(完整版)HPLC谱图常见问题原因汇总及解决方式

高压液相色谱HPLC常见故障及排除方法[重点]

高压液相色谱HPLC常见故障及排除方法诊状(一)保留时间变化可能的原因: 解决方法1.柱温变化:柱恒温2.等度与梯度间未能充分平衡:至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够:用>25mmol/L的缓冲液4.柱污染:每天冲洗柱5.柱内条件变化:稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命:采用保护柱(二)保留时间缩短可能的原因: 解决方法1.流速增加:检查泵,重新设定流速2.样品超载:降低样品量3.键合相流失:流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向4.流动相组成变化:防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加:柱恒温(三)保留时间延长可能的原因: 解决方法1.流速下降:管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化:用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失:同前(二)34.流动相组成变化:同前(二)45.温度降低:同前(二)5(四)出现肩峰或分叉可能的原因: 解决方法1.样品体积过大:用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强:采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道:更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效:更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏:更换进样器转子(五)鬼峰可能的原因: 解决方法1.进样阀残余峰:每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物:处理样品3.柱未平衡:重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六)基线噪声可能的原因: 解决方法1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) : 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声:更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) : 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡:流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾可能的原因: 解决方法1.柱超载:降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰:清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4 : 同前(四)45.同前(四)3 5. : 同前(四)36.死体积或柱外体积过大:连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降:用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽可能的原因: 解决方法1.进样体积过大:同(四)12.在进样阀中造成峰扩展:进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢:设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大:设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高:增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大:用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长:等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大:将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载:进小浓度小体积样品液相色谱柱使用及保养液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。

高效液相色谱常见问题分析与对策

高效液相色谱常见问题分析与对策液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。

其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。

对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

A、峰拖尾原因解决方法1、筛板阻塞a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷填充色谱柱3、干扰峰a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱4、流动相PH选择错误调整PH值。

对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点发生反应a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更改色谱柱B、峰前延原因解决方法1、柱温低升高柱温2、样品溶剂选择不恰当使用流动相作为样品溶剂3、样品过载降低样品含量4、色谱柱损坏见A1、A2C、峰分叉原因解决方法1、保护柱或分析柱污染取下保护柱再进行分析。

如果必要更换保护柱。

如果分析柱阻塞，拆下来清洗。

如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。

如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相改变样品溶剂。

如果可能采取流动相作为样品溶剂。

D、峰变形原因解决方法1、样品过载减少样品载量E、早出的峰变形原因解决方法1、样品溶剂选择不恰当a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解决方法1、柱外效应a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）b、使用小体积的流通池G、K’增加时，脱尾更严重原因解决方法1、二级保留效应，反相模式a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d、更换一支柱子2、二级保留效应，正相模式a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法3、二级保留效应，离子对加入三乙胺（或碱性样品）H、酸性或碱性化合物的峰拖尾原因解决方法1、缓冲不合适a、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液I、额外的峰原因解决方法1、样品中有其他组份正常2、前一次进样的洗脱峰a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂c、减少进样体积J、保留时间波动原因解决方法1、温控不当调好柱温2、流动相组分变化防止变化（蒸发、反应等）3、色谱柱没有平衡在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱K、保留时间不断变化原因解决方法1、流速变化重新设定流速2、泵中有气泡从泵中除去气泡3、流动相选择不恰当a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相L、基线漂移原因解决方法1、柱温波动。

（完整版）HPLC色谱常见问题

（完整版）HPLC色谱常见问题HPLC色谱常见问题1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？5.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不重现，为什么？6.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？7.色谱双峰产生的可能及判断和处理8.色谱柱中的流动相会排干吗？9.使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意什么问题？10.液相色谱梯度洗脱中柱温的影响有那些？11.为何基线会漂移12.规则的基线噪音是如何产生的13.不规则的基线噪音是如何产生的14.保留时间漂移的故障排除15.为何出现肩峰或分叉？16.为何出现鬼峰？17.为何出现峰拖尾？18.为何出现峰展宽？19.除了流速外，还有哪些因素能引起压力改变？20.什么是强溶剂、弱溶剂？21.怎样才会使峰位发生重排？22.除了在线脱气常用的实验室脱气方式还有哪些？23.评价一个色谱柱的最基本指标有那些？24.什么是时间常数？25.为什么在实验过程中有时会出现倒峰？26.为何会出现“胖”峰和平头峰？怎样避免？27.什么是次级保留效应？28.前延峰的发生及处理？29.峰变宽的原因？30.柱平衡慢的常见原因有哪些？31.用内标法实验时对内标物的要求有哪些？32.管子切割与安装注意事项？33.什么是HPLC的“无限直径效应”？34.如何评价一台检测器？35.如何简单判断比例阀是否内漏？1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法

高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。

对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。

2 常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。

其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。

2.1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。

所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。

压力过高、过低都属于柱压问题。

2.1.1 压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。

此时，我们应该分段进行检查。

(1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。

处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。

如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；(2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。

处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。

如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下，过滤白头正常，在检查；(3).把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。

处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。

如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。

假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。

这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。

高效液相色谱常见故障及解决方案

高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。

解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。

-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。

解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。

2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。

解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。

3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。

-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。

解决方案包括更换流动相或清洗柱。

4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。

解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。

-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。

解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。

5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。

6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。

解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。

7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。

解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。

8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。

解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。

这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。

在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。

HPLC 常见故障分析及排除方法

Accum. Head
Primary X-ducer
Primar y Head
Prime/Vent Valve In-Line Filter
GPV
From Degasser
To Sample Management System
©2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 13
©2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 26
HPLC常见故障因素 2487/2489
错误信息
Lamp lighting failure 氘灯启动失败解决：检查电源检查氘灯使用时间
Peak not found: 656 nm Deuterium Peak not found: Erbium n nm
保存于聚乙烯瓶中的超纯水
测试条件水样: 40ml trace enrichment @ 2.0 ml/min 色谱柱: C18 反相柱 (Waters) 梯度: 线性 100% 水－ 100% 乙腈波长: 254 nm
0
5
10
15
分
2 星期
1 星期
1天
1 小时新鲜配制
20
25
©2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 10
例如，根据不同的应用使用 80% 水:20% 甲醇的溶液或 80% 水:20% 乙腈的溶液
©2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 16
2695 故障 2690初始化错误： Plunger homing over pressure

高效液相色谱（HPLC）使用中常见故障及解决方法（三）峰型异常问题

高效液相色谱（HPLC）使用中常见故障及解决方法（三）峰型异常问题峰型问题是液相的主要问题，在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。

1、色谱图中未出峰。

解决方法：系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。

2、一个峰或几个峰是负峰。

解决方法：流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。

3、所有峰均为负峰。

解决方法：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光学装置尚未达到平衡。

4、所有峰均为宽峰。

解决方法：系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响。

、5、所出峰比预想的小。

解决方法：样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确．定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。

6、出现双峰或肩峰。

解决方法：进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。

7、前伸峰。

解决方法：进样量或样品浓度高；溶解样品的溶剂较流动相极性强；保护柱或色谱柱污染或失效。

8、拖尾峰。

解决方法：柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值；柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连接点降至最低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护柱，对柱子进行再生。

9、出现平头峰。

解决方法：检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。

10、出现鬼峰。

解决方法：进样阀残余峰，在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用HPLC级试剂；流路中有小的气泡，打开Purge阀，加大流速排除。

HPLC谱图的各种问题及相应的解决办法解析

HPLC谱图的各种问题及相应的解决办法随着2005年版药典的施行，高效液相色谱仪在新版药典中得到极为广泛的应用。

我们在平常的检验工作中，常常发现HPLC谱图会与理论上的有差别，出现各种各样的问题，一直是困扰着广大药品检验人员的一个主要因素。

当出现某种现象时，又该如何去有针对性的解决问题呢，这也是广大药检人士所共同期待的事，如今参考多种文献资料，讲义，教材，结合自身的平常工作经验，将一些常见的，主要的现象，原因及解决措施进行了整理总结，以供专业人士查阅参考,也。

这里所罗列的也只是一个大概内容。

如何做到真正解决问题，我认为坚持几个原则：一具体问题具体对待原则；二先外设后内部原则；三由简而繁原则；四单一处理到综全处理原则。

由于这方面所遇到的问题相对比较多，笔者打算做成几个系列化内容，分次发表。

下面先介绍几个最常见，最主要的问题。

（解决办法前的编号对应前面相应的原因编号，其他皆同。

）问题一：基线漂移原因主要有：1、柱温波动。

（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。

通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。

）；2、流动相不均匀。

（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。

）；3、流通池被污染或有气体；检测器出口阻塞。

（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）；4、流动相配比不当或流速变化；5、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；6、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成；7、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线；8、使用循环溶剂，但检测器未调整；9、检测器没有设定在最大吸收波长处。

针对上述原因，有一些基本的解决办法：1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器；2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。

流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气；3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。

如有需要，可以用1N的硝酸。

（不要用盐酸）；4、取出阻塞物或更换管子。

高效液相色谱常见故障及解决方案

清洗柱或更换柱清洗六通阀清晰检测器
管路污染
冲洗
流动相中含有稳定剂或稳定剂变化
使用无防腐溶剂
8.保留时间变化
现象
保留时间不重复
判断
系统不问或未达到平衡
室温波动大
柱被污染溶剂配比不合适进样体积太大或样品浓度太高
故障排除
分析之前应有足够的时间使系统平衡使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境冲洗柱或更换柱调节溶剂配比
检测器内有气泡
用甲醇或其他强极性的溶剂冲洗流通池
用强极性的溶剂清洗系统
清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器
检测器灯能量不足
更换灯
12.规则基线噪音
现象
规则基线噪音
判断
故障排除
流动相、检测器或泵内有气泡
流动相脱气，冲洗系统除去检测器或泵内的空气
室温不稳
稳定环境温度。使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境
鬼
洗脱物
峰
注射器脏
故障排除
用标准品对照、检查样品处理过程，换新样品
增加分析时间或梯度洗脱、提高流速、如问题仍存在，两次进样间用强溶剂冲洗色谱柱
清洗注射器、冲洗进样口
现象
判断
故障排除
流动相被污染
清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂
色谱图出现鬼峰
柱被污染六通阀污染检测器污染
峰变宽
环境温度变化漏夜
使用柱温箱检查漏夜的位置并维修
出现两个或多个未被完全分离的物质的峰
选择其它色谱条件以改善分离效果
检测器时间常数太大
使用较小的时间常数
4.峰分叉

高效液相色谱使用中常见问题及对策

高效液相色谱使用中常见问题及对策
高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分
析技术。

在使用HPLC的过程中，可能会遇到一些常见问题，以下是一些可能的问题及对策：
1. 峰形不对称或分离不良：可能是由于柱问题引起的。

可以尝试更换柱，确保柱的性能良好，
并尽量避免超出柱的最大推荐压力。

2. 峰形峭度低：这可能意味着分离不充分。

可以尝试调整流动相的组成、pH值或流速来改善
分离。

3. 噪音较大：可能是由于进样器或检测器的问题引起的。

可以检查进样器和检测器的状态，并
确保它们正常运行。

4. 色谱柱寿命较短：这可能是由于样品中的杂质或试剂导致的。

可以尝试优化样品的准备方法，如前处理或过滤样品，以减少对柱的损害。

5. 流动相配制错误：这可能导致峰错位或分离不良。

可以仔细检查流动相的配制方法和溶剂的
纯度，确保配制正确。

6. 峰定量不准确：可能是由于进样量不准确或方法参数设置不合适引起的。

可以检查进样量的
准确性，并根据实际情况调整仪器参数。

7. 泵压过高：可能是由于管路堵塞或柱封堵引起的。

可以检查管路是否通畅，并根据需要更换
柱或清洗柱。

8. 柱渗漏：可能是由于柱端部密封不良或柱老化引起的。

可以检查柱端部的密封情况，并确保
柱处于良好状态。

针对以上问题，及时检查、调整和维护HPLC设备，并根据具体情况进行修复或更换，可以提
高HPLC分析的效果和结果的准确性。

HPLC高效液相色谱故障排除及解决办法解析

–平头峰
•检测器设置不正确 •进样体积太大或样品浓度太高
色谱图常见问题分析(二)
•色谱峰保留时间问题:
–保留时间飘忽不定(各次运行之间)
•系统不稳定或未达化学平衡 •泵压力不稳(泵头里有气泡) •进样体积过大或样品浓度过大 •温度波动 •流动相混合不均匀 •色谱柱被污染
色谱图常见问题分析(二)(续)
–一个或几个峰是负峰
•流动相吸收本底高 •进样过程中进了空气 •离子对分离中的系统峰 •样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相
色谱图常见问题分析(一)(续)
•色谱峰峰形异常问题:
–所有的峰均为负峰:
•信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒 •光学装置尚未达到平衡
–所有的峰都是宽峰
•系统未平衡或未达到化学平衡 •溶样的溶剂比流动相强很多 •色谱柱类型或尺寸不正确 •色谱柱或保护柱被污染或降级 •温度变化对色谱柱的影响
•色谱峰保留时间问题:
–保留时间增加或减少(各次运行之间)
•系统不稳定或化学平衡不足 •泵流速变化 •温度变化 •色谱柱污染,柱效下降 •流动相被污染 •溶剂入口过滤器堵或管路堵塞 •系统渗漏
色谱图常见问题分析(二)(续)
•色谱峰保留时间问题:
–保留时间改变到一个新的恒定值
•流动相不正确或其组成不正确 •泵流速变化 •实际输液的流速不正确(泵失灵或故障) •环境温度变化；柱温不正确 •色谱柱尺寸或类型不正确 •色谱柱被污染 •流动相含有稳定剂或稳定剂发生变化 •输液系统的梯度滞后体积不正确
• 规则四∶尝试预测将来可能发生的问题。利用成功的故障排除经验来改善您目前的预防保养工作,使现有问题再发率降至最低。
• 规则五∶养成记录的好习惯。一个好记录是成功地进行故障排除的关键。

(完整版)HPLC谱图常见问题原因汇总及解决方式

HPLC谱图常见问题原因及解决方式汇总液相色谱系统的许多问题都可以在谱图上反映出来。

其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。

对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键所在。

A.峰拖尾
B.峰前延
C.峰分叉
D.峰变形
E．早出的峰变形
F．早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
G．K’增加时，脱尾更严重
H．酸性或碱性化合物的峰拖尾
I．额外的峰
J.保留时间波动
K.保留时间不断变化
L.基线漂移
M.基线噪音（规则的）
N.基线噪音（不规则的）
O.宽峰
P.分离度降低
Q.所有的峰面积都太小
R.所有峰面积都太大。

得到完美的色谱图要跳过哪些坑？HPLC谱图常见故障及解决方法!

得到完美的色谱图要跳过哪些坑？ＨＰＬＣ谱图常见故障及解决方法！!"#$#%&%%%"%&%%%!%&%%%$%&%%%'()*"%&%%%%&%%%"%&%%%$%&%%%+%&%%%,%&%%%#%%&%%%'-.液相色谱中的许多问题都能在谱图上反映出来，其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。

对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

１　拖尾峰（１）筛板阻塞，柱子两头的过滤筛板如果堵塞，样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟，使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。

需要通过反冲色谱柱，或者更换筛板。

（２）色谱柱塌陷，是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失，不能对物质形成保留，使得物质不在固定相上保留而随流动相流出，但是又还有一点柱效，因此形成拖尾。

需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱。

（３）有污染，即样品不在同一起跑线起跑，从后面开始跑得到达终点稍晚，表现出拖尾。

更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱１ｈ以上，以冲洗柱子。

（４）流动相ＰＨ值选择错误，如某ＰＨ下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡，离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。

调节ＰＨ值可抑制分子解离，改善拖尾，对于碱性化合物，相对较低的ＰＨ值更有利于得到对称峰。

２　前沿峰（１）样品过载，被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来，形成前沿峰。

降低样品含量。

（２）样品溶剂选择不恰当，当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰，例如，在反相色谱中用已腈做样品溶剂，而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。

选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。

（３）色谱柱损坏，色谱柱柱效损失，不能对物质形成保留。

更换色谱柱。

（４）在大峰前有小峰出现，假象前沿峰，即大峰前包埋了没有分开的小峰。

HPLC谱图常见问题原因汇总及解决方式(2021年整理精品文档)

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HPLC谱图常见问题原因及解决方式汇总液相色谱系统的许多问题都可以在谱图上反映出来。

其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。

对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键所在。

A.峰拖尾
C。

峰分叉
E．早出的峰变形
F．早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
G．K’增加时，脱尾更严重
H．酸性或碱性化合物的峰拖尾
I．额外的峰
J.保留时间波动
K.保留时间不断变化
L.基线漂移
M。

基线噪音（规则的）
N.基线噪音（不规则的）
O。

宽峰。

分离度降低
P
Q.所有的峰面积都太小
R。

所有峰面积都太大。

HPLC色谱分析中常见问题

泵头上滤芯，保护柱等
2020/10/19
6
进样阀
流路检查顺序
泵
预
柱
分
析
柱
检测器
2020/10/19
7
柱效低的原因频繁更换流动相组成——加速柱效降低
最好一根色谱柱使用的流动相成分和pH值相近，如始终在酸性条件下或碱性条件下工作
色谱柱的选择不合适或使用时间久
更换色谱柱（厂家，型号）
进样操作不当
导致进样后，各组分出峰忽而正常，忽而异常，且峰位置发生明显变化
更换主动阀阀芯，可消除上述症状
2020/10/19
13
异常情况
主
动
阀故
异常压力线
障
对
异常情况
色
谱分
异常压力线
离影
正常情况
响
2020/10/19
正常压力线
14
解决办法
使用保护柱可延长分析柱寿命
每天实验后应用强溶剂（例甲醇-水等，至少2030倍柱体积的量）冲洗色谱柱
并定期进行保养，以低流速的强溶剂较长时间冲洗色谱柱
2020/10/19
4
样品纯度差——有微小的颗粒堵塞管路
可用滤膜过滤样品后再进样样品浓度高——连续进样，造成过载
如果样品吸收度不是太低，使样品浓度在 0.5mg/ml以下较适宜
24. 432
70
60
2. 357
进样量10µL
例：三七提取物以甲醇为溶剂，流动相：乙腈-水,梯度洗脱，乙腈初始浓度20%
2020/10/19
50
正常
40
30
20. 466 25. 208
2. 096 3.2.3465902. 953 3. 895 5. 152

HPLC常见问题

HPLC常见问题HPLC常见问题和对策—对实验⼈员⼗分有⽤HPLC⾊谱常见问题1.⽤HPLC进⾏分析时保留时间有时发⽣漂移，有时发⽣快速变化，原因何在？如何解决？2.液相⾊谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？5.我最近更换了另⼀种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不重现，为什么？6.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过⾼，请问为什么？7.⾊谱双峰产⽣的可能及判断和处理8.⾊谱柱中的流动相会排⼲吗？9.使⽤PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意什么问题？10.液相⾊谱梯度洗脱中柱温的影响有那些？11.为何基线会漂移12.规则的基线噪⾳是如何产⽣的13.不规则的基线噪⾳是如何产⽣的14.保留时间漂移的故障排除15.为何出现肩峰或分叉？16.为何出现⿁峰？17.为何出现峰拖尾？18.为何出现峰展宽？19.除了流速外，还有哪些因素能引起压⼒改变？20.什么是强溶剂、弱溶剂？21.怎样才会使峰位发⽣重排？22.除了在线脱⽓常⽤的实验室脱⽓⽅式还有哪些？23.评价⼀个⾊谱柱的最基本指标有那些？24.什么是时间常数？25.为什么在实验过程中有时会出现倒峰？26.为何会出现“胖”峰和平头峰？怎样避免？27.什么是次级保留效应？28.前延峰的发⽣及处理？29.峰变宽的原因？30.柱平衡慢的常见原因有哪些？31.⽤内标法实验时对内标物的要求有哪些？32.管⼦切割与安装注意事项？33.什么是HPLC的“⽆限直径效应”？34.如何评价⼀台检测器？35.如何简单判断⽐例阀是否内漏？1.⽤HPLC进⾏分析时保留时间有时发⽣漂移，有时发⽣快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：①温度控制不好，解决⽅法是采⽤恒温装置，保持柱温恒定②流动相发⽣变化，解决办法是防⽌流动相发⽣蒸发、反应等③柱⼦未平衡好，需对柱⼦进⾏更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发⽣变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定②泵中有⽓泡，可通过排⽓等操作将⽓泡赶出。

HPLC常见故障排除及维护

溶剂过滤头
废液
压力传感器
左泵头
参比阀
右泵头
抽液阀
HPLC 常见故障因素（进样器）
7725i
HPLC 常见故障因素（7725i）
PN:201900119
HPLC 常见故障因素（7725i）
进样请选用型号正确并完好的注射器
HPLC 常见故障因素（7725i）
√
X
请正确安装手动进样器！
HPLC 常见故障因素（7725i）
接触面处有杂质
宝石球与球座不能紧密接触
形成了液体的反向泄漏
如何减少单向阀的故障
流动相一定要用0.45μ m的滤膜过滤。避免使泵长期不工作，使流动相干枯。避免使用高粘度的流动相。使用带缓冲盐的流动相后，一定要充分清洗。定期对流动相过滤头进行清洗。
吸入单向阀故障的排除
带Techtron保护柱的 Zorbax 卡套柱
带整体过滤片的 Techtron 保护柱
制备样品: 流动相
真正的环境样品
样品的溶解性溶剂强度体积效应
Contaminant
微粒强保留的组分
过滤样品，以确保其不含有固体微粒用流动相或比流动相极性较弱的溶剂溶解样品进样的样品体积应尽量小
HPLC 常见故障因素（化学品）
化学品的影响
• 已损坏的保护柱、色谱柱 • 所用溶剂、试剂的品质 • 化学品使用不当带来的影响 • 样品前处理方法不当带来的影响 • 实验前的准备和结束后的收尾工作
友情提示：保持良好的色谱柱使用习惯
在使用前过滤溶剂完全润湿在运输中变干的色谱柱了解溶剂对样品的溶解性及分离的影响对含有保留性较强的杂质组分的样品要进行预处理清除柱填料的局限性