设备
1．样本来源 无菌制剂一车间和二车间286份样本
2．培养基
胰酪胨大豆琼脂培养基（TSA），批号： 1221965，BD公司； 麦康凯琼脂（Mac），批号：1108423, BD公司； MRS琼脂，批号：100915，北京陆桥技术有限 责任公司
二、采样方案
1. 采样区域的确定 2.采样对象及方式的确定 3.采样频次的确定
1. 采样区域的确定
根据车间的面积、房间数，考虑到可能影 响到产品质量的关键区域及易于受到微生 物污染的关键部位的分布，设定了监测点 及采样方案。 企业按照中国新版药品 GMP的要求，将洁净区划分为A级（动态 100级）、B级（静态100级）、C级 （10000级）、D级（100000级）。
五、鉴定结果
（一）人员环境总体结果 一车间：110株
其中：人员67株 环境43株
二车间：182株 其中：人员133株 环境49株
总计：292株，其中阳性球菌109株（37.3%） 阳性芽孢杆菌 114株（39.0%） 阳性无芽孢杆菌 22株（7.5%） 阴性杆菌 39株（13.4%）
2010-12
模仿葡萄糖球菌 非脱羧勒菌 植生拉乌尔菌
表皮葡萄球菌3
西宫皮球菌/坐皮肤球 克氏库克菌
花域芽孢杆7
菌
酸土脂环酸芽孢杆菌
(二)不同枯芽草孢区/杆解域菌淀1粉1结/萎果缩— 少蜡二动样鞘/车蕈氨状间醇/苏单主云胞金要菌芽区域短地小衣芽 芽孢胞杆杆菌菌
溶液制备一定浊度的菌悬液，将64个生化反应 集成到Viteck鉴定卡上，一般2-10小时左右给出 鉴定结果 。
（3）结果判断：相似度96%-99%为极好， 95%-92%为较好，91%-89%为好，88%85%为可以接受，85%以下的相似度为低分 辨率的鉴别。对于只鉴定到属的鉴别，还需根 据提示信息进行补充试验，进一步甄别到种。
微生物采样点分布图见图1和图2。其中一 车间采样点共39个，二车间采样点共98 个。
1. 采样区域的确定（一车间）
1. 采样区域的确定（二车间）
2.采样对象及方式的确定
人员：手套印记 表面接触（头、胸、 手腕、肘、膝盖）
环境：沉降菌（ A级、B级、 C级）
浮游菌（A级、B级）
3.采样频次的确定
GN鉴定卡、GP鉴定卡、BCL鉴定卡、 YST鉴定卡、ANC鉴定卡：法国生物梅 里埃公司。
API
RP
四、鉴定方法
鉴定流程图
四、鉴定方法
1.菌种的纯化与复壮
采集的微生物可能在物理的、化学的消杀条件下暴露 了较长时间，菌株本身可能存在一定的损伤和变异 ，有必 要对送检菌株进行复壮和再次纯化。
首选的复壮及纯化培养基为胰酪胨大豆琼脂培养基 （TSA）;对于革兰氏阴性菌，在无法与革兰氏阳性菌区分 的情况下，也会选择MaC琼脂作为纯化培养基；对于较难 培养的菌株，也采用血平板、改良MRS琼脂等进行纯培 养。
头状葡萄球菌
缓慢芽孢杆菌5
人葡萄球菌
藤黄微球菌/里拉微 枯草/解淀粉/萎缩/花 沃氏葡萄球菌
球菌4
域芽孢杆菌
金黄色葡萄球菌2
溶血葡萄球菌
地衣芽孢杆菌
头状葡萄球菌
腐生葡萄球菌
波茨坦短小芽孢杆菌 藤黄微球菌/里拉微球菌
调剂区 （B级）
金黄色葡萄球菌/中 间葡萄球菌 山羊葡萄球菌
玫瑰色库克菌 杀鲑气单胞菌/奈瑟菌 属