黄酮显色

（一）还原反应

1、盐酸-镁粉（或锌粉）反应：

多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红~紫红色，花色素及部分查耳酮、橙酮等在单纯浓盐酸酸性条件下颜色也会发生变化，故须先做空白对照。

A:样品的乙醇溶液1 mL，加少量镁粉/锌粉，加浓盐酸4-5滴，沸水浴2-3 min，

B:样品乙醇溶液1 mL，加浓盐酸4-5滴，沸水浴2-3 min，

A.B 均显红色，则有花色素（橙酮，查耳酮）。继续加碳酸试液，红色转变为紫色进而变为蓝色即证明含有花色素。

A红色或紫色（个别为淡黄色、橙色、紫色、蓝色）

PS：多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇橙红——紫红，少数显紫~蓝色，B环有-OH 或OCH3取代时，颜色随之加深。查耳酮、橙酮、儿茶素类不显色。异黄酮类一般不显色。

2、四氢硼钠反应二氢黄酮(醇)

样品的乙醇溶液0.1 mL，加入0.1 mL2%四氢硼钠的甲醇液，1 min后加入数滴浓盐酸/浓硫酸，生成紫色或紫红色。二氢黄酮(醇)类专属反应，其他黄酮均不反应

二、与金属盐类试剂的络合反应

分子中具有3-羟基，4-羰基或5-羟基，4-羰基或邻二酚羟基

(1)三氯化铝显色

1%三氯化铝或硝酸铝，鲜黄色荧光

样品的乙醇溶液点于滤纸上（干后再点1次，浓度适中），干后，喷雾1%ALCL3乙醇溶液，紫外灯下观察，黄色、绿色、橙色均为黄酮类；天蓝色或者黄绿色为二氢黄酮。

4′━羟基黄酮醇或7， 4′━二羟基黄酮醇显天蓝色荧光

硝酸铝显色法是先用亚硝酸钠还原黄酮，再加硝酸铝络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2’羟基查耳酮而显色.

它的显色原理发生在黄酮醇类成分邻位无取代的邻二酚羟基部位,不具有邻位无取代邻二酚羟基的黄酮醇类成分加入上述试剂时是不显色的

硝酸铝络合分光光度法测定总黄酮的原理为:在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮类化合物与铝盐生成螯和物,加入氢氧化钠溶液后显红橙色,

（2）铅盐

醋酸铅只与含有邻二酚羟基或兼有3-OH、4C=0或5-OH、4C=0的生成沉淀

碱式醋酸铅一般的酚类都可以

1%醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液，生成黄色~红色沉淀

(3)锆盐-枸橼酸反应区分3-OH或5-OH黄酮

多用2%二氯氧化锆（ZrOCl2）甲醇溶液。

0.5~1 mg样品，10 ml甲醇加热溶解，加入1 ml2%二氯氧化锆甲醇液，溶液显黄色后，再加入2%枸橼酸甲醇溶液，仍呈鲜黄色(3-OH);黄色溶液显著褪去(5-OH)

（4）镁盐：

二氢黄酮、二氢黄酮醇类与醋酸镁的甲醇溶液，加热可显天蓝色荧光，若具有C5-OH，色泽更为明显。而黄酮、黄酮醇及异黄酮类等则显黄~橙黄~褐色。

滤纸上滴一滴供试液，喷以醋酸镁甲醇溶液，加热干燥，紫外灯下观察荧光

（5）氯化锶（SrCl2）：邻二酚羟基的黄酮

1mg试样溶于1ML甲醇中，可水浴加热，加入3滴0.01 mol氯化锶的甲醇液,再加入3滴氨蒸气饱和的甲醇溶液，可与分子中具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物生成绿色~棕色乃至黑色沉淀。

（6）三氯化铁

多数黄酮类化合物因分子中含有游离酚羟基，与三氯化铁水溶液或醇溶液可产生阳性反应，呈现颜色；当含有氢键缔合的酚羟基时，颜色更明显。有酚羟基的黄酮遇三氯化铁显蓝绿棕红褐色等反应。

三、硼酸显色反应

在无机酸或有机酸存在条件下，5-羟基黄酮及2’-羟基查耳酮可与硼酸反应，呈亮黄色。在草酸存在下，显黄色并带绿色荧光。

在枸橼酸丙酮存在条件下，只显黄色而无荧光。

硼酸丙酮枸橼酸丙酮试验：

样品的乙醇溶液1 mL，沸水浴蒸干加入饱和硼酸丙酮溶液及10%枸橼酸丙酮溶液各0.5 mL，蒸去丙酮后，紫外灯观察，管内显强烈的绿色荧光，黄酮或其苷类。

四、碱性试剂反应

在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用氨蒸气和其他碱性试剂处理后的颜色变化的情况。

二氢黄酮类可转变为查耳酮类化合物，显橙~黄色。

黄酮类化合物与碱性试剂显黄、橙、红色。

黄酮醇类在碱液中先呈黄色，通入空气后变为棕色。

当分子中有邻二酚羟基取代或3,4’-二羟基取代时，在碱液中很快氧化，黄色-深红色最后生成棕绿色沉淀。

样品的乙醇溶液点于滤纸上，干后再点一次，干后，喷1%碳酸钠溶液或氨蒸气中熏几分钟，显亮黄、绿或橙黄色。

氨蒸气熏的置于空气中，颜色逐渐褪去而变为原有颜色，黄酮或其苷类

五 Gibbs反应

检查5-OH对位未被取代的黄酮。

将样品溶于吡啶中，加入Gibbs试剂显蓝或蓝绿色。

Gibbs试剂:

甲液：0.5%2,6-二氯苯醌-4氯亚胺的乙醇溶液。

乙液：硼酸-氯化钾-氢氧化钾缓冲液（pH9.4）