DNA拷贝数的计算方法

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DNA拷贝数的计算方法
1 A260 吸光度值= ds DNA 50 ug/ml= ss DNA 33 ug/ml= ss RNA 40 ug/ml
核酸浓度=(OD260)×(dilution factor)×(33/40/50)= ng/ul
平均分子量(MW)代表克/摩尔,单位道尔顿(dolton),即1dolton=1g/mol
1摩尔=6.02×1023
平均分子量(MW):
dsDNA=(碱基数) x (660 道尔顿/碱基)
ssDNA=(碱基数) x (330 道尔顿/碱基)
ssRNA=(碱基数) x (340 道尔顿/碱基)
拷贝数计算公式:
(6.02 x 1023次拷贝数/摩尔) x (浓度g/ml) / (MW g/mol) = copies/ml.
(6.02 x 1023次拷贝数/摩尔) x (浓度g/ml) / (DNA长度×660) = copies/ml.
(6.02 x 1023次拷贝数/摩尔) x (ng/ul×10-9) / (DNA长度×660) = copies/ul.
例:3000 碱基质粒,浓度100 ng/ml ,MW = 3000 bp x 660 dalton/bp = 1.98 x 106 daltons,1 mol = 1.98 x 106g.
(6.02 x 10的23次拷贝数/摩尔) x (1x10的-7次克/微升) / (1.98 x 10的6次克/摩尔) = 3 x 1010次copies/ml.
梯度配制方法:低浓度使用胎盘DNA 20ng/ul;高浓度使用灭菌水配制,
20ng 基因组DNA所包含的拷贝数:6.02×3 x 1023 x20ng/2.91 x109 x660=6289个拷贝数。

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