安捷伦2100生物分析仪简要操作说明
RNA完整值RIN—RNA质量控制标准化
RNA 完整值(RIN) —RNA 质量控制标准化应用摘要评估RNA 完整性是获得有意义基因表达数据的第一个关键步骤。
采用完整RNA 是成功微阵列或qRT-PCR 分析的关键要素。
Agilent 2100 生物分析仪系统和RNA 试剂盒在协助研究者确定RNA 质量方面发挥重要作用。
Agilent 2100生物分析仪系统上生成的谱图包括浓度信息，允许直观检查RNA 完整性，并生成核糖体比率。
本应用简报描述的新软件算法开发用于从生物分析仪电泳图提取RNA 样品完整性的信息。
Odilo Mueller Samar Lightfoot Andreas SchroederNote: Trap set for 16% of size.位内标之间的基线信号增大。
生物分析仪软件自动生成18S/28S 核糖体亚基的比率。
尽管核糖体比率在确定凝胶电泳中样品降解程度方面发挥重要作用，但Agilent 2100 生物分析仪系统中更详细的分析表明，该比率未充分描述样品完整性。
为了将RNA 完整性解释过程标准化，安捷伦科技有限公司已经推出一种新的RNA 质量评估工具。
开发RNA 完整值(RIN) 旨在消除RNA 质量控制中的个人解释。
它将完整电泳图前言确定RNA 起始材料的完整性是基因表达分析中的一个关键步骤。
Agilent 2100 生物分析仪系统及相关的RNA 6000 Nano 试剂盒和Pico 试剂盒已成为RNA 质量评估和定量的标准1,2。
在精密加工的芯片上利用电泳分离，分离RNA 样品，并随后通过激光诱导荧光检测法检测。
生物分析仪软件生成电泳图和凝胶样图像，并展示多种结果，如样品浓度和核糖体比率。
电泳图提供了RNA 样品质量的详细直观评估结果。
然而，依赖人工目视解释数据的方法具有内在缺陷。
此前，研究者们已经将核糖体比率在平板凝胶分析中并作为特征在生物分析仪软件中用来表征RNA 完整性的状态。
采用核糖体比率的总RNA 样品平板凝胶分析通常得到不准确的RNA 完整性评估结果3。
安捷伦2100生物分析仪简要操作说明
安捷伦2100生物分析仪简要操作说明安捷伦2100 生物分析仪简要操作说明1．启动电脑，登陆刷卡系统。
2．开生物分析仪电源(位于后侧底部)，等待正面右上方状态灯显示绿色。
3．双击电脑桌面上“2100 Expert”图标，进入Instrument 主界面，确认COM Port 选择正确（COM选择1），左侧仪器示意图清晰显示(表示通讯正常) 。
4．按照试剂盒操作说明准备好注胶平台(注射器安装是否足够紧固以及注胶平台密封性是否完好，对于实验成功至关重要!)：5．按照试剂盒说明将2100 生物分析仪芯片槽的类型选择推杆推到正确位置(1 - 电泳，2 –细胞)。
6．按照试剂盒说明将芯片混匀仪转速设到正确位置(一般为2400rpm)。
7．取出试剂盒，平衡到室温约30 分钟，注意避光。
准备凝胶和染料的混合物，染料用完立即放回试剂盒避光。
(请参照相应试剂盒说明，注意离心过滤和混合的先后顺序以及离心转速的不同)8．取出9ul(核酸)或12ul(蛋白)凝胶染料混合物，加入电泳芯片的注胶孔(注意不要接触芯片底部，往芯片孔中加液时伸入底部不要靠壁!) 9．将芯片放入注胶平台，拉动注射器推杆至1ml 刻度并扣紧上盖，压下推杆至固定架卡扣，计时(时间参考试剂盒说明)，到时间松开固定架卡扣，等待注射器推杆停止运动后将其缓慢拉回至1ml 刻度，松开注胶平台上盖。
10．从注胶平台取出芯片，并往右上方两个注胶孔各加入9ul(核酸)或12ul(蛋白)凝胶染料混合物。
(对于蛋白实验还要取12ul 去染色试剂至孔中)。
11．往电泳芯片上数字标记的样品孔及Ladder 孔中各加入5ul Marker。
(蛋白实验不需要加Marker 直接加6ul 样品或稀释的Ladder 并忽略下一步，对于RNA Pico 试剂盒还要往CS 孔中加入9ulConditioning Solution)12．往Ladder 孔中加入1ul Ladder，数字标记的样品孔中各加入1ul 样品(RNA 样品和Ladder 以及蛋白样品的变性处理请参考相应试剂盒说明)。
安捷伦高效液相色谱仪的规范操作
安捷伦高效液相色谱仪的规范操作1. 目的：明确安捷伦高效液相色谱仪的规范操作，确保数据的准确性。
2. 范围：适用于安捷伦高效液相色谱仪。
3. 职责：检验人员对此负责。
4.操作规程：4.1 系统组成本系统由1个溶剂二元输送泵（分主/A泵和副/B泵）、手动进样阀、柱温箱、检测器、化学工作站和电脑等组成。
4.2 准备4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。
4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常4.1 将待测样品按要求前处理，准备HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等。
4.3开机：4.3.1 打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。
4.3.2 打开1200 LC 各模块电源。
4.3.3 待各模块自检完成后，双击[Instrument 1 Online]图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入的工作站画面如下所示。
4.3.4 从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部工具栏]，[ 显示状态工具栏]，[系统视图],[样品视图]，使其命令前有[√]标志，来调用所需的界面。
4.3.5 把流动相放入溶剂瓶中。
4.3.6 打开冲洗阀。
4.3.7 点击[泵]图标，点击[设置泵…]选项，进入泵编辑画面。
4.3.8 设流速：5ml/min，点击[确定]。
4.3.9 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[启动]，点击[确定] ，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
4.3.10 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[关闭]，点击[确定]关泵，关闭冲洗阀。
Agilent 2100生物分析仪
• 无 RNA 酶污染 — 使用无 RNA 酶的 试剂和芯片来避免分析过程中发生样品 降解
• 洁净 — 最大限度地减少有害物质的接 触，如溴化锭
Fluorescence
10
RIN = 9,2
8
6
4
2
0 19 24 29 34 39 44 49 54 59 64 69 Time [sec]
功能一键式操作，
轻链
• 洁净 — 最大程度地减少与染料或其它 有害材料的接触
蛋白质 QA/QC • 监测蛋白降解和样品完整性 • 确定蛋白质污染物 • 在还原及非还原条件下分析蛋白
对照样
重链
稳定性试验
L对稳ad照定de样性r试验 荧光
时间 (秒)
在还原条件下，用应激稳定性实验检测一个多克隆抗体的典型的降解和聚合方式。对 照样品只表现与抗体轻链和重链相对应的两个峰。当备检样品处于 40 °C 下 12 周后， 电泳图谱中出现了新的峰。Agilent 2100 生物分析仪可自动确定降解度。
• 微阵列或者 qPCR 实验前的 RNA 样品 质量控制
• PCR/mPCR 和 RT-PCR 产物的 DNA 分析
• 蛋白表达分析
3. 样品组分通过电泳被分离
4. 各组分通过其荧光被检测并被转变成凝 胶样图像（条带）和电泳图谱（峰）。
• 纯化过程中的蛋白纯度检测
• 在基因沉默或细胞凋亡研究中进行基于
培养 24h
荧光
百分率: 40.6
• 自动化 — 所需做的就是将 1 到 6 个样 品加到一个芯片上即可开始分析。
• 芯片上染色步骤 — 加速工作流程。
荧光
总事件数: 1702
培养 24h
RNA完整值（RIN）—RNA质量控制标准化
RNA完整值（RIN）—RNA质量控制标准化摘要评估 RNA 完整性是获得有意义基因表达数据的第⼀个关键步骤。
微阵列或 Qrt-pcr 实验能否成功主要取决于 RNA 是否完整。
Agilent 2100 ⽣物分析仪系统和 RNA 试剂盒在协助研究者确定RNA 质量⽅⾯发挥重要作⽤。
Agilent 2100 ⽣物分析仪系统上⽣成的谱图包括浓度信息，允许直观检查 RNA 完整性，并⽣成核糖体⽐率。
本应⽤简报描述的新软件算法开发⽤于从⽣物分析仪电泳图提取 RNA 样品完整性的信息。
前⾔确定 RNA 起始材料的完整性是基因表达分析中的⼀个关键步骤。
Agilent 2100 ⽣物分析仪系统及相关的 RNA 6000 Nano 试剂盒和 Pico 试剂盒已成为 RNA 质量评估和定量的标准[1,2]。
在精密加⼯的芯⽚上利⽤电泳分离，分离 RNA 样品，并通过激光诱导荧光检测法检测。
通过⽣物分析仪软件可显⽰图像如电泳图和凝胶图以及多种分析结果如样品浓度和核糖体⽐率。
电泳图提供了 RNA 样品质量的详细直观评估结果。
然⽽，依赖⾁眼观察解释数据的⽅法本⾝存在缺陷。
此前，研究者们已将核糖体⽐率作为特征值应⽤在⽣物分析仪软件中，⽤来表征凝胶分析中 RNA的完整性。
然⽽，仅通过总 RNA 的核糖体⽐率去评估 RNA 完整性通常不准确[3]。
通过显⽰RNA ⽚段⼤⼩分布的详细画⾯，Agilent 2100 ⽣物分析仪系统提供更好的 RNA 完整性评估结果。
图 1总 RNA 样品经过不同时间降解，并且在Agilent 2100 ⽣物分析仪系统上使⽤真核细胞总 RNA Nano 分析法分析所得的样品。
随着降解推进，可以观察到向较短⽚段⼤⼩⽅向偏移RNA 降解是⼀个逐渐的过程。
随着降解推进（图 1），18S/28S 核糖体条带⽐减⼩，⽽两个核糖体峰和下位内标之间的基线信号增⼤。
⽣物分析仪软件⾃动⽣成 18S/28S 核糖体亚基的⽐率。
安捷伦生物药物分析解决方案
安捷伦生物药物分析解决方案随着生物药物的研发和应用不断增加，药物分析已经成为确保药物质量和安全性的重要环节。
而安捷伦作为行业内领先的生物药物分析解决方案提供商，为研究人员提供了全面的工具和技术来进行药物分析。
下面将从安捷伦的产品、技术和服务三个方面对其生物药物分析解决方案进行介绍。
首先，安捷伦提供了一系列高质量的仪器设备，用于生物药物的分析与检测。
其中包括质谱仪、色谱仪、光谱仪等多种仪器设备。
这些仪器设备具有高分辨率、高灵敏度和高通量的特点，能够准确地分析和测定生物药物的组分和含量。
例如，安捷伦的质谱仪能够对药物样品进行分子量测定、结构鉴定和定量分析，从而确保药物的质量和纯度。
此外，安捷伦的色谱仪和光谱仪也能够进行生物药物的分离和测定，为药物的研发和生产提供了重要的支持。
其次，安捷伦拥有丰富的分析技术和方法，可以应对不同类型的生物药物分析需求。
安捷伦的技术包括高效液相色谱、气相色谱、质谱、核磁共振和光谱等多种技术。
这些技术能够对药物样品进行分离、纯化和鉴定，从而保证药物的质量和安全性。
此外，安捷伦还提供了广泛的分析方法和应用文库，帮助研究人员快速准确地开展生物药物分析。
同时，安捷伦还不断推出新的分析技术和方法，以满足不断发展的生物药物分析需求。
综上所述，安捷伦作为生物药物分析领域的解决方案提供商，通过其高质量的产品、先进的技术和全面的服务，为研究人员提供了全面的生物药物分析解决方案。
未来，随着药物研发和应用的不断推进，安捷伦将继续不断创新和进化，为生物药物分析提供更加先进和可靠的解决方案，为保障药物质量和安全性做出更大的贡献。
安捷伦二代测序操作方法
安捷伦二代测序操作方法
安捷伦二代测序操作方法主要分为以下几个步骤：
1. 文库构建：将待测样本的DNA或RNA分离，并进行适当的处理，如碎裂、修复末端、连接接头等。
然后通过PCR扩增，生成适合测序的文库。
2. 文库质检：对文库进行定量和质量检测，确保文库中的DNA或RNA片段长度适当且浓度合适。
3. 群体扩增：将文库中的DNA或RNA片段固定在测序芯片上的空位上，然后进行PCR反应，使每个DNA片段扩增成数百个等位基因的聚集体。
4. 测序反应：将扩增的DNA片段附着在玻璃芯片上，并加入碱基、引物和聚合酶。
然后通过荧光信号和光学检测，测定每个聚集体中的碱基序列。
5. 数据处理：将测序得到的原始数据进行图像转换和碱基配对，然后进行质量控制和序列比对。
最后得到测序样本的碱基序列信息。
6. 数据分析：根据测序得到的碱基序列信息，进行序列组装、多样性分析、功能注释等一系列数据分析，获得样本的基因型、表达水平、突变状态等相关信息。
需要注意的是，具体的操作方法可能会有一些具体的差异，可以参考安捷伦二代
测序仪的操作说明书来进行操作。
此外，操作中的实验室条件、试剂质量等因素也会对结果产生影响，需要严格控制实验条件和使用优质试剂。
安捷伦网络分析仪使用手册
Format: 设置格式
Scale: 设置比例尺
Display: 设置显示参数
Avg: 波形平整
Cal: 校准
STIMULUS Block:
Start: 设置频段起始位置
Stop: 设置频段截止位置
Center: 设置频段中心位置
Span: 设置频段范围
Sweep Setup: 扫描设置
Search target: 寻找目标
Search left: 向左寻找目标
Search right: 向右寻找目标
Target value: 设定目标值
Target transition: 根据变化趋势寻找目标
Positive: 正向搜索
Negative: 负项搜索
Both: 双向搜索
Cancel: 取消
Save/Recall:(保存,装载设定)
Save state: 存储当前状态
State01—state08: 将当前状态存于状态01到状态08
Autorec: 以Autorec为文件名将当前状态储存于硬盘中
File dialog: 以任意文件名将当前状态保存于硬盘中
Return: 返回
Recall state: 装载已保存状态
State01-state08: 装载状态01到状态08
Autorec: 装载以文件名Autorec保存的状态
File dialog: 装载以其它文件名保存的状态
Return: 返回
Save channel:
State A–State D: 将当前所有通道设定保存到状态A到D中
Clear states: 清除所有通道设定记录
网络分析仪使用手册
RNA完整值RIN—RNA质量控制标准化
RNA 完整值(RIN) —RNA 质量控制标准化应用摘要评估RNA 完整性是获得有意义基因表达数据的第一个关键步骤。
采用完整RNA 是成功微阵列或qRT-PCR 分析的关键要素。
Agilent 2100 生物分析仪系统和RNA 试剂盒在协助研究者确定RNA 质量方面发挥重要作用。
Agilent 2100生物分析仪系统上生成的谱图包括浓度信息，允许直观检查RNA 完整性，并生成核糖体比率。
本应用简报描述的新软件算法开发用于从生物分析仪电泳图提取RNA 样品完整性的信息。
Odilo Mueller Samar Lightfoot Andreas SchroederNote: Trap set for 16% of size.位内标之间的基线信号增大。
生物分析仪软件自动生成18S/28S 核糖体亚基的比率。
尽管核糖体比率在确定凝胶电泳中样品降解程度方面发挥重要作用，但Agilent 2100 生物分析仪系统中更详细的分析表明，该比率未充分描述样品完整性。
为了将RNA 完整性解释过程标准化，安捷伦科技有限公司已经推出一种新的RNA 质量评估工具。
开发RNA 完整值(RIN) 旨在消除RNA 质量控制中的个人解释。
它将完整电泳图前言确定RNA 起始材料的完整性是基因表达分析中的一个关键步骤。
Agilent 2100 生物分析仪系统及相关的RNA 6000 Nano 试剂盒和Pico 试剂盒已成为RNA 质量评估和定量的标准1,2。
在精密加工的芯片上利用电泳分离，分离RNA 样品，并随后通过激光诱导荧光检测法检测。
生物分析仪软件生成电泳图和凝胶样图像，并展示多种结果，如样品浓度和核糖体比率。
电泳图提供了RNA 样品质量的详细直观评估结果。
然而，依赖人工目视解释数据的方法具有内在缺陷。
此前，研究者们已经将核糖体比率在平板凝胶分析中并作为特征在生物分析仪软件中用来表征RNA 完整性的状态。
采用核糖体比率的总RNA 样品平板凝胶分析通常得到不准确的RNA 完整性评估结果3。
2100N浊度仪操作规程
2100N浊度仪操作规程一、测量操作：1、收集有代表性的水样品于洁净的容器中，把水样品倒入至刻度线（约30ml），小心拿样品池的上端，盖好样品池盖。
2、拿着样品池盖，檫掉池上的水滴和指印。
3、将样品池从上至下滴上硅油，用滤纸擦拭，使一薄层硅油均匀覆盖于样品池表面。
4、将样品池放入仪器的池槽中，关上盖子。
5、按RANGE键，选择手动或自动量程。
6、按SIGNAL/AVG键，选择粗略的信号平均（关或开）。
7、按RATIO键，选择合适的比率（开或关）。
注：量程大于40NTU时需比率开。
8、按UNITS/EXIT键，选择测定单位（NTU,EBC和NEPH）为NTU。
9、读数和记录结果。
二、校正操作配制福尔马井稀释液1.1配制前的准备1.1.1去离子水（小于0.5NTU）2L。
1.1.2 10ml刻度吸液管1个。
100mlA级容量瓶2个，200mlA级容量瓶1个。
1.1.3 4000NTU福尔马井标准液100ml1.2配制20NTU稀释液。
1.2.1加100ml去离子水到200mlA级容量瓶中。
1.2.2用吸液管吸取1.0ml混合均匀的4000NTU福尔马井标准液到200ml容量瓶中。
1.2.3用去离子水稀释到200ml刻度线，加好塞子，摇匀。
1.3配制200NTU稀释液。
1.3.1加50ML去离子水到100MLA级容量瓶中。
1.3.2用吸液管吸取5.0ml混合均匀的4000NTU加标准液到100ml容量瓶中。
1.3.3用去离子水稀释到100ml刻度线，加好塞子，摇匀。
1.4配制1000NTU稀释液。
1.4.1加50ML去离子水到100MLA级容量瓶中。
1.4.2 用吸液管吸取25.0ml混合均匀的4000NTU加标准液到100ml容量瓶中。
1.4.3用去离子水稀释到100ml刻度线，加好塞子，摇匀。
2、校正操作2.1向洁净的样品池中加入去离子水到刻度线（约30ml），用滤纸擦净样品池，滴上硅油，用擦净纸擦拭使之呈膜状覆盖于样品池表面。
安捷伦产品手册
7697A 顶空进样器 —— 具有 111 位和 12 位样品瓶容量两种配置的最先进顶空气相色谱系统，在序列运行 过程中可以更换样品盘，从而提高样品通量
欢迎您的选购 如果您想了解安捷伦生命科学和应用市场的全部产品系列，请访问
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目录 气相色谱 ...........................................................................................................................................................3
4
/chem/lc-cn
安捷伦液相色谱
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1290 Infinity II 液相色谱系统 —— 引领了 UHPLC 的未来趋势 — 具有极高的稳定性和耐用性，辅以突破性的技术，从三方面大幅提高您的业务 效率：最大化分析效率 、最大化仪器效率 、最大化实验室效率 1260 Infinity 液相色谱系统 —— 建立了更高的性能标准和可信度。同时还提供了 UHPLC 水平的分析效率、数据质量和耐用性 —— 价格却仅仅 相当于普通的 HPLC 系统 1220 Infinity 液相色谱系统 —— 用于常规 HPLC 和先进的 UHPLC 分析的高质量集成系统，使您的投资回报最大，配合移动设备平台附件，1220 Infinity 可立刻升级成为车载液相色谱仪；构建移动实验室
Agilent 2100 Bioanalyzer 说明书
Bioanalizzatore Agilent 2100Our measure is your success.possibilità per l’analisi di DNA,RNA, proteineproducts | applications | software | servicesBioanalizzatore Agilent 2100 Tecnologia lab-on-a-chip applicataIl bioanalizzatore Agilent 2100 rappresenta lo standard di riferimento per il QC di campioni di RNA e ha sostituito la piùimpegnativa elettroforesi su gel per questa applicazione. Inoltre, sta rapidamente sostituendo la stessa tecnica anche per l’analisi di frammenti di DNA e della tecnica SDS-PAGE per l'analisi delle proteine. Una caratteristica esclusiva del bioanalizzatore Agilent 2100 è la possibilità di utilizzarlo sia per le separazioni elettroforetiche sia per le analisi citometriche a flusso dei parametri di fluorescenza cellulare. Questa versatilità rende il Bioanalizzatore Agilent 2100 uno strumento indispensabile per la biologia e la biochimica miniaturizzazione della strumentazione analitica presenta numerosi vantaggi rispetto alle tecniche tradizionali. Questi vantaggi comprendono il miglioramento della precisione e della riproducibilità dei dati, i tempi di analisi più corti, il consumo minimo di campione, il potenziamento dell’automazione e l'integrazione di flussi operativi complessi. Introdotto nel 1999, il Bioanalizzatore Agilent 2100è stato il primo strumento commerciale a usare la tecnologia microfluidica per l’analisi di campioni biologici.Possibilità di scelta fra due configurazioni:•Bioanalizzatore Agilent 2100 con cartucce intercambiabili, per applicazioni in elettroforesi e in citometria a flusso•Bioanalizzatore per elettroforesi Agilent 2100 con cartucce intercambiabili, solo per applicazioni in elettroforesi Per entrambi i sistemi la configurazione include:1. Stazione di riempimento chip2. Vortex per chip3. Software Agilent 2100 expert per il controllo dellostrumento e l’elaborazione dei dati (espandibile per un completo supporto alla conformità negli ambientiregolamentati)4. Assistenza e supporto su sistemi e applicazioni23•Citometria a flusso su chipIl modo più semplice per acquisire dati di fluorescenza cellulare a doppia colorazione•Controllo della qualità dell’RNA con RINLo standard dell’industria per l’analisi dell’RNA che fornisce dati di RNA totale, mRNA e Small RNAcompreso l’algoritmo per il RIN (RNA Integrity Number)Un’ampia gamma di applicazioniUn unico sistema compatto con kit pronti per l’uso•Dimensione e quantità del DNASeparazione e quantificazione del DNA di alta qualità•Sostituzione SDS-PAGE per l’analisi delle proteine.Il modo veloce ed affidabile per determinare la quantità e la purezza delle proteine in base alla sensibilità della macchiatura d’argento CoomassieIl bioanalizzatore Agilent 2100 offre un’ampia gamma di kit di analisi pre-validati combinati con un sistema da banco di facile utilizzo Bioanalizzatore Agilent 2100: analisi rapide ed eccellente qualità dei dati•Test pronti per l’uso e kit di reagenti preconfezionati •Minimo consumo di campione (1-4 µl) e risultati entro 30minuti•Cartuccia elettrodo sostituibile per cambiare metodo senza rischio di contaminazioni•Migliore accuratezza e precisione dell’analisi •Risultati interlaboratorio confrontabili•Dati digitali per semplificare le operazioni di analisi,archiviazione e memorizzazione•Opzioni per la visualizzazione dei dati come immagine gel,elettroferogrammi e tabelle•Facilità d'uso con confronto dei campioni semplificato •Minima esposizione a materiali pericolosi •Supporti per la conformità al CFR 21 Parte 11Small RNAPurezza proteine4Facile da utilizzareConfronto dei campioni semplificato•Kit di reagenti pronti all’uso •Istruzioni per un rapido avvio dell'analisi•Preparazione del chip in meno di cinque minuti•Minimo impiego di sostanzechimiche tossiche e quantità minime di rifiuti da smaltire•Volumi di campione nel range dei µlIl campione si sposta attraverso imicrocanali partendo dal pozzetto del campione.Il campione viene iniettato nel canaledi separazione.I componenti del campione vengonoseparati elettroforeticamente.I componenti vengono rivelatimediante la loro fluorescenza e convertiti in immagini gel simili(bande) ed elettroferogrammi (picchi).Principio di funzionamento del lab-on-a-chip1.3.4.2.Ottieni il massimo dai tuoi dati digitaliUn software potente per l’analisi di RNA, DNA, proteine e celluleIl software Agilent 2100 Expert è l’unica soluzione creata specificamente per il sistema bioanalizzatore. Costruito sull’esperienza di numerose generazioni di software per bioanalizzatore, offre la flessibilità della piattaforma integrata 2100 expert, con funzioni accuratamente progettate per aiutarti a ottenere il massimo dai dati digitali. Funzioni dedicate•Strumenti potenti per la valutazione dei dati: un’unica piattaforma per tutte le analisi•Algoritmo esclusivo per il numero di integrità dell’RNA (RIN) per una stima dell’integrità dell’RNA totale senza errori.•Pronto per la conformità - servizi di supporto per la valutazione del sistema (IQ e OQ) e conformità al CFR 21 Parte 11 usando il Security pack opzionale.•Segnalazione sui risultati con codice colore – un sistema di facile uso, con regole definite per il QC e la valutazione dei dati•T abelle e grafici flessibili dei risultati permettono un facile controllo dello strumento e supportano modalità utente standard e avanzate•Funzioni di sovrapposizione, regolazione e zoom con un solo clic del mouse consentono di confrontare velocemente fino a 48 campioni presenti in uno o in vari chip •Molteplici formati di esportazione per un flessibile scambio di dati•Il software di revisione dei dati permette la valutazione e la condivisione offline•Efficienti strumenti integrati per la diagnostica minimizzano i tempi di fermo del sistema•Migliori analisi di campioni di RNA, DNA e proteine •File in formato XML nativo per l’integrazione totale dei dati fra piattaforme e progettiImposta e avviaAnalizza e confrontaLe varievisualizzazionigrafiche, comel’immagine gelsimile quimostrata, sonosupportate databelle diinformazioniaggiuntive eagevolano l’analisidei risultati.Impostazione deicampioni, sceltadel metodo e avviodell’analisi sonocomodamentedisponibili tramiteun’interfacciautente intuitiva chefornisce l’accessoagli strumenti dellaserie 2100.Stampa i reportI report possonoessere configuratifacilmente dagliutenti per soddisfarele loro esigenzesegnalazione deirisultati tramitecodice coloreconsente agli utentidi vedereimmediatamente sei risultati sono entroi limiti.56Agilent supporta il tuo processo di validazione dall’inizio alla finePer gli utilizzatori che lavorano in ambienti regolamentati, il software Agilent 2100Expert supporta le procedure di IQ e OQ/PV di hardware e software, in un contesto di validazione dedicato.Qualificazione del design (DQ)La procedura di DQ definisce le specifiche funzionali e operative del Bioanalizzatore 2100 assicurando la presenza delle funzioni necessarie e dei criteri di prestazione. I documenti forniti per il Bioanalizzatore 2100 comprendono:•Dichiarazione di validazione del sistema•Dichiarazione di conformità dello strumento alle specifiche di fabbricazioneGli strumenti e i software Agilent spianano la via alla conformitàLe aziende biofarmaceutiche devono sopportare i costi e il carico di lavoro supplementari associati al controllo della qualità e alla conformità alle normative. Per questo, le procedure di laboratorio e di produzione devono essere standardizzate e al tempo stesso soddisfare le richieste di GLP e GMP. Agilent ti aiuta a garantire la sicurezza del cliente, minimizzando l’impatto per l’azienda, con il Bioanalizzatore Agilent 2100, per un controllo qualitàstandardizzato e affidabile. Agilent supporta il processo di validazione fornendo la documentazione di DQ e IQ e offrendo strumenti e servizi di OQ/PV. Il software Security Pack del Bioanalizzatore Agilent 2100 risponde a tutti i requisiti del CFR 21 Parte 11 relativi al trattamento delle registrazioni elettroniche, alla sicurezza e all’integrità dei dati e alla tracciabilità per l’audit. Il Security Pack richiede il software 2100 Expert.•Dichiarazione di conformità dello strumento ai requisiti della Guida 22ISO/IEC e EN 45014 CEN/CENELEC •Dichiarazione di conformità per chip e reagenti.Qualificazione dell’installazione (IQ)La procedura di IQ assicura che il Bioanalizzatore Agilent 2100 e il software 2100 expert sono statiinstallati in modo corretto al momento della consegna.“Sono convinto che Agilent fornisca la gamma piùcompleta di servizi per laconformità e la validazione, con pacchetti globali, multi-vendor e multiprodotto, che ticonsentono di risolvere con una chiamata ogni tua esigenza.”Dr. Ludwig Huber, esperto internazionale in materia di conformitàSicurezza negli ambienti regolamentatiQualificazione Operativa (OQ)Il processo di qualificazione operativa dimostra che lo strumento funzioneràsecondo le specifiche operative nell’ambiente previsto.Qualificazione delle prestazioni (PQ)Il laboratorio è responsabile della procedura di PQ che dimostra che il Bioanalizzatore 2100 sta funzionando secondo specifiche appropriate per l’uso di routine e produce dati affidabili,accurati e riproducibili.INSTALLAZIONEQualificazione dell’installazioneSTART UPQualificazione OperativaFUNZIONAMENTOQualificazione delleprestazioniIQ OQ PQPROGETTAZIONEQualificazione del designDQ7Specifiche dello strumentoSupporto a strumenti e applicazioniRiparazione in 24 ore, garanzia estesa, applicazione e servizi di conformitàServizi di assistenza per hardware e softwareTutti i componenti del Bioanalizzatore 2100 sono coperti da garanzia per un anno. Il Bioanalizzatore Agilent 2100 ècoperto dal servizio di riparazione premium che prevede la sostituzione dello strumento in 24 ore o la restituzione per la riparazione con prestito di uno strumento sostitutivo.Questo riduce significativamente i tempi di fermo macchina.Il servizio di garanzia premium può essere inoltre ulteriormente ampliato:•Estensione per uno o più anni della garanzia per tutti i principalicomponenti del Bioanalizzatore 2100,compresi PC, stampante e software,con servizio di “Express exchange”dello strumento. Inoltre, è compreso un intervento annuale dimanutenzione preventiva (PM).•Estensione per uno o più anni della garanzia “Express exchange” per il Bioanalizzatore 2100, con lapossibilità di includere il PC Agilent e la stampante.•Estensione per uno o più anni della garanzia del software, comprensiva di assistenza illimitata, aggiornamenti automatici e gratuiti del software e bollettini sullo stato del software.Supporto applicativoSono disponibili due tipi di assistenza applicativa on-site: •Servizi di start-up, per permettere ai nuovi utenti di acquisire familiaritàcon l’hardware, il software e l’applicazione scelta.•Servizi operativi, comprendenti la risoluzione dei problemiapplicativi e il corso sull’utilizzo del kit LabChip scelto. Il corso comprende l’esecuzione di analisi con campioni del cliente.Servizi di conformità per la qualificazione del sistemaPer gli attuali* sistemi con Bioanalizzatore 2100, Agilent offre servizi completi di qualificazione dell’installazione (IQ) e di qualificazione operativa (OQ). I servizi vengono forniti esclusivamente da tecnici Agilent appositamente addestrati e serie completa di servizi per la conformitàcomprende la qualificazione di esperimenti,cartucce e strumenti multipli.*Non disponibile per strumenti serie “A” venduti prima del 2001.Bioanalizzatore Agilent 2100Una piattaforma, possibilità infinite per l’analisi di DNA, RNA, proteine e cellulePer ulteriori informazioni: /chem/labonachip Acquista online:/chem/store Visita il nostro sito:/chem eMail:************************© Copyright 2008 Agilent Technologies Pubblicazione Febbrario 1, 2008Numero pubblicazione 5989-7725ITE。
热应激下泌乳母猪乳腺组织中circRNA的识别与鉴定
热应激下泌乳母猪乳腺组织中circRNA的识别与鉴定倪一凡1，蔡剑锋1，陈强强1，胡金平2，沈家聪2，张金枝1*（1.浙江大学动物科学学院，浙江杭州 310058；2.杭州大观山种猪育种有限公司，浙江余杭311100）摘 要：为深入研究热应激（Heat Stress，HS）对母猪泌乳性能的影响、丰富热应激母猪转录组信息，选取40头泌乳母猪进行热应激（HS组）和正常养殖（TC组）实验，每组20头，研究其泌乳性能的差别，随后各组随机选取3个样本，采用转录组学的方法研究热应激母猪乳腺中的环状 RNA（circRNA）差异。
结果表明：持续热应激会导致泌乳母猪泌乳量减少，血液生化指标和免疫指标发生显著改变，从而对泌乳母猪的健康形成不利影响。
HS组和TC组共鉴定了来自母猪乳腺的circRNA 20 311个，筛选出187个差异表达circRNA，其中106个上调，81个下调。
差异表达circRNA的宿主基因GO和KEGG功能分析发现多数亲本基因主要涉及Rab GTPase的结合、生物学过程的负调控、cAMP信号通路和HIF-1信号通路。
此外，circRNA-miRNA 靶标预测的构建表明，187个差异表达的circRNAs被鉴定可作为466个miRNAs的“分子海绵”。
最终筛选出sscirc_078984、sscirc_098353和sscirc_135768可能参与了HS母猪的泌乳性能调节，为进一步探究HS对泌乳母猪的影响机制提供基础。
关键词：circRNAs；热应激；乳腺；泌乳性能；RNA测序中图分类号：S828.2 文献标识码：A DOI编号：10.19556/j.0258-7033.20200720-08母猪热应激（Heat Stress,HS）是母猪对高温环境产生的非特异性反应的总和[1]。
高温环境严重影响母猪的摄食、繁殖、泌乳和新陈代谢[2-3]。
其中，泌乳是一个动态的、多因素调节的复杂过程。
高热条件下，母猪皮肤毛细血管血流量增大、散热增加从而影响母猪泌乳效率[4]。
安捷伦操作
安捷伦操作1 开机1.1 打开电脑1.2 打开液相色谱各个模块的电源1.3 双击桌面“LC1260(Online)”，进入联机界面1.4 排气：1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈）1.4.2 右键单击“Pump”图标区域，选择“Method”选项，进入泵编辑画面，设流速：5ml/min，点击“确定”；1.4.3 右键单击“Pump” 图标区域，点击“Control”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止；1.4.4 右键单击“Pump” 图标，点击“Method”选项，设流速：0ml/min，手动旋紧冲洗阀；1.4.5 右键单击“Pump”图标，点击“Method”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速：1.0ml/min；（不一定是1）1.4.6 同理右键单击“Column Comp”，“DAD”图标，点击“Method”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制” 选项，“ON”打开柱温箱和检测器。
2 编辑方法2.1 点击“Method”——“Edit EntireMethod”开始编辑完整方法；2.2 选中除“Data Analysis ”外的三项，进入下一选项卡，选择“Als”（自动进样），点击“OK”，进入下一选项；2.3 选择“Method”菜单下“Method Information”选项，在“Method Comments”中加入方法的信息（如：This is for test!），选择“OK”，进入下一选项；2.4 泵参数设定：右键单击“Pump”图标，点击“Method…”选项，设置“Flow”：如1.0ml/min；“Stop Time”：如10 min （该停止时间仅为做一个样品需要的时间），按照要求选择合适比例的流动相配比，选择“OK”，进入下一选项；2.5 自动进样器参数设定：右键单击“Sampler”图标，点击“Method”选项，选择“Injection volume”，输入进样体积，选择“OK”，进入下一选项；2.6 柱温箱参数设定：右键单击“Column Comp”，点击“Method”选项，设置“Left”温度（可设置温度范围：低于室温10℃-80℃），一般“Left”和“Right”温度一致，选择“Combined”绑定即可，“Stop Time”选择“As Pump /Injector”，选择“OK”，进入下一选项；2.7 UV检测器参数设定: 右击“DAD” ，点击“Method…”选项，下方的空白处输入所需的检测波长（可根据需要选择多个波长，最多可选8个波长）；“Stop Time”选择“As Pump /Injector”；“Spectrum”——“Store”选项下，根据需要选择“None”或“All（全波长扫描）”等选项，选择“OK”，进入下一选项；2.8 编辑方法完毕，从“Method”菜单中，选中“Save Method As”，输入一方法名，选择“OK”，保存方法成功。
安捷伦高效液相色谱仪操作说明
远兴生物能源有限公司安捷伦高效液相色谱仪操作说明一、校枪及样品处理1. 校枪仪器:两个小烧杯、分析天平、移液枪1000μL、100μL步骤:打开分析天平预热,一只烧杯放到称量盘上调零,一只装入纯水。
将移液枪1000μL、100μL调至950μL、50μL,分别吸取纯水称质量,如偏大或偏小,调节移液枪直至准确到0.001g。
(如枪使用过久或气密性不好,可以准备一个小烧杯装入纯水,每次先轻轻沾湿枪口,甩掉水或在用卫生纸吸取口上的水,再插上枪头使用。
)注意慢吸慢放,不要挂珠。
2. 样品处理:用1.5mL离心管取0.5mL发酵液,取出样品后,首现在离心机上离心(13000rap/min 3min)。
然后将样品稀释20倍,取950μL纯水、50μL发酵液于离心管中。
混匀后在离心机上离心(13000rap/min 3min)。
准备自动进样瓶(瓶中放上内衬管),取200μL待测液盖紧盖子。
按顺序放到自动进样盘中。
二、开机1、仪器各组件将在线脱气器、泵:四元、进样器:自动进样器(六通阀)、柱温箱、检测器:示差折光检测器开关打开。
打开计算机,进入Windows XP 画面,并运行CAC Server程序,打开色谱仪各组件电源,待显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后,双击Instrument 1 Online ,图标打开工作站。
化学工作站自动与1200LC通讯。
流动相:将流动相(一般不主张使用偏酸、偏碱的流动相)放入溶剂瓶中,打开冲洗阀,设流速为2ml/min,单击确定,再依次单击泵→控制,选中启动,单击确定,则系统开始冲洗,至管路无气泡为止,切换管路反复操作至所需管路均无气泡。
在“控制”选项中选“关闭”,关闭泵,关闭冲洗阀。
单击泵下面瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积。
每次四元泵开始前,要打开冲洗阀阀门以5ml/min的流速冲洗10分钟,使脱气机与泵之间的流动相从冲洗阀流出,以免隔夜的流动相损伤色谱柱。
每次进样检测前,要用流动相冲洗色谱柱30分钟,达到柱温前20min流速设为0.2ml/min,达柱温后再改为0.6ml/min。
JEOL2100操作步骤
JEOL 2100 HRTEM操作规程一开机前准备1. 检查离子泵(SIP)真空<3×10-5；加速电压120KV在OFF状态；电镜在TEM1-3放大模式；放大倍数<40K；循环水箱、空压机正常工作。
2.给冷阱加满液氮，等喷发一次后盖好冒口。
3.升高压。
点击120KV ON­ →120KV-160KV (3.3min) →160KV-200KV(33.3min)二. 进试样1 装样品：将铜网装入HOLDER(样品杆)，用HOLDER后端部位敲击手掌数次，防止铜网或试样掉落。
检查样品杆上的两个O-RING，避免纤维等附着在O-RING。
如有异物，请用洗耳球吹掉或用无毛纸擦净。
装样品时一定要小心！以免损坏样品台或污染镜筒。
2 预抽真空：将HOLDER缓慢插入测角台。
铜销钉进入暗销位置并听到主机“嘀”声后，将开关拨向Pump。
等右手的灯变为绿色，一般再过5-10分钟后，才开始进样。
3进样：顺时针旋转样品杆，当不能继续旋转时(约10度)，会感到有一股吸力将样品杆朝镜筒方向吸，顺势让样品杆被吸入至停止(前进距离约3cm)。
然后继续顺时针旋转样品杆至不能旋转，顺势让样品杆被吸入至停止(约15cm)。
此时应检查镜筒的真空，一般应为<2.0&αχυτε;10-5 Pa，如果大于3.5×10-5则需要停止工作。
让离子泵再抽约10-20分钟，才可加灯丝电流。
三．测试前准备1. 确认离子泵的真空(<2.0&αχυτε;10-5 Pa)2. 确认FILAMENT READY灯亮(在计算机屏幕上)。
3. 按下灯丝加热钮，等电子束发射稳定。
最终的Beam Current 约比不加灯丝电流时多3—5 A。
四．测试操作1. 调入对应电压下的合轴数据（事先管理老师已合好并存储）2. 低倍形貌观察(<100K)：在Low Mag下寻找样品位置→回到Mag模式→按下STD Focus →按下Image Wobb X，调整Z轴高度,使图像不再颤抖（正焦）→ 按F1抬起荧光屏→调节Focus使图像清晰（略欠焦）→拍照3. 高倍结构观察(>100K):在低倍合轴完毕的基础上，将放大倍数升到100K以上→按下STD Focus→按下HT Wobb→按亮Bright Tilt →调整DEF X/Y旋钮使该标志物同心放大和收缩→ 按下HT WOBB键使图像停止颤动→按F1抬起荧光屏→调节Focus使图像清晰(如有需要，按下OL Stig，用Live FFT做物镜消像散) →拍照注意：观察过程中一定要顺时针散开光斑，保持亮度value<3000, 否则会烧坏CCD探头！无法维修。
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安捷伦2100 生物分析仪简要操作说明
1．启动电脑，登陆刷卡系统。
2．开生物分析仪电源(位于后侧底部)，等待正面右上方状态灯显示绿色。
3．双击电脑桌面上“2100 Expert”图标，进入Instrument 主界面，确认COM Port 选择正确（COM选择1），左侧仪器示意图清晰显示(表示通讯正常) 。
4．按照试剂盒操作说明准备好注胶平台(注射器安装是否足够紧固以及注胶平台密封性是否完好，对于实验成功至关重要!)：
5．按照试剂盒说明将2100 生物分析仪芯片槽的类型选择推杆推到正确位置(1 - 电泳，2 –细胞)。
6．按照试剂盒说明将芯片混匀仪转速设到正确位置(一般为2400rpm)。
7．取出试剂盒，平衡到室温约30 分钟，注意避光。
准备凝胶和染料的混合物，染料用完立即放回试剂盒避光。
(请参照相应试剂盒说明，注意离心过滤和混合的先后顺序以及离心转速的不同)
8．取出9ul(核酸)或12ul(蛋白)凝胶染料混合物，加入电泳芯片的注胶孔(注意不要接触芯片底部，往芯片孔中加液时伸入底部不要靠壁!)
9．将芯片放入注胶平台，拉动注射器推杆至1ml 刻度并扣紧上盖，压下推杆至固定架卡扣，计时(时间参考试剂盒说明)，到时间松开固定架卡扣，等待注射器推杆停止运动后将其缓慢拉回至1ml 刻度，松开注胶平台上盖。
10．从注胶平台取出芯片，并往右上方两个注胶孔各加入9ul(核酸)或12ul(蛋白)凝胶染料混合物。
(对于蛋白实验还要取12ul 去染色试剂至孔中)。
11．往电泳芯片上数字标记的样品孔及Ladder 孔中各加入5ul Marker。
(蛋白实验不需要加Marker 直接加6ul 样品或稀释的Ladder 并忽略下一步，对于RNA Pico 试剂盒还要往CS 孔中加入9ul Conditioning Solution)
12．往Ladder 孔中加入1ul Ladder，数字标记的样品孔中各加入1ul 样品(RNA 样品和Ladder 以及蛋白样品的变性处理请参考相应试剂盒说明)。
13．将加好样品的电泳芯片放入芯片混匀仪卡槽，注意方向以保证卡紧并用手指按压确保芯片放置平稳，旋混1 分钟，混匀完成后5 分钟之内要开始分析。
14．打开2100 生物分析仪顶盖，放入混匀后的芯片，轻轻关上顶盖。
2100 Expert 软件Instrument 操作界面上识别到已装入芯片，点击Assays 选择相应的实验类型，设定数据保存路径，点击Start 开始运行。
运行中勿触碰仪器并避免台面震动。
15．数据采集完毕用Electrode Cleaner 装纯水清洗电极。
(RNA 实验前后均须用RNAse Zap 和无酶水清洗，具体操作步骤见Maintenance and Troubleshooting Guide)。
16．打开Data 操作界面，调用数据，软件将自动运算并显示结果，点击Result Flagging 子界面设定结果颜色标记的规则，点击Print 图标生成报告。
2100 生物分析仪的维护
1．镜头污染时用专用拭镜纸蘸少量酒精或异丙醇挤掉多余液滴后轻轻擦拭；
2．电极严重污染时需要取下清洗，方法详见Maintenance & Troubleshooting Guide；3．注胶平台密封性差时需要更换密封圈，为保证密封性请在每次开启新的芯片盒时更换新的随附注射器。