实验八四体、放线菌、真菌
微生物实验报告：微生物形态观察
实验一微生物形态观察一、实验目的1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用；2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构；3．练习手绘微生物图片。
二、实验原理1．细菌基本形态细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。
细菌的基本形态有3种：球状，杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。
球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。
杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等，是细菌中种类最多的。
螺旋菌分为弧菌和螺菌。
除此之外，还有一些特殊形态的细菌。
2．细菌特殊结构细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。
鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生位置、数目因菌种而异。
菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬，且数量较多的丝状体，与细菌吸附或性结合有关。
芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。
3．真菌的结构特征菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。
可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。
根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。
为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。
比如吸器、假根、子实体。
4．放线菌的结构特征放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。
链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状态。
当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。
细菌、放线菌、真菌的异同点（环境微生物）
细菌:广义的细菌即为原核生物是指一大类细胞核无核膜包裹，只存在称作拟核
区（或拟核）的裸露DNA的原始单细胞生物.人们通常所说的即为狭义的细菌，狭义的细菌为原核微生物的一类，是一类形状细短，结构简单，多以二分裂方式进行繁殖的原核生物，是在自然界分布最广、个体数量最多的有机体，是大自然物质循环的主要参与者。
放线菌：因菌落呈放线状而的得名。
它是一个原核生物类群，在自然界中分布
很广，主要以孢子繁殖，其次是断裂生殖。
其细胞结构与细菌十分相近。
细胞核属于原核，没有核膜和核仁的分化，细胞微小，直径在0.5~1.5um，细胞壁化学成分亦与细菌相仿，只有无性生殖等。
真菌：是一种真核生物，具有细胞核和细胞壁的异养生物。
最主要的真核微生
物类群，与藻类相比，无叶绿素，无光合作用系统，化能有机营养型。
最常见的真菌是各类蕈类，另外真菌也包括霉菌和酵母。
异同点：细菌仅有原始核结构，无核膜和核仁，细胞器很少，属于原核细胞型
微生物；细菌的基本结构有细胞壁、细胞膜、细胞质和DNA集中的区域，没有成形的细胞核．没有叶绿体，因此营养方式是异养，必须依靠现成的有机物维持生活．（只有少数硫化菌以分解硫化物获得能量自养）分裂生殖。
放线菌的菌丝由于形态与功能的不同，分为基丙菌丝、气生菌丝和孢子丝三部分．细胞中具核质而无真正的细胞核，无叶绿体，孢子生殖。
微生物中只有真菌具有真正的细胞核和完整的细胞器，故又称真核细胞型微生物，真菌的基本结构有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核，没有叶绿体，营养方式异养有的寄生、多数腐生，靠孢子繁殖后代．。
微生物实验放线菌的形态观察
实验一：丝状微生物的鉴定实验目的：1、观察常见放线菌的基本形态特征。
2、观察镰刀菌与木霉的基本形态。
3、掌握埋片培养法培养放线菌。
4、掌握载片培养法培养丝状真菌。
5、学会用显微镜观察未染色样品。
实验原理：放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。
放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。
孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。
孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。
它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。
真菌的菌丝较放线菌粗，菌落疏松，主要用肉眼观察，必要时借助放大镜或显微镜。
利用显微镜主要观察孢子的着生状态，孢子形状及菌丝有无横隔等。
3材料3.1菌种链霉菌（Streptomyces sp.）；诺卡氏菌（Nocardia sp.）；尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)；绿色木霉（Trichoderma viride）3.2培养基高氏1号培养基，PDA培养基。
3.3器皿培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。
4流程4.1埋片培养法: 倒琼脂→切槽→接种→埋片→培养→镜检→记录绘图。
4.2载片培养法：滴琼脂→凝固→边缘接种→盖盖玻片→培养→镜检→记录绘图。
5步骤埋片培养法：1 向每个培养皿倒约20毫升高氏一号琼脂培养基，待凝固。
2 用无菌手术刀在琼脂平板上平行开两条槽，取出其中的琼脂培养基。
3 在槽的外侧边缘接种待鉴定的放线菌菌株。
4 将无菌载玻片呈与槽垂直的方向盖在平板上面，用镊子轻轻压下，使载玻片与琼脂平板接触。
5 放于28℃培养3天。
6 将载玻片从平板上取下，直接在显微镜下观察。
载片培养法：1 将无菌载玻片放于洁净工作台。
细菌、酵母菌、放线菌、霉菌四大菌落形态观察
一、实验目的
1.熟悉各大类微生物群体类微生物
二、基本原理
区分和鉴别各大类微生物通常不外乎包括群体形 态和个体形态两方面的观察，而在一般条件下，特别 是在菌种筛选和菌种辨别等方面，多半首先采用观察 群体形态基本特征的方法来区分各大类微生物。这种 方法简便快速，应用非常广泛。
四、实验结果
微生物 菌落 特性
大肠 杆菌
干湿
啤酒 酵母
放线菌
曲霉
根霉
青霉
厚薄
松紧
大小 结果
微生物
菌落 特征
细菌
酵母
霉菌
放线菌
干湿 厚薄 松紧 大小
很湿或较湿 较湿
干燥
干燥或较干燥
透明或 稍透明
稍透明
不透明
不透明
松
松
小而突起或 大而平坦
大而突起
很紧 小而紧密
较紧
大而疏松或 大而致密
青霉（Penicillium Sp.）
菌丝较粗壮，形成的 菌落较疏松，呈绒毛 状、絮状或蜘蛛状， 菌落大。
曲霉（Aspergillus Sp.）
曲霉菌是一种典型的丝状 菌，菌落生长较快，结构 疏松，表面灰绿色，背面 无色或略呈褐色。菌体有 许多复杂的分枝菌丝构成。
根霉（Phizopus Sp.）
大肠杆菌（Escherichia coli）
啤酒酵母 （Saccharomyces cereuisiae）
大多数酵母菌的 菌落特征与细菌 相似，但比细菌 菌落大而厚，菌 落表面光滑、湿 润、粘稠，容易 挑起，菌落质地 均匀，正反面和 边缘、中央部位 的颜色均一，菌 落多为乳白色。
放线菌5406 （Streptomyces microflavus）
实验四 细菌、真菌、放线菌的分离与培养
实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。
二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。
在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。
为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。
通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。
挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。
1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。
2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。
用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
用途一般多用于筛选菌株。
放线菌
放线菌（Actinomycete）是原核生物的一个类群。大多数有发达的分枝菌丝。菌丝纤细， 宽度近于杆状细菌，约0.5～1微米。可分为：营养菌丝，又称基质菌丝，主要功能是吸 收营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据；气生菌丝，叠生于营养 菌丝上，又称二级菌丝。 放线菌是一群革兰氏阳性、高( G + C) mol% 含量( >55% ) 的细菌。放线菌因菌落呈放线 状而的得名。它是一个原核生物类群，在自然界中分布很广，主要以孢子繁殖，其次 是断裂生殖。 放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌 所产生。一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂（蛋白酶、淀粉酶、和纤维素酶等）、 维生素（B12）和有机酸等。弗兰克菌属（Frankia）为非豆科木本植物根瘤中有固氮能 力的内共生菌。此外，放线菌还可用于甾体转化、烃类发酵、石油脱蜡和污水处理等方 面。少数放线菌也会对人类构成危害，引起人和动植物病害。因此，放线菌与人类关系 密切，在医药工业上有重要意义。 放线菌在自然界分布广泛，主要以孢子或菌丝状态存在于土壤、空气和水中，尤其是含 水量低、有机物丰富、呈中性或微碱性的土壤中数量最多。放线菌只是形态上的分类， 不是生物学分类的一个名词。有些细菌和真菌都可以划归到放线菌。土壤特有的泥腥味， 主要是放线菌的代谢产物所致。
实验八、土壤微生物的分离和 纯化
实验八、土壤微生物的分离和纯化土壤微生物是指生长在土壤中的微弱的、微小的生物体，包括细菌、真菌、放线菌、原生动物等。
土壤微生物是土壤的重要组成部分，对维持土壤生态系统的平衡和功能发挥起着关键作用。
因此，对土壤微生物的分离和纯化具有重要意义。
本实验就是针对土壤微生物的分离和纯化进行研究。
一、实验原理由于土壤微生物数量繁多而多样，分离出单一的菌落对于此实验来说非常的困难。
但是采用适宜的富培养基后能够轻松的促进土壤微生物菌群的生长。
富培养基包括有机和无机元素、维生素、氨基酸、碳源和氮源。
地衣素琼脂（ISP）是一种富含多种碳源和氮源的优质菌落培养基，是常用的微生物培养基。
本实验的基本原理就是在能够生长的环境中分离出单一的菌落，通过多次分离和鉴定获得纯种菌株。
二、实验器材和试剂1.地衣素琼脂培养基2.试管、移液器、移菌环、烧灼器、电热蚊子香、灭菌器3.已经壳霉菌疫苗接种的贵州悬钩子种子和土壤三、实验步骤1.准备工作。
用移液器将壳霉菌疫苗接种在新的地衣素琼脂培养基板上，将其灭菌，以备之后的使用。
2.准备土壤基质。
将土壤样品剪碎成非常小的颗粒，并放入烧灼的试管中，加入恰当的地衣素酵母素琼脂，变形后形成一个接种板。
在较大的容器中放置电热器设备，以保持环境的湿度和温度适宜。
接下来，将接种板和采样站放在单独的区域以免混淆。
3.接种。
从土壤中取一小部分，倒入试管中，并加入适量的地衣素琼脂培养基，并将其摇动均匀，使菌群溢出。
等到土壤均匀地分散在地衣素琼脂培养基中之后，用移菌环扭曲并切出一个菌落，并将其置于新的地衣素琼脂培养基板中。
重复此步骤至少三次，每次都要将新的分离土壤菌落剪出来。
4.孵育。
将地衣素琼脂培养基板置于电热器设备中，以使温度保持在合适的范围内，并等待菌落的生长。
当新的菌落形成后，即可重复上述步骤以获得更多的菌株。
5.纯化。
检查菌落后，需要进行纯化。
鉴定每个菌落，把每个菌落分别悬浮在新的地衣素琼脂培养基板中，并等待菌落的生长。
细菌、酵母菌、霉菌和放线菌接种方法和形态观察
注意：由于实验内容较多，所以我们只要把蓝色字体部分写在实验报告上即可，黑体字部分自己看一下。
由于11-13周为教学质量检查周，督导随时可能来查，所以预习报告还是要写。
细菌、酵母菌、放线菌和真菌接种方法和形态观察一、微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 基本原理将微生物培养物或含有微生物的样品在无菌条件下移植到培养基上的操作技术称为接种。
接种的关键是严格进行无菌操作。
常用的接种方法有斜面接种、液体接种、穿刺接种、平板接种和固体接种等。
3 实验材料3.1 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、玫瑰暗黄链球菌、曲霉、荨麻青霉的斜面培养物3.2 培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基及高氏1号培养基的斜面和平板3.3 试剂：5ml无菌生理盐水试管3.4 仪器与其他用品酒精灯、记号笔、试管、橡胶塞、试管架、接种环、培养皿、超净台等。
4 操作步骤4.1 斜面接种法斜面接种法主要用于传代活化、纯化培养、鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，液体培养基中的纯培养物接种到斜面培养基上。
操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行。
4.1.1准备工作将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在外侧，接种管在内侧，斜面向上管口对齐，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。
4.1.2接种环灭菌右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。
镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍。
4.1.3拔管塞和烧烤试管口用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。
4.1.4接种环冷却和取菌将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出。
实验三 微生物菌落,放线菌、酵母菌、霉菌形态观察
它们是怎样形成的？ 7．细菌、放线菌、酵母菌、霉菌在制片方法上有何特点？ 8．总结在显微镜下看到青霉、黄曲霉和黑根霉在以下各方 面的异同： (1) 菌丝有隔或无隔 (2) 无性繁殖的方式 (3) 有性繁殖的方式
内容： 1．观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的菌落
形态。 2．观察放线菌的形态结构特征 3．观察酵母菌个体形态。 4．曲霉、青霉、根霉形态观察。
二、材料和用具
1．菌种：金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、 酿酒酵母、灰色链霉菌、黑曲霉、 产黄青霉、根霉。
2．染液：乳酸石炭酸棉兰，吕氏美兰染液， 碘液，0.04%的中性红染色液，0.1%美蓝 染色液，石炭酸复红染色液。
3．其他：显微镜、载玻片、盖玻片、酒精灯、 镊子、接种环。
三、操作步骤及注意事项
(一) 观察菌落 1．注意细菌菌落的形状、高度、大小、颜色、
是否湿润、光泽、透明度、边缘状况。
2．观察酵母菌菌落表面湿润或干燥，有无光 泽、隆起形状、边缘的整齐度、大小、颜 色等。
3．观察放线菌菌落表面形状、大小、颜色、 边缘，以及有无色素分泌到培养基内等。
4．观察青毒、曲霉、根霉平板中的菌落，描 述其菌落特征。注意菌落形态的大小，菌丝 的高矮，生长密度，孢子颜色和菌落表面等 状况。并与细菌、放线菌、酵母菌菌落进行 比较。
菌落特征
形态：点状、圆形、丝状、不规则、 假根状、纺锤形
隆起：扁平、拱起、凸透镜状、枕状、 脐突状
边缘：完整、波纹、裂中状、噬蚀状、 丝状、卷曲
(二) 放线菌形态特征的观察 用镊子取放线菌时要注意力度，太轻不宜取 下，太重则会损环菌丝形态。
(三) 酵母菌的形态观察 注意通过微加热增加酵母的死亡率，易于观 察死亡细胞。
实验五放线菌、霉菌及真菌的形态观察
放线菌在显微镜下一般气丝在上，基丝在 下，气丝色暗，基丝较透明。有的放线菌 只产生基丝而无气丝。 本实验采用插片法来观察放线菌的菌丝形 态。
2．酵母菌：酵母的菌落形态与细菌的相仿， 由于酵菌细胞比细菌的大，细胞内有许多分化 的细胞品，细胞间隙含水量较少，不能运动， 帮菌落较大、较厚，外观较稠和、不透明，菌 落颜色多为乳白色或矿烛色。
实验五
放线菌、霉菌及酵母菌的 形态观察
一．实验目的
学习并掌握观察放线菌、霉菌及酵母菌 形态的基本方法；
初步了解放线菌、霉菌及酵母菌的形态 特征。
二．实验原理
1．放线菌：是一类主要呈菌丝状生长和孢子繁 殖的陆生性较强的革兰氏阳性细菌，广泛分布 于含水量低、有机质丰富的微碱性土壤中。
放线菌的菌落形态特征为：形成干燥、不透 明、表面呈致密丝绒状，上有一层彩色“干粉” 的菌落。菌落与培养基连接紧密，难以挑取， 菌落正反面颜色不一致，在菌落边缘的琼脂平 板上有变形的现象，有泥腥味。
1. 放线菌形态观察： A. 用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同培 养基切下一小块，菌面朝上放在一载玻片上。 B. 另取一洁净载玻片置火焰上微热后，盖在 菌苔上，轻轻按压，使培养物（气丝、孢丝或 孢子）粘附在后一块载玻片中央，有印迹的一 面朝上，通过火焰2～3次固定。 C. 用番红染液覆盖印迹，染色约1min后水洗 D. 干后用油镜观察
3. 霉菌的形态观察： A. 先观察霉菌的菌落形态; B. 然后在载玻片上滴加一滴0.1％的美蓝染液； C. 用解剖针或镊子从霉菌菌落底部小心挑取少 量已经产孢子的霉菌菌丝； D. 放在载玻片上的染液中 E. 盖上盖玻片，置于低倍镜下观察，必要时换 高倍镜。
放线菌及霉菌形态观察
霉菌形态比细菌、放线菌复杂，个体比较大(直径310µm)，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。观察时 要注意菌丝粗细，菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根 ，无性繁殖或有性繁殖时形成的孢子是哪一种，孢子是 怎样着生的。
根霉
黑根霉（匍枝根霉） Rhizopus nigricans
• 菌落：初期白色，老熟 后灰褐色
四、方法及步骤
1、放线菌观察：
印片法：用接种铲切取5406放线菌一块（带有 培养基）→在载玻片上轻压一下，弃去培养基，制 成印片→固定（火焰）→蕃红染色→水洗→吸干→ 镜检。
扦片法：
2、霉菌：由于霉菌的菌丝较粗大，而且孢子容易飞 散，如将菌体置于水中容易变形，故观察时不用水浸法 制片，而将菌体置于乳酸石炭酸棉兰染液中，使细胞不 易干燥。
孢子囊
• 显微形态：匍匐枝无色，
假根发达呈褐色。孢子
囊簇生，可形成球状接
合孢子。
假根
匍匐枝接合孢子来自霉 黑曲霉 Aspergillus niger
菌丝体：有横隔，常无色，老熟 时变为浅黄色至褐色，有足细胞 无性生殖体： 1、分生孢子梗 2、顶囊 3、小梗 4、分生孢子
分生孢子
小梗 顶囊 分生孢子梗
在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉兰染液 →用镊子挑取少许霉菌菌丝，置于染色液中 →挑散菌丝 →盖上盖玻片，吸去多余染液 →镜检
五、观察与绘图
• 放线菌：观察气生菌丝形态及有无分隔， 孢子丝及分生孢子排列方式
• 黑根霉：假根、匍匐菌丝、孢囊梗及孢 子囊
• 青霉、曲霉：观察菌丝形态及有无分隔， 有无足细胞，分生孢子梗有无顶囊、小 梗及孢子排列方式
有些气生菌丝分化成
各种孢子丝，呈螺旋 状、波浪形或分枝状 等，着生形式有丛生、 互生和轮生三种。孢 子的表面光滑或粗糙， 圆或椭圆和杆状。孢 子有各种颜色。这些 形态特点都是鉴别放 线菌的重要依据。
微生物实验-放线菌、霉菌、酵母菌的形态观察
毛霉与根霉的比较
①两者皆有假根，但根霉属有匍匐枝，毛霉属无。 ②根霉属有囊托，毛霉属无。③两者皆具囊轴④ 毛霉属孢子囊梗单株从菌丝上发生，分枝或不分 枝，根霉无分支。
二、实验原理
酵母
酵母菌是单细胞真核微生物。
酵母菌细胞的形态通常有球形、
卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬
形或藕节形等。比细菌的单细胞 个体要大得多，一般为1~5微米 ′5~30微米。酵母菌无鞭毛，不 能游动。
毛霉
毛霉又叫黑霉、长毛霉。
菌丝无隔、多核、分枝状，在基物内外能 广泛蔓延，有假根，无匍匐菌丝。
毛霉
毛霉显微结构
根霉
根霉(Rhizopus)属于毛霉目 根霉在自然界分布很广，用途广泛，其淀粉酶活性很强，
是酿造工业中常用糖化菌。我国最早利用根霉糖化淀粉 （即阿明诺法）生产酒精。
根霉显微形态
实验四 放线菌、霉菌、 酵母菌的形态观察
实验四 放线菌、霉菌、酵母菌的形态观察
一、实验目的
1、学习掌握观察放线菌、霉菌标本片形态特征。
2、学习掌握观察酵母菌标本片形态特征。
二、实验原理---放线菌
放线菌 因菌落呈放线状而的得名
二、实验原理
放线菌
放线菌的形态比细菌复杂些， 但仍属于单细胞。在显微镜 下，放线菌呈分枝丝状
七、下一个实验
实验五 微生物数量的测定
酵母菌具有典型的真核细胞
结构,有细胞壁、细胞膜、细胞核、
细胞质、液泡、线粒体等，有的
还具有微体。
啤酒酵母的菌落
红酵母的菌落
各种酵母菌的菌落
酵母菌和霉菌的培养对比
电镜下的酵母
三、实验器材
1、菌种：根霉、青霉、曲霉、放线菌、酵 母等标本片
实验四 细菌、真菌、放线菌的分离与培养
实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。
二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。
在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。
为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。
通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。
挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。
1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。
2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。
用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
用途一般多用于筛选菌株。
微生物形态观察实验报告
一、实验目的1. 掌握显微镜的使用方法，学会油镜的使用技巧。
2. 了解并掌握微生物的基本形态特征，包括细菌、放线菌、酵母菌和霉菌。
3. 培养无菌操作技能，提高实验操作的规范性和准确性。
二、实验原理微生物是构成生命的基本单位，其形态和结构是微生物学研究的重要内容。
通过显微镜观察微生物的形态，可以了解其生物学特性，为微生物的分类、鉴定和实验研究提供依据。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的纯培养物。
2. 仪器：光学显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、无菌水、无菌棉签、培养皿、试管等。
四、实验步骤1. 涂片（1）将接种环在酒精灯上灼烧，待其冷却后，蘸取适量纯培养物。
（2）将接种环在载玻片上轻轻涂成薄层。
（3）在涂片上滴加适量无菌水，用无菌棉签轻轻涂抹，使菌体均匀分布。
2. 干燥将涂片放在室温下自然干燥。
3. 染色（1）将干燥后的涂片放入乳酸石炭酸棉蓝染色液中，染色5-10分钟。
（2）用蒸馏水冲洗涂片，去除多余的染色液。
4. 观察（1）将涂片放在显微镜载物台上，先用低倍镜观察，找到菌体后，用高倍镜观察。
（2）观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的形态、大小、颜色等特征。
5. 记录将观察到的微生物形态特征记录在实验报告中。
五、实验结果与分析1. 细菌细菌是单细胞生物，基本形态有球形、杆形和螺旋形。
在显微镜下，观察到细菌的形态和大小，为杆状，大小约为0.5-1.0μm。
2. 放线菌放线菌是丝状真菌，由菌丝构成。
在显微镜下，观察到放线菌的菌丝呈细长状，直径约为2-5μm，菌丝间有横隔。
3. 酵母菌酵母菌是单细胞真菌，个体形态多为卵圆形、圆柱形。
在显微镜下，观察到酵母菌的个体大小约为5-10μm，细胞壁较薄，细胞质透明。
4. 霉菌霉菌是丝状真菌，由菌丝构成。
在显微镜下，观察到霉菌的菌丝呈粗细不一的丝状，直径约为5-20μm，菌丝间有横隔。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了显微镜的使用方法，观察了细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的形态特征，了解了微生物的基本生物学特性。
实验五 放线菌与真菌形态结构观察
实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：放线菌与真菌形态结构观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年10月16日一、实验目的和要求1.学习并掌握放线菌(链霉菌)，真菌(酵母、霉菌)形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。
2.熟练掌握显微镜的使用。
二、实验内容和原理1.放线菌放线菌，是一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的陆生性较强大的原核生物。
因在固体培养基上呈辐射状生长而得名。
大多数有发达的分枝菌丝。
菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.5～1微米。
可分为：营养菌丝，又称基内菌丝，主要功能是吸收营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据；气生菌丝，叠生于营养菌丝上，又称二级菌丝。
2.真菌[1]酵母菌：为单细胞真核生物。
呈圆形、卵形、椭圆形或柠檬型。
各体直径比细菌大几倍到几十倍。
菌落大而厚，湿润光华，颜色多为乳白色、灰白色、似细菌落。
繁殖方式包含无性繁殖(芽殖或裂殖)与有性繁殖(形成子囊与子囊孢子)。
[2]酵母菌的出芽生殖：在细胞的一端初生小突起，如芽状，逐渐增大。
细胞核一分为二，其中一个进入小突起，经细胞壁缢缩。
芽体与母细胞脱离，形成新个体。
若芽体不脱离母体而有继续生出新芽，而芽细胞聚集形成芽簇，芽簇细胞伸长呈丝状或藕节状，称做假菌丝。
[3]美兰染色法：美兰是一种无毒性染料，氧化型呈蓝色，还原型呈无色。
活细胞具有较强还原能力，使美兰由蓝色变成无色。
染色后，酵母活细胞无色，死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞呈蓝色或淡蓝色。
[4]酵母菌肝糖粒碘液染色：肝糖粒是酵母细胞的内含物，属于碳源及能源性贮藏物。
用碘液染色，菌体呈淡黄色，肝糖粒呈红褐色。
[5]霉菌：由菌丝体构成，分为基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝长到一定阶段分化产生繁殖菌丝。
由繁殖菌丝产生孢子。
菌丝和孢子的宽度比细菌和放线菌大几倍到几十倍。
制片时滴加乳酚油，防止干燥，可保持菌丝体原形。
实验五 放线菌
实验五放线菌、酵母菌和霉菌形态观察
一、实验目的
1．观察放线菌、酵母菌和霉菌的形态特征。
2. 巩固显微镜的使用
二、实验原理
放线菌是丝状的原核生物，主要以产生无性孢子进行繁殖。
酵母菌是单细胞的真菌，主要以出芽生殖方式繁殖。
霉菌是丝状真菌，主要以产生无性孢子和有性孢子进行繁殖。
三、实验材料和用具
青霉、根霉、酿酒酵母和放线菌。
显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环和0.1%美蓝染色液等。
四、操作步骤
（一）放线菌的形态观察
用镊子小心取出用玻璃纸法培养的放线菌培养皿中的玻璃纸，用无菌剪刀取小片置于载玻片上，用低倍镜、高倍镜观察，并绘图。
注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和色泽差异。
（二）霉菌的形态观察
根霉假根观察：将已做好的根霉标本置显微镜下观察。
只要用低倍镜就能观察到假根及从根节上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子和两个假根间的匍匐菌丝，观察时注意调节焦距以看清各种构造。
（三）酵母菌的形态观察
酵母菌的活体染色观察及死亡率的测定
1．以无菌水洗下PDA斜面培养的酿酒酵母菌苔，制成菌悬液。
2. 取0.05%美蓝染色液1滴，置载玻片中央，并用接种环取酵母菌悬液与染色液混匀，染色2～3min，加盖玻片，在高倍镜下观察酵母菌个体形态，区分其母细胞与芽体，区分死细胞(蓝色)与活细胞(不着色)。
3. 在一个视野里计数死细胞和活细胞，共计数5～6个视野。
酵母菌死亡率一般用百分数来表示，以下式来计算：
死亡率=死细胞总数／死活细胞总数×100%
五、实验报告
1. 计算酵母菌的死亡率
2．根霉和青霉形态图，示各部。
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实验八 四体、放线菌、真菌（小培养） 一、绘图：青霉、曲霉
【青霉绘图】
1.形态特征：菌丝体由多数具有横
隔的菌丝所组成，通常以产生分生
孢子进行繁殖，产生孢子时，菌丝
体顶端产生多细胞的分生孢子梗，
梗的顶端分枝2—3次，每枝的末端
细胞分裂成串的分生孢子，形成扫
帚状。
2.繁殖：分生孢子
3.应用：抗生素
【曲霉绘图】
1.形态特征：菌丝有膈，具足细胞、分生
孢子梗及膨大顶囊
2.繁殖：分生孢子
3.应用：酿造酒、酱，有机酸及多种酶
制剂的生产
二、真菌小培养方法
【原理】
采用真菌培养板或载玻片进行小室培养，主要用来观察丝状真菌的孢子，孢子丝及其子实体的结构（如分生孢子头），常用于真菌的鉴定。
【具体步骤】
1.滴加培养基：将已灭菌的沙保培养基斜面用酒精灯溶化后，冷却至50度左右（比较烫手而还可以把持），用吸管在无菌玻片（放到灭菌平板内）上滴加2-3滴培养基。
2.加盖盖玻片：取无菌盖玻片在火焰上加热后迅速放到琼脂块上，轻压一下盖玻片使其铺平。
3.接种真菌：用接种针沾取少量青霉或曲霉的孢子，从琼脂块边缘刺入琼脂块中。
4.观察结果：加浸水的无菌的滤纸放到平板中，盖上皿盖，25-28度培养3天后，将载玻片放到显微镜下，用低倍镜（10倍）和高倍镜（40倍）观察青霉和曲霉的分生孢子头结构。
（具体图片见前文）
三、镀银染色方法和绘图
1.材料
(1)标本：牙扼。
(2)试剂：键银染色液,生理盐水。
(3)器材:灭菌牙签，载玻片。
2.方法
(1)涂片：在载玻片中央加1滴生理盐水，用牙签挑取少量牙垢与盐水混匀涂片。
(2)固定：不要火焰固定，待涂片自然干燥后，加数滴固定液覆盖涂片1-2分钟，水洗。
(3)媒染:滴加数滴媒染液覆盖涂膜，火焰上微微加热至微冒蒸汽(切勿烧干)，30秒后水洗。
(4)染色：加硝酸银染液，微微加热(切勿烧干)，约30秒后水洗，印干后油镜观察。
3.结果 奋森螺旋体是口腔正常微生物群中的成员之一，牙坂经镀银染色后，在油镜下可见染成棕揭色的奋森螺旋体，体态较细而柔软，有数个不规则弯曲。
【绘图】 1.革兰染色阴性
2.染成红色
四、印片法
(1)材料：链霉菌高氏一号琼脂平板培养物，亚甲蓝染液，盖玻片，载玻片，小摄子。
(2)方法：用小摄子夹一片洁净盖玻片过火焰使之微热，然后放在平板链霉菌菌落表面，轻轻按压，盖玻片上即可印上放线菌的抱子和抱子丝。
取一块洁净载玻片，在中央滴加1滴亚甲蓝染液，将盖玻片印有抱子的一面朝下，平置于亚甲蓝染液上，盖玻片上的孢子及孢子丝即可染成蓝色。
【绘图】
链霉菌显微镜下绘图。