标准菌株使用标准操作规程

标准菌株使用标准操作规程

1 检验目的

对实验室的标准菌株进行合理的保存，并规范合理的使用流程，保证菌株的性能稳定可靠。

2 范围

微生物实验室保存的标准菌株。

3 职责

微生物组工作人员正确执行本操作规程。

4 术语和定义

4.1标准菌株

其特征进行了分类和描述，有明确的来源。ATCC（American Type Culture Collection）美国标准菌株收藏中心。

4.2标准储备菌株

标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。

4.3 工作菌株

标准储备菌株传代后得到的同种菌株。

4.4 标准培养物

标准菌株、标准储备菌株、工作菌株的统称。

4.5质控菌株

ATCC最佳，但当无法获得时可以使用ATCC演化的菌株或我国国家菌种库储存的标准菌株。特殊情况，例如定性试验可用已知的菌种作为质控菌株。室间质评的菌株即可。

5 保存程序

5.1标准菌株

5.1.1商业购买的ATCC标准菌株干粉，-80℃低温保存，可以2年以上。安瓿真空包装的，-80℃可长期稳定保存。将标准菌株进行编号和登记。

5.1.2复苏

用1ml无菌的小牛血清或营养肉汤溶解。根据菌种的生长特点，接种到新鲜培养基上选择适宜的培养条件培养18-24h。酵母菌要求3天，形成孢子的微生物宜保存孢子。

5.2标准储备菌株

5.2.1由复苏后的ATCC标准菌株制备。复苏后的标准菌株要检查其纯度，必要时进行生化试验检查。刮取培养物上的菌体，用足量的菌悬浮于防冻培养基中。防冻液可以是无菌脱纤维羊血、10%甘油肉汤。储存足够量的标准储备菌株，可用1-2年。一年52周需要52支以上。

5.2.2甘油肉汤保存法

成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、甘油、纯化木。相当于20%的甘油。挑取5环菌落加入到1ml甘油肉汤中混匀。苛养菌可以适当增加菌量。-80℃保存。除链球菌和嗜血杆菌以外细菌均可使用。保存期限1-5年。

5.2.3全血保存法

成分为脱纤维羊血。挑取5环菌落加入到1ml甘油肉汤中混匀。苛养菌可以适当增加菌量。-80℃保存。主要用于保存链球菌、嗜血杆菌及厌氧菌。保存期限1-5年。

5.2.4标准储备菌株进行编号和登记。

5.3工作标准菌株

由标准储备菌株传代得到的菌株。标准储备菌株对多向下传三代。过多的传种会增加变异的机会。标准储备菌株根据菌种特点选择适宜的培养基和培养条件进行培养18-24h即工作标准菌株。储存在2-8℃，可放四周。个别营养要求高的为2周，例如肺炎链球菌和嗜血杆菌。使用时应编号并登记。

5.4编号方法

每个菌的保存管都要有唯一的编号，签字笔标注，便于查找和管理。

5.5记录管理

5.5.1菌种应有严格的登记。每个编号都要有详细的记录包括来源、传代、保存方法、使用记录、使用原因、高压灭菌记录等。附表《标准菌株记录表》《标准储备菌株记录表》

5.5.2菌种保管应有专人负责，保存于专用冰箱中，双人双锁，确保菌种安全。保管人员变动时，必须严格交接手续。

5.5.3各种菌种应按规定时间接种，注意菌种有无污染及变异，如发现变异时，应及时更换

5.5.4一个使用周期结束后，标准菌株、储备菌株、工作菌株都要进行高压灭菌处理，并做好记录。

6 使用流程

代

1代 2

7 质量控制

7.1 观察菌落的典型形态是否符合菌种。有没有杂菌生长。 7.2用氧化酶、触酶、上机等生化试验，鉴定菌种有没有变化。

7.3如果有污染或怀疑有问题时，应准备新的首次传代物或者获取新的标准菌株。

8 参考文献