植物生理学实验-叶绿素a b测定
植物生理学实验 2
氧化态DCIP在620 nm有最大吸收。故以 3 号管为空白，测定 1，2 号 管的 OD620 值。加入DCIP后立即测定，此为时间为0的 OD620 起始值。然 后每光照 0.5 min 测定一次，共 5～6 次。记录结果。 5、作业 分别对 1、2 管号的测定值，以△OD620 /min为纵坐标，时间（min）为 横坐标作图，并对两条曲线进行比较分析。
3、叶绿体色素理化性质的鉴定与结果分析（p.54-55）
①叶绿素荧光现象观察：取提取液（2 ml）于一支试管中，比较在入 射光和反射光下颜色的差异，并解释之。
②光对叶绿素的破坏作用：2 支试管盛取提取液少许（0.5 ～1 ml）分 别置于强光和黑暗下，实验结束时，观察其颜色的变化，并解释之。
③铜代反应：取提取液少许（1 ml）于一支试管内，逐滴加入浓 HCl 至提取液变成褐色，然后加入CuAC2（醋酸铜）晶体少许，并于酒精 灯上加热，再观察颜色变化，并解释之。
（2）混合组分的OD值等于各组分在此波长下的OD值之和，则 OD663=ka-663 · Ca+kb-663 · Cb OD645=ka-645 · Ca+kb-645 · Cb 代入已知 k值，经单位换算可得： Ca=12.7 OD663－2.69 OD645 Cb=22.9 OD645－4.68 OD663 （mg/L） （3 ） （4） （1） （2）
生命科学学院 龙云
2、材料 菠菜（叶）
3、操作步骤（一组/ 2人）
菠菜叶（去主脉）0.5 g → 加少许CaCO3，石英砂 → 丙酮 2 ml → 研磨成匀浆→ 80 %丙酮 8 ml → 离心（3 000 rpm, 2 min） → 上清用80 % 丙酮定 容至 20 ml →取 1 ml + 80 % 丙酮 4 ml → 比色 （空白：80 %丙酮）
植物生理学实验
实验名称：植物含水量的测定实验目的：掌握测定植物组织的含水量的方法实验原理：利用水遇热蒸发为水蒸汽的原理，可用加热烘干法来测定植物组织中的含水量。
植物组织含水量的表示方法，常以鲜重或干重 % 表示，有时也以相对含水量 % （或称饱和含水量 % ）表示。
后者更能表明它的生理意义。
实验材料与设备：（一）材料：植物鲜组织。
（二）仪器设备：天平（感量1/1000g）；烘箱；干燥器；剪刀；搪瓷盘；塑料袋；纸袋；吸水纸等。
实验步骤：⒈鲜重测定迅速剪取植物材料，装入已知重量的容器（或塑料袋）中，带入室内，用分析天平称取鲜重（FW）。
⒉干重测定提前把烘箱打开，温度升至100~105℃。
把称过鲜重的植物材料装入纸袋中，放入烘箱内，100~105℃杀青10min，然后把烘箱的温度降到70~80℃左右，烘至恒重。
取出纸袋和材料，放入干燥器中冷却至室温，称干重（DW）。
⒊饱和鲜重测定将称过鲜重的植物材料浸入水中，数小时后取出，用吸水纸吸干表面水分，立即称重；再次将材料放入水中浸泡一段时间后，再次取出，吸干表面水分，称鲜重，直到两次称重的结果基本相等，最后的结果即为饱和鲜重（SFW）。
若事先已知达到水分饱和所用的时间，则可一次取得饱和鲜重的测量定值。
⒋取得以上数据后，按公式计算组织含水量、相对含水量。
思考题：测定饱和含水量时，植物材料在水中浸泡时间过短或过长会出现什么问题？实验名称：植物组织水势的测定（小液流法）实验目的：学会用小液流法测定植物组织的水势实验原理：将植物组织分别放在一系列浓度递增的溶液中，当找到某一浓度的溶液与植物组织之间水分保持动态平衡时，则可认为此植物组织的水势等于该溶液的水势。
因溶液的浓度是已知的，可以根据公式算出其渗透压，取其负值，为溶液的渗透势（ψπ），即代表植物的水势（ψw）。
ψw＝ψπ＝－P＝－iCRT实验材料与设备：（一）材料：小白菜或其它作物叶片（二）仪器设备：1.带塞青霉素小瓶12个；2.带有橡皮管的注射针头；3.镊子；4.打孔器5.培养皿。
植物生理学实验-叶绿体色素的定量测定
植物生理学实验
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2、测定光密度
以96%乙醇为空白，比色测定3份样品的光密度；
波长665nm、649nm和470nm
B126室：分光光度计 型号：22PC
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分光光度计的使用：？
功能键
显示屏
样品室
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波长调节旋钮
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测定溶液加到 比色杯的2/3初
空白对准光路
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植物生理学实验
叶绿体色素在不同溶剂中的吸收光 谱有差异。在使用不同溶剂提取色素时， 计算公式有所不同。
本实验以 96％乙醇为例。
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96％乙醇提取
已知叶绿素a、b的96%乙醇提取液在红光 区的最大吸收峰：a＝665nm；b＝649nm
根据有色物质的加和性，建立方程组： D665=Kaλ665 Ca+ Kbλ665 Cb D649=Kaλ649 Ca+ Kbλ649 Cb
Ka645＝ 16.75 Kb645＝ 45.60
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植物生理学实验
根据加和性原则列出以下关系式： D663 = 82.04Ca+9.27Cb D645 = 16.75Ca+45.60Cb
解方程组得：
Ca (mg/L)= 12.72D663 – 2.59D645 Cb (mg/L)= 22.88D645 – 4.67D663 Ca与Cb相加即得叶绿素总量（CT）： CT (mg/L)= Ca + C整b理课=件20.29D645 + 8.05D663
Enter 输入键，接受当前的状 态或进行测定；
Mode 功能键，按该键显示不 同的功能菜单；
2、测定
叶绿素a和叶绿素b的快速鉴定
叶绿素a和叶绿素b的快速鉴定目录一、内容概括 (2)1. 叶绿素简介 (2)2. 叶绿素a与叶绿素b的重要性 (3)二、实验原理 (4)1. 叶绿素a与叶绿素b的光谱特性 (5)2. 鉴定原理 (5)三、材料与方法 (6)1. 实验材料 (7)样品来源 (8)样品处理 (8)2. 实验仪器与试剂 (9)萃光仪 (10)分光光度计 (10)缓冲液 (11)3. 实验步骤 (12)样品提取 (12)测定波长 (13)重复测定 (14)四、结果分析 (15)1. 叶绿素a与叶绿素b的吸收光谱图 (16)2. 数据处理与结果解读 (17)3. 结果讨论 (18)五、结论 (20)1. 快速鉴定叶绿素a与叶绿素b的效果 (21)2. 实验的局限性及改进方向 (21)一、内容概括本文档旨在介绍叶绿素a和叶绿素b的快速鉴定方法。
内容将涵盖叶绿素a和叶绿素b的基本性质、特点及其在生物体系中的重要性。
本文还将详细阐述快速鉴定叶绿素a和叶绿素b的流程和步骤，包括实验前的准备、实验操作的具体步骤以及结果的解析。
还将提及一些可能出现的问题以及解决策略，以确保实验的准确性和可靠性。
本文档旨在为研究人员、学生及叶绿素相关领域的从业者提供一种便捷、高效的鉴定方法，以推动相关领域的研究进展。
1. 叶绿素简介又称植物色素，是植物中一类重要的绿色色素，广泛存在于高等植物、藻类和某些微生物中。
它们是植物进行光合作用的关键色素，通过吸收和转化光能，将二氧化碳和水转化为有机物质，并释放氧气。
叶绿素的结构中包含一个镁原子，其骨架由两个吡咯环和一个碳链组成，这使得叶绿素具有特定的光谱特性，能够在特定波长下吸收光。
叶绿素a和叶绿素b是叶绿素中最主要的两种类型，它们在结构上有所不同。
叶绿素a的分子结构中除了镁原子外，还包含一个长链的碳链和一个醛基，这使得它呈现出蓝绿色的特征。
而叶绿素b的分子结构中则不含醛基，因此它呈现出黄绿色。
尽管这两种叶绿素在颜色上有所差异，但它们在光合作用中的作用却是相同的。
植物生理学实验五叶绿素a 、b 含量的测定(分光光度法)
————————————
切取叶面总和（dm2）×照光时数（h）
实验原理
改良半叶法是将植物对称叶片的一部分遮光或取 下置于暗处，另一部分则留在光下进行光合作用， 过一定时间后，在这两部分叶片的对应部位取同 等面积，分别烘干称重。因为对称叶片的两对应 部位的等面积的干重，开始时被视为相等，照光 后叶片重量超过暗中的叶重，超过部分即为光合 作用产物的量，并通过一定的计算可得到光合作 用强度。
3. 剪取样品：按编号次序分别剪下对称叶片 的一半（主脉不剪下）。按编号顺序夹于 湿润的纱布中，贮于暗处，过六个小时左 右，在依次剪下另外半叶，按同样的编号 夹于湿润的纱布中（两次剪叶的速度应尽 量保持一致。）
实验步骤
4. 称重比较：将叶片对应部位重叠在一起，用 打孔器均匀打相同数目的孔（50），分别置 于光照及黑暗的两个称量皿中，80-90℃下 烘干至恒重，在分析天平上称重比较。
实验器材和试剂
植物材料: 生长的榕树叶
实验器材：分析天平、烘箱、剪刀（自 备）、称量瓶、打孔器、纱布、棉签。
实验试剂：三氯乙酸（5 %） 。
实验步骤
1. 选择测定样品：选择生长旺盛常绿向阳的 榕树叶片20片。用小纸牌编号。
2. 叶子基部处理：采用5%三氯乙酸涂在叶 柄，以阻断光合产物的输出。
韩山师范学院生物系
植物生理学实验
实验五 叶绿素a 、b 含量的测定 （分光光度法）
实验器材和试剂
植物材料: 自选
实验器材：分光光度计、台天平、剪刀、 研钵、漏斗、移液管、量筒、10 mL容 量瓶。
实验试剂：80% 丙酮、 碳酸钙、 石英 砂、 水、 丙酮。
实验方法和步骤
不同环境条件下植物叶绿素a、b含量的比较
一、实验课题名称：不同环境条件下植物叶绿素a、b含量的比较二、选题背景或文献综述：《植物生理学实验指导》（第四版）、《植物生理学》（第六版）、上网查阅相关资料阴生植物也称“阴性植物”，是在较弱的光照条件下生长良好的植物，但并不是阴生植物对光照强度的要求越弱越好，而是必须达到阴生植物的补偿点，植物才能正常生长，阳生植物也称“阳性植物”，光照强度对植物的生长发育及形态结构的形成有重要作用，在强光环境中生长发育健壮，在阴蔽和弱光条件下生长发育不良的植物称阳性植物，这类植物要求全日照，并且在水分、温度等条件适合的情况下，不存在光照过强的问题。
文档来自于网络搜索阳生植物和阴生植物的区别:关于光的饱和点和补偿点光是光合作用的能量来源，光照强度直接影响光合速率，在其它条件都适宜的情况下，在一定范围内，光合速率随光照强度提高而加快，当光照强度高到一定数值后，光照强度再提高而光合速率不再加快，这种现象叫光饱和现象。
开始达到光饱和现象的光照强度称为光饱和点，在光饱和点以下，随着光照强度减弱，光合速率减慢，当减弱到一定光照强度时，光合作用吸收二氧化碳量与呼吸释放二氧化碳的量处于动态平衡，这时的光照强度称为光补偿点。
此时植物制造有机物量和消耗有机物量相等，不同类型植物的光饱和点和补偿点是不同的，阳性植物的光饱和点和补偿点一般都高于阴性植物。
结构和特性的区别:阴生植物的叶片的疏导组织比阳生植物稀疏，以叶绿体来说，阳生植物有较大的基粒，基粒片层数目多的多，叶绿素含量也高，阴生植物在较低的光照条件下充分的吸收光线，叶绿素a/叶绿素b的比值小，能够强烈的利用蓝紫光，阳性植物叶片小而厚，表面具蜡质或绒毛，叶脉密，单位面积内气孔多，叶绿素含量高，体内含盐分多，渗透压高，可以抗高温干旱，阳生植物的气孔一般在叶片下表皮分布的数量多于上表皮，这样可以避免阳光直晒而减少水分散失，阳生植物的呼吸速率高于阴生植物。
区分阳生植物与阴生植物，主要是根据植物对光照强度需要的不同，阳生植物要求充分直射日光才能生长或生长良好，阴生植物适宜于生长在荫蔽环境中，它们在完全日照下反而生长不良或不能生长，阳生植物和阴生植物之所以能适应不同光照，是与它们的生理特征和形态特征不同有关，以光饱和点来说，阳生植物的光饱合点是全光照（即全部太阳光照）的100％，而阴生植物是全光照的10％～50％。
不同环境条件下植物叶绿素a、b含量比较
一、实验课题名称：不同环境条件下植物叶绿素a、b含量的比较二、选题背景或文献综述：《植物生理学实验指导》（第四版）、《植物生理学》（第六版）、上网查阅相关资料阴生植物也称“阴性植物”，是在较弱的光照条件下生长良好的植物，但并不是阴生植物对光照强度的要求越弱越好，而是必须达到阴生植物的补偿点，植物才能正常生长，阳生植物也称“阳性植物”，光照强度对植物的生长发育及形态结构的形成有重要作用，在强光环境中生长发育健壮，在阴蔽和弱光条件下生长发育不良的植物称阳性植物，这类植物要求全日照，并且在水分、温度等条件适合的情况下，不存在光照过强的问题。
阳生植物和阴生植物的区别：关于光的饱和点和补偿点光是光合作用的能量来源，光照强度直接影响光合速率，在其它条件都适宜的情况下，在一定范围内，光合速率随光照强度提高而加快，当光照强度高到一定数值后，光照强度再提高而光合速率不再加快，这种现象叫光饱和现象。
开始达到光饱和现象的光照强度称为光饱和点，在光饱和点以下，随着光照强度减弱，光合速率减慢，当减弱到一定光照强度时，光合作用吸收二氧化碳量与呼吸释放二氧化碳的量处于动态平衡，这时的光照强度称为光补偿点。
此时植物制造有机物量和消耗有机物量相等，不同类型植物的光饱和点和补偿点是不同的，阳性植物的光饱和点和补偿点一般都高于阴性植物。
结构和特性的区别:阴生植物的叶片的疏导组织比阳生植物稀疏，以叶绿体来说，阳生植物有较大的基粒，基粒片层数目多的多，叶绿素含量也高，阴生植物在较低的光照条件下充分的吸收光线，叶绿素a/ 叶绿素b 的比值小，能够强烈的利用蓝紫光，阳性植物叶片小而厚，表面具蜡质或绒毛，叶脉密，单位面积内气孔多，叶绿素含量高，体内含盐分多，渗透压高，可以抗高温干旱，阳生植物的气孔一般在叶片下表皮分布的数量多于上表皮，这样可以避免阳光直晒而减少水分散失，阳生植物的呼吸速率高于阴生植物。
区分阳生植物与阴生植物，主要是根据植物对光照强度需要的不同，阳生植物要求充分直射日光才能生长或生长良好，阴生植物适宜于生长在荫蔽环境中，它们在完全日照下反而生长不良或不能生长，阳生植物和阴生植物之所以能适应不同光照，是与它们的生理特征和形态特征不同有关，以光饱和点来说，阳生植物的光饱合点是全光照（即全部太阳光照）的100 ％，而阴生植物是全光照的10 %〜50 %。
植物生理学实验--
v 用分光光度计分别测定在665nm、649nm的吸光值， 然后计算出提取液中叶绿素a和叶绿素b的浓度。
三、实验器材
v 材料：菠菜叶片。 v 仪器：分光光度计，电子天平，研钵，漏斗，剪刀，
植物生长状况记载表
六、注意事项
v 1．注意保持pH在～之间，如变动较大可用稀酸和 稀碱进行调整。
v 2．经常补充培养瓶内由于植物蒸腾造成的水分损 失，每周注意加蒸馏水。
v 3．实验前记录幼苗发育状态（根长、茎、叶片大 小、颜色等），实验期间随时记录植株生长发育情 况和病变。
1、缺氮。番茄缺氮时，植株瘦弱，叶色淡绿色或黄绿色，叶小而薄，叶脉由 黄绿色变为深紫色，茎秆变硬并呈深紫色。花蕾变为黄色，易脱落，果小而 少。
别在波长663 nm、645 nm 下测定吸光度； v 如果用95％乙醇提取，则用95％乙醇为空白，分别
在波长665 nm、649 nm下测定吸光度。
五、实验结果
Ca(mg/L)= 665－649 Cb(mg/L)= 649－665 CT (mg/L)= Ca+ Cb
叶绿素含量＝(色素的浓度（ CT )×提取液体积×稀释倍数)/样品鲜重
七、思考题
v 1.就你所知还有哪些快速方法，可以测定种子的发 芽率 ?
v 2.试比较 TTC 法、红墨水法，测定的结果是否相 同 ? 为什么 ?
实验九 植物生长素类物质生理 效应的测定
一、实验目的
v 掌握测定激素生理效应的方法。 v 理解植物激素对各器官的不同效应。
二、实验原理
v 生长素及人工合成的类似物质（NAA、IAA、萘乙酸 钠等）对植物生长有很大影响，但不同浓度的作用 不同，一般来说低浓度表现有促进效应，高浓度引 起抑制作用。不同的植物或同一植物的不同器官， 对生长素的浓度反应都有差异。
《植物生理学实验》实验03 叶绿素含量的测定
类胡萝卜素→吸收兰紫 光，不吸收红光等长波 长的光 叶绿素→吸收红光、兰 紫光
645nm
在测定叶绿素a、叶绿素 b时，为了排除类胡萝卜 素的干扰，所用单色光 的波长选择叶绿素在红 光区的最大吸收峰。
• 如果我们在645nm或663处用分光光度计检测得到溶液OD值（测量 数据，已知数据），根据吸光度的加和性，我们可得到 OD663= OD663叶绿素a + OD663叶绿素b OD645= OD645叶绿素a + OD645叶绿素b
• 代入公式OD = K × L × C OD663= K663叶绿素a × L×C叶绿素a + K663叶绿素b × L × C叶绿素b OD645= K645叶绿素a × L×C叶绿素a + K645叶绿素b × L × C叶绿素b
叶绿素a和叶绿素b的
波长 （nm）
80%丙酮溶液，当浓度在
663
色素的提取
取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块→ →称取0.5g放入研钵中→ →加纯 丙酮5mL，少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆→ →再加80％丙酮5mL → →将 匀浆转入离心管→ →用适量80%丙酮洗涤研钵，一并转入离心管→ →离心后 弃沉淀→ →上清液用80％丙酮定容至20mL
测定吸光值
• 代入K值， 1g/L时，比吸收系数k值
645
叶绿素a 82.04 16.75
OD663= 82.04 × L×C叶绿素a + 9.27× L × C叶绿素b OD645= 16.75× L×C叶绿素a + 45.6× L × C叶绿素b
K值 叶绿素b 9.27 45.60
• 代入L值，比色杯的厚度为1cm OD663= 82.04×C叶绿素a + 9.27 × C叶绿素b OD645= 16.75×C叶绿素a + 45.6 × C叶绿素b
植物生理学实验指导
植物生理学实验指导实验一叶绿体色素提取分离与理化性质及含量测定一、实验目的和意义绿色植物的光合作用是在叶绿体中的叶绿体色素中进行的，了解叶绿体色素的组成、性质及测定对于理解光合作用的本质很有帮助。
因此，测定叶绿素含量便成为研究光合作用与氮代谢必不可少的手段，在作物育种、科学施肥、看叶诊断中有着广泛的应用二、实验原理植物叶绿体色素是吸收太阳光能，进行光合作用的重要物质。
它一般由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。
色素分离的方法有多种，纸层析是最简便的一种。
当溶剂（有机推动剂）不断从纸上流过时，由于混合物（叶绿素提取液）中各种成分在固定相（滤纸纤维素所吸附的水分）和流动相（有机推动剂）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。
叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。
叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。
叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。
叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。
叶绿素中的镁可以被氢离子所取代而成褐色的去镁叶绿素。
去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。
测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度D，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
Ca=12.7D663–2.69D645（3）Cb=22.9D645–4.68D663（4）Ck=4.7D440-0.27Ca+b三、实验材料和器材1、实验材料菠菜或白菜叶片2、器材：722型分光光度计、电子天平、量筒、研钵、剪刀、漏斗、滤纸、移液管（1mL）、试管及试管架、洗耳球、酒精灯、电筒等。
不同环境条件下植物叶绿素a、b含量地比较
一、实验课题名称：不同环境条件下植物叶绿素a、b含量的比较二、选题背景或文献综述：《植物生理学实验指导》（第四版）、《植物生理学》（第六版）、上网查阅相关资料阴生植物也称“阴性植物”，是在较弱的光照条件下生长良好的植物，但并不是阴生植物对光照强度的要求越弱越好，而是必须达到阴生植物的补偿点，植物才能正常生长，阳生植物也称“阳性植物”，光照强度对植物的生长发育及形态结构的形成有重要作用，在强光环境中生长发育健壮，在阴蔽和弱光条件下生长发育不良的植物称阳性植物，这类植物要求全日照，并且在水分、温度等条件适合的情况下，不存在光照过强的问题。
阳生植物和阴生植物的区别：关于光的饱和点和补偿点光是光合作用的能量来源，光照强度直接影响光合速率，在其它条件都适宜的情况下，在一定范围内，光合速率随光照强度提高而加快，当光照强度高到一定数值后，光照强度再提高而光合速率不再加快，这种现象叫光饱和现象。
开始达到光饱和现象的光照强度称为光饱和点，在光饱和点以下，随着光照强度减弱，光合速率减慢，当减弱到一定光照强度时，光合作用吸收二氧化碳量与呼吸释放二氧化碳的量处于动态平衡，这时的光照强度称为光补偿点。
此时植物制造有机物量和消耗有机物量相等，不同类型植物的光饱和点和补偿点是不同的，阳性植物的光饱和点和补偿点一般都高于阴性植物。
结构和特性的区别：阴生植物的叶片的疏导组织比阳生植物稀疏，以叶绿体来说，阳生植物有较大的基粒，基粒片层数目多的多，叶绿素含量也高，阴生植物在较低的光照条件下充分的吸收光线，叶绿素a/叶绿素b的比值小，能够强烈的利用蓝紫光，阳性植物叶片小而厚，表面具蜡质或绒毛，叶脉密，单位面积内气孔多，叶绿素含量高，体内含盐分多，渗透压高，可以抗高温干旱，阳生植物的气孔一般在叶片下表皮分布的数量多于上表皮，这样可以避免阳光直晒而减少水分散失，阳生植物的呼吸速率高于阴生植物。
区分阳生植物与阴生植物，主要是根据植物对光照强度需要的不同，阳生植物要求充分直射日光才能生长或生长良好，阴生植物适宜于生长在荫蔽环境中，它们在完全日照下反而生长不良或不能生长，阳生植物和阴生植物之所以能适应不同光照，是与它们的生理特征和形态特征不同有关，以光饱和点来说，阳生植物的光饱合点是全光照（即全部太阳光照）的100 %, 而阴生植物是全光照的10 %〜50 %。
大学植物生物学实验——叶绿素含量的测定
植物生物学实验(二) 植物生理学基础与综合实验
实验五、 实验五、叶绿体含量的 测定（分光光度法） 测定（分光光度法）
一，实验目的与要求
三、实验步骤
• 提取：叶片洗净、吸干、称重 称重后于研钵中加入 5mL 95%乙醇、少许石英砂和碳酸钙，研磨匀 浆后过滤，再用5mL 95%乙醇冲洗滤渣，定容 混匀； 到10mL，混匀 • 测定：充分过滤后，以95%乙醇调零，测定叶 绿素提取液在649 649nm和664 664nm处的光吸收值。 • 计算： 叶绿素a：C=13.95A664-6.88A649 叶绿素b：C=24.96A649-7.32A665
• 掌握叶绿素a、b含量测定的方法； • 了解不同生境下植物的叶绿素含量和叶 绿素a、b比值。
二、实验材料与试剂
• 95%乙醇。 • 不同生境下的植物叶片。
三、实验原理
• 叶绿素a、b的吸收光谱
• 叶绿素a、b乙醇提取液的光吸收总 和在649nm 665nm处各有一峰值。 649nm和665nm •Lambert-Bear定律： A=nCL n=摩尔消光系数； C=溶液浓度； L=比色杯内径。 •吸光度的相加性 吸光度的相加性： 吸光度的相加性 混合液在某一波长下的吸光度等于各组分 在相应波长下吸光度的总和。
•计算叶绿素含量
叶绿素a（mg/gFW)=? 叶绿素b（mg/gFW)=? 叶绿素a：叶绿素b=?
四、数据分析
• 统计植物生境与叶绿素含量、叶绿素a： b值之间的关系，并分析其生理意义；
பைடு நூலகம்
植物叶绿素、电导率以及一些酶的测定
叶绿素含量的测定植物体内的叶绿素在代谢过程中一方面合成，一方面分解，不断地更新。
在环境条件不适宜时，叶绿素的合成就受到影响；而分解过程仍然进行，植物的光合作用就会受到抑制。
因此，植物体内叶绿素含量的多少反映了植物抗逆（包括抗旱）能力的大小。
叶绿素含量采用比色法测定，测定方法参照《植物生理学实验》（气象出版社，1995）所介绍的方法。
本实验中，欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b的含量，只需测定该提取液在两个特定波长下的光密度D值，并根据叶绿素a、b在该波长下的比吸收系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、b时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光选择叶绿素在红光区（550nm）的最大吸收峰。
已知叶绿素a、b在1：1的乙醇-丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的系数分别为82.04和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，根据加和性原则列出以下关系式：D663=82.04Ca+9.27Cb (3-1)D645=16.75Ca+45.06Cb (3-2)式（3-1）、（3-2）中的D663和D645为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时的光密度，Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度，以mg/dm3为单位。
解方程组（3-1）、（3-2），得：Ca=12.72D663-2.59D645 (3-3)Cb=22.88D645-4.67D663 (3-4)将Ca与Cb相加即得叶绿素含量CTCT=Ca+Cb=20.29D645+8.05D663 (3-5)本实验中叶绿素含量测量选取与测定光合作用相同位置和发育阶段的叶片0.2g，剪碎后加入1：1的乙醇-丙酮混合液中，定容至25mL，在黑暗中常温浸提72小时。
然后将提取液摇匀，倒入干净的比色皿中，用分光光度计（UV-3150,Shimadzu Co.,Japan）分别测量其在663nm，645nm的吸光度值D663，D645，按照Arnon法的修正公式计算。
植物生理学实验报告叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定
实验报告课程名称：植物生理学及实验实验类型：探索、综合或验证实验项目名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定一、实验目的和要求掌握植物中叶绿体色素的提取分离和性质鉴定、定量分析的原理和方法二、实验内容和原理以青菜为材料，提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量分析。
原理如下：1.叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂.常用95%的乙醇或80%的丙酮提取。
2.皂化反应。
叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应，形成绿色的可溶性叶绿素盐，就可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开。
3.取代反应。
在酸性或加温条件下，叶绿素卟啉环中的Mg2+可依次被H+和Cu2+取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。
H+取代Mg2+, Cu2+ (Zn2+)取代H+。
4.叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光。
透射光下呈绿色，反射光下呈红色。
5.光谱分析。
叶绿素吸收红光和兰紫光，红光区可用于定量分析，其中645和663用于定量叶绿素a,b及总量，而652可直接用于总量分析。
三、主要仪器设备1.天平（万分之一）、可扫描分光光度计（UV-1240）、离心机2.研具、各种容（量）器、酒精灯等四、操作方法与实验步骤1.定性分析a)称取鲜叶3-5g，并逐步加入乙醇15ml，磨成匀浆取匀浆过滤，并倒入三角瓶中，同时观察荧光现象。
b)取三角瓶中约1ml溶液于小试管。
加KOH数片剧烈摇均，加石油醚1ml和HO 1ml分层后观察。
2c)取代反应：加醋酸约1ml，取1/2加醋酸铜粉加热。
观察颜色变化。
2. 叶绿素和类胡萝卜素的吸收光谱测定：a) 取皂化反应的上层黄色石油醚溶液→稀释（470nm OD 0.5-1） b) 取下层绿色溶液（留1/3），反复用石油醚粹取,直到无类胡萝卜素,离心得叶绿素(盐)→稀释（663nm OD 0.5-1）c) 两者在400-700nm 处扫描光谱，分别测定类胡萝卜素和叶绿素的吸收峰3. 叶绿素定量分析：鲜叶0.1g ，加1.9mlH 2O ，磨成匀浆，取2份0.2ml 加95%酒精4.8ml,摇匀，8000转离心5min,上清液在645，652，663测定OD ，计算Chla,Chlb 和Chl 总量的值。
叶绿素等的测定方法
叶绿素等的测定方法叶绿素是存在于植物和藻类细胞中的一种绿色色素，它在光合作用中起着关键作用。
因此，测定叶绿素及其相关的测定方法对于研究植物生理学、光合作用机理以及环境生态学等方面具有重要意义。
下面将介绍几种常用的叶绿素测定方法。
1.全光谱扫描法全光谱扫描法可以用于测定叶绿素a、叶绿素b以及类胡萝卜素的含量。
该方法基于不同波长下叶绿素和类胡萝卜素的吸光度差异，通过测量样品在300-800nm范围内的吸光度来确定其含量。
全光谱扫描法准确度较高，但需要较贵的设备。
2.分光光度法分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法。
该方法基于叶绿素和类胡萝卜素在不同波长下的吸光度差异，通过选择波长进行测定。
常用的波长包括470nm、645nm和663nm等。
该方法简单、快速，并且可以用于高通量样品测定。
3.乙醇提取法乙醇提取法是一种常用的叶绿素提取和测定方法。
该方法将叶样品放入乙醇等有机溶剂中，通过溶剂提取叶绿素并使其溶于溶剂中，然后使用分光光度法或高效液相色谱法等测定溶液中叶绿素的含量。
乙醇提取法可以快速提取样品中的叶绿素，适用于大量样品的测定。
4.高效液相色谱法高效液相色谱法是一种高精度的叶绿素测定方法。
该方法基于叶绿素在特定条件下在高效液相色谱柱中的分离和检测，通过测定样品中叶绿素的峰面积或峰高来确定其含量。
高效液相色谱法准确度高，但需要较为复杂的仪器和操作技术。
除了以上介绍的常用方法外，还有一些新兴的测定方法不断涌现，例如荧光光谱法、激光诱导荧光法、红外反射法等。
这些新方法在提高测定精度、扩展测定范围和降低测定成本方面具有优势，正在逐渐得到广泛应用。
综上所述，叶绿素测定方法多种多样，每一种方法都有其特点和适用范围。
在选择合适的测定方法时，需要考虑实验目的、样品种类、所需精度、设备条件和实验操作难易程度等因素，以确定最适合的测定方法。
植物生理学实验-叶绿体色素的定量测定
分光光度计的狭缝较宽，分光性能差，单色光的 纯度低（±5～7nm），测定的叶绿素a的测定值偏低， 叶绿素b值偏高，a/b比值严重偏小。
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比色测定步骤
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三、实验材料：
菠菜叶片 材料分：
新生叶（幼叶），功能叶 ； 一组测定幼叶， 一组测定功能叶。
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四、操作步骤程序：
1、样品提取； 2、比色测定 3、了解CL-01叶绿素仪
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1、样品提取步骤
为避免光分解，操作
将组织表面擦净，剪碎于培养皿内混匀 时应在弱光下进行
称取剪碎样品0.15g，共3份 碳酸钙要少，多则过
植物生理学实验
叶绿体色素的定量测定
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一、目的意义
植物体内的叶绿体色素与光合作用有非 常密切的关系。植物叶片的叶绿体色素含量 常因栽培技术，氮素营养水平、植物种类等 不同条件而有很大变化。因此，在肥水技术、 育种、丰产性能及植物病理等研究上常有测 定的需要。
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植物生理学实验
叶绿素a
解方程组得：
Ca (mg/L)= 12.72D663 – 2.59D645 Cb (mg/L)= 22.88D645 – 4.67D663 Ca与Cb相加即得叶绿素总量（CT）： CT (mg/L)= Ca + C精b选课=件20.29D645 + 8.05D66135
植物生理学实验
由于叶绿素a、b在652nm的吸收峰 相交，两者有相同的比吸收系数（均为 34.5），也可以在此波长下测定一次光密 度（D652）而求出叶绿素a、b总量：
2020年国家开放大学电大《植物生理学》网络核心课形考网考作业及答案
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该课程的考核采取100%形考，考核范围包括四个模块下安排的论坛讨论和形考作业，满分100分，60分及以上为合格。
形考作业1一、选择填空题题目11．植物散失水分的主要方式是[蒸腾]。
2．植物细胞吸收矿质元素的方式主要有三种类型：[被动吸收]、主动吸收和胞饮作用。
3．根部矿质元素主要是通过[木质部]向地上部运输，也可以横向运输到韧皮部。
4．整个光合作用根据能量转换过程可分为三个阶段：原始反应、电子传递与光合磷酸化、[碳同化]。
5．生活细胞内的有机物，在酶的催化下，逐步氧化分解并释放能量的过程，称为[呼吸作用]。
二、选择题题目2以下植物含水量最高的部位是（）。
选择一项：A. 茎杆B. 嫩梢C. 休眠芽D. 风干种子题目3细胞吸水的主要方式是（）。
选择一项：A. 渗透B. 扩散C. 集流D. 结冰题目4下列无法利用质壁分离现象判断的是（）。
选择一项：A. 观测物质透过原生质体的难易程度B. 测定细胞的渗透势C. 判断细胞的死活D. 测定细胞的水势题目5水分在根内吸水的途径有3条，不包括下列选项中的（）。
选择一项：A. 质外体途径B. 跨膜途径C. 共质体途径D. 细胞间途径题目6矿质元素主要是由根系从（）中吸收。
选择一项：A. 空气B. 营养液C. 水分D. 土壤题目7以下哪条不符合确定植物必需元素的标准（）。
选择一项：A. 缺乏该元素，植物生长发育受阻，不能完成其生活史B. 缺乏该元素，可以用其他元素替代C. 该元素的生理效应或功能必须是直接的D. 缺乏该元素，植物表现出专一的缺乏症题目8植物必需矿质元素的一般生理作用有（）。
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叶绿素a,b含量测定
［实验目的］熟悉在未经分离的叶绿素溶液中测定叶绿素a和b的方法及其计算。
［实验原理］在叶绿素a和b的吸收光谱曲线中，红波波长范围内，叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b的最大吸收峰在645nm。
吸收曲线彼此又有重叠。
根据Lambert—Beer定律，最大吸收峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与光密度OD之间有如下关系：OD1＝Ca·ka1+Cb·kb1 (1)
OD2＝Ca·ka2+Cb·kb2 (2)
Ca为组分a的浓度（g/L） Cb为组分b的浓度（g/L）
OD1为在波长λ1（即组分a的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度OD值。
OD2为在波长λ2（即组分b的最大吸收缝波长）时，混合液的光密度OD值。
ka1，kb1，ka2，kb2分别为组分a，b的比吸收系数，即组分a（b）的浓度为（1g/L）时，其在相应波长（λ1，λ2）时的光密度OD值。
叶绿素A和B的80%丙酮溶液，当浓度为1时，比吸收系数K值如下表：
将表中数值代入上式（1），（2）并整理的：
Ca=0.0127OD663-0.00269OD645
Cb=0.0229OD645-0.00468OD663
若把Ca，Cb的浓度单位从原来的g/L改为mg/L，则上式可改写为下列形式：
Ca=12.7OD663-2.69OD645 (3)
Cb=22.9OD645-4.68OD663 (4)
Ct=Ca+Cb=8.02OD663+20.21OD645 (5)
Ct为叶绿素总浓度，单位为g/L。
利用（3），（4），（5）式即可计算出叶绿素A和B及总叶绿素的浓度（g/L）。
［器材与试剂］
1.实验仪器：高级型分光光度计，离心机，台天平，剪刀，研钵，漏斗，移液管
2.实验试剂：丙酮，碳酸钙
3.实验材料：植物叶片
［实验步骤］
1.色素的提取：取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块，称取0.5G放入研钵中加纯丙酮5ML，少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆，再加80%丙酮5ML，将匀浆转入离心管，并用适量80%丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后弃沉淀，上清液用80%丙酮定容至20ML。
2.测定光密度：取上述色素提取液1ml，加80%丙酮4ml稀释和转入比色杯中，以80%丙酮为对照，分别测定663nm，645nm处的光密度值。
3.按公式分别计算色素提取液中叶绿素A，B及叶绿素总浓度。
再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素的含量。
［注意事项］
1.由于植物子叶中含有水分，故先用纯丙酮进行提取，以色素提取液中丙酮的最终浓度近似80%。
2.由于叶绿素A，B的吸收峰很陡，仪器波长稍有偏差，就会使结果产生很大的误差，因此最好能用波长较正确的高级型分光光度计。
［实验作业］
1.试比较阴生植物和阳生植物的叶绿素A和叶绿素B的比值有无不同。
2.分光光度法和比色法有何不同？
3.叶绿素A和叶绿素B在红光区和蓝光区都有最大吸收峰，能否用蓝光区的最大吸收峰波长进行叶绿素A和叶绿素B 的定量分析，为什么？。