1型原胶原氨基末端前肽

《文件已阅声明表》

《Procedure circulation form》

文件名称:总1型胶原氨基端延长肽检测作业指导书表号: KM-MP03•02•02

《文件修改记录页》

《Procedure amendment form》

表号:KM-MP03.02.03

文件信息表

(Procedure information form)

表号：KM-MP03•02•04

总1型胶原氨基端延长肽检测检测作业指导书(Total procollagen type 1 amino-terminal propeptide(t-p1np )by Roche cobas e601)

1原理（Test principle）

“三明治”法，总检测时间：18 分钟。第一次孵育：20μl 标本和一份生物素抗P1NP 特异性单克隆抗体一起孵育。第二次孵育：在加入链亲和素包被的微粒和一份钌复合体标记的P1NP 特异性单克隆抗体后，反应形成一“三明治”样抗原

－抗体复合体，复合体在链亲和素和生物素相互作用下形成固相。将反应液吸入检池中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。未结合的物质通过ProCell 除去。在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光的强度。

2 样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）:

样本类型(sample type)：血清(serum)必须用标准试管或内有分离胶的试管收集。使用肝素锂和EDTA-K3 血浆(plasma)。

拒收标本（Specimen rejection）：严重溶血、脂血、或用叠氮钠防腐标本。

标本用量(volume)：200uL血清/血浆

储存条件(sample storage conditions)：在15–25°C可保存24小时；在2--8°可保存5天，C在-20°C可保存6个月。样品最多可以冻融5次。

3 试剂（Reagent）：

3.1 Roche cobas e601 原装试剂。

3.1.1试剂内组份(components)：

Ⅰ链霉亲和素包被的微粒

Ⅱ R1 生物素化的抗total P1NP抗体

Ⅲ R2 三联吡啶钌标记的抗total P1NP抗体

Ⅳ使用说明书，分英语、法语、德语、葡萄牙语、西班牙语各一份。

3.1.2 未随试剂盒提供的组分

· Elecsystotal P1NP定标液（P1NP CalSet）

· Elecsys骨标志物质控品（PreciControl Bone）

· Elecsys系统缓冲液（ProCell M）

· Elecsys测量池清洗液（CleanCell M）

· Elecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯（PC/CC-Cup）

· Elecsys反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M)

· Elecsys废物盒(wasteliner)

· Elecsys系统清洗液支架(SysClean Adapter M)

· Elecsys系统清洗液（SysClean）

3.2 试剂准备：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。Put reagent from refregeratory to room temperature for proper time; New reagent lots must be tested in parallel with old lots before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintained consistent results for patient specimens. Recod the results.

4 仪器（Instrument）：Roche cobas e601。

4.1 仪器准备（prepare apparatus）：

使用前确保仪器水通道、液体垃圾通道畅通，保证系统清洗液（SysClean）、测量池清洗液（CleanCell M）、反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M)、废物盒(wasteliner)、系统缓冲液（ProCell M）的足够。然后开机，在仪器的试剂盘中加入所需的试剂。

5 安全防范（Safety Precautions）：

操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。

6 校准（Calibration if Applicable）：

6.1校准品储存和使用(calibration material storage and usage)：Roche cobas e601原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。Stop using overdue calibration e it within expiration date,storage in 2-8℃配制（calibration material redissolve）：用复溶专用加样枪准确吸取1mL去离子水于瓶中，溶解静置3小时，混匀并用有盖小子弹头分装200μL/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于－20℃冻存备用。Label confecting date ,calibration lot,person who confected, expiration date.then

复溶后校准品成分的稳定性：

保存于（-20）℃，可稳定2个月。

6.2每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求：

●试剂批号改变(Reagent lot changes)

●同一批号的试剂盒在分析仪上使用超过1个月（28天）

●同一试剂盒在分析仪上使用超过7天

●根据需要：如质控数据超过额定的限度。Recalibration based on quality control

problem

6.3步骤：当使用新批号试剂之前，都需要对试剂盒进行校准。在校准（clibration）菜单中编辑校准液的资料，在两个样本管中分别加入至少200ul的1，2校准品并放到已指定位置的校准架中，放入样本通道中。然后在计算机屏幕上选择START项，再次点击START界面中的绿色START健。

6.4结果判断：仪器会自动提示是否通过校准。如果未通过会有相应的原因解释以及解决方法的指导。校准后必须及时做质控且须获得通过

6.5校准周期：质控在控的情况下一个月内对同批号试剂有效。如果质控值提示有需要校准时，应重新校准。

7 操作过程（Procedural Steps）：

7.1 样本准备：先检查标本是否合格（标本与作业指导书上标本要求是否一致），核对验单上的条码和标本上的条码是否一致，按样本每天唯一号原则进行编号。将带有编号的标本离心取血清/血浆，将待测物加入相应的样本管。