(完整版)大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌的培养
特殊营养物质
混合显色剂
琼脂
pH±25℃
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
注意
此培养基仅供实验室使用。
用法
称取本品加入1000ml蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。取1ml制备好的样品液加入直径为9cm无菌平皿中心，倾入冷却至45-50℃培养基约15ml，混匀，凝固后，再加入一层培养基进行履盖。或冷却至45-50℃时，倾入无菌平皿，琼脂完全凝固后，在37℃的培养箱中倒置放置1-2小时，加入适当稀释度的样品液1ml，涂布于培养基上，36±1℃培养18～24h。
典型特征
大肠杆菌典型菌落为蓝色至紫色，大肠菌群为粉红色菌落，其它细菌为无色菌落。
大肠杆菌的培养：
37摄氏度，恒温培养48到72小时，因为接种时和具体培养条件的不同，其生长一般都在2天外才能长出明显的菌落。
菌落特征：乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色一致。
大肠杆菌/大肠菌群显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基，用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠杆菌和大肠菌群的快速检测。大肠杆菌显蓝色至紫色，大肠菌群显红色。
总大肠菌群=蓝色菌落+紫色菌落+粉红色菌落
大肠杆菌=蓝色菌落+紫色菌落
4、对可疑大肠杆菌菌落可划线接种到营养琼脂平板上，36±1℃培养12-16小时，挑取单菌落做大肠杆菌全套生化试验(本公司有生化鉴定管套装20支x3种)
质量控制
1、外观
此干燥培养基的粉末均匀，具有良好的流动性，呈淡红色。制备好的平板呈透明粉红色固体培养基。
（5）包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期。
大肠杆菌培养操作规程
大肠杆菌培养操作规程本页仅作为文档页封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March大肠杆菌培养操作规程一、目的及适用范围制订本规程的目的为规范大肠杆菌总RNA的制备，保证为诊断试剂产品提供质量可控的质控品及标准品基质。
本规程适用于南京实验室提取大肠杆菌总RNA 的操作。
依照本操作规程，每次可提前大约提取基质液原液。
二、常规时间安排RNA完全提取根据需求，自行安排。
三、培养用耗材准备1、锥形瓶、双层铝箔、棉绳2、包扎一盒1ml的枪头，50ml康宁冻存管四、培养基配制(早上)培养基应现配现用，每次配置350ml，一次性使用完毕。
1、按下表称取物资配置LB培养基到500ml锥形瓶中：2、用双层铝箔和棉绳对锥形瓶进行封口，摇晃锥形瓶以使各物质迅速、均匀、完全、溶解。
待灭菌。
五、PBS溶液配制1、10XPBS不需要每次生产都配置，生产前跟检查PBS量是否充足，如充足则可跳过该步骤。
2、配制10XPBS缓冲液备用；例如配制1000L10XPBS储存液，取1000ml配液瓶，根据下表称取各物质。
用去离子水定容至1000ml。
3、将PBS溶液混合均匀，包扎好，待灭菌。
六、灭菌1、将配置好的PBS溶液，培养基，1ml枪头准备好。
2、确认灭菌锅内水位是否达到标准水位，若未达到，则加入纯化水至标准水位。
3、将包扎好的培养基、PBS溶液和枪头盒一同放入灭菌锅。
注意PBS盖不可太紧，盖紧灭菌锅盖，须旋紧；设置各参数：121℃，20min。
4、灭菌结束后，待灭菌锅压力降至“0”，打开灭菌锅盖；取出灭好菌的培养基和枪头盒。
5、PBS、培养基放置于室温静置2h，待完全冷却。
枪头盒放入80°C鼓风干燥箱三小时烘干。
备用。
6、冷却至室温后，进行活化。
七、菌种复苏（下班前）1、打开超净工作台紫外灯，紫外照射半小时，关闭紫外灯。
2、在超净工作台内进行菌种复苏接种操作，打开50ml冻存管管盖后，用酒精灯外焰灼烧灭菌处理冻存管管口，打开处理好的培养基瓶，用酒精灯外焰灼烧灭菌处理培养基瓶瓶口，倒10ml培养基至50ml冻存管中，用酒精灯外焰灼烧灭菌处理培养基瓶瓶口后将培养基瓶密封待用。
大肠杆菌的培养
大肠杆菌种子液的制备牛肉膏蛋白胨培养基的配方：液体培养基牛肉膏 3.0g蛋白胨10.0g氯化钠 5.0g水1000mlpH 7.4-7.6固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂1 试管斜面与平板的制备（1）称量按培养基配方比例依次准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、水放入烧杯中。
（2）熔化在上述烧杯中先加入少于所需要量的水，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。
将称量好的 1.8％琼脂放入已溶的药品中，再加热熔化，最后补充所损失的水分。
（3）调PH 在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌，并随时用PH试纸测基PH直到PH达到7.4-7.6。
反之用1mol/L HCl进行调节。
（4）分装将培养基分装入三个试管中和三角烧瓶中。
其试管装量不超过管高的1/5，三角烧瓶的量不超过1/2加塞培养基分装完毕后，在试管口和三角烧瓶口上塞上棉塞。
（5）包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一道麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
（6）灭菌将上述培养基以0.1Mpa,121℃,15min高压蒸气灭菌。
（7）倒平板，取三个已消毒的培养皿，在无菌操作台上用三角烧瓶中的培养基倒制三个平板培养基，冷却。
（8）搁置斜面将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
2 接种大肠杆菌斜面种子(1) 取实验室储备的大肠杆菌BL21种子，在酒精灯附近，用接种环在已制备好的斜面上接种上大肠杆菌。
(2) 将接种好的斜面放入37℃的恒温培养箱子中培养24h。
3 制备平板种子(1) 在无菌条件下，取一支保存的大肠杆菌的斜面，用无菌生理盐水将菌种冲洗下来，再用无菌生理盐水将其梯度稀释为1倍，10倍，100倍和1000倍，用移液枪分别吸取各梯度的溶液涂布平板(每个梯度涂布三个平板，每次吸取溶液100ul)，然后在37℃培养箱中过夜。
大肠杆菌的培养
大肠杆菌的培养1. 介绍大肠杆菌(Escherichia coli)是一类具有多种生物学功能的革兰氏阴性菌，在科学研究和工业生产中广泛应用。
为了更好地利用大肠杆菌及其功能，需要对其进行培养和分离，以获得足够的生物材料。
2. 大肠杆菌培养的基本方法大肠杆菌的培养需要特定的培养基和条件。
下面介绍大肠杆菌的基本培养方法。
2.1 培养基的选择常用的大肠杆菌培养基包括Luria-Bertani(LB)培养基、MacConkey培养基和TB培养基等。
其中，LB培养基为较为广泛应用的培养基。
其主要组成成分包括营养成分、糖类、盐类等。
在实验室中，通常用LB培养基作为大肠杆菌的培养基。
2.2 培养条件的控制大肠杆菌的生长适宜温度为37℃，PH值为7.2-7.5，培养过程中需要适宜的氧气供应。
在LB培养基中培养时，可以在室温下保存，但最好在4℃下保存。
2.3 常见实验的流程在实验中，通常需要进行以下操作：菌的接种、培养、收获和保存等。
1.菌的接种首先需要选择一个新鲜的培养基，将大肠杆菌的菌种接种到培养基上。
通常使用无菌的卡片棒进行操作，经过操作后菌种应均匀分布在培养基表面。
2.培养接下来将接种好的培养基放入培养箱中，在适宜的条件下进行培养。
培养期间需要观察培养基的状态，如果出现不规律的杂质，则需要重新接种。
3.收获当菌种生长到一定程度后，可以进行收获。
收获的方法主要有离心沉淀和过滤两种。
其中离心沉淀可以采用低速离心和高速离心排液的方法，而过滤通常采用滤纸或滤膜的方法进行。
4.保存最后需要将采集到的菌液进行保存。
保存可采用冷冻或冻干的方法，分别可以在-20℃和-80℃下保存。
3.大肠杆菌的培养可以通过合适的培养基和条件，使其生长和繁殖。
根据实验的具体需要，可以选择相应的培养基和培养方法，以保障实验的有效性和准确性。
大肠杆菌一般培养方法
大肠杆菌一般培养方法大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，也是实验室常用的模型菌株之一、它具有许多重要的应用价值，如基因工程、发酵制药和生物学研究等。
因此，了解大肠杆菌的常规培养方法是非常重要的。
大肠杆菌的培养基本上可以分为两个类型：液体培养基和固体培养基。
下面我将为您详细介绍。
1.液体培养基液体培养基是一种将细菌培养在含有养分的液体中的方法。
使用液体培养基可以快速扩大大肠杆菌数量，并且可以用于后续实验，如基因克隆和蛋白表达等。
下面是一种常见的液体培养基配方：- 色氨酸酸盐 (tryptone): 10g/L- 酵母粉 (yeast extract): 5g/L-氯化钠(NaCl):10g/L- 葡萄糖 (glucose): 5g/L-洗涤剂提供的磷酸缓冲溶液(PBS)：500mL，pH值自动调整到7.0将这些成分溶解在适量的去离子水中，并将溶液进行无菌过滤。
然后将无菌培养基分装到培养瓶中，每个瓶子的体积约为250-500mL，用铝箔进行覆盖。
接种数量的大肠杆菌通常为菌液的10-20倍。
将培养瓶放在摇床上以200rpm的速度培养，温度为37°C。
培养时间一般为12-16小时。
2.固体培养基固体培养基是将细菌培养在含有固体化剂（如琼脂）的培养基上的方法。
使用固体培养基可以使大肠杆菌形成菌落，便于分离和挑选单个菌落。
下面是一种常见的固体培养基配方：- 琼脂 (agar): 15g/L- 色氨酸酸盐 (tryptone): 10g/L- 酵母粉 (yeast extract): 5g/L-氯化钠(NaCl):10g/L- 葡萄糖 (glucose): 5g/L-洗涤剂提供的磷酸缓冲溶液(PBS)：500mL，pH值自动调整到7.0将这些成分溶解在适量的去离子水中，并将溶液进行无菌过滤。
然后将无菌培养基分装到试管或平盘中，每个试管或平盘的体积约为10-15mL或20-25mL，用无菌塞子或膜进行封口。
大肠杆菌培养实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除大肠杆菌培养实验报告篇一：大肠杆菌实验报告大肠杆菌紫外线诱变及抗药性菌株筛选0740063阿噟兰1.前言抗生素能破坏细菌细胞壁的结构，使细菌的繁殖和生长受到抑制。
但某些细菌对抗生素表现出抗性，原因是其基因发生了改变，产生能抵抗抗生素的性状。
在自然情况下，细菌的基因突变率很低，而且突变是不定向的，因此在自然条件下，想要获得有抗性的细菌是很困难的。
当给与适当的物理条件时，其突变率会大大增加。
如当用α射线、β射线、γ射线、Χ射线、中子和其他粒子、紫外线、微波等物理因素辐射时，能够促进遗传物质突变。
DnA对紫外线（uV）有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。
紫外线引起DnA结构变化的形式有DnA链断裂、碱基破坏、胸腺嘧啶二聚体等。
因此，紫外线通常作为诱变剂，用于微生物菌种选育。
一般细胞分裂越旺盛，诱变剂量越大，突变率高，诱变最有效的波长253~265nm。
选择合适的诱变剂量对于获得较高突变率十分关键，过高或过低的辐射剂量会导致菌株死亡或诱变不充分而降低诱变效果。
在紫外线诱变下，菌株发生不定向的突变，想要得到需要的特向变异必须对诱变后的菌株做筛选。
本实验想要得到的是能够抵抗抗生素的菌株，因此可以用抗生素培养基作为筛选培养基对菌种进行筛选。
若菌株没有发生定向突变，则该菌株不能在抗性培养基上正常生长，只有发生了定向突变才可能在筛选培养基上正常生长。
紫外线对于菌株有诱变作用外，对菌株还有较强的致死作用，因为紫外线改变了菌株的基因结构导致菌株无法正常生长繁殖。
因此，通过本实验的操作，在合适的照射剂量的设置下，比较不同不同照射剂量下的致死效果和突变率，并初步分析两者的相关性。
在分析死亡曲线和诱变率曲线的基础上，能了解诱变育种的机理和方法，为做进一步的诱变实验做准备。
2.材料和方法2.1实验材料、仪器和试剂菌种：大肠杆菌仪器：超净台、离心机、高压灭菌锅、培养箱、磁力搅拌器、培养皿、涂布器、移液管、移液器试剂：牛肉膏蛋白胨培养基相关试剂、硫酸卡那霉素水溶液（50mg/ml）、生理盐水2.2实验方法2.2.1制备培养基普通培养基——牛肉膏蛋白胨培养基（400ml）：牛肉膏5g蛋白胨10gnacl5g琼脂20g蒸馏水1000mlph7.0按配方配制好培养基后置于灭菌锅中115℃15min，倒平板，4皿*15ml*5组+2皿*15ml=22皿*15ml=330ml筛选培养基(200ml)：含抗生素50mg/L。
大肠杆菌培养基制备过程
大肠杆菌培养基制备过程
制备大肠杆菌培养基的过程如下：
1. 准备培养基成分：大肠杆菌培养基的成分包括碳源、氮源、矿物质盐及其他添加物。
常用的
碳源有葡萄糖、蔗糖等；氮源可以选择氨基酸、氨基酸类化合物等；矿物质盐可以选择无机盐、有机盐等。
添加剂有pH调节剂、辅因子等。
2. 杀菌处理：将所需的碳源、氮源、矿物质盐及其他添加物加入适量的蒸馏水中，经过高温高
压灭菌处理。
3. 酶解处理：将培养基中添加的蛋白质进行酶解处理，以提供大肠杆菌生长所需的氮源。
4. 调整pH值：使用pH调节剂调整培养基的pH值，常见的调节剂有氢氧化钠和氢氧化钾等。
5. 分装和灭菌：将制备好的培养基分装到培养瓶或培养皿中，然后进行高温高压灭菌处理，以
保证培养基的无菌状态。
6. 储存和使用：将灭菌后的培养基在低温下储存，以延长其使用寿命。
使用时，将培养基回溶，配制成适当浓度的液态培养基，用于大肠杆菌的培养和研究。
需要注意的是，大肠杆菌培养基的制备过程可能存在一定的差异，具体的制备步骤和成分比例
可根据实验需求进行调整。
此外，操作过程中需要注意无菌操作，并保持培养基的无菌状态，
以避免杂菌污染。
大肠杆菌的培养
大肠杆菌种子液的制备牛肉膏蛋白胨培养基的配方：液体培养基牛肉膏3.0g蛋白胨10.0g氯化钠5。
0g水1000mlpH 7。
4—7.6固体培养基在液体培养基的基础上再加入1。
5%－2.0％的琼脂1 试管斜面与平板的制备（1）称量按培养基配方比例依次准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、水放入烧杯中.（2）熔化在上述烧杯中先加入少于所需要量的水，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。
将称量好的1。
8%琼脂放入已溶的药品中，再加热熔化，最后补充所损失的水分。
（3）调PH 在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌,并随时用PH试纸测基PH直到PH达到7。
4—7。
6。
反之用1mol/L HCl进行调节.（4）分装将培养基分装入三个试管中和三角烧瓶中。
其试管装量不超过管高的1/5,三角烧瓶的量不超过1/2加塞培养基分装完毕后,在试管口和三角烧瓶口上塞上棉塞.（5）包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,其外再用一道麻绳扎好.用记号笔注明培养基名称、配制日期。
（6）灭菌将上述培养基以0。
1Mpa,121℃，15min高压蒸气灭菌。
（7）倒平板，取三个已消毒的培养皿，在无菌操作台上用三角烧瓶中的培养基倒制三个平板培养基，冷却.（8）搁置斜面将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜.2 接种大肠杆菌斜面种子（1）取实验室储备的大肠杆菌BL21种子，在酒精灯附近，用接种环在已制备好的斜面上接种上大肠杆菌。
(2) 将接种好的斜面放入37℃的恒温培养箱子中培养24h.3 制备平板种子(1) 在无菌条件下，取一支保存的大肠杆菌的斜面，用无菌生理盐水将菌种冲洗下来，再用无菌生理盐水将其梯度稀释为1倍,10倍,100倍和1000倍,用移液枪分别吸取各梯度的溶液涂布平板(每个梯度涂布三个平板，每次吸取溶液100ul），然后在37℃培养箱中过夜。
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大肠杆菌培养
一、菌种冻存液的制备
含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。
二、培养基制备
LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）
液体培养基
胰化蛋白胨 10.0g
酵母粉 5.0g
氯化钠 10.0g
水 1000ml
pH 7.4
固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂
三、平板的制备
1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。
2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。
如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。
所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。
液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。
四、接种大肠杆菌
1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。
3）因实验一般都要求挑取单菌落，故涂平板适应考虑冻存液内细菌数量，若菌量过大应适当稀释。
一般方法一获得单菌落的可能性比较大。
涂平板应在酒
精灯附近进行，若冻存液涂完的平板应倒置，防止平皿盖上产生水蒸气。
五、大肠杆菌的培养
1）将接种好的平皿倒置放入37℃的恒温培养箱中培养，大约十几小时后长出菌落。
2）挑取生长状态好，特征明显的单个菌落，接种于新鲜灭菌的LB液体培养基中37℃，220rpm/min恒温振荡培养9-12h。
菌落特征：乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色一致。