细菌真菌放线菌培养基配方
实验四 细菌、真菌、放线菌的分离与培养
实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。
二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。
在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。
为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。
通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。
挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。
1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。
2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。
用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
用途一般多用于筛选菌株。
常用微生物培养基
常用微生物培养基分离真菌：注：抗生素所有培养基灭菌放置不烫手背时（温度约为40°C左右），同时加入氯霉素和链霉至终浓度为0.5 mg/mL（提前配置好，用0.22 µm微孔滤膜过滤，-20℃存储），混匀后倒平板，用于抑制细菌生长。
1.GPY培养基：葡萄糖20 g，蛋白胨10 g，酵母提取物10 g，海盐15 g，琼脂20 g，蒸馏水1 L，pH 7.5，115℃，30 min灭菌2.PDA培养基：Potato Dextrose Agar干粉39 g/L，海盐15 g，蒸馏水1 L，pH 6.5-7.0，121℃，15 min灭菌3.马丁培养基：葡萄糖10 g，蛋白胨5 g，磷酸二氢钾1 g，七水合硫酸镁0.5 g，孟加拉红0.03 g，海盐15 g，琼脂20 g，蒸馏水1 L，115℃、30 min灭菌4.MEA培养基：麦芽浸粉17g，蛋白胨3g，海盐15g，蒸馏水1L，121℃，20 min 灭菌5.YPD培养基：酵母提取物10 g/L，蛋白胨20 g/L，葡萄糖20 g/L，琼脂20 g/L，115℃，30 min灭菌6.沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA，每升培养基）：蛋白胨（peptone）10.0 g，葡萄糖（glucose）40.0 g，琼脂（agar）15.0 g，pH 4.0 - 6.0；7.酵母汁麦芽提取物琼脂培养基（YM，每升培养基）：麦芽浸粉（malt extract）3.0 g，酪蛋白胨（casein peptone）5.0 g，酵母提取物（yeast extract）3.0 g，葡萄糖（glucose）10.0 g，琼脂（agar）15 g，pH 6.0 - 6.5；8.察氏培养基（CDA，每升培养基）：硝酸钠（NaNO3）3. 0 g，氯化钾（KCl）0.5 g，蔗糖（sucrose）30. 0 g，七水合硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.5 g，七水合硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）0. 01 g，磷酸氢二钾（K2HPO4）1.0 g，琼脂（agar）15.0 g，pH 6.0 - 6.5；分离放线菌：注：抗生素所有培养基灭菌放置不烫手背时（温度约为40℃左右），同时加入制霉菌素（终浓度为100.0 μg/ml）和萘啶酮酸（终浓度为25.0 μg/ml）（提前配置好，用0.22µm 微孔滤膜过滤，于-20℃冻存），混匀后倒平板，分别用于抑制真菌和细菌生长。
真菌常用培养基配方
[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂，沙堡弱培养基，SDA]（一）组成葡萄糖 40.0g蛋白胨 10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水 1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。
（三）目的是常用的分离或保存菌种的培养基。
[沙氏液基，SDB]（一）组成葡萄糖 40.0g蛋白胨 10.0g蒸馏水 1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。
[加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，SDA with antibiotic]（一）组成葡萄糖 40.0g蛋白胨 10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水 1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素。
250mg放线菌酮，121摄氏度10分钟灭菌后备用。
[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，modified SDA]（一）组成葡萄糖 20.0g蛋白胨 10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水 1000ml（二）制法上述混合后121摄氏度10分钟灭菌后备用。
（三）目的保存菌种培养基。
[马铃薯葡萄糖琼脂，PDA]（一）组成马铃薯 200.0g葡萄糖 20.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水 1000ml（二）制法先将马铃薯洗净去皮切片，加水180ml，煮沸30分钟后过滤，再加葡萄糖、琼脂，将过滤液补足到1000ml，121摄氏度灭菌后备用。
（三）用途此培养基是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。
鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。
[玉米吐温80琼脂，CMA with Tw80]（一）组成玉米粉 40.0g琼脂15.0g蒸馏水 1000ml吐温80 10ml（二）制法先将玉米粉混于水中，65摄氏度水浴一小时，过滤，再补足水量，然后加入琼脂和吐温80，121摄氏度10分钟灭菌后备用。
（三）用途用于观察白念珠菌厚壁孢子及假菌丝；红色毛癣菌在此培养基产色素较好。
[米饭培养基rice grain medium](一) 组成大米 300.0g蒸馏水 1000ml（二）制法将3g大米放入试管中，加入10ml蒸馏水，高压121摄氏度10分钟灭菌后备用。
常见微生物培养基
常见微生物培养基Medium含有碳水化合物、含氮应用化学药品配成并标液体培养基不易长期保有不同。
一般培养基在对一些需严格灭菌的培2~6。
C的冰箱内。
1、细菌培养基配方一牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3克 1.00.5 1.5水100毫升在烧杯内加水100火上加热。
待烧杯内各10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.27.6,30分钟。
配方二马铃薯培养基250500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。
在烧杯上做好2pH值调到7.5左右。
每支试管内加入10毫升配方三根瘤菌培养基葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克碳酸钙3克硫酸镁0.2克酵母粉0.4克琼脂20克水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升2、放线菌培养基配方一可溶性淀粉2克硝酸钾0.1克磷酸氢二钾0.05克氯化钠0.05克硫酸镁0.05克硫酸亚铁0.001克琼脂2克水100毫升595使它溶解。
在烧杯外做好pH值到7.27.4备用。
配方二面粉琼脂培养基面粉60克琼脂20克水1000毫升50030分钟。
另取500pH值到7.43、真菌培养基配方一Sabouraud’s蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升40本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。
配方二马铃薯糖琼脂培养基2001000液中加入10煮沸溶解后加糖20用。
把这培养基的pH值调到7.27.4杆菌。
配方三黄豆芽汁培养基黄豆芽100克琼脂15克葡萄糖20克水1000毫升301000把这培养基的pH值调到7.27.4配方四豌豆琼脂培养基豌豆80粒琼脂5克水200毫升取801小4、食用菌菌种培养基配方一马铃薯—蔗糖--琼脂培养基20%马铃薯煮汁1000毫升蔗糖20克琼脂18克200100020分钟足水分到100020%pH配方二综合马铃薯培养基20%马铃薯煮汁1000 毫升磷酸二氢钾3克硫酸镁1.5克葡萄糖20克维生素10毫克琼脂18克先配制20%整pH值到6该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。
放线菌的分离和鉴定
放线菌的分离和鉴定放线菌的分离和鉴定实验器材：1.⼟壤材料 5 ---10cm 处⼟壤，放于采集袋中带回实验室。
2.培养基淀粉琼脂培养基（⾼⽒Ⅰ号培养基( w /v)）可溶性淀粉2%，KNO3 0. 1%，NaCL 0. 05%，K2HP04 0. 05%，MgSO4 0. 05%，FeSO4 0. 001%，琼脂2% 3.溶液和试剂（1) 20% ⽢油( 2) 0. 1%美蓝 A 液: 美蓝0. 3g ，95% ⼄醇300ml;B 液: 0. 01% KOH 100ml 混合A 和B 液即成⾰兰⽒染液3( 1) 结晶紫染⾊液: 甲液结晶紫2g，95% ⼄醇20ml;⼄液草酸铵0. 8g，蒸馏⽔80ml。
甲⼄液先分别溶解，然后混合在⼀起，过滤除去残渣后装⼊滴瓶中备⽤。
( 2) 碘液: 碘1g，碘化钾2 个，蒸馏⽔100ml 先取少量蒸馏⽔加⼊碘和碘化钾，使碘完全溶解后再加⼊全部蒸馏⽔，分装于滴瓶中备⽤。
( 3) 复红酒精溶液: 碱性复红0. 4g，95%⼄醇100ml，溶解装⼊滴瓶备⽤。
4.仪器和其他⽤品⽆菌纸、带玻璃珠的三⾓烧瓶、1ml⽆菌吸管、⽆菌试管、⽆菌培养⽫⼀.⽬的要求：1. 掌握倒平板的⽅法和常⽤分离纯化微⽣物的基本操作。
2. 初步观察⼟壤中放线菌菌落形态。
3. 初步了解掌握微⽣物分类的基本⽅法。
⼆.实验原理：放线菌在⾃然界中主要⽣存于陆地和淡⽔中，⼟壤为这类微⽣物的主要习居场所，⽆论在种类和数量上都⽐其他地⽅繁多。
在中性或偏碱性的⼟壤和有机质等丰富的⼟壤中较多。
放线菌以孢⼦和菌丝⽚段的形式存在于⼟壤，每克⼟壤内含有数万、数⼗万的孢⼦。
放线菌的⽣活史和形态特征放线菌的孢⼦和孢囊孢⼦在适宜的环境下吸收⽔分，膨胀萌发，⽣出芽管1 －3 个，芽管伸长长出分枝，分枝越来越多，形态菌丝体。
因其菌丝体在培养基内，即基内菌丝或称营养菌丝体。
基内菌丝体⼀般没有横隔，由于菌丝体长⼊培养基内和培养基表⾯，并纠缠在⼀起形成密集的菌落，所以⽤接种针将整个菌落培养基挑起⽽不破裂。
真菌培养常用培养基(完整资料).doc
此文档下载后即可编辑[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂，沙堡弱培养基，SDA]（一）组成葡萄糖40.0g蛋白胨10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。
（三）目的是常用的分离或保存菌种的培养基。
[沙氏液基，SDB]（一）组成葡萄糖40.0g蛋白胨10.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。
[加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，SDA with antibiotic] （一）组成葡萄糖40.0g蛋白胨10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素。
250mg放线菌酮，121摄氏度10分钟灭菌后备用。
[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，modified SDA]（一）组成葡萄糖20.0g蛋白胨10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后121摄氏度10分钟灭菌后备用。
（三）目的保存菌种培养基。
[马铃薯葡萄糖琼脂，PDA]（一）组成马铃薯200.0g葡萄糖20.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法先将马铃薯洗净去皮切片，加水180ml，煮沸30分钟后过滤，再加葡萄糖、琼脂，将过滤液补足到1000ml，121摄氏度灭菌后备用。
（三）用途此培养基是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。
鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。
][玉米吐温80琼脂，CMA with Tw80（一）组成玉米粉40.0g琼脂15.0g蒸馏水1000ml吐温80 10ml（二）制法先将玉米粉混于水中，65摄氏度水浴一小时，过滤，再补足水量，然后加入琼脂和吐温80，121摄氏度10分钟灭菌后备用。
（三）用途用于观察白念珠菌厚壁孢子及假菌丝；红色毛癣菌在此培养基产色素较好。
[米饭培养基rice grain medium](一)组成大米300.0g蒸馏水1000ml（二）制法将3g大米放入试管中，加入10ml蒸馏水，高压121摄氏度10分钟灭菌后备用。
培养基配方
培养基配方1、PDA培养基（用于分离、培养植物内生真菌）：马铃薯（去皮）200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。
用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 μ g/ml，用于抑制细菌的生长。
2、NA培养基（用于分离、培养植物内生细菌）：牛肉膏3g，蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，琼脂粉15g，蒸馏水1000ml，pH 7.0。
用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50μg/ml，用于抑制真菌生长。
115℃，20min 灭菌。
3、LB培养基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；4、DSM1培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，胰蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL，pH=7.0；5、DSM2培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl5 g，细菌学蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；6、Msgg培养基：磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0)，MOPs 100 mmoL/L（pH7.0），MgCl2 2 mmoL/L，CaCl2 700 mmoL/L，MnCl2 50 μM，FeCl3 50 μM，ZnCl2 1 μM，VB1 2 μM，甘油0.5 %，谷氨酸0.5 %，色氨酸50 μg/mL，苯丙氨酸50 μg/mL，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。
7、N%NA培养基：牛肉膏3.0 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉N*10 g，8、BGM1培养基：牛肉膏3 g，胰蛋白胨10 g，NaCl 5 g，磷酸三钾26.631 g（pH7.0），二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，葡萄糖1 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。
水产微生物实验—培养基的配制
⽔产微⽣物实验—培养基的配制实验⼆培养基的配制⼀、基础知识培养基是⼈⼯配制的适合微⽣物⽣长繁殖或积累代谢产物的营养基质，⽤以培养、分离、鉴定、保存各种微⽣物或积累代谢产物。
飞⾃然界中，微⽣物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的⽬的不同，所以培养基的种类很多。
但是，不同种类的培养基中，⼀般应含有⽔分、碳源、氮源、能源、⽆机盐、⽣长因素等。
不同微⽣物对pH要求不⼀样，霉菌和酵母的培养基的pH⼀般是偏酸性的，⽽细菌和放线菌的培养基的pH⼀般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。
所以配制培养基时，都要根据不同微⽣物的要求将培养基的pH调到合适的范围。
此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微⽣物，因此，已配制好的培养基必须⽴即灭菌，如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防⽌其中的微⽣物⽣长繁殖⽽消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。
根据微⽣物的种类和实验⽬的不同，培养基的类别如下（⼀）按成分的不同分1．天然培养基。
主要成分是复杂的天然有机物质，如马铃薯、⽟⽶粉、⾖饼粉、⾖芽汁、⽜⾁膏、蛋⽩胨、⾎清等。
这些复杂天然有机物质的成分不完全了解，每次所⽤的原料，其中各成分的数量也不恒定。
这类培养基是实验室和发酵⼯⼚常⽤的培养基，例如⽜⾁膏蛋⽩胨培养基，马铃薯培养基，⽟⽶粉、黄⾖饼粉培养基、⾎琼脂培养基等。
2．合成培养基⽤化学成分完全了解的纯化合物药品配制⽽成的培养基，因此也称化学成分明确的培养基(chemically defined medium)，如⾼⽒I号培养基、查⽒培养基、M9培养基等。
⼀般⽤于研究微⽣物的形态，营养代谢、分类鉴定、菌种选育、遗传分析等。
⾼⽒I号培养基是⽤来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。
如果加⼊适量的抗菌药物(如各种抗⽣素、酚等)，则可⽤来分离各种放线菌。
此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的⽆机盐，这些⽆机盐可能相互作⽤⽽产⽣沉淀、如⾼⽒⼯号培养基中的磷酸盐和镁盐相互混合时易产⽣沉淀；因此，在混合培养基成分时，⼀般是按配⽅的顺序依次溶解各成分，甚⾄有时还需要将三种或多种成分分别灭菌，使⽤时再按⽐例混合。
放线菌
孢子丝发育到一定阶段便分化为分生孢子。在光学显微镜下，孢子呈圆形、椭圆形、杆状、圆柱状、瓜子状、梭状和半月状等，孢子的颜色十分丰富。孢子表面的纹饰因种而异，在电子显微镜下清晰可见，有的光滑，有的褶皱状、疣状、刺状、毛发状或鳞片状，刺又有粗细、大小、长短和疏密之分。
生孢囊放线菌的特点是形成典型孢囊，孢囊着生的位置因种而异。有的菌孢囊长在气丝上，有的菌长在基丝上。孢囊形成分两种形式：有些属菌的孢囊是由孢子丝卷绕而成；有些属的孢囊是由孢囊梗逐渐膨大。孢囊外围都有囊壁，无壁者一般称假孢囊。孢囊有圆形、棒状、指状、瓶状或不规则状之分。孢囊内原生质分化为孢囊孢子，带鞭毛者遇水游动，如游动放线菌属；无鞭毛者则不游动，如链孢囊菌属。
配方二 面粉琼脂培养基
面粉 60克 琼脂 20克
水 1000毫升
把面粉用水调成糊状，加水到500毫升，放在文火上煮30分钟。另取500毫升水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。
战功累累的放线菌
医生常常使用链霉素、红霉素这一类抗生素药物治病，使许多病人转危为安。抗生素的主角就是大名鼎鼎的放线菌。
放线菌培养基
配方一 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）
可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克
磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克
硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克
琼脂 2克 水 1000毫升
先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。
放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞。在显微镜下，放线菌呈分枝丝状，我们把这些细丝一样的结构叫做菌丝，菌丝直径与细菌相似，小于1微米。菌丝细胞的结构与细菌基本相同。
实验四 细菌、真菌、放线菌的分离与培养
实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。
二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。
在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。
为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。
通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。
挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。
1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。
2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。
用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
用途一般多用于筛选菌株。
实验一培养基的配制与灭菌技术一、目的要求1掌握配制培养基的...
实验一培养基的配制与灭菌技术一、目的要求1 掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2 学习高压灭菌锅的操作方法。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NACL提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
高氏1号培养基是分离和培养放线菌的合成培养基，是由可溶性淀粉作碳源，KNO3作氮源，NaCl，K2HPO4.3H2O，MgSO4.7H2O，FeSO4.7H2O为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离子。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固；二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。
灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。
通常为15磅/英寸2(121.3℃)灭菌15—20分钟；不耐高压的培养基则可采用流通蒸汽灭菌或间歇灭菌。
含糖培养基用112.6℃（8磅/英寸2）灭菌15分钟。
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了DNA的复制；由于辐射能使空气中的氧电离成[O]再使O2氧化生成臭氧O3或使水H2O氧化生成过氧化氢H2O2，O3和H2O2均有杀菌作用。
实验五 微生培养基配制与灭菌
1、无菌室
（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间 （2）无菌室的消毒和防污染 每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）. 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）. 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。
2、超净工作台
超净台的使用与保养: （1）风速保持在0.32-0.48米/秒; （2）使用前开启紫外灯照射30分钟以上; （3）让超净台预工作10－15分钟; （4）使用完毕后，用70%酒精将台面和台
培养基和玻璃器材的灭 菌方法
培养基和玻璃器材的灭 菌方法
紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h， 就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂， 可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使 一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气 及表面杀菌。
煮沸消毒法
灼烧灭菌
100℃、5~6min
干热灭菌
巴氏消毒法
接种环、接种针等 金属用具
方法
70~75℃、30min
耐高温需保持干燥的 物品
化学药剂 80℃、15min
160～170℃ 1-2小时
高压蒸汽灭菌
紫外线
培养基，
酒精、氯气、石炭酸等
100KPa、 121℃、15～30min
湿热灭菌的优点
湿热灭菌法菌体吸收水分蛋白质较易凝固 湿热的穿透力比干热大，水的传热能力比许多非导体的
注意事项 – 生物性废弃物
生物性废弃物
放至正确位置以 便灭菌
二、微生物的接种与分离技术
（一）、接种
将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的 生物体内的过程叫做接种。
1)确定和选择配方-MSM
③ 仪器等
天平; 电炉（电磁炉）；高压蒸汽灭菌器(锅)；电烘箱（干热灭菌箱）；培养箱 （后期培养时使用）；恒温水浴箱（培养基恒温）等；
MSM培养基。每人2个培养皿（固体培养），2个三角瓶 （液培）（上个实验已经准备好的）
具体工作：
给液体和固体培养基接种 每天测定—镜检，OD值测定
产出：
菌种生长曲线（细菌个数，OD值）
1、平板培养接种 1）平板划线(streak plate)； 使用材料和用具：培养皿、酒精灯、接种环等：
2）稀释涂布平板法(spread plate)： 使用材料和用具：培养皿、酒精灯、涂布器 （玻棒制作）等：
实验一
培养基（medium, media, culture media）的制备
1.前期准备: 1）确定和选择配方-MSM; LB 细菌— 真菌— 放线菌—
一. 培养基（medium, media, culture media）的制备 1.前期准备: 2）准备试剂, 器皿和设备等； ①常用试剂等材料: 基本试剂: 牛肉膏；蛋白胨；琼脂；NaCl；pH试纸；HCl和 NaCl调整pH 使用商品化干燥培养基：营养琼脂，细菌培养基等 ② 玻璃器皿等
1）高压蒸汽灭菌器(锅)；
适用范围：配置的培养基，制 备无菌水等的灭菌； 使用条件: 恒温121.3℃，维持 20min; 注意事项：高压容器注意安全 操作；开始检查水位和密封圈； 升至100 ℃，关掉出气阀门。
3灭菌 2）干热灭菌（电烘箱）；
适用范围; 玻璃器皿耐热物体的 灭菌; 使用条件: 恒温160℃，维持2hr; 恒温170℃, 维持1hr 注意事项：高温设备，注意安全 操作；
实验室36种微生物培养基配制方法
实验室36种微生物培养基配制方法1.牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，pH7.4～7.6。
2.高氏1号培养基(用于放线菌培养)可溶性淀粉20g，KNO₃ 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4•3H2O 0.5g，MgSO4•7H2O0.5g，FeSO4•7H2O0.01g•水1000mL•pH7.4～7.6。
配制时注意：可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。
3.马丁氏（Martin）培养基（用于从土壤中分离真菌）K2HPO 41g，MgSO4•7H2O 0.5g，蛋白胨 5g，葡萄糖 10g，1/3000孟加拉红水溶液100mL，水900mL，自然pH，121℃湿热灭菌30min。
待培养基融化后冷却55～60℃时加入链霉素(链霉素含量为30μg/mL)。
4.马铃薯培养基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培养)马铃薯(去皮) 200g，蔗糖(或葡萄糖)20g，水1000mL，配制方法如下：将马铃署去皮，切成约2cm²的小块，放入1500mL的烧杯中煮沸30min，注意用玻棒搅拌以防糊底，然后用双层纱布过滤，取其滤液加糖，再补足至1000mL，自然pH，霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。
5.察氏培养基(蔗糖硝酸钠培养基)(用于霉菌培养)蔗糖 30g，NaNO3 2g，K2HPO4 1g，MgSO4•7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4•7H2O 0.1g，水1000mL，pH7.0～7.2。
6.Hayflik培养基(用于支原体培养)牛心消化液(或浸出液) 1000mL，蛋白胨 10g，NaCl 5g，琼脂15g，pH7.8～8.0，分装每瓶 70mL，121℃湿热灭菌15min，待冷却至80℃左右，每70mL中加入马血清20mL，25%鲜酵母浸出液10mL，15醋酸铊水溶液2.5mL，青霉素G钾盐水溶液(20万单位以上) 0.5mL，以上混合后倾注平板。
放线菌发酵实验报告
放线菌发酵实验报告一、引言放线菌发酵是一种常见的微生物实验方法，通过培养放线菌并利用其代谢产物进行发酵，可以得到各种有用的化合物，如抗生素、酶和有机酸等。
本实验旨在通过放线菌发酵实验，了解放线菌的发酵过程及其应用。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 放线菌培养基：包括碳源、氮源、矿物质盐等；- 放线菌菌种：选择常见的放线菌菌种，如链霉菌、链霉菌属、真菌等；- 培养基培养基：用于接种放线菌菌种的培养基；- 发酵罐：用于进行放线菌发酵的装置；- 发酵液收集瓶：用于收集发酵产物。
2. 实验方法：- 准备放线菌培养基：按照配方将碳源、氮源、矿物质盐等按一定比例混合均匀；- 接种放线菌菌种：将放线菌菌种接种到培养基中，放入恒温培养箱中进行孵育；- 准备发酵罐：将培养基倒入发酵罐中，控制好温度、湿度和通气等条件；- 进行发酵：将已经孵育好的放线菌菌种接种到发酵罐中，进行发酵；- 收集发酵产物：在适当的时间点，将发酵液收集瓶放入发酵罐中收集发酵产物。
三、实验结果通过放线菌发酵实验，我们观察到以下结果：1. 发酵过程中，发酵液的颜色逐渐变化，由初始的无色逐渐变为黄色或其他颜色；2. 发酵液的酸碱度随着发酵时间的延长而发生变化，有些发酵产物会使发酵液呈酸性，而有些则呈碱性；3. 发酵液中可能会有一些气泡产生，这是由于发酵过程中产生的气体的释放；4. 在一定的发酵时间后，可以收集到发酵产物，可以通过化学分析等方法对其进行进一步研究和应用。
四、实验讨论通过放线菌发酵实验，我们可以得到各种有用的化合物，如抗生素、酶和有机酸等。
放线菌产生的抗生素广泛应用于临床医学，能够有效抑制或杀死一些病原微生物，对治疗感染性疾病具有重要意义。
放线菌产生的酶可以用于工业生产中，如纺织、食品、制药等领域，具有广阔的应用前景。
有机酸是一类重要的有机化合物，可用于食品添加剂、化妆品等领域。
然而，放线菌发酵也存在一些问题和挑战。
首先，放线菌发酵过程需要严格的温度、湿度和通气等条件控制，否则会对发酵产物的产量和质量产生影响。
工业化生产乳酸菌的液体培养基的配方
工业化生产乳酸菌的液体培养基的配方工业化生产乳酸菌的液体培养基的配方产品要菌体,菌种是复合菌种,做进一步的发酵用的,十分感谢!其实工业培养基跟实验室培养基只是说原料粗糙度或者说是原料选择的区别,品级不一样而已,要看楼主对于乳酸菌培养的要求了,比如楼主是要做高密度培养呢,还是直接就获取代谢产物,菌体离心收集后洁净度是否要高,还有发达就是楼主选择的工艺是否时候使用低品级的工业培养基呢,这些问题需要综合考虑才能最后定论培养基的内容。
1、细菌培养基配方一牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3克,蛋白胨1.0克,氯化钠0.5克,琼脂1.5克,水100毫升在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。
待NDS烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。
等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2~7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟。
配方二马铃薯培养基取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。
在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。
过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。
每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。
配方三根瘤菌培养基葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克碳酸钙3克硫酸镁0.2克酵母粉0.4克琼脂20克水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。
2、放线菌培养基配方一淀粉琼脂培养基(高氏培养基)可溶性淀粉2克硝酸钾0.1克磷酸氢二钾0.05克氯化钠0.05克硫酸镁0.05克硫酸亚铁0.001克琼脂2克水100毫升先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。
在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。
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一．细菌培养基：肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的培养基 ,肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
肉膏蛋白胨培养基1.药品比例：牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，Nacl5g，琼脂 15～20g，水 1000mL，PH7.4～7.62.实验器材：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO3、NaCl、K2 HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、4.5mL 无菌水 6 管，10%酚液，49.5mL 无菌水 ( 带玻璃珠 )1瓶。
土壤样品、试管、培养皿、移液管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、称量纸、牛角匙、pH试纸、棉花、报纸、记号笔、线绳、纱布、酒清灯。
电炉、高压蒸气灭菌锅、超净工作台 .3.配置方法（1）称药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
（2）加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。
（3）调 pH：检测培养基的 pH，若 pH偏酸，可滴加 lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。
若偏碱，则用 lmol/L HCl 进行调节。
pH 的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
（ 4）过滤：液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用 4 层纱布趁热过滤，以利培养的观察。
但是供一般使用的培养基，这步可省略。
（5）分装：按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
分装量：固体培养基约为试管高度的l/5 ，灭菌后制成斜面。
分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。
半固体培养基以试管高度的1/3 为宜，灭菌后垂直待凝。
（6）加棉塞：试管口和三角瓶口塞上用普通棉花 ( 非脱脂棉 ) 制作的棉塞。
棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。
要使棉塞总长约3/5 塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。
有些微生物需要更好的通气，则可用 8 层纱布制成通气塞。
有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。
（7）包扎：加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。
若培养基分装于试管中，则应以5支或 7 支在一起，再于棉塞外包一层牛皮纸，用绳扎好。
然后用记号笔注明、培养基名称、组别、日期。
（8）灭菌：将上述培养基于 121.3 ℃湿热灭菌 20min。
如因特殊情况不能及时灭菌，则应故人冰箱内暂存。
（9）摆斜面：灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜度，便斜面的长度不超过试管总长的1/2 。
（10）无菌检查：将灭菌的培养基放入 37℃温箱中培养 24～48h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。
二.放线菌培养基 : 高氏合成一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基 , 培养基中的可溶性淀粉作为碳源和能源， KNO3作为氮源，K2HP04、MgSO4和 FeS04作为无机盐等高氏合成一号培养基1.药品比例：可溶性淀粉20gNaCI0 ．5gKNO31gK HPO ．3H O0 ．5g242MgSO4．7H2O0．5gFeSO ．7 H O0．01g42琼脂15～25g水1000mlpH7.4 ～7.62.实验器材：试管，锥形瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，培养基分装器，天平，高压蒸汽灭菌器， PH试纸，棉花，牛皮纸，麻绳，纱布3.配制方法：（1）、称量和溶化按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。
然后再称取其他各成分，并依次溶化，对微量成分FeSO4．7 H2 O 可先配成高浓度的贮备液，按比例换算后再加入。
待所有试剂完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。
（2）、调 pH用试纸测培养基的原始PH,如果偏酸，用滴管向培养基中加入1mol/LNaOH,边滴边搅拌，并随时用pH 试纸测其 pH,直至 pH达 7.6 。
反之，用 1mol/LHCI 进行调节。
（3）、分装和加塞将配制的培养基分装入试管内，在试管口或锥形瓶口上塞上棉塞。
（4）、包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一根麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
（5）、灭菌将上述培养基以1210C,20min,0.103MPa 高压蒸汽灭菌。
（6）、搁置斜面将灭菌的试管培养基冷却至 500C左右，将试管口端搁在玻璃棒上。
斜面的斜度要适当，使斜面的长度约为管长 1/3 。
（7）、无菌检查将灭菌培养基放入 370C 的培养箱中培养 24～28h，以检查灭菌是否彻底。
三．真菌培养基：马铃薯糖琼脂培养基（马丁氏培养基）马铃薯糖琼脂培养基1.药品比例K2HPO41g，MgSO4·7H2O 0.5g ，蛋白胨 5g，葡萄糖 l0g ，琼脂 15～20g，水1000mL，自然 pH此培养液 1000ml 加 1%孟加拉红水溶液 3．3ml 。
临用时每 100ml 培养基中加 1%链霉素液 0． 3ml。
（孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌无抑制作用，因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长，从而达到分离真菌的目的）2.实验器材KH2PO4，MgSO4?7H2O，蛋白胨，葡萄糖，琼脂，孟加拉红，链霉素；试管，三角烧瓶，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅3.配制方法（1）称量和溶解：先计算后称量，按用量称取各成分，并将其溶解在少于所需的水中。
待各成分完全溶解后，补充水分到所需体积。
再将孟加拉红配成 1%的水溶液，在 1000mL培养液中加入以上孟加拉红溶液 3.3mL，混匀后，加入琼脂加热融化，方法同牛肉膏蛋白胨培养基配制。
（2）分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白膝培养基配制。
（3）链霉素的加入：链霉素受热容易分解，所以临用时，将培养基融化后待温度降至 45℃左右时才能加入。
可先将链霉素配成 1%的溶液 ( 配好的链霉素溶液保存于 -20 ℃) ，在 100mL培养基中加 1%链霉素 0.3mL ，使每毫升培养基中合链霉素 30μg。
四．灭菌采用高压蒸气灭菌法进行灭菌，步骤如下：1．首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。
切勿忘记加水，同时水量不可过少，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。
2．放回内层锅，并装入待灭菌物品。
注意不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果。
三角烧瓶与试管口端均不要与锅壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
3．加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。
再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
4．用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。
待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加到逐渐上升。
当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。
本实验用0.1Mpa，121.5 ℃， 20min 灭菌。
灭菌的主要因素是温度而不是压力。
因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压力。
5．灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。
压力一定要降到“ 0”时，才能打开排气阀，开盖取物。
否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。
6．将取出的灭菌培养基，需摆斜面的则摆成斜面，然后放入 37℃温箱培养 24h，经检查若无杂菌生长，即可待用。
五．土壤微生物的分离1．取土壤：取表层以下 5～10cm处的土样，放入无菌的袋中备用，或放在 4℃冰箱中暂存。
2．制备稀释液 ( 要无菌操作 )(1)制备土壤悬液：称土样 0.5g ，迅速倒入带玻璃珠的 49.5mL 无菌水瓶中 ( 玻璃珠用量以充满瓶底力最好 ) ，振荡 5～10min，使土样充分打散，即成为 10-2的土壤悬液。
(2)稀释：用无菌移液管吸 10-2的土壤悬液 0.5mL，放入 4.5mL 无菌水中即为 10-3稀释液，如此重复，可依次制成10-3～10-8的稀释液。
注意：操作时管尖不能接触液面，每一个稀释度换用一支移液管，每次吸入土液后，要将移液管插入液面，吹吸 3 次，每次吸上的液面要高于前一次，以减少稀释中的误差。
六．混菌法测定菌落数的方法(1)细菌：取10-7、10-6两管稀释液各1mL，分别接人相应标号的平皿中，每个稀释度接两个平皿。
然后取冷却至50℃的牛肉膏琼脂培养基，分别倒入以上培养皿中 ( 装量以铺满皿底高 1.5 ～2mm为宜 ) ，迅速轻轻摇动平皿，使菌液与培养基充分混匀，但不沾湿皿的边缘，待琼脂凝固即成细菌平板。
倒平板时要注意无菌操作。
（2）放线菌：取 10-5、10-4两管稀释液，在每管中加入 10%酚液 5～6 滴，摇匀，静置片刻，然后分别从两管中吸出1mL加入相应标号的平皿中，选用高氏 1 号培养基，用与细菌相同的方法倒入平皿中，便可制成放线菌平板。
（3）真菌：取 10-2、10-3两管稀释各 1mL，分别接入相应标号的平皿中，每个稀释度接两个平皿。
在融化的马铃薯培养基中，每 100mL加入灭菌的乳酸1mL，轻轻摇匀，然后用与细菌相同的方法倒入平皿中，便可制成真菌的平板。
4．培养：将接种好的细菌、放线菌、真菌平板倒置，即皿盖朝下放置，于 28～30℃中恒温培养，细菌培养 1～2d，放线菌培养 5～7d，真菌培养 3～5d。
观察生长的菌落，用于进一步纯化分离或直接转接斜面。
七. （一）平板制作及划线分离方法。
1．倒平板：按无菌操作要求，在火焰旁操作。
2．划线分离：使用接种环，从待纯化的菌落或待分离的斜面菌种只沾取少量菌样，在相应培养基平板中划线分离，划线的方法多样，目的是获得单个菌落。
3．培养：方法同“土壤稀释分离”。
（二）斜面接种和穿刺接种1．斜面接种（1）取新鲜固体斜面培养基，分别做好标记（写上菌名、接种日期、接种人等），然后用无菌操作方法，把待接菌种接入以上新鲜培养基斜面上。