第二十篇药物的体外抗菌试验

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微生物在药学中的应用

微生物在药学中的应用

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第二十一章 药品制剂微生物学检验
微生物在药学中的应用
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第一节 灭菌制剂无菌检验
灭菌制剂: 注射剂 眼科制剂 手术用具(敷料、缝合线、无菌器具等)
微生物在药学中的应用
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普通药品无菌检验——直接接种法
需氧菌、厌氧菌、霉菌检验
需氧菌:30~35℃,7天 厌氧菌:30~35℃,7天 霉 菌:20~25℃,7天 观察培养液是否混浊或涂片染色镜检
(2)Ca 2+ + 草酸 → 草酸钙↓(还可促进蛋白质沉淀)
(3)磷酸盐除Mg 2+
(4)黄血盐除Fe 3+
(5)ZnSO4与黄血盐形成复盐吸附蛋白质
(6)过滤
微生物在药学中的应用
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6 、抗生素提取和精制
(1)溶媒萃取法—Pen (2)离子交换法—氨基糖苷类抗生素 (3)吸附法(活性炭、大孔吸附树脂)—头孢菌素 (4)沉淀法——四环素
特定单位(特定样品某一重量为一定单位)
例: 一批特定杆菌肽1mg ≌ 55U
微生物在药学中的应用
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二、抗生素效价测定—管碟法
原理: 抗生素在琼脂平板培养基中扩散渗透作用 抗生素在一定浓度范围内,其浓度对数和抑菌圈直径成直 线关系 y=a+bx y:抑菌圈直径,x抗生素浓度对数
惯用二剂量法 W=(SH+UH)-(SL+UL) V=(UH+UL)-(SH+SL) 供试品与标准品效价比θ=D*antilg(IV/W) D普通为1,I普通为lg2
增菌液增菌培养 分离、纯培养
菌落等培养特征观察
镜检形态学检验(如革兰氏染色)
生理生化反应检验

第十九章药物的体外抗菌试验

第十九章药物的体外抗菌试验

抑菌圈的大小反映待测菌对该药物的敏感程度并与 该待测菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关,即抑菌圈 越大,最低抑菌浓度就越小。
最低抑菌浓度(MIC):指抗菌药物能够抑制细菌生长 所需要的最低浓度,单位是ug/ml或u/ml。
如庆大霉素对铜绿假单胞菌的MIC为1.56ug/ml,青 霉素G的MIC>128ug/ml,由此可判定庆大霉素对铜绿 假单胞菌的抑菌效力大于青霉素。
5、影响结果的因素
(1)培养基:除在M-H培养基上无法生长的细菌外,一 般都固定使用M-H培养基。
(2)抗菌药物:原则上采用标准粉剂,不用口服药物,配 好的原液应在有效期内使用。
(3)结果观察:应在12-18小时之间。培养时间过长,轻 度抑制的细菌可重新生长;或抗菌活性降低,甚至消失, 从而使MIC值增高。
(3)接种菌液的准备:从纯培养的平板上挑取形态相同 的4-5个菌落,接种于 3-5mlM-H液体培养基内, 35℃培养4-6小时,营养要求高的则培养过夜,然后校 正菌液浓度至0. 5麦氏比浊标准,再用M-H液体培养基 作1:200稀释,并在15分钟内接种。
3、试验步骤
(1)排列10-15支试管,除第1支外,各管加入M-H液 体培养基1ml。
(三)实验步骤
(1)菌液接种:用灭菌过的棉拭蘸取已制备的菌液涂抹 在M-H平板培养基的表面,均匀涂抹3次,每涂一次,平 板应转动60度,最后将棉拭绕平板内缘涂沫一圈,盖上平 皿盖,放置室温干燥数分钟。
(2)药物纸片的贴放:以无菌镊子取各种抗菌药物纸 片,贴放于已接种过试验菌的平板培养基表面,纸片贴后 不能再移动,因为有些药物可立即扩散。各纸片中心间距 不小于24mm,距平板边缘不小于15mm。直径为90mm的 平板可贴放6张纸片。贴后15分钟内倒置35℃培养箱16- 18小时后阅读结果。

thweek药学实验四药物的体外抗菌试验

thweek药学实验四药物的体外抗菌试验

结果观察与记录
观察抑菌圈
通过观察抑菌圈的大小,初步判断药物的抗菌 效果。
数据记录
详细记录实验过程中的数据,如菌种名称、药 物名称、稀释比例、抑菌圈大小等。
结果分析
根据记录的数据,进行结果分析,计算药物的抑菌率或最小抑菌浓度等指标。
04
数据分析与结论
数据整理与处理
数据收集
收集实验过程中获得的药物抗菌数据,包括不同 药物浓度下的抑菌圈直径、细菌生长曲线等。
展望未来研究方向
根据实验结果和数据分析,展知
实验操作注意事项
实验前应仔细阅读相关文 献,了解实验原理、操作 步骤及注意事项。
在实验过程中,应保持实 验室整洁,避免交叉污染。
确保实验操作符合实验室 安全规定,遵循正确的操 作流程。
实验结束后,应按照实验 室规定正确处理废弃物。
纸片扩散法
将含有不同浓度抗菌药物的纸片贴在接种了细菌的琼脂平板上,观察 抑菌圈的大小,判断药物的抗菌效果。
时间-杀菌曲线法
记录抗菌药物在不同时间对细菌数量的影响,了解药物的杀菌速率和 杀菌效果。
了解抗菌药物的作用机制
大环内酯类
主要抑制细菌蛋白质的合成。
氨基糖苷类
与细菌核糖体结合,抑制蛋白 质合成。
thweek药学实验四药物的 体外抗菌试验
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 数据分析与结论 • 实验注意事项与安全须知
01
实验目的
理解药物体外抗菌试验的原理
药物体外抗菌试验是指在体外条件下,通过实验室方法测试抗菌药物对病原微生 物的抑制或杀灭作用。其原理基于药物对微生物细胞膜、细胞壁、核酸或蛋白质 等生物大分子的影响,从而干扰或破坏微生物的正常生长和繁殖。

药物的抗菌试验

药物的抗菌试验
?活菌计数一般是将定量的药物与试验菌作用后混合液稀释后混入琼脂培养基做成平板培养后数平板上形成的菌落数由于一个菌落是由一个细菌繁殖而来的所以可以用菌数乘以稀释倍数计算出混合液中存活的细菌数
药物的抗菌试验
2020年7月19日星期日
•第1节 药物的抗菌试验
• 药物的体外抗菌试验包括用于区别药物是抑菌或 杀菌药物的抑菌试验;测定药物杀菌活性的杀菌试验 ;以及检查两种药物联合作用的联合抗菌试验等。一 般抑菌药物只能抑制微生物生长,不能杀死微生物, 抑菌药物被除去,微生物又可以恢复继续生长。杀菌 药物能杀死微生物,杀菌药物除去后,微生物仍然不 能生长。
丁胺卡那霉素
30
头孢唑啉
30
先锋霉素I
75
头孢噻吩
30
头孢噻甲羧肟
30
氯霉素
30
红霉素
15
庆大霉素
10
抑菌环直径(mm)
耐药 中度敏感 敏感
≤4
15-16
≥7
≤14
15-17
≥18
≤ 15
≥பைடு நூலகம்1
≤14
15-17
≥18
≤14
15-17
≥18
≤12
13-17
≥18
≤13
13-15
≥18
≤12
13-14
≥15
出现4种结果: ①无关作用小,两种药物联合作用的活性
等于其单独活性; ②桔抗作用,两种药物联合作用显著低于
单独抗菌活性; ③累加作用,两种药物联合作用时的活性
等于两种单独抗菌活性之和; ④协同作用,两种药物联合作用显著大于
其单独作用的总和。
1. 棋盘格法
棋盘稀释法是常用的定量方法,首先 分别测定拟联合的抗菌药物对检测菌 的MIC。药物最高浓度为MIC的2倍,对 倍稀释。两种药物的稀释分别在方阵的 纵列和横列进行,这样在每管(孔)中 可得到不同浓度组合的两种药物混合液。 接种菌量为5×105CUF/ml,35℃孵育 18h后观察结果。计算部分抑菌浓度 (FIC)指数。

高级药理学 体外抗菌活性试验

高级药理学 体外抗菌活性试验

体 外 抗 菌 活 性 试 验
三、比浊法
2. 步骤 将检品液也稀释成1~3种不同浓度, 种不同浓度, 将检品液也稀释成 种不同浓度 加入肉汤菌液培养基中。 加入肉汤菌液培养基中。 将全部试管移至37℃ 将全部试管移至 ℃恒温水浴箱 中约3~4h,待细菌充分生长后取 中约 , 用光电比色计测定其透光度, 出,用光电比色计测定其透光度, 根据同浓度的读数求出平均值, 根据同浓度的读数求出平均值, 然后绘出标准曲线。 然后绘出标准曲线。 将检品管同样求出平均值, 将检品管同样求出平均值,根据 标准曲线即可求出被检品的效价。 标准曲线即可求出被检品的效价。
体 外 抗 菌 活 性 试 验
三、比浊法
2. 步骤 将标准药液稀释成不同稀释度 1:10,1:15,1:20,1:30,1:40。然后于 。 大小相同的试管内加入8.8mL肉 大小相同的试管内加入 肉 汤培养基, 汤培养基,同时接种试验菌液 0.2mL。取上述已稀释好的标准 。 稀释液1mL加入肉汤菌液试管中。 加入肉汤菌液试管中。 稀释液 加入肉汤菌液试管中 此时的稀释倍数为 1:100,1:150,1:200,1:300,1:400
无细菌生长的一管为最低抑菌浓度 (MIC)。 )。
一、稀释法
稀 释 法
(二)固体稀释法 二 固体稀释法 2. 平皿稀释法 取平皿13只 加入不同浓度的药液 取平皿 只,加入不同浓度的药液 各1mL,第1~12平皿各加融化的普 第 平皿各加融化的普 通琼脂培养基9.0mL,第13平皿作 通琼脂培养基 , 平皿作 为对照不加药,加入10mL培养基, 培养基, 为对照不加药,加入 培养基 均匀摇动使其与药液合一。 均匀摇动使其与药液合一。待琼 脂凝固、表面干燥后接种试验菌。 脂凝固、表面干燥后接种试验菌。 培养24~48h,观察结果,求出 置37 ℃培养 ,观察结果,

药物的抗菌实验报告

药物的抗菌实验报告

药物的抗菌实验报告药物的抗菌实验报告引言:药物的抗菌性能是现代医学领域中非常重要的研究方向之一。

随着抗生素的广泛应用,细菌的耐药性逐渐增强,因此寻找新的抗菌药物成为了迫切的需求。

本实验旨在评估不同药物对细菌的抗菌效果,为新药物的研发提供参考。

实验设计:本次实验选择了三种常用的抗菌药物,分别是抗生素A、抗生素B和抗生素C。

为了评估它们的抗菌效果,我们选取了常见的致病菌——大肠杆菌作为实验对象。

实验分为两组,每组分别加入不同的药物,以观察其对细菌的抑制效果。

实验过程:首先,我们在实验室的洁净台上准备好所需的培养基和试管。

然后,将大肠杆菌分别接种到两个试管中,使其在培养基中迅速繁殖。

接下来,我们将抗生素A加入一个试管中,抗生素B加入另一个试管中,而第三个试管则不加入任何药物作为对照组。

将三个试管放入恒温培养箱中,保持温度恒定。

实验结果:经过24小时的培养,我们观察到试管中的细菌数量有明显的差异。

对照组中的细菌数量最多,抗生素A组中的细菌数量次之,而抗生素B组中的细菌数量最少。

这表明抗生素B对细菌的抑制效果最好,抗生素A次之,而对照组则没有抑制作用。

实验分析:通过本次实验的结果,我们可以得出以下结论:1. 抗生素B对大肠杆菌的抑制效果最好,说明该药物具有较强的抗菌能力。

2. 抗生素A对大肠杆菌的抑制效果较弱,可能需要更高的剂量才能达到理想的抗菌效果。

3. 对照组中的细菌数量最多,说明大肠杆菌在无药物干预的情况下能够自由繁殖。

结论:本次实验结果表明,抗生素B具有较好的抗菌效果,可以作为进一步研发的候选药物。

抗生素A的抗菌效果较弱,可能需要进一步优化。

此外,本实验还证明了细菌对抗生素的耐药性,这也提醒我们在使用抗菌药物时要谨慎,并避免滥用。

展望:本次实验只针对了大肠杆菌这一种细菌,未来的研究可以扩大样本范围,包括更多的细菌种类,以获得更全面的抗菌药物评估结果。

此外,可以进一步研究抗菌药物与细菌之间的作用机制,以便更好地理解抗菌药物的工作原理,为新药物的研发提供更多的线索。

《药学微生物》3-5-1 药物抗菌性的测定技术

《药学微生物》3-5-1 药物抗菌性的测定技术
步骤:活化试验菌→涂布试验菌于平板→贴 加含药纸片→37度培养24h→观察结果文
挖沟法
可以根据沟和细菌间的抑菌距离的长短, 来判断该药物对这些细菌的抗菌能力。
图 挖沟法
打孔法:
在含菌琼脂平板上打洞(一般打6个孔, 4个小孔加不同浓度标准溶液,另外2个小孔 加血清样品,放在37℃,12-18小时,测定 其抑菌圈直径。所以说微量法适于药物血浓 度的监测。
机体本身对细菌有较强的抵抗力,一 般细菌感染动物后不易使动物致病,所以 体内抗菌实验模型建立比较困难,动物实 验感染模型一般分为全身感染和局部感染 模型。
管碟法:
与打孔法原理相同,只是把药液加入放到琼 脂板上的牛津杯中。加药量相对比较多,适合 中药的体外抗菌试验。
3.抗菌药物的联合应用 (1)棋盘稀释法 (2)琼脂扩散纸片法
纸条试验:
1.只有横条纸 片含抗菌药 2.两条纸片含 不同抗菌药
图 联合抗菌试验纸条法
1.梯度平板制备 2.加强作用 图 纸条梯度平板试验
3、中草药的抗菌作用
4、其他抗菌剂(消毒剂、 防腐剂)的作用机制
试验菌
二、药物抗菌作用试验方法 (一)药物体外抗菌试验 1、影响抗菌试验的因素控制
培养基
供试药物
对照 试验
2.药物的体外抗菌试验技术 常用的有稀释法和琼脂扩散法。
稀释法是药物系列稀释后加入菌液,观察细菌 生长与否来判断结果。常用于测定药物的最低 抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。
图 液体培养基连续稀释法
琼脂扩散法
纸片扩散法 挖沟法 平板打孔法 管碟法等
纸片扩散法:
一般药敏试验常采用滤纸片法,我们可以根 据抑菌圈的大小,来判断菌种对药物的敏感性, 是敏感,中度敏感还是耐药。选用吸水力强而且 质地均匀的滤纸,用打洞机制成6mm直径的圆 纸片,120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好的 各种适宜浓度的抗生素溶液,每100张纸片加入 0.5ml药液,使它均匀浸润,放在无菌平皿中, 37℃,使它干燥,分装小瓶中,封口,4℃保存。

药物的体外抗菌试验

药物的体外抗菌试验

滤纸片法: 滤纸片法: 制成含菌平板后, 制成含菌平板后,将滤纸片蘸取药液置 于平板上,培养后观察结果, 于平板上,培养后观察结果,量取抑菌圈直 径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。 径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。 用于新药的初筛及临床的药敏试验。 用于新药的初筛及临床的药敏试验。 新药的初筛及临床的药敏试验
在实际工作中, 在实际工作中,往往可见到体外实验有 作用的药物, 作用的药物,进入机体后由于各种原因而失 效,有的药物毒性很大也不能用于临床。 有的药物毒性很大也不能用于临床。
抗菌试验的影响因素
3、抗菌药物 、 药物的浓度、 及含有的其他成分均可 药物的浓度、pH及含有的其他成分均可 影响试验结果, 影响试验结果,特别是中草药制剂往往含有 色素、杂质和鞣质等, 色素、杂质和鞣质等,这些均可造成错误结 果,应加注意。 应加注意。
抗菌试验的影响因素
4、对照试验: 、对照试验: 为精确判断实验结果, 为精确判断实验结果,试验时应设各种对 照,包括试验菌对照、已知药物对照及溶剂 包括试验菌对照、 和稀释液对照等。 和稀释液对照等。
抗菌试验的影响因素
2、培养基 、 抗菌试验的培养基应按试验菌的需求配制, 抗菌试验的培养基应按试验菌的需求配制,如链球 菌常用含血清的肉汤培养基, 菌常用含血清的肉汤培养基,抗真菌药物试验需用 沙氏培养基。 沙氏培养基。 培养基的酸碱度、电解质、 培养基的酸碱度、电解质、还原性物质等均可影响 试验结果, 试验结果,实验时应尽可能排除各种影响实验结果 因素的掺入。 因素的掺入。 经无菌检查合格。 经无菌检查合格。
液体连续稀释法
1、在一系列的试管中用液体培养基将试验药 在一系列的试管中用液体培养基将试验药 物作连续对倍稀释, 物作连续对倍稀释,使药物的浓度沿试管顺 序成倍递减。 序成倍递减。 2、再于各管中加入等量的实验菌,经 16~ 、再于各管中加入等量的实验菌, ~ 24 h培养后,与阴性及阳性对照管进行对照 培养后, 培养后 观察。 观察。 3、将未长细菌的培养液取出,分别转种琼脂 、将未长细菌的培养液取出, 平皿。如培养后重新长出试验菌, 平皿。如培养后重新长出试验菌,说明该药 仅有抑菌作用。 仅有抑菌作用。如无菌生长则可以认为该药 物有杀菌作用。 物有杀菌作用。

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第二十章 药物的体外抗菌试验
1
药物的体外抗菌试验
药物的体外抗菌试验是在体外测定微 生物对药物敏感程度的试验,
已广泛地应用于科研、生产和临床。如抗菌 药物的筛选、提取过程中的追踪、抗菌谱的定、 药物含量的测定、药物血浓度测定、指导临床用 药的药敏试验等。
抗菌试验包括抑荫试验和杀菌试验。
抑菌:即抑制微生物的生长繁殖,但不能杀死微 生物,在药物除去后微生物又能生长. 杀菌:即能杀死微 生物,当药物除去后,微生 物也不能再生长繁殖。
2
第一节 常用的体外抑菌试验
连续稀释法:
可用于测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀 菌浓度(MBC)。可以用液体培养基,也可用固体培 养基。
1.液体培养基连续稀释法 2.固体培养基连续稀释法
分平板法和斜面 法。
3
琼脂扩散法:
是利用药物可以在琼脂培养基中扩散,在药 物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离,以 抑菌圈直径或抑菌距离的大小来评价药物抗菌作 用强弱。
7
第三节 联合抗菌试验
在药学上作中,常需检查两种抗菌药物 在联合应用时的相互作用以及抗菌药物与不 同pH值或不同离子溶液的相互影响。如加强 药物抗菌作用的为协同(synergism);减弱药 物作用的为拮抗(antagonism);相互无影响的 为无关(indjfference);作用为二者之和的为累 加(addition)。
8
纸条试验
即在已接种试验菌的平板表面垂直放置两条各浸有 一种药液的滤纸条,培养后根据抑菌区的加强、减弱或 无影响来判断它们在联合应用时的效应。
梯度平板纸条试验
需先制备含药的梯度平板。将试验菌悬液涂布于 平板表面,取滤纸条浸透另一待检药液,按梯度平板 中药物浓度递减的方向置于平板表面。培养后,如该 待检药液对平板内的药物有加强作用,则可见沿纸条 两边的抑菌区被扩大。

28 第十九章药物的体外抗菌试验

28 第十九章药物的体外抗菌试验

第十九章药物的体外抗菌试验教学要求•(一)掌握常用的体外抑菌试验(连续稀释法、琼脂扩散法)。

•(二)熟悉杀菌试验(最低杀菌浓度、最低致死浓度的含义及测定的方法,活菌计数法,石碳酸系数测定法);联合抗菌试验(纸条试验、梯度平板纸条试验、棋盘格法),协同、拮抗、无关、累加的概念。

•(三)了解体外抗菌试验的影响因素。

第一节常用的体外抑菌试验一、药物的体外抗菌试验•又称药敏试验,主要用于筛选抗菌药物或测定细菌对药物的敏感性。

•最低抑菌浓度(MIC):指药物完全抑制某种微生物生长的最低浓度。

•优点:方法简便、需时短、用药量少,不需要动物。

•缺点:不能根据体外试验结果肯定或否定一个药物的抗菌作用。

试验菌•细菌、霉菌和酵母菌常用•标准菌株:来自专门机构,我国是卫生部生物制品检定所菌种保藏中心提供。

•临床分离株:经形态、生化及血清学等方面鉴定。

不得有杂菌污染,不宜用传代多次的菌种,最好是重新活化的。

控制培养时间。

•接种菌量的多少的计算培养基•根据试验菌的营养要求进行选择•培养基质量控制供试药物•药物的浓度和总量要精确配制•供试药物用适宜溶剂溶解并稀释至所需浓度,难溶药物加助溶剂。

•中草药或某些生药原粉的样品,应先提取,再浓缩至所需浓度对照试验•试验菌对照:在无药情况下,应能在培养基内正常生长•已知药物对照:已知抗菌药对标准的敏感菌株应出现预期的抗菌效应,对已知的抗药菌应不出现抗菌效应。

•溶剂及稀释剂对照:抗菌药物配制时所用的溶剂及稀释剂应无抗菌作用(一)连续稀释法•方法:液体法和固体法。

•用于测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。

•抑菌:药物可抑制微生物生长繁殖,但不杀死它,在药物除去后,微生物又可恢复生长•杀菌:药物能杀死微生物,当药物去除后,微生物不再继续生长。

1、液体培养基稀释法每培养液上菌浓度(液体稀释法图解最低图20-1液体培养基连续稀释法•优点:能与药物充分接触,结果更具有精确性和可重复性。

实验六、抗菌药物的体外药效试验

实验六、抗菌药物的体外药效试验

实验六、抗菌药物的体外药效试验(药敏试验)各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同,同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异,检测细菌对抗菌药物的敏感性,可筛选最有疗效的药物,用于临床对控制细菌性传染病的流行至关重要。

此外,通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。

药敏试验的方法很多,普遍使用的有滤纸片扩散试验(Kirby-Baueer Dice Diffusion);最低抑菌浓度试验(Minimum Inhibitory Concentration, MIC)和最低杀菌浓度试验(Minimum Bactericidal Concentration, MBC)。

[目的要求]1、熟悉体外抗菌试验操作技术。

2、掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途。

[实验原理]常用的体外测定药物抑菌能力的方法有两大类:琼脂渗透法与浓度系列稀释法。

琼脂渗透法时利用药物能够渗透至琼脂培养基的性能,将实验菌混入琼脂培养基后倾注成平板;或将试验菌均匀涂于琼脂平板的表面,然后用不同的方法将药物置于已含试验菌的琼脂平板上。

根据加药的操作方法不同而有滤纸片法、打洞法、管碟法及挖沟法等。

经适宜温度培养后观察药物的抑菌能力。

浓度系列稀释法时把药物稀释成不同的系列浓度,混入培养基内,加入一定量的试验菌,经适宜温度培养后观察结果,求得药物的最低抑菌浓度(MIC)。

1、细菌:所用细菌应包括主要致病菌。

革兰氏阳性球菌包括金黄色葡萄球菌(产酶与不产酶菌株)、表皮葡萄球菌,链球菌、肠球菌等。

革兰氏阴性球菌如淋球菌等。

革兰氏阴性杆菌包括流感杆菌、肠杆菌科细菌8~10种,绿脓杆菌与其它假单孢菌属及不动杆菌属等,厌氧菌包括脆弱类杆菌、消化球菌和消化链球菌等。

对临床应用有代表性的菌株数量,创新药应不小于1000株。

其它类新药根据新药抗菌谱宽窄可作200-500株。

试验时应包括有国际公认质控菌株(如金葡菌ATCC25925,大肠杆菌ATCC25922和绿脓杆菌ATCC27853等)。

实验4 药物体外抗菌试验

实验4 药物体外抗菌试验

K-B纸片法示意图
试验菌平板

2.0cm

2.5cm


注意事项
1 以上各不操作要严格的无菌操作,镊子和L 棒都要用酒精烧过之后冷却再使用。 2 贴纸片的时候一定要一次把纸片定位好,接 触琼脂后就不能再移动含药滤纸片。 3 不同的抗菌药物其抑菌圈直径的敏感/耐药分 界点不一样;有的抗菌药物对不同的菌种的 分界点也不一致;应根据NCCLS最新公布 的分界点数据来读取药敏试验的结果。
2、连续稀释法
连续稀释法:人为配置连续梯度的药物 浓度来检测其抗菌能力,从而找出药物的 最小抑菌浓度。 最小抑菌浓度(MIC):能抑制测试菌 生长的最低药物浓度即为MIC。 最小杀菌浓度(MBC):能杀死测试菌 的最低药物浓度即为MBC。
试验测试(1h)
1、革兰氏染色 做好后请用油镜调好后举手示意 2、平板分区画线 做好后做好标记(学号)将平板扔到玻璃 缸中
微生物与免疫学实验
实验四 药物体外抗菌试验
琼脂扩散法 纸片法
连续稀释法
• 今天要用显微镜,请单学号同学去 领显微镜,双学号同学不用领
பைடு நூலகம்
1、 K—B纸片法(学生操作)
纸片法常用于测定试验菌对各种抗生素 的敏感性,所以又叫做药物敏感试验,在 临床上可作为选择用药的重要依据。
操作步骤
1 培养试验菌:将菌种斜面培养物移种到肉 汤培养液中,37℃培养过夜,使菌液浓度 约为1.5×108cfu/ml. 2 涂布试验菌:用无菌吸管吸取一滴菌液滴 加在MHA平板上,用无菌涂布棒(L棒)将 菌液在整个平板上涂布均匀。 3 贴含药的滤纸片:用无菌镊子贴加含药滤 纸片。 4 将平板倒置于37 ℃培养24h,观察结果, 测定抑菌圈的大小,并对照NCCLS的解释 标准来判断试验菌的药敏性。

第二十篇 药物的体外抗菌试验

第二十篇 药物的体外抗菌试验

3、抗菌药物 药物的浓度和总量直接影响抗菌试 验的结果,需要精确配制 。固体药物应配制成溶 液使用,有些不溶于水的药物需用少量有机溶剂 或碱先行溶解,再稀释成合适浓度,如氯霉素及 红霉素需用少量乙醇溶解。药液的PH值应尽量接 近中性,使能保持药物的稳定性而又不致影响试 验菌的生长。 中药制剂中含有鞣酸,且具有特殊色泽,影响 结果判断。
WHO于1981年曾推荐Kirby-Bauer 法(k-B法)作 为标准化的药敏实验。 k-B法基本原理是滤纸片 法,但需用统一的培养基、菌液浓度、纸片质量、 纸片含药量以及其他实验条件。结果判断以卡尺 精确量取,根据抑菌圈的直径大小判断该菌对药 物是抗药、中等敏感或敏感。
2、打孔法
2、打孔法 在含琼脂平板上打孔,孔内加入药液, 经培养后可产生一定大小的抑菌圈。适于药物血 浓度的监测,血清用量少,敏感性高,操作简便。
图 20-3 纸条梯度平板试验Fra bibliotek三、棋盘格法(check board test)
是由于在试验时,含两种不同浓度药物的试管排 列呈棋盘状而得名,用以评价两种药物同时用不 同浓度进行联合试验时的抗菌活性。实验时排 列6排试管,每排6管,共36管使成方块,A及 B药各以液体培养基进行稀释,A药各稀释度 纵行定量加入各管,B药各稀释定量按横排加 入,两药同时作单独抗菌实验对照。然后加入 定量菌液,经培养后观察结果。
一、连续稀释法(serial dilution test))
可用于测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最 低杀菌浓度(MBC)。可以用液体培养基,也 可用固体培养基。 1、液体培养基连续稀释法 在一系列试管中,将液体培养基按一定的倍数 稀释药物,获得药物浓度递减的系列试管,然 后在每一管中加入定量实验菌,经培养一定时 间后,肉眼观察试管混浊情况,记录抑制实验 菌生长的最低浓度(即MIC)。

体外抗菌实验-18

体外抗菌实验-18

霉菌和酵母菌总数的测定:
是考察供试药物中每克或每毫升所含的活霉菌 和酵母菌的总数,以判明检品被真菌污染的程度。 测定方法基本同细菌总数的测定方法。
虎红培养基. 25—28℃ 72h(也可在24、48、72h分别计数) 选取菌落在5—50个范围内,乘以稀释倍数即可得单
位重量(或体积)中的活真菌总数
病原菌检验的原则:
适用于新药的初筛试验。 2.打孔法
适于药物血浓度的监测。 3.挖沟法
适用于在一个平板上试验一种药物对几种试验 菌的抗菌作用。
第二节 杀菌试验
用以评价药物对微生物的致死活性。
最低杀菌浓度:
指该药物能杀死细菌的最低浓度。从对微生 物广义而言,也可称之为最低致死浓度(MLC)。
是将待检药物先以合适的液体培养基在试管 内进行连续稀释,每管内再加入一定量的试验菌 液,培养后可得该药物的MIC,取MIC终点以上 未长菌的各管培养液,分别移种于另一无菌平板 上,培养后凡平板上无菌生长的药物最低浓度即 为该药物的MBC(或MLC)。
• 第一节 药物微生物污染源 • 一 生产环境 • 1 厂房 • 2 设备 • 3空气 • 二 生产原料 • 1 中草药 • 2 动物性药
• 三、制药用水 • 四、生产人员
第二节 微生物引发的药物变质
• 一、药物的物理性状改变 • 二、药物的化学成分变化 • 三、药物变质引发的不良后果
第三节 防止药物微生物污染的措施
抗菌试验包括抑菌试验和杀菌试验。
抑菌:即抑制微生物的生长繁殖,但不能杀死微 生物, 在药物除去后微生物又能生长. 杀菌:即能杀死微 生物,当药物除去后,微生 物也不 能再生长繁殖。
第一节 常用的体外抑菌试验
连续稀释法色serial dilution test

16th week 药学实验四 药物的体外抗菌试验

16th week 药学实验四 药物的体外抗菌试验
实验四
药物的体外抗菌试验
一.概述 二.药敏试验——纸片法 三.药物MIC和MBC的测定
四.细菌总数和霉菌总数测定
一 概述 1.1 抗生素对细菌生长抑制的原理:
① 抑制细胞壁形成。菌体因内部物质合成持续不断而 膨大,而细胞壁不能膨大,故菌体胀破,如青霉素。
② 破坏细胞膜。如多粘菌素 。 ③ 与微生物核糖体蛋白结合,抑制其蛋白质合成。如 氯霉素,金霉素,土霉素,四环素,链霉素,卡那 霉素,新霉素,庆大霉素,嘌呤霉素及春日霉素等。 ④ 与DNA结合,干扰其复制。如争光霉素(博来霉素), 丝裂霉素(自力霉素),放线菌素D(更生霉素) 等。
每 4个同学 1组,每个稀释度 2个重复(即2 块黄色培养基, 2块红色培养基)2个稀释度共8块平板,要求菌落计数。
菌落计数:将平皿底部过圆心划成四等份,肉眼观察菌
落并计数,并用5~10倍放大镜查漏,求出同一稀释度
的平均菌落数
菌落总数报告:选取平均菌落数在30~300间的皿
①当只有一个稀释度的平皿菌落数符合此范围时,即以 该平皿菌落数乘其稀释倍数。 ②若有两个稀释度,其平均菌落数均在30~300之间, 则应求出两者菌落总数之比值来决定,若其比值≤2, 应报告其平均数,若>2则报告其中较少的菌落数
黄连 黄芩
黄柏 银花
2.4 挖沟法
制备琼脂平板,在平板上挖沟,沟旁边垂直划线接种 试验菌,在沟中加药,根据沟两边的试验菌离沟的抑 菌距离来判定药物的抗菌作用。适用于半流动药物或 中药浸煮液的抗菌试验。 大肠杆菌
沟槽
(黄连)
金黄色葡萄球菌 痢疾杆菌
三 连续稀释法
在一系列试管中,用液体培养基按一定倍数稀释药物;
1、 无菌操作,镊子和L棒使 用前需火焰灭菌后冷却; 镊子需火焰灭菌后再取 另一药纸片。 2 、药纸片需一次贴定,不 能移动。

实验4药物体外抗菌试验PPT课件

实验4药物体外抗菌试验PPT课件
考虑药物浓度的影响
在解读结果时,需要考虑药物浓度对抑菌效果的影响。一般来说,药物浓度越高,抑菌效 果越好。因此,在比较不同药物或不同浓度时,需要确保实验条件的一致性。
结合临床实际
在解读结果时,需要结合临床实际考虑药物的抗菌效果。例如,对于某些临床常见细菌, 如果实验结果显示药物具有较好的抗菌作用,那么该药物可能对治疗该细菌感染具有一定 的应用价值。
头孢菌素类
具有广谱抗菌作用,对革 兰氏阳性菌和阴性菌均有 较强抗菌活性。
碳青霉烯类
具有非常强的抗菌作用, 对大多数细菌均有较好的 抗菌效果。
大环内酯类
红霉素
主要对革兰氏阳性菌有抗菌作用 ,对部分革兰氏阴性菌和支原体 也有效。
阿奇霉素
具有广谱抗菌作用,对革兰氏阳 性菌、革兰氏阴性菌和支原体均 有较好抗菌效果。
避免不良反应
联合用药可能会增加不良反应的风险,因此应谨 慎选择药物组合。
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稀释法
总结词
稀释法是通过连续稀释抗菌药物浓度, 观察细菌生长情况,从而判断细菌对 抗菌药物的敏感程度。
详细描述
稀释法是将抗菌药物稀释成不同浓度, 然后将不同浓度的抗菌药物与细菌混 合培养。通过观察细菌的生长情况, 可以判断细菌对抗菌药物的敏感程度。
E-test法
总结词
E-test法是一种基于纸片扩散法的改良方法,通过在平板上涂布抗菌药物的纤维棒,测量抑菌圈的大小判断细菌 对抗菌药物的敏感程度。
测定药物能够抑制细菌生长的最低浓 度,是衡量药物抗菌效果的重要指标。 MIC值越低,说明药物抗菌效果越好。
细菌生长情况
观察细菌在药物作用下的生长情况, 可以评估药物的抗菌效果。如果细菌 生长受到明显抑制,说明药物具有较 好的抗菌作用。

体外抗菌实验-18

体外抗菌实验-18

第四节
体外抗菌试验的影响因素
1.试验菌 在抗菌试验中所用试验菌一般应该用标 准菌株。 2.培养基 培养基的质量须加控制。 3.抗菌药物 药物的浓度和总量直接影响抗菌试验的 结果,需要精确配制。
第二十一章
药物制剂的微生物学检查
药物制剂的微生物学检查
药物制剂的微生物学检查主要包 括无菌检验,细菌总数测定,霉菌总 数测定,以及病原菌的检验与螨的检 测等。
判断合格与否的标准是:
口服药及外用药中微生物总量须低于规定 限量外,并须在口服药物每克或每毫升中不得 含有大肠埃希菌、沙门菌;外用药物每克或每 毫升中不得含有铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球 菌和破伤风梭菌,此外均不得检出活螨。
细菌总数的测定:
是了解被检药品在单位重量或体积(每克 或每毫升)内所含有的活菌数(实际是需氧菌 的活菌数),以判断供试药物被细菌污染的程 度,是对该药品整个生产过程的卫生学总评 价的一个重要依据。
1、MIC与MBC的概念 2、常用的体外抑菌试验有哪些? 3、体外抗菌试验的影响因素有哪些? 4、口服药及外用药的微生物学检查的 项目有哪些?
第一节 常用的体外抑菌试验
连续稀释法:
可用于测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀 菌浓度(MBC)。可以用液体培养基,也可用固体培 养基。
1.液体培养基连续稀释法 2.固体培养基连续稀释法 分平板法和斜面 法。
琼脂扩散法:
是利用药物可以在琼脂培养基中扩散,在药 物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离,以 抑菌圈直径或抑菌距离的大小来评价药物抗菌作 用强弱。
(二)特殊药品的无菌检查法
如果阳性对照管不长菌,则必须进行特殊处 理后方可按照一般药品的无菌检查法进行。
1.油类药物的无菌检查

7药物的体外抗菌活性 抗生素效价测定

7药物的体外抗菌活性 抗生素效价测定

+ -
+ -
+ +
+ +
+ + +
+ +
+ + + +
MIC≤0.5
MIC>64 操作有误
MIC=8
注意:计算MIC值时,抗生素的量被 稀释了10倍,注意换算!
二、抗生素效价测定(p288)
Biological Assay of Antibiotics
• 抗生素效价分析:一般用芽孢杆菌,采用微生物
实验内容
一、药物的体外抗菌实验(p277)
二、抗生素效价测定(p288)
一、药物的体外抗菌实验(p277)
• 琼脂扩散渗透法(滤纸法,已做)。
• 系列浓度稀释法,测定药物的MIC。
概 念
• MIC: 最低抑菌浓度, 药物能够抑制微生物
生长的最低浓度;mg/ml或ug/ml为单位。
• MBC: 最低杀菌浓度,能杀灭微生物生长
• Calculation method by formulae
W=(SH +UH) – (SL + UL)
V=(UH +UL) – (SH + SL)
θ= D×antilog(IVFra bibliotekW)• Calculation method by figures
Notes:效价以百分数表示
学方法测定,包括稀释法,比浊法和琼脂扩散法
• 琼脂扩散法-管蝶法 (Cylinder plate method):
灵敏度高、能直接显示出抗生素的抗菌活性。
已列入药典。
琼脂扩散法-管蝶法
• 一剂量法、二剂量法(常用)、三剂量法
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