药物的体外抗菌试验
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养基 、 抗菌试验的培养基应按试验菌的需求配制， 抗菌试验的培养基应按试验菌的需求配制，如链球 菌常用含血清的肉汤培养基， 菌常用含血清的肉汤培养基，抗真菌药物试验需用 沙氏培养基。 沙氏培养基。 培养基的酸碱度、电解质、 培养基的酸碱度、电解质、还原性物质等均可影响 试验结果， 试验结果，实验时应尽可能排除各种影响实验结果 因素的掺入。 因素的掺入。 经无菌检查合格。 经无菌检查合格。
挖沟法： 挖沟法： 1、在琼脂平板上挖沟，沟两边垂直划线接种 、在琼脂平板上挖沟， 各种试验菌，沟内加入药液。 各种试验菌，沟内加入药液。 2、培养后，根据沟两边所生长的试验菌离沟 、培养后， 的距离来判断药物对试验菌的抗菌作用强弱。 的距离来判断药物对试验菌的抗菌作用强弱。 适用于在一个平板上试验一种药物对几种不 适用于在一个平板上试验一种药物对几种不 同试验菌的抗菌作用 的抗菌作用。 同试验菌的抗菌作用。
药物的体外抗菌 试验
药物的体外抗菌试验
用途： 用途： 抗菌药物的筛选、 抗菌药物的筛选、药物的抗菌谱测定及 临床药物敏感性试验等方面。 临床药物敏感性试验等方面。
常用的体外抑菌试验
琼脂扩散法 连续稀释法 滤纸片法 挖沟法
琼脂扩散法
原理： 原理： 药物可以在琼脂培养基中自由扩散， 药物可以在琼脂培养基中自由扩散，形成一定浓度的含药 区域。 区域。 由于各种微生物对不同药物或同一药物不同浓度的敏感性 不同，因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距离，根据其大小， 不同，因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距离，根据其大小， 可以了解药物的抗菌作用大小或是微生物对试验药物的敏感性。 可以了解药物的抗菌作用大小或是微生物对试验药物的敏感性。
琼脂扩散法具有方法简便， 琼脂扩散法具有方法简便，技术要求不 易掌握操作的特点。但精确度不高， 高，易掌握操作的特点。但精确度不高，一 般能用于定性或初步判断其作用的强弱 定性或初步判断其作用的强弱。 般能用于定性或初步判断其作用的强弱。 液体稀释法是一种测定药物的抗菌作用 定量方法，较琼脂扩散法精确， 定量方法，较琼脂扩散法精确，因而运用较 普遍 。
液体连续稀释法
1、在一系列的试管中用液体培养基将试验药 在一系列的试管中用液体培养基将试验药 物作连续对倍稀释， 物作连续对倍稀释，使药物的浓度沿试管顺 序成倍递减。 序成倍递减。 2、再于各管中加入等量的实验菌，经 16～ 、再于各管中加入等量的实验菌， ～ 24 h培养后，与阴性及阳性对照管进行对照 培养后， 培养后 观察。 观察。 3、将未长细菌的培养液取出，分别转种琼脂 、将未长细菌的培养液取出， 平皿。如培养后重新长出试验菌， 平皿。如培养后重新长出试验菌，说明该药 仅有抑菌作用。 仅有抑菌作用。如无菌生长则可以认为该药 物有杀菌作用。 物有杀菌作用。
所用的试验菌株应处于对数生长期， 所用的试验菌株应处于对数生长期，因此期 对数生长期 的微生物对外界因素变化最敏感。 的微生物对外界因素变化最敏感。 试验结果的灵敏度在一定程度上与试验菌的 试验结果的灵敏度在一定程度上与试验菌的 接种量成反比关系 故应选用适宜的接种量。 成反比关系， 接种量成反比关系，故应选用适宜的接种量。
凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该 药的最低抑菌浓度 药的最低抑菌浓度 （Minimal inhibitory concentration，MIC）。 ， ）。 以培养后无细菌生长的最高药物稀释度为最 以培养后无细菌生长的最高药物稀释度为最 小杀菌浓度（Minimal bactericidal 小杀菌浓度（ concentration，MBC）。 ， ）。
抗菌试验的影响因素
3、抗菌药物 、 药物的浓度、 及含有的其他成分均可 药物的浓度、pH及含有的其他成分均可 影响试验结果， 影响试验结果，特别是中草药制剂往往含有 色素、杂质和鞣质等， 色素、杂质和鞣质等，这些均可造成错误结 果，应加注意。 应加注意。
抗菌试验的影响因素
4、对照试验： 、对照试验： 为精确判断实验结果， 为精确判断实验结果，试验时应设各种对 照，包括试验菌对照、已知药物对照及溶剂 包括试验菌对照、 和稀释液对照等。 和稀释液对照等。
在测定中草药煎剂时， 在测定中草药煎剂时，由于有些煎剂颜色 较深，肉眼不易分辨是否有效； 较深，肉眼不易分辨是否有效；需再于每管 中取数环移种于适当的培养基上， 中取数环移种于适当的培养基上，经培养后 观察有无细菌生长而决定之。 观察有无细菌生长而决定之。
抗菌试验的影响因素
1、试验菌： 、试验菌： 用专门的供应机构提供的标准菌株 标准菌株。 用专门的供应机构提供的标准菌株。 北京卫生部药品生物制品检定所菌种保藏中 心。 试验菌应合理保藏， 试验菌应合理保藏，用前加以纯化及生物学 特征鉴定。 特征鉴定。
滤纸片法： 滤纸片法： 制成含菌平板后， 制成含菌平板后，将滤纸片蘸取药液置 于平板上，培养后观察结果， 于平板上，培养后观察结果，量取抑菌圈直 径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。 径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。 用于新药的初筛及临床的药敏试验。 用于新药的初筛及临床的药敏试验。 新药的初筛及临床的药敏试验
在实际工作中， 在实际工作中，往往可见到体外实验有 作用的药物， 作用的药物，进入机体后由于各种原因而失 效，有的药物毒性很大也不能用于临床。 有的药物毒性很大也不能用于临床。
挖沟法： 挖沟法： 1、在琼脂平板上挖沟，沟两边垂直划线接种 、在琼脂平板上挖沟， 各种试验菌，沟内加入药液。 各种试验菌，沟内加入药液。 2、培养后，根据沟两边所生长的试验菌离沟 、培养后， 的距离来判断药物对试验菌的抗菌作用强弱。 的距离来判断药物对试验菌的抗菌作用强弱。 适用于在一个平板上试验一种药物对几种不 适用于在一个平板上试验一种药物对几种不 同试验菌的抗菌作用 的抗菌作用。 同试验菌的抗菌作用。
药物的体外抗菌 试验
药物的体外抗菌试验
用途： 用途： 抗菌药物的筛选、 抗菌药物的筛选、药物的抗菌谱测定及 临床药物敏感性试验等方面。 临床药物敏感性试验等方面。
常用的体外抑菌试验
琼脂扩散法 连续稀释法 滤纸片法 挖沟法
琼脂扩散法
原理： 原理： 药物可以在琼脂培养基中自由扩散， 药物可以在琼脂培养基中自由扩散，形成一定浓度的含药 区域。 区域。 由于各种微生物对不同药物或同一药物不同浓度的敏感性 不同，因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距离，根据其大小， 不同，因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距离，根据其大小， 可以了解药物的抗菌作用大小或是微生物对试验药物的敏感性。 可以了解药物的抗菌作用大小或是微生物对试验药物的敏感性。
琼脂扩散法具有方法简便， 琼脂扩散法具有方法简便，技术要求不 易掌握操作的特点。但精确度不高， 高，易掌握操作的特点。但精确度不高，一 般能用于定性或初步判断其作用的强弱 定性或初步判断其作用的强弱。 般能用于定性或初步判断其作用的强弱。 液体稀释法是一种测定药物的抗菌作用 定量方法，较琼脂扩散法精确， 定量方法，较琼脂扩散法精确，因而运用较 普遍 。
液体连续稀释法
1、在一系列的试管中用液体培养基将试验药 在一系列的试管中用液体培养基将试验药 物作连续对倍稀释， 物作连续对倍稀释，使药物的浓度沿试管顺 序成倍递减。 序成倍递减。 2、再于各管中加入等量的实验菌，经 16～ 、再于各管中加入等量的实验菌， ～ 24 h培养后，与阴性及阳性对照管进行对照 培养后， 培养后 观察。 观察。 3、将未长细菌的培养液取出，分别转种琼脂 、将未长细菌的培养液取出， 平皿。如培养后重新长出试验菌， 平皿。如培养后重新长出试验菌，说明该药 仅有抑菌作用。 仅有抑菌作用。如无菌生长则可以认为该药 物有杀菌作用。 物有杀菌作用。
所用的试验菌株应处于对数生长期， 所用的试验菌株应处于对数生长期，因此期 对数生长期 的微生物对外界因素变化最敏感。 的微生物对外界因素变化最敏感。 试验结果的灵敏度在一定程度上与试验菌的 试验结果的灵敏度在一定程度上与试验菌的 接种量成反比关系 故应选用适宜的接种量。 成反比关系， 接种量成反比关系，故应选用适宜的接种量。
凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该 药的最低抑菌浓度 药的最低抑菌浓度 （Minimal inhibitory concentration，MIC）。 ， ）。 以培养后无细菌生长的最高药物稀释度为最 以培养后无细菌生长的最高药物稀释度为最 小杀菌浓度（Minimal bactericidal 小杀菌浓度（ concentration，MBC）。 ， ）。
抗菌试验的影响因素
3、抗菌药物 、 药物的浓度、 及含有的其他成分均可 药物的浓度、pH及含有的其他成分均可 影响试验结果， 影响试验结果，特别是中草药制剂往往含有 色素、杂质和鞣质等， 色素、杂质和鞣质等，这些均可造成错误结 果，应加注意。 应加注意。
抗菌试验的影响因素
4、对照试验： 、对照试验： 为精确判断实验结果， 为精确判断实验结果，试验时应设各种对 照，包括试验菌对照、已知药物对照及溶剂 包括试验菌对照、 和稀释液对照等。 和稀释液对照等。
在测定中草药煎剂时， 在测定中草药煎剂时，由于有些煎剂颜色 较深，肉眼不易分辨是否有效； 较深，肉眼不易分辨是否有效；需再于每管 中取数环移种于适当的培养基上， 中取数环移种于适当的培养基上，经培养后 观察有无细菌生长而决定之。 观察有无细菌生长而决定之。
抗菌试验的影响因素
1、试验菌： 、试验菌： 用专门的供应机构提供的标准菌株 标准菌株。 用专门的供应机构提供的标准菌株。 北京卫生部药品生物制品检定所菌种保藏中 心。 试验菌应合理保藏， 试验菌应合理保藏，用前加以纯化及生物学 特征鉴定。 特征鉴定。
滤纸片法： 滤纸片法： 制成含菌平板后， 制成含菌平板后，将滤纸片蘸取药液置 于平板上，培养后观察结果， 于平板上，培养后观察结果，量取抑菌圈直 径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。 径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。 用于新药的初筛及临床的药敏试验。 用于新药的初筛及临床的药敏试验。 新药的初筛及临床的药敏试验
在实际工作中， 在实际工作中，往往可见到体外实验有 作用的药物， 作用的药物，进入机体后由于各种原因而失 效，有的药物毒性很大也不能用于临床。 有的药物毒性很大也不能用于临床。