酶法测定膳食纤维的推荐方法(AOAC

酶法测定膳食纤维的推荐方法：

试剂：1. 0.1M PBS, PH=0.6.

2. 4M HCl ; 4M NaOH

3. 95%乙醇，78%乙醇

4. 丙酮

酶：淀粉酶，蛋白酶，胰酶

步骤：1. 湿样品需要均质并冻干，所有样品都需要粉碎至粒径0.3mm。

2. 当脂肪含量大于6-8%时或者需要适当粉碎时，需要在室温下用石油醚抽脂15min。

3. 称取1g样品，精确到0.1mg，转移至锥形瓶。向其中加入25ml 0.1M的PBS，PH=6，充分悬浮样品。

4. 加入100ul 淀粉酶。用膜盖住锥形瓶顶部，沸水浴保温15min，偶尔摇晃一下。

5. 室温下放凉，加入20ml蒸馏水，用HCL调至PH=1.5，用少量蒸馏水冲洗电极。

6. 加入100mg 胃蛋白酶，顶部盖膜，40℃保温并搅拌60min.

7. 加入20ml蒸馏水，用NaoH调PH至6.8，少许蒸馏水冲洗电极。

8. 加入100ml 胰酶，顶部盖膜，40℃保温并搅拌60min.

9. 用HCl调PH至4.5.

10. 用干燥的称量过的G2坩埚（含0.5g硅藻土）作为辅助过滤设施。用20m蒸馏水分两次冲洗。

A. 滤液残留（不溶性膳食纤维）：

11. 用20ml 95%乙醇和20ml 丙酮分两次冲洗。

12. 105℃干燥至恒重，干燥器内冷却后称重（D1）。

13. 550℃灰化5h，干燥器内冷却后称重（I1）

B．滤液（可溶性膳食纤维）

14. 将滤液可冲洗水合并定容至100ml.

15. 加入微热（60℃）的95%乙醇400ml，沉淀1h（时间可以缩短）.

16. 用含有0.5g硅藻土的G2坩埚过滤。

17. 用20ml 78%乙醇、20ml 95%乙醇和20ml丙酮分别分两次冲洗。

18. 105℃烘至恒重，在干燥器内冷却后称重（D2）

19. 550℃至少灰化5h，干燥器内冷却后称重（I2）

空白：水溶性膳食纤维和不溶性膳食纤维空白值（B1和B2）的测定都是在没有添加样品的情况下进行。使用新的一批酶时，应该不定时检查空白值。

计算：W=样品质量（g）。D=干燥后的质量（g）。I=灰化后的质量（g）。B=无灰空白质量（g）

不溶性膳食纤维=D1-I1-B1